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糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子表达的影响
目的 研究糖基化终产物对结缔组织生长因子(CTGF mRNA)及蛋白质表达的影响,探讨糖基化终产物致动脉粥样硬化机制. 方法 采用组织块贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞.反转录聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测血管平滑肌细胞结缔组织生长因子mRNA及蛋白质的表达. 结果 随着糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)的干预浓度(100、200、400 mg/L)升高,CTGF mRNA的表达水平呈上升趋势,分别为(0.78±0.03)、(1.15±0.03)、(1.40±0.04)mg/L,与未干预(0.40±0.02)mg/L比较,差异有统计学意义(P<0.05),不同浓度间差异亦有统计学意义(P<0.05).以200 mg/L的AGE-BSA对平滑肌细胞分别干预0、4、8、16、24、48、72 h,发现4 h时CTGF mRNA表达即已升高(0.93±0.04)mg/L,8 h时高(1.29±0.04)mg/L,以后虽略有下降,但仍维持较高水平. 结论 糖基化终产物促进血管平滑肌细胞表达结缔组织生长因子,可能是其致动脉粥样硬化机制中的一个重要方面.
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葡萄籽原花青素对糖尿病大鼠心肌糖基化终末产物受体和结缔组织生长因子的影响
目的 探讨葡萄籽原花青素(GSPE)对糖尿病大鼠心肌糖基化终末产物受体(RAGE)、核转录因子κB(NF-κB)和结缔组织生长因子(CTGF)的影响.方法 将链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠30只随机分为两组,糖尿病未治疗组(糖尿病1组)和糖尿病GSPE治疗组(糖尿病2组,每日给予GSPE 250 mg/kg灌胃)各15只；正常大鼠20只随机分为正常对照组(对照l组)和正常GSPE治疗组(对照2组,每日给予GSPE 250 mg/kg灌胃)各10只,24周后采血检测空腹血糖(FBG)、糖基化终末产物(AGEs),免疫组织化学染色和Western blot测定心肌NF-κB蛋白的表达,并应用Westernblot测定各组心肌RAGE和CTGF的蛋白表达变化.结果 糖尿病1组FBG、血清AGEs含量较对照1组显著升高(P＜0.05),经GSPE治疗后,血清AGEs含量显著降低(P＜0.05),而FBG降低差异无统计学意义；糖尿病1组心肌组织RAGE、NF-κB和CTGF蛋白表达较对照1组显著升高(P＜0.05),GSPE能够显著抑制RAGE、NF-κB和CTGF蛋白表达.结论 GSPE对糖尿病心肌病具有保护作用,其可能机制与抑制糖尿病大鼠AGEs-RAGE、NF-κB和CTGF的表达有关.
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糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α表达的影响
目的探讨糖基化终产物(AGEs)对大鼠主动脉平滑肌细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)mRNA及蛋白表达的影响.方法将培养的大鼠主动脉平滑肌细胞用不同浓度(100、200、400 mg/L)的AGEs孵育24 h及同一浓度(400 mg/L)AGEs孵育0、12、24、36 h,采用RT-PCR方法及流式细胞仪检测MIP-1αmRNA及蛋白的表达水平.结果对照组平滑肌细胞内MIP-1α呈弱表达,100、200、400 mg/L AGEs培养平滑肌细胞24 h显著增高MIP-1αmRNA的表达,其电泳条带相对积分吸光度值分别为对照组的1.36、1.75、2.45倍(P<0.05);100、200、400mg/LAGEs孵育24 h后,各组平滑肌细胞MIP-1α蛋白的平均荧光强度分别为197±3、260±6 及375±6,分别为对照组(158±4)的1.24、1.63、2.37倍(P<0.05).400 mg/L AGEs培养12、24、36 h后,各组平滑肌细胞MIP-1αmRNA的表达也明显增高,其电泳条带相对积分吸光度值分别为0 h组的1.52、2.38、2.53倍(P<0.05);400mg/L AGEs孵育12、24、36 h后,各组平滑肌细胞MIP-1α蛋白的平均荧光强度分别为244±5、375±6及 425±3,分别为0 h组(170±5)的1.43、2.21、2.49倍(P<0.05).结论糖基化终产物以时间及剂量依赖的方式促进平滑肌细胞MIP-1αmRNA及蛋白的表达.
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吡咯烷类对糖基化终产物诱导的老年大鼠内皮细胞纤连蛋白mRNA表达的影响
目的 观察抗氧化剂吡咯二硫代氨基甲酸乙酯(PDTC)对糖基化终末产物(AGEs)诱导的老年大鼠内皮细胞核转录因子(NF-κB)活性、活化蛋白(AP-1)组成成分c-jun和纤维连接蛋白(Fn)mRNA表达的影响.方法 取24月龄的SD大鼠主动脉内皮细胞进行原代培养,再给予不同剂量AGEs及PDTC继续培养并分为5组,采用荧光免疫化学法检测细胞NF-κB活性和RT-PCR检测细胞c-jun和Fn mRNA的表达.结果 不同剂量AGEs组中,NF-κB活性呈浓度依赖性上升,AGEs 25 mg/L组和50 mg/L组分别为(0.25±0.02)%和(0.42±0.03)%,与未给AGEs对照组(0.04±0.01)%比较,差异有统计学意义(P＜0.05);AGEs还上调了Fn mRNA和c-jun mRNA的表达(P＜0.05).给予PDTC干预后,抑制了AGEs诱导的NF-κB激活,干预后AGEs 25 mg/L组和50mg/L组NF-κB分别为(0.21±0.01)%和(0.22±0.01)%,与干预前比较,差异有统计学意义(P＜0.05);PDTC干预后,AGEs诱导的cjun和Fn mRNA的表达均有所下调.结论 抗氧化剂PDTC通过抑制NF-κB和c-jun途径,下调了AGEs诱导的血管基底膜Fn的表达.
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糖尿病对大鼠皮肤角质形成细胞功能损害的影响
目的 探讨糖尿病对大鼠皮肤角质形成细胞生物学行为的影响.方法 将SD大鼠随机分为糖尿病组和对照组,诱导糖尿病大鼠模型,并制作深Ⅱ度烫伤大鼠模型,测定伤后3、7、14 d和21 d的创面愈合率;观察两组表皮组织的组织学特征及厚度,测定两组角质形成细胞贴壁率、细胞周期、早期凋亡率、迁移能力,观察晚期糖基化终末产物(AGEs)蓄积情况.结果 糖尿病组与对照组比较,在伤后7、14 d和21 d创面愈合面积百分比显著减少(P<0.05).糖尿病组皮肤表皮细胞层次欠清晰,部分表皮细胞缺乏复层排列,细胞数量明显减少;糖尿病组角质形成细胞12、24 h贴壁率显著下降(P<0.05),进入G2/M期的细胞显著减少(P<0.05),早期凋亡细胞的比例显著增高(P<0.05),细胞迁移能力明显低于对照组.糖尿病大鼠表皮层中有大量的AGES蓄积.结论 糖尿病大鼠创面愈合过程中存在再上皮化受阻,这一现象与表皮角质形成细胞的生物学功能受抑有关.表皮层大量AGEs蓄积可能与糖尿病环境下角质形成细胞牛物学功能受抑有关.
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银杏叶提取物对老龄大鼠心肌保护作用的研究
目的 探讨银杏叶提取物对老龄大鼠心肌的保护作用.方法 选择20月龄大鼠,分别给予银杏叶提取物(EGB)和非酶糖基化产物(AGEs)交联结裂解剂(ALT-711)灌胃,经16周治疗后,观察心肌内AGEs、血清内抗氧化活性物质超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)及氧化代谢产物丙二醛(MDA)的含量,观察心肌细胞内线粒体DNA的缺失率及心肌超微结构的改变.结果 老龄对照组大鼠和成年对照组比较.心肌细胞间质增生、肿大,线粒体和内质网膜受损,心肌组织内AGEs含量减少[分别为(33.5±1.3)AU/mgHYP和(18.1±1I 2)AU/mgHYP,t=7.18,P<0.05],血清中SOD和GSH-PX减少[分别为(138.4±3.8)U/ml和(1283.8±28.8)U/ml、(227.7±13.8)U/ml和(2114.1±135.9)U/ml,t分别为-19.59和-18.79,均P<0.01],MDA增多[分别为(6.7±0.6)mmol/ml与(4.1±1.O)mmol/ml,t=7.18,P<0.05],线粒体mtDNA缺失率增多[(0.1805±0.0718)%和(0.0060±0.0001)%,t=6.98,P<0.01],EGB和ALT-711治疗组与老年对照组比较,心肌内AGEs产物减少(P<0.05).血清内SOD、GSH-PX抗氧化物质增多(P<0.05),血清氧化代谢产物MDA减少(P<0.05),mtDNA缺失率减少(P<0.01).结论 老龄大鼠心肌老化和非酶糖基化及氧化应激相关,EGB和ALT-711同样具有抑制非酶糖基化和抑制氧化应激的作用,通过对心肌内线粒体mtDNA缺失率的抑制,具有抗衰老作用.
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糖尿病心肌病内质网应激相关的差异表达蛋白分析
目的 应用同位素标记的相对和绝对定量技术(iTRAQ)检测和探讨糖尿病心肌病内质网应激相关的差异表达蛋白质的变化. 方法 以雄性C57BLKS/J db/db小鼠为2型糖尿病模型组(8只),db/m小鼠为正常对照组(8只);每周测定体质量、微量血糖变化.于18周末留取血清测定空腹血糖、总胆固醇、三酰甘油、糖基化终末产物(AGEs)的含量;留取心肌组织行HE染色观察组织病理变化,透射电镜观察肌浆网超微结构变化,应用iTRAQ技术检测各组内质网应激相关的差异表达蛋白. 结果 模型组与对照组比较,第8～18周体质量显著增加(P＜0.01);第18周空腹血糖、总胆固醇、三酰甘油及血清AGEs含量显著升高(P＜0.01).模型组小鼠心肌组织HE染色可见心肌细胞肥大、肌纤维排列不规则、肌丝断裂、并伴有核损伤;超微结构观察显示模型组心肌组织肌小节失去正常结构,明暗带消失,肌浆网扩张、肿胀,肌纤维间水肿,其间可见炎性细胞浸润.模型组与正常对照组心肌组织应用质谱分析结合数据库检索,共鉴定了22个与内质网应激相关的差异表达蛋白,其中上调者6个,下调者16个. 结论 内质网应激相关差异表达蛋白含缬酪肽蛋白、B细胞受体相关蛋白31、溶血磷脂酰胆碱酰基转移酶3,在糖尿病心肌病中具有重要作用,并可能为研究或发现糖尿病心肌病防治的新药靶点提供理论基础.
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晚期糖基化终末产物受体介导急性缺氧诱导的早期生长反应因子-1表达上调
目的 探讨急性缺氧对早期生长反应因子-1(Egr-1)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响及其可能的信号机制. 方法 取整体缺氧小鼠模型的主动脉,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Egr-1和MCP-1 mRNA含量、蛋白印迹检测Egr-1和晚期糖基化终末产物受体(RAGE)抗原表达,凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)检测Egr-1 DNA结合活性；以可溶性RAGE(sRAGE)阻断RAGE信号后,观察其对缺氧诱导Egr-1表达的影响. 结果 缺氧30 min,Egr-1mRNA表达上调,为对照组的(28.3±0.9)倍(F=617.17,P＜0.01)；缺氧45 min,Egr-1的抗原含量为对照组的(5.7±0.3)倍(F=57.18,P＜0.01),Egr-1 DNA结合活力高于对照组,并被抗-Egr-1 IgG所抑制；缺氧4h,MCP-1 mRNA含量为对照组的(4.0±0.3)倍(F=30.68,P＜0.01)；缺氧15 min,RAGE抗原含量增加,sRAGE预处理减少缺氧诱导的Egr-1表达(3.3±0.2)倍与(1.4±0.2)倍(F=30.20,P＜0.01). 结论 小鼠整体缺氧诱导主动脉Egr-1及MCP-1表达上调,阻断RAGE信号显著抑制缺氧诱导的Egr-1高表达.
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黄精多糖对老年糖尿病小鼠脑组织糖基化终产物受体mRNA表达的影响
目的探讨黄精多糖对老年糖尿病小鼠脑组织糖基化终产物受体mRNA(RAGE mRNA)表达的调节作用. 方法 BALB/C小鼠30只,随机分为对照组、糖尿病模型组和治疗组,每组10只;糖尿病模型组和治疗组腹腔注射链脲佐菌素建立小鼠糖尿病模型,治疗组给予黄精多糖2 ml/kg,每日1次灌胃给药,共12周.各组实验动物脑组织RAGE mRNA表达的测定采用RT-PCR法. 结果糖尿病模型组实验鼠脑组织RAGE mRNA表达增加,RAGE/β-actin相对值(0.153±0.054)明显高于对照组(0,P＜0.01).应用黄精多糖治疗后,治疗组鼠脑组织RAGE mRNA表达较模型组降低,RAGE/β-actin相对值(0.092±0.033)显著低于模型组(P＜0.05). 结论黄精多糖能抑制老年糖尿病鼠脑组织RAGE mRNA表达,对高血糖及糖基化终产物(AGE)造成的脑组织损伤具有保护作用.
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糖基化终产物及其受体在糖尿病血管并发症中的作用
高血糖记忆现象可能与糖尿病患者体内高水平的糖基化终产物(AGEs)有关,现就AGEs及其晚期糖基化终末产物受体(RAGE)在糖尿病血管并发症中的作用综述如下.
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肝素对血液透析病人单核细胞表面晚期糖基化终产物受体的影响
目的研究肝素对慢性肾衰竭长期血液透析(血透)病人单核细胞表面晚期糖基化终产物(AGE)受体的影响,探讨血透病人体内AGE潴留的机制.方法用核素[125I]标记AGE修饰的人血清白蛋白(AGE-HSA).用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞.用放射性配体-受体结合法观察肝素和低分子量肝素对血透病人及正常人单核细胞表面AGE受体的影响.结果采用常规持续肝素输注法进行抗凝的血透病人,在透析后15 min,单核细胞与125I-AGE-HSA的结合被抑制27%,作用持续6 h,透析后24 h结合率恢复至透析前水平;用低分子量肝素抗凝的病人,透析中及透析后单核细胞与125I-AGE-HSA的结合无明显变化.体外实验显示,肝素抑制AGE与其单核细胞表面AGE受体的结合,这种作用呈剂量依赖性;低分子量肝素对AGE受体不具有封闭作用.结论肝素可以阻断AGE与其单核细胞表面AGE受体的结合,从而干扰体内AGE的清除,可能是造成血透病人体内AGE潴留的原因之一.
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罗格列酮对2型糖尿病大鼠肾皮质趋化因子fractalkine表达的影响
目的 观察罗格列酮对2型糖尿病大鼠肾皮质趋化因子fractalkine表达的影响.方法 SD大鼠30只,10只分至正常对照组,20只腹腔注射小剂量链脲佐菌素结合高能量饲料制备2型糖尿病大鼠模型,然后分至糖尿病组(n=10)及罗格列酮干预组(n=10).运用流动注射分析法测定血清糖基化终产物-肽(advanced glycosylation end products-peptide,AGE-P),应用半定量逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学法分别检测肾皮质fractalkine mRNA和蛋白表达.选用单因素方差分析进行数据统计分析.结果 糖尿病组大鼠血清AGE-P[(2.87±0.21)U/ml]、肾皮质fractalkine mRNA(1.41±0.03)及fractalkine蛋白表达(0.79±0.04)均明显高于对照组[分别为(0.90±0.13)U/ml、0.85±0.04及0.46±0.03,P<0.01];罗格列酮干预组大鼠血清AGE-P[(1.45±0.15)U/ml]、肾皮质fractalkine mRNA(1.00±0.05)及fractalkine蛋白表达(0.67±0.03)则明显低于糖尿病组(P<0.01).结论 罗格列酮可能通过抑制肾皮质fractalkine表达发挥其肾脏保护作用.
关键词： 糖尿病肾病 糖基化终产物 高级 罗格列酮 Fractalkine -
基于皮肤自体荧光的糖尿病快速无创筛查方法的临床研究
目的 基于皮肤自体荧光光谱,反映受试者皮肤晚期糖基化终末产物(AGEs)累积水平,并比较皮肤荧光法与空腹血糖(FPG)在糖尿病筛查中的应用价值.方法 选取2009年6月至2011年6月于中国科学院合肥物质科学研究院医院健康体检及安徽省立医院内分泌科门诊进行皮肤荧光、FPG及口服葡萄糖耐量试验(OGTT)糖负荷后2h血糖测量(2 h PG)的受试者201名,其中正常糖调节组111名、糖调节受损组27例和2型糖尿病患者组63例.糖尿病、糖调节受损的诊断采用2010年《中国2型糖尿病防治指南》中的糖尿病诊断标准.测量比较各组FPG,并行OGTT,测定2 hPG,且同时检测受试者右前臂内侧皮肤的荧光,记录皮肤荧光强度值.统计学采用单因素ANOVA方差分析、x2检验和Spearman相关性分析.结果 正常糖调节组、糖调节受损组和2型糖尿病患者组的平均FPG分别为(4.99±0.45)、(6.57± 0.27)和(9.45±3.98) mmol/L,组间差异具有统计学意义(F=280.88,P＜0.05).皮肤荧光平均值分别为(1.88±0.12)、(1.92 ±0.14)和(2.15±0.22)AU,组间差异有统计学意义(F=10.88,P＜0.05).ROC曲线分析表明,在FPG=6.1 mmol/L这一工作点,空腹血糖法用于糖尿病筛查的特异性和敏感性分别为86.2％和65.1％.在相同特异性水平下,皮肤荧光法的敏感性达到77.8％,皮肤荧光法的筛查敏感性明显高于空腹血糖法.结论 与空腹血糖相比,皮肤荧光法筛查糖尿病具有无创、快速的优点,且具有更高的敏感性.
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阿托伐他汀对糖基化白蛋白诱导的大鼠肾脏病变的保护作用
目的 观察阿托伐他汀能否改善牛血清糖基化白蛋白(GBA)诱导的肾脏病变.方法 健康雄性SD大鼠40只(体重230～250 g),采用随机数字表法分为正常对照组(给予普通饲料)、高脂组(仅给予高脂饲料)、GBA组(腹腔注射GBA40 mg· kg-1·d-1,并给予高脂饲料)、GBA+阿托伐他汀组(腹腔注射GBA40mg· kg-1·d-1,阿托伐他汀20 mg·kg-1·d-1灌胃,并给予高脂饲料)、每组各10只.24周后酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清糖基化终末产物水平,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)法测定大鼠肾组织糖基化终末产物受体(RAGE)mRNA表达,采用免疫组化法检测大鼠肾组织中S100(一种糖基化终末产物)、RAGE蛋白的表达,采用HE染色进行肾脏病理观察,同时测量肾小球及系膜区面积.应用t检验和方差分析进行数据分析.结果 实验24周4组大鼠之间血糖、血清胆固醇和血肌酐水平差异均无统计学意义(F=1.780、2.012、2.075,均P＞0.05):与高脂组比较,GBA组的大鼠血清糖基化终末产物水平明显升高[(72±4)比(50 ±5) μg/L,t=3.445,P＜0.05],肾脏中肾小球肥大,系膜区基质增生明显[肾小球面积分别为(9505±326)、(7920±518)μm2,t=2.587,P＜0.05;系膜区面积分别为(5752±316)、(1898±259) μm2,t=9.435,P＜0.05],肾脏RAGE mRNA表达明显升高(9.7±1.0比2.4±0.5,t=6.629,P＜0.05).同时肾脏S100、RAGE蛋白表达增加.与GBA组比较,GBA+阿托伐他汀组的大鼠血清糖基化终末产物水平明显降低[(53±3)比(72 ±4) μg/L,t=3.298,P＜0.05]、肾脏中肾小球肥大明显好转、系膜基质增生程度减轻[肾小球面积分别为(7276±326)、(9505±326)μm2,t=4.834,P＜0.05；系膜区面积分别为(2436±316)、(5752±316) μm2,=7.418,P＜0.05],肾脏RAGE mRNA表达水平下降(3.3±0.8比9.7±1.0,t=4.978,P＜0.05),同时肾脏S100、RAGE蛋白表达减少.结论 阿托伐他汀可通过降低血清糖基化终末产物水平、下调肾脏RAGE的表达来减轻糖基化终末产物诱导的肾脏病变.
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糖基化终产物对小鼠成骨细胞细胞外基质金属蛋白酶诱导物及基质金属蛋白酶-2分泌的影响
目的 探讨糖基化终产物(advanced glycated end-products,AGEs)对小鼠成骨细胞细胞外基质金属蛋白酶诱导物(extracellular matrix metalioproteinase inducer,EMMPRIN)及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)分泌的影响.方法 在培养的小鼠成骨细胞株(MC3T3-E1)中分别加入不同浓度(50、100、200及400 mg/L)AGEs干预24 h和同一浓度(200 mg/L)AGEs干预12、24及48 h,以无血清培养基(DMEM)和相应浓度牛血清白蛋白(bovine scram albumin,BSA)为对照.用酶联免疫吸附试验检测上清液中EMMPRIN蛋白分泌,用酶谱法检测上清液中MMP-2分泌.将EMMPRIN中和抗体分别加入DMEM组和50 mg/L AGEs组,用酶谱法检测上清液巾MMP-2分泌.组间差异用方差分析进行检验.结果 不同浓度AGEs干预组上清液中EMMPRIN分泌水平[(7.34±0.11)、(10.86±0.07)、(14.48±0.14)及(15.43±0.23)μg/L]明显高于对应BSA组(q值分别为3.111、3.090、2.921及4.387,均P<0.05);上清液中MMP-2条带酶解量[(225.12±5.01)、(305.83±5.21)、(363.04±8.04)及(410.63±16.84)INT·mm2]明显高于BSA组(q值分别为3.109、3.545、5.912及5.895,均P<0.05).200 mg/L AGEs干预12、24及48 h,EMMPRIN分泌水平[(12.41±0.02)、(17.88±0.35)及(18.88±0.36)μg/L]明显高于对应BSA组[q值分别为5.522、7.462及7.323,均P<0.05];干预24及48 h后,MMP-2条带酶解量[(222.18±14.53)及(246.53±5.96)INT·mm2]与BSA组比较差异有统计学意义(q值分别为4.159及4.321,均P<0.05).加入2 mg/L EMMPRIN中和抗体的DMEM组MMP-2水平[(543.21±67.90)INT·mm2]明显低于DMEM组[(867.95±113.46)INT·mm2,q=6.354,P<0.05].加入5 mg/L EMMPRIN中和抗体的50 mg/LAGEs干预组MMP-2水平[(127.63±11.36)INT·mm2]明显低于AGEs组[(160.76±17.45)INT·mm2,q=7.742,P<0.05].结论 AGEs促进小鼠成骨细胞MC3T3-El EMMPRIN及MMP-2分泌,EMMPRIN抗体可部分减少AGEs增加的MMP-2分泌,提示AGEs可能通过增加成骨细胞EMMPRIN分泌而促进MMP-2分泌,从而参与骨质疏松的发病.
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糖基化终产物对人单核细胞源树突状细胞清道夫受体A表达的影响及其机制的研究
目的探讨糖基化终产物 (AGEs)对人单核细胞源树突状细胞(MDCs)清道夫受体A(SR-A) 表达的影响及其机制.方法用免疫磁珠分离人外周血CD14+单核细胞,经含重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF,100 ng/ml)和重组人白细胞介素-4(rhIL-4,50 ng/ml)的RPMI1640培养,使其分化为MDCs,采用RT-PCR和Western-Blot法,分别观察糖基化-白蛋白(AGE-BSA)不同蛋白浓度(0、50、100、200、300 μg/ml)和不同时间(0、6、12、24、36 h)干预,以及酪氨酸蛋白激酶抑制剂金雀异黄素(genistein)干预后, MDCs SR-A基因和蛋白的表达.结果与空白对照相比,蛋白浓度为50 μg/ml和100 μg/ml干预24 h即可分别上调SR-A mRNA和蛋白的表达(P＜0.05),200 μg/ml时达峰值(P＜0.01),在干预的不同时间组,12 h和24 h可分别上调SR-A mRNA和蛋白的表达(P＜0.05),36 h达峰值(P＜0.01),呈明显的浓度和时间依赖性,genistein能够完全抑制其作用.结论AGEs能够上调DCs SR-A的表达,是与其激活酪氨酸蛋白激酶有关,这可能是DCs参与动脉粥样硬化发生的机制之一.
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糖尿病足截肢患者血清Nε-羧甲基赖氨酸与胫前动脉斑块内钙化的关系
目的 探索糖基化终产物主要成分Nε-羧甲基赖氨酸(CML)水平与糖尿病足截肢患者胫前动脉斑块钙化之间的相关性.方法 前瞻性入选2012年6月至2016年6月在江苏大学附属医院骨科因糖尿病足行大截肢治疗的患者共60例.根据下肢胫前动脉狭窄程度的彩色多普勒超声检测结果,将截肢患者分为轻度狭窄组(n=20)、中度狭窄组(n=20)及重度狭窄组(n=20).采集各组患者临床基线资料,分离胫前动脉行苏木素-伊红(HE)染色明确动脉壁病变情况,邻甲-酚酞络合酮法测定动脉壁钙含量,酶法检测明确各组动脉组织碱性磷酸酶(ALP)活性,ELISA法检测各组血清CML水平.结果 截肢前糖尿病足患者胫前动脉彩色超声检查与截肢后动脉HE染色显示,随着糖尿病足患者胫前动脉狭窄程度的加重,斑块的回声强度明显增加,斑块内点灶状分布的蓝染钙颗粒也不断增多甚至破坏动脉壁内弹力板.轻度、中度和重度狭窄组动脉壁钙含量[分别为(2.3±0.9)、(3.9±1.3)和(6.6±1.7) μmol/mg]、ALP活性[分别为(102.4 ±39.4)、(202.3 ±73.4)和(483.7±117.9)U/mg]、血清CML水平[分别为(28.9±4.4)、(37.9±5.3)和(57.3±7.1)μg/L]差异均有统计学意义(P均＜0.001).Pearson相关性分析显示血清CML水平与糖尿病足胫前动脉钙含量(r=0.749,P＜0.001)及ALP活性(r=0.923,P＜0.001)均呈正相关.结论 血清CML水平与糖尿病足截肢患者胫前动脉斑块内钙化具有一定的相关性.
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冠心病患者血清糖基化终产物水平升高的意义
目的探讨糖基化终产物(AGEs)与冠心病的关系。方法分别运用荧光法和ELISA法测定冠心病患者血清F-AGE和E-AGE水平，并与健康人、糖尿病患者比较。结果 35例冠心病患者血清F-AGE和E-AGE水平分别为(10.4±0.6) U/ml和(14.7±1.8) U/ml, 明显高于健康人［分别为(7.5±0.2) U/ml, P<0.01和（8.6±1.5) U/ml, P<0.0001］；但与糖尿病患者差异无显著性［分别为(11.0±0.3) U/ml, P>0.05和(18.1±1.3) U/ml, P>0.05)］。结论增高的AGEs水平可能与冠心病发病有密切关系。
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过氧化物酶体增殖物激活受体γ对糖基化终产物诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用
目的观察吡格列酮对糖基化终产物(AGEs)刺激下大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的作用及对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因及蛋白表达水平的影响,探讨PPARγ在AGEs诱导VSMCs增殖中的作用.方法 (1)MTT法观察不同浓度、不同时间的AGEs对VSMCs增殖的影响及吡格列酮(1.0、10、100 μmol/L)与AGEs共孵育对VSMCs增殖的干预作用.(2)用半定量逆转录聚合酶链反应测定 VSMCs中PPARγ mRNA的表达.(3)用Western blot法检测PPARγ的蛋白表达.结果 AGEs作用导致VSMCs增殖,AGEs抑制PPARγ mRNA和蛋白表达水平,这种抑制作用随着AGEs干预的时间延长和浓度的增加而增强(P<0.05).PPARγ激活剂吡格列酮通过增加PPARγ的表达,抑制AGEs诱导的VSMCs增殖.结论 PPARγ表达的下降可能是糖尿病易患动脉粥样硬化的重要原因之一.
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阿托伐他汀对晚期糖基化终末产物诱导的人内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1mRNA表达影响及其机制的实验研究
目的 观察阿托伐他汀对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGE)诱导的人脐静脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响,并探讨其作用机制.方法 实验分组:(1)空白对照组.(2)牛血清白蛋白(BSA)对照组.(3)AGE诱导组:不同作用浓度的AGE(10-4、10-3、10-2及10-1g/L)与细胞共同培养24 h.(4) AGE+阿托伐他汀组:用不同作用浓度的阿托伐他汀(0.1、1、10 μmol/L)分别与细胞培养1 h,而后加入10-1 g/L AGE[根据(3)实验结果选取佳浓度]与细胞共孵育24 h.(5)PPAR-γ激动剂(15 d-PGJ2)组:15 d-PGJ2( 10 μmol/L)与细胞孵育1 h后加入10-1 g/L AGE再与细胞共孵育24 h.(6)PPAR-γ抑制剂(GW9662)组:GW9662(5000 g/L)与细胞孵育1 h后加入AGE(10-1 g/L)和阿托伐他汀(1 μmol/L)[根据(4)实验结果选取佳浓度]再与细胞共孵育24 h.胶原酶消化法获取人脐静脉内皮细胞.逆转录聚合酶链反应法分析细胞MCP-1和过氧化物酶增殖物活化受体γ(PPAR-γ)基因的表达.蛋白免疫印迹法测定细胞核因子-κB(NF-κB )p65表达水平.结果 (1)AGE(10-4、10-3、10-2及10-1 g/L)呈浓度依赖性提高人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA表达水平,分别是空白对照组的1.53倍、2.12倍、2.56倍及4.71倍;AGE浓度为10-4 g/L时,细胞MCP-1 mRNA表达明显高于空白对照组(0.26±0.02比0.17±0.04,P<0.01).(2)与AGE组比,阿托伐他汀(0.1、1、10 μmol/L)呈浓度依赖性抑制AGE诱导的人内皮细胞MCP-1 mRNA的表达;阿托伐他汀浓度为1 μmol/L时,细胞MCP-1 mRNA表达水平显著低于AGE(10-1g/L)组(0.63±0.11比1.03±0.07,P<0.01).(3)AGE(10-1 g/L)组人脐静脉内皮细胞PPAR-γ mRNA的表达水平显著低于空白对照组(0.22±0.08比0.69±0.09,P<0.01),磷酸化和非磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著高于空白对照组(0.78±0.06比0.31±0.01和1.61±0.16 比0.59±0.14,P均<0.01).(4)阿托伐他汀(1、10 μmol/L)组人脐静脉内皮细胞PPAR-γ mRNA表达水平显著高于AGE(10-1 g/L)组(0.59±0.02和0.61±0.06比0.22±0.08,P均<0.01);阿托伐他汀(1 μmol/L)组磷酸化和非磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著低于AGE(10-1g/L)组(0.40±0.03比0.78±0.06和0.65±0.12比1.61±0.16,P均<0.01).(5)PPAR-γ激动剂(15 d-PGJ2)组细胞磷酸化和非磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著低于AGE(10-1g/L)组 (0.21±0.01比0.78±0.06和0.67±0.14比1.61±0.16,P均<0.01),MCP-1 mRNA表达水平显著低于AGE(10-1g/L)组(0.17±0.02比0.93±0.12,P<0.01).(6)PPAR-γ抑制剂(GW9662)组细胞磷酸化和非磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著高于AGE(10-1g/L)+阿托伐他汀(1 μmol/L)组(0.53±0.02比0.40±0.03和1.38±0.18比0.65±0.12,P均<0.01),MCP-1 mRNA表达水平显著高于AGE(10-1g/L)+阿托伐他汀(1 μmol/L)组(0.62±0.05比0.30±0.07,P<0.01).结论 阿托伐他汀可通过提高AGE诱导的人脐静脉内皮细胞对PPAR-γ表达抑制细胞NF-κB信号途径,进而抑制AGE诱导的人脐静脉内皮细胞的炎性反应.
