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甘露糖受体介导的人参多糖注射液对肝癌细胞增殖抑制
目的 探讨人参多糖注射液对人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2增殖抑制的机制及与甘露糖受体表达水平的关系.方法 实验于2014年6月在齐齐哈尔医学院中心研究室进行,利用荧光免疫法检查甘露糖受体在人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2上的表达水平;采用CCK8检测细胞的增殖抑制情况.结果 免疫荧光结果:甘露糖受体在人肝癌细胞HpeG2上表达分布较少,而在人肝癌细胞BEL-7402上表达分布较多;CCK8结果:在一定浓度范围内,人参多糖注射液对人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2的增殖有明显抑制作用(P＜0.05),并且与浓度和时间呈正相关,同时证明人参多糖注射液对人肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用明显高于对HpeG2增殖抑制作用(P＜0.05).结论 人参多糖注射液对人肝癌细胞BEL-7402和HpeG2的增殖有明显的抑制作用;对人肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用高于对HpeG2的抑制作用,增殖抑制作用的高低与甘露糖受体表达水平呈正相关.
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甘露糖受体和Podoplanin在肝细胞肝癌中的表达及临床意义
目的：观察甘露糖受体(Mannose receptor,MR)和Podoplanin在肝细胞肝癌组织中的表达,探讨其与肝细胞肝癌恶性程度的关系.方法实验于2014年6月在齐齐哈尔医学院中心研究室进行,将肝细胞肝癌癌组织分为有淋巴结转移和无淋巴结转移两组,并与正常肝组织对照.采用免疫组化检测肝细胞肝癌组织中MR蛋白和Podoplanin的阳性表达情况与正常肝组织组进行对照,观察MR﹑D2-40的阳性表达率与肝细胞肝癌淋巴转移的关系,同时利用免疫组织化学方法观察MR蛋白和Podoplanin在肝癌组织﹑癌旁组织﹑正常肝组织中的表达情况.结果①MR蛋白和Podoplanin在肝细胞肝癌组织中都是高表达,而在正常肝组织内均是低表达(P<0.05)；②MR阳性表达率在淋巴结转移组及无淋巴结转移组无明显差异(P>0.05)；Podoplanin在肝细胞肝癌淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组(P<0.05).结论 MR蛋白和Podoplanin在肝细胞肝癌组织中高表达可能与肝细胞肝癌恶性程度有关；Podoplanin在肝细胞肝癌中高表达可能与淋巴管生成和淋巴道转移密切相关.
关键词： 肝细胞肝癌 甘露糖受体 Podoplanin -
人精子甘露糖受体表达与顶体反应的关系
目的研究人精子的甘露糖受体(MR)表达与顶体反应的关系,以探讨体外获能培养精子的MR表达是否为人精子获能的标志.方法将上游法收获的活精子在获能培养基BWW中进行体外获能培养后,加入小鼠透明带溶解液(mZPS)诱导人精子顶体反应,精子悬液用异硫氰酸荧光素标记的甘露糖基化牛血清白蛋白(FITC-DMA)为探针标记MR,用豌豆凝集素(PSA)法检测顶体反应.结果体外获能培养人精子的MR表达率与mZPS诱导的顶体反应率无相关性.结论体外获能培养精子的MR表达可能不是人精子获能的标志.
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抗人精子甘露糖受体抗血清对精子穿透实验的影响
目的 研究人精子甘露糖受体(MR)在精卵融合中的作用.方法 用亲合层析法分离纯化的人精子甘露糖受体来免疫Balb/c小鼠得到抗MR抗血清;用抗血清处理顶体反应后的人精子,并进行去透明带金黄地鼠卵的精子穿透实验(SPA),观察其体外受精情况.结果 抗MR抗血清可抑制人精子与去透明带金黄地鼠卵的结合与穿透,使卵子的受精率下降,具剂量依赖性.结论 人精子MR与精卵膜的识别与融合有关.
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中国汉族和维吾尔族MRC1基因多态性与肺结核病的相关性
目的 探讨中国汉族和维吾尔族人群MRC1基因多态性与肺结核病易感性的联系. 方法 应用PCR和DNA测序技术,对中国汉族454例和维吾尔族595例人群的MRC1基因的第7号外显子6个SNPs(G1186A、G1195A、T1212C、C1221G、C1303T和C1323T)基因型及基因频率分布进行检测,并进行连锁不平衡分析. 结果 中国汉族人群中G1186A位点等位基因G型分布频率在肺结核病组和正常健康组之间存在显著差异(P =0.037；OR =0.76；95％ CI:0.58～0.98)；AG基因型在两组之间存在显著性差异(P ＜0.01；OR=0.57；95％ CI:0.37 ～0.87).在年龄和性别校正后,G1186A位点在显性(P＜0.01；OR=0.59；95％ CI:0.40～0.87)、超显性(P =0.045；OR =0.69;95％ CI:0.47～0.99)和加性模式(P =0.041；OR=0.76；95％ CI:0.59 ～0.99)时,与肺结核病存在显著相关性.在维吾尔族人群中G1186A位点的等位基因G的分布频率在两组之间的分布具有显著性差异(P =0.031；OR=1.29；95％CI:1.02 ～ 1.62)；基因型分析发现AA基因型在两组之间也存在显著性差异(P=0.033；OR=1.64；95％ CI:1.04～2.60)；在年龄和性别校正后,G1186A位点在加性模式下与肺结核病存在相关性(P=0.033；OR=1.28；95％ CI:1.02～1.61).连锁不平衡分析发现,构建的单体型GGTCCT(P=0.032；OR =0.75；95％ CI:0.57 ～0.97)和GGTCCC(P=0.044；OR=0.57；95％ CI:0.33 ～0.99)与肺结核病存在显著的相关性. 结论 MRC1基因G1186A位点与中国人群肺结核病相关.
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甘露糖受体在肝细胞癌中的表达及意义
目的:观察甘露糖受体(mannose receptor, MR)在肝细胞癌组织/肝癌细胞系中的表达,探讨其与肝细胞癌发生、发展及恶性程度的关系.方法:应用免疫组织化学检测50例肝细胞癌组织及癌旁组织、10例正常肝组织中MR的表达,免疫荧光法、Western blot法检测肝癌细胞系、肝细胞系中MR的表达.结果:免疫组织化学染色:肝细胞癌组织中MR的表达水平明显高于癌旁组织及正常肝组织(86％ vs 76％,30％,P＜0.05).免疫荧光:MR在肝癌细胞系BEL-7402、HepG2和人肝细胞系HL-7702中均有表达.在肝癌细胞系BEL-7402、HepG2上有很强的MR表达,在肝细胞系HL-7702上MR的表达分布明显较少.Westem blot法:MR在肝癌细胞系HepG2、BEL-7402和人肝细胞系HL-7702上均有表达,肝癌细胞BEL-7402中MR的表达水平明显高于肝癌细胞HepG2(P＜0.01)、肝细胞HL-7702(P＜0.01).结论:MR在肝细胞癌组织/肝癌细胞系中高表达提示可能与肝细胞癌的发生、发展及恶性程度密切相关.
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嗜酸性粒细胞的抗白血病肿瘤免疫功能的探讨
目的 探讨嗜酸性粒细胞(EOS)在慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓中的抗肿瘤细胞免疫功能.方法 逆转录PCR观察CML患者外周血纯化EOS的BCR-ABL融合基因、IL-12 mRNA和IL-17 mRNA表达情况.酶联免疫吸附试验检测CML患者血清中IL-12和IL-17浓度；观察患者骨髓EOS中过氧化物酶(POX)和人类白细胞抗原(HLA)-DR表达,免疫荧光观察患者骨髓涂片中EOS甘露糖受体(MR)、IL-12、IL-17A和IL-17RA表达水平,并与正常健康人群对比.结果 60例CML患者血清IL-12和IL-17水平分别为(196.33 ±21.79) ng/L和(36.55±3.01) ng/L,明显高于对照组的(96.60 ±4.92) ng/L和(23.74±1.36) ng/L(P值均＜0.01).32例骨髓EOS活化组患者IL-12和IL-17的水平分别为(273.12±17.16) ng/L和(40.11±6.13) ng/L,显著高于EOS未活化组的(126.16±14.27) ng/L和(28.14±5.29)ng/L(P值均＜0.01).EOS表达IL-12和IL-17 mRNA,不表达BCR-ABL融合基因.CML骨髓和外周血EOS明显增多,胞浆内POX强阳性,弱表达HLA-DR,以黏附、捕获和吞噬状态攻击肿瘤细胞.活化状态的EOS高表达MR、IL-12、IL-17A和IL-17RA,与患者血清细胞因子水平密切相关.结论 CML骨髓中活化的EOS表达IL-12 mRNA和IL-17 mRNA,可通过释放POX、分泌IL-12和IL-17介导细胞免疫和炎症反应破坏白血病肿瘤细胞；通过表达MR捕获和吞噬细胞,在CML患者体内发挥重要的抗肿瘤免疫生物学效应.
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嗜酸粒细胞在自身免疫相关血细胞减少中的病理效应及临床意义
目的 观察嗜酸粒细胞(EOS)在免疫相关血细胞减少或全血细胞减少(IRH/IRP)患者骨髓造血细胞原位损伤的病理效应,探讨相关免疫机制及临床意义.方法 ELISA法检测2008年2月至2012年2月解放军第一四八医院济南军区肿瘤诊疗专科中心117例IRH/IRP患者血清白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-12和IL-17含量,观察患者骨髓EOS数量、活化状态、过氧化物酶活性和HLA-DR表达,免疫荧光染色观察EOS和造血细胞表达抗人IgG及细胞间黏附分子(ICAM)-1、Fcγ受体Ⅱ型(FcγRⅡ)、甘露糖受体(MR)、IL-5受体(IL-5R)、IL-12、IL-12受体(IL-12R)、IL-17A及IL-17A受体(IL-17RA)表达,TdR掺入法检测EOS抗原提呈能力,反转录(RT)-PCR方法检测EOS IL-17mRNA表达.结果 IRH/IRP患者血清IL-4、IL-5、IL-6、IL-12和IL-17分别为(170.9±14.7)、(112.9±8.2)、(131.8±13.8)、(339.2 ±26.1)和(42.5±2.2) ng/L,显著高于健康对照组[(60.3 ±11.0)、(34.1±2.2)、(91.0±12.3)、(94.0±3.3)和(20.0±1.1)ng/L].117例(100％)患者IL-5、IL-12和IL-17均升高.显微镜下白细胞减少伴HLA-B27+者,骨髓中EOS黏附、捕获和吞噬血细胞现象多见；活化的EOS过氧化物酶强阳性,被攻击的中性粒细胞则过氧化物酶活性减弱或消失；活化的EOS表达HLA-DR和自身抗体IgG,能增强EOS抗原提呈能力.EOS表达IL-17 mRNA,具有分泌IL-17的功能；骨髓中EOS表达IL-17A和ICAM-1、FcγRⅡ、MR、IL-5R、IL-12、IL-17A和IL-17RA等众多免疫分子.结论 EOS能分泌和表达多种免疫因子,具有黏附、捕获和吞噬病变血细胞功能,参与IRH病理过程的多个环节,是骨髓造血细胞原位损伤的重要免疫效应细胞.
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甘露糖受体生物学功能的新进展
甘露糖受体为甘露糖受体家族的成员之一,属于C型凝集素受体,是一种重要的模式识别受体,多表达于巨噬细胞和未成熟的树突状细胞.既往研究表明它参与多种生物学功能,如维持内环境的稳定、先天性和获得性免疫及病原微生物感染的清除.然而,新的进展证实它还介入生殖、细胞的黏附、迁移以及细胞活化等多种功能.它在肿瘤的转移、呼吸系统疾病、肾脏疾病等多种疾病病理生理过程中发挥了重要的作用,具有极其重要的临床价值.
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巨噬细胞甘露糖受体与呼吸系统疾病研究进展
甘露糖受体是参与免疫反应的一种模式识别受体,可以调节巨噬细胞的活化,呈递抗原及吞噬等过程,甘露糖受体下调或缺失将会影响机体对病原体的易感性.本文对近年巨噬细胞表面甘露糖受体基本结构和分布以及甘露糖受体在呼吸系统相关疾病中的研究进行综述.
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L-选择素和甘露糖受体与肿瘤淋巴转移的相关性
肿瘤的侵袭转移是一个复杂的、多因素、多步骤的病理生理过程.L-选择素属于选择素类黏附分子,表达在多数白细胞表面,参与其与炎症内皮细胞的黏附和游走,并能促进淋巴细胞归巢.甘露糖受体是C型凝集素家族的一员,主要表达在巨噬细胞和树突状细胞;能够介导细胞的内吞和噬菌作用.二者的相互识别和结合在肿瘤细胞的淋巴转移过程中起到重要作用.
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壳寡糖结合并激活巨噬细胞机制的研究
目的:研究壳寡糖结合并激活巨噬细胞的机制.方法:RT-PCR和ELISA检测壳寡糖对巨噬细胞及经γ干扰素(IFN-γ)预刺激巨噬细胞的白介素1β(IL-1β)基因表达水平的影响;钙离子脂化探针Fluo-3/AM检测壳寡糖对巨噬细胞胞浆游离Ca2+浓度的影响;用四甲基异硫氰酸罗丹明标记甘露聚糖,激光共聚焦显微镜和流式细胞仪观察标记糖结合及进入巨噬细胞的情况;通过竞争性抑制实验探讨巨噬细胞摄取壳寡糖的可能途径.结果:壳寡糖对巨噬细胞IL-1β基因表达的影响呈浓度与时间依赖性,IFN-γ预刺激巨噬细胞有增强作用;高浓度壳寡糖引起巨噬细胞胞浆游离Ca2+浓度升高;壳寡糖竞争性抑制巨噬细胞内吞甘露聚糖,抑制强度达44%.结论:壳寡糖可能是经由巨噬细胞表面的甘露糖受体介导结合并激活巨噬细胞,钙离子相关的信号转导途径可能参与这一过程.
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氧化型甘露聚糖修饰的肿瘤细胞疫苗诱导CTL的抗肿瘤免疫效果评价
目的：研究将氧化型甘露聚糖修饰的肾透明细胞癌细胞786?0作为肿瘤细胞抗原致敏树突状细胞（DC），观察其诱导产生的CTL对肾透明细胞癌的杀伤作用。方法分离健康志愿者外周血单个核细胞，体外经GM?CSF和IL?4刺激DC成熟。以肾癌786?0整个细胞作为肿瘤抗原，并制备成氧化型甘露聚糖肿瘤细胞疫苗。实验分组：空白组（DC?PBS组），对照组（Control?DC?786?0融合瘤苗组）、实验组（DC?Ox?Mannose?786?0融合瘤苗组）。流式细胞术检测各组DC表型的变化情况，ELISA法检测各组DC上清IL?12的分泌水平，CCK?8法检测各组DC诱导的细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）对肾癌细胞786?0的杀伤效果。结果经流式细胞仪分析检测：DC?Ox?M?786?0组DC表面成熟标志CD80、CD83、CD86、HLA?DR的表达水平明显高于Control?DC?786?0组及DC?PBS组，ELISA法测得实验组IL?12的分泌水平也明显高于Control?DC?786?0组和DC?PBS组，与此同时DC?Ox?M－786?0组诱导的各组细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）杀瘤活性较Control?DC?786?0组、DC?PBS组均明显增强。结论氧化型甘露聚糖化抗原能更为有效的致敏DC，并刺激其成熟，增强其抗原递呈功能，与此同时对于肿瘤细胞的杀伤作用也有明显的提高。
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中药多糖选择性免疫细胞受体研究进展
中药多糖对提高机体体液和细胞免疫功能,调整免疫细胞状态,激活细胞因子表达,发挥防御病原免疫、抗肿瘤等方面具有重要研究价值.归纳国内外学者对中药多糖生物特性以及主要选择结合补体Ⅲ型受体、Toll - Like受体、甘露糖受体的作用机制研究进展,揭示中药多糖可能通过与细胞免疫分子联系的信号通路传导发挥其作用.
关键词： 补体Ⅲ型受体 Toll - Like受体 甘露糖受体 综述 -
巨噬细胞甘露糖受体模型的初步建立及其在中药复方筛选中的应用
目的:建立巨噬细胞甘露糖受体(MMR)模型,用于筛选中药中以甘露糖受体(MR)为靶标的活性物质.方法:将小鼠腹腔臣噬细胞分别与不同浓度的D-甘露糖和D-半乳糖共孵,用流式细胞仪和荧光显微镜检测D-甘露糖和D-半乳糖对Mψ结合算硫氰酸荧光素标记的甘露糖化牛血清白蛋白(M-FITC-BSA)的拮抗作用,优化实验条件,建立MMR筛选模型;将上述模型用于筛选四物汤等6个复方多糖中的MR结合成分.结果:两种检测方法均显示:随D-甘露糖浓度的上升,M-FITC-BSA标记的Mψ检出率逐步下降(P＜0.01),而这种现象在D-半乳糖组中未观察到;当D-甘露糖达到0.080mmol/L浓度时,便能明显拮抗Mψ结合M-FITC-BSA(P＜0.05或P＜0.01).复方多糖的筛选结果显示:在一定浓度下,四君子汤、六味地黄汤和玉屏风散多糖组分能明显拮抗小鼠腹腔Mψ与M-FITC-BSA的结合,且具有浓度组间差异性(P＜0.05或P＜0.01).结论:MMR模型对MR结合成分的筛选作用稳定而敏感,用于中药MR结合物的筛选,对快速筛选中药免疫调节成分、研究中药免疫调节机制具有重要意义.
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宫颈粘液对人精子甘露糖受体表达的影响
目的:研究人宫颈粘液是否影响人精子甘露糖受体的表达.方法:正常人精子穿透宫颈粘液2 h后,用金霉素(CTC)荧光染色法鉴定其获能及顶体状态,并用异硫氰酸荧光素标记的甘露糖化牛血清白蛋白(FITC-DMA)检测精子甘露糖受体的表达.对照组分别用获能培养基BWW培养0、2、6 h后用相同方法检测.结果:人精子穿透宫颈粘液后"获能"型精子百分率较穿透前增高,而"顶体反应"型精子百分率及甘露糖受体的标记阳性率与穿透前无差别.结论:宫颈粘液促进精子获能,但不诱导顶体反应,且不影响其甘露糖受体的表达.
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干扰素-α对嗜酸性粒细胞抗白血病免疫效应的增强作用
目的:观察干扰素-α(interferon-α,IFN-α)在羟基脲(hydroxycarbmide,OHU)治疗慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)中对嗜酸性粒细胞(eosinophile granulocyte,EOS)抗白血病免疫效应的增强作用,并探讨其相关的免疫机制.方法:收集2010年1月至2012年2月间解放军第148中心医院诊治的46例BCR-ABL阳性的CML初治患者,分为OHU单独治疗组(20例)和OHU联合IFN-α治疗组(26例),两组患者的性别比例、年龄范围和疾病分期等基本均衡；同时采集本院查体中心30名健康志愿者的标本作为对照.ELISA法检测患者治疗前后血清中IL-6、IL-12、IL-17和IFN-γ的水平；细胞化学染色法检测患者骨髓细胞中过氧化物酶(peroxydase,POX)的活性,免疫荧光(immunofluorescence,IF)染色检测CML患者骨髓中IL-12、IL-17A和甘露糖受体(mannose receper,MR)的表达情况.结果:CML患者血清IL-6、IL-12和IL-17含量较健康志愿者显著升高[ (116.13±15.16)vs(90.98±12.32) Pg/ml,( 189.26 ±22.14)vs (96.60±4.92)pg/ml,(34.42±2.16)vs(23.74±1.36) pg/ml;均P＜0.05].单纯OHU治疗后,CML患者血清中IL-6、IL-12和IL-17的水平显著下降[分别为(87.14±13.37)、(60.22±20.16)、(17.03±2.16) pg/ml,均P＜0.05]；与单纯OHU治疗组相比,OHU联合IFN-α组患者血清中IL-6、IL-12和IL-17的水平显著上调[(122.04±10.25)、(101.12±27.16)和(40.16±4.11) pg/ml,P＜0.05或P＜0.01].CML患者骨髓中EOS阳性表达IL-12、IL-17A和MR.IFN-α联合OHU治疗能减轻OHU对EOS的免疫抑制效应,患者骨髓中IL-12、IL-17A水平和MR阳性EOS数量较单纯OHU治疗组显著增加,且POX活性增强.结论:CML患者的EOS能分泌IL-12和IL-17,并表达MR.IFN-α联合OHU治疗能增强EOS的抗白血病效应,减轻OHU对EOS的免疫抑制作用.
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甘露糖修饰壳聚糖对巨噬细胞摄取纳米粒的影响
目的 制备和评价甘露糖修饰壳聚糖包衣乳酸-羟基乙酸共聚物( PLGA)纳米粒,考察其对巨噬细胞毒性和对巨噬摄取功能的影响.方法 采用复乳法制备负载卵清蛋白(OVA)的PLGA纳米粒,并经甘露糖修饰壳聚糖包衣处理后用激光粒度测定仪测定该纳米粒的大小与ζ电位,透射电镜观察纳米粒的外观形态,BCA法测定OVA含量后计算载药量与释放度.负载异硫氰酸荧光素(FITC)标记的OVA纳米粒与巨噬细胞(RAW 264.7)共孵育,MTT法测定细胞存活率,荧光显微镜考察摄取程度.结果 OVA-PLGA纳米粒的大小和ζ电位均随壳聚糖包衣液浓度的增加而变大(P＜0.05),OVA载药量范围为7.2％～8.4％.壳聚糖与甘露糖修饰壳聚糖包衣FITC-OVA-PLGA纳米粒与RAW 264.7共孵育后,对细胞存活率的影响不大(P＞0 05),但可明显促进FITC-OVA-PLGA纳米粒的巨噬细胞摄取(P＜0.05).结论 初步建立了负载模型抗原的甘露糖修饰阳离子型纳米粒系统,这为体内抗原递呈细胞靶向性研究提供了依据.
关键词： 甘露糖受体 壳聚糖 乳酸-羟基乙酸共聚物 巨噬细胞 -
大鼠肺泡、腹腔巨噬细胞甘露糖受体与配体的亲和力比较
目的:探讨来源于不同组织肺泡、腹腔巨噬细胞甘露糖受体(macrophage mannose receptor, MMR)与配体的亲和力差异.方法:采用支气管肺泡灌洗和腹腔冲洗法获得肺泡和腹腔巨噬细胞(macrophage,Mφ),经纯化、鉴定后与异硫氰酸荧光标记的甘露糖基化牛血清白蛋白(M-FITC-BSA)孵育20 min,分别加入D-甘露糖、D-半乳糖、EDTA,采用荧光显微镜和流式细胞仪检测甘露糖受体(mannose receptor,MR)与配体的结合情况.结果:Mφ上存在MR,MR与配体的结合属于Ca2+依赖性,其结合可被D-甘露糖、EDTA抑制,而不受D-半乳糖的抑制;腹腔MMR与配体的亲和力高于肺泡MMR.结论:腹腔MMR与配体的亲和力高于肺泡MMR.
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L-选择素与小鼠肝癌细胞Hepa1-6淋巴道转移的关系
目的 研究L-选择素(L-selectin)与其配体甘露糖受体(mannose receptor,MR)间相互作用与小鼠肝癌细胞Hepa1-6淋巴道转移潜能相关性.方法 构建含有L-selectin的重组载体pcDNA3.1,转染小鼠肝癌细胞 Hepa1-6,筛选稳定表达L-selectin的细胞株.采用免疫组化、RT-PCR、流式细胞、体外黏附试验技术研究小鼠肝癌细胞Hepa1-6中L-selectin的表达及其与肿瘤细胞淋巴道转移潜能的相关性.结果 1重组质粒为目的基因L-selectin.2 Hepa1-6细胞表面有L-selectin表达,阳性率20.2%.3流式细胞仪检测结果表明Hepa1-6细胞表达L-selectin为19.9%.4体外黏附试验结果表明,不具有转移特性的Hepa1-6表达L-selectin后可发生淋巴道转移,L-selectin能与MR结合(P<0.001),介导Hepa1-6的淋巴道转移.结论 Hepa1-6表达目的基因L-selectin后具有淋巴道转移潜能,并能与MR在体外结合,介导肿瘤细胞的淋巴道转移.
