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α1受体参与不同血供状态心肌凋亡蛋白调控的研究
α1受体的活化状态与不同血供状态心肌细胞凋亡相关,但其机制不清,我们从凋亡蛋白的变化来探讨.
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脂联素对PDGF诱导的肾小球系膜细胞增殖的影响
目的：探讨脂联素（adiponectin，ADPN）对血小板源性生长因子（PDGF）诱导的系膜细胞增殖及凋亡相关蛋白Bcl-2，Bax表达的影响。方法：脂联素预孵系膜细胞，采用PDGF-BB刺激系膜细胞，应用MTT法检测细胞增殖，应用Western法检测增殖细胞核抗原PCNA、凋亡抑制蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的表达。结果：（1）脂联素抑制PDGF-BB所致的系膜细胞增殖，与单用PDGF-BB组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。（2）脂联素抑制PDGF-BB所致系膜细胞Bcl-2的表达，促进Bax蛋白的表达，与PDGF-BB组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：PDGF-BB能够促进系膜细胞增殖，使凋亡抑制蛋白Bcl-2表达增加，而促凋亡蛋白Bax表达减少。加入脂联素干预后通过下调Bcl-2，上调Bax的表达而抑制了由PDGF-BB引起的系膜细胞增殖。
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补肾健脾中药复方干预成骨细胞内细胞凋亡蛋白的机制研究
目的 分析补肾健脾中药复方对成骨细胞内Bcl-2、Bax和Bid的调控作用,探讨细胞凋亡信号途径和骨质疏松症的相关关系.方法 选用1日龄SD大鼠获取原代的成骨细胞体外培养,细胞分成治疗组、对照组和正常组,治疗组给予补肾健脾中药复方含药血浆,对照组给予戊酸雌二醇含药血浆培养,正常组常规培养,采用MTT比色法记录各组细胞的OD值,荧光定量PCR法检测各组Bcl-2、Bax和Bid表达.结果 在细胞增殖方面,治疗组的OD值在第8天时达大值,明显高于对照组(P＜0.05),从而确定第8天为佳实验时间;与对照组相比,治疗组中Bcl-2、Bax和Bid蛋白的表达量上升,其差异有统计学意义(P＜0.05);而且治疗组的Bcl-2/Bax比值明显高于对照组,其差异有统计学意义(P＜0.05).结论 补肾健脾中药复方能下调Bcl-2、Bax和Bid的表达,在一定程度上抑制成骨细胞的凋亡.
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三氧化二砷联合多西他赛对人卵巢癌细胞株HO8910的抗肿瘤作用机制研究
目的 研究三氧化二砷联合多西他赛对体外培养卵巢癌细胞株的增殖及细胞凋亡的影响.方法 将卵巢癌细胞随机分为4组:空白组(0.9％ NaCl)、模型组(8 μmol·L-1As2O3)、对照组(1 mg·L-1多西他赛)和实验组(8μmol· L-1 As2O3+1 mg·L-1多西他赛),4组均培养72 h.用噻唑蓝法检测药物对细胞生长的抑制率,用免疫印迹法和实时定量聚合酶链式反应检测药物作用后细胞蛋白激酶样R内质网激酶(PERK)、同源蛋白(CHOP)、细胞凋亡蛋白酶Caspase3与B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达情况.结果 药物干预72 h后,模型组、对照组与实验组的抑制率分别为(3.04±0.76)％,(14.91±1.52)％,(38.79±2.94)％.与模型组比较,对照组和实验组差异均有统计学意义(均P＜0.01);与对照组比较,实验组差异也有统计学意义(P＜0.01).药物干预72 h后,模型组、对照组与实验组的PERK分别为6.27±0.18,6.28±0.19,7.74±0.90;这3组的CHOP分别为6.25±0.24,6.27±0.16,7.51±0.49;这3组的Caspase分别为37.14±0.21,37.21±0.63,9.40±0.33.与模型组比较,实验组差异均有统计学意义(均P＜0.05);与对照组比较,实验组差异也均有统计学意义(均P＜0.01).结论 As2O3联合多西他赛可激活卵巢癌细胞株内质网应激效应,抑制卵巢癌细胞增殖,诱导卵巢癌细胞凋亡.
关键词： 三氧化二砷 多西他赛 卵巢癌细胞HO8910 凋亡蛋白 内质网 -
清热化瘀滋阴方药效学研究和对狼疮小鼠肾组织凋亡蛋白的影响
目的：观察清热化瘀滋阴方的抗炎镇痛作用和对狼疮性MRL／lpr小鼠肾组织凋亡蛋白的影响。方法制备小鼠醋酸扭体和二甲苯致小鼠耳肿胀模型，动物分为5组，模型组、3个剂量（12，24，48 g· kg －1）清热化瘀滋阴方组及阿司匹林组（300 mg· kg －1），灌胃3 d，观察给药前后镇痛抗炎作用。制备大鼠Ⅲ型变态反应模型，动物分为5组，模型组、3个剂量（6，12，24 g· kg－1）清热化瘀滋阴方及泼尼松组（5 mg · kg－1），灌胃10 d，观察给药后大鼠皮肤反应程度。MRL／lpr小鼠分为4组，模型组、清热化瘀滋阴方组（24 g· kg－1）、泼尼松组（10 mg· kg－1）及清热化瘀滋阴方联合泼尼松组（24 g· kg－1＋10 mg· kg －1），灌胃4周，检测对肾组织Fas、FasL凋亡蛋白的表达。结果清热化瘀滋阴方能够明显减少扭体次数和耳廓肿胀度；抑制大鼠Ⅲ型变态反应皮肤反应程度；同时显著升高MRL／lpr小鼠肾组织Fas、FasL蛋白表达。结论清热化瘀滋阴方具有抗炎镇痛、抑制变态反应和促进肾组织细胞凋亡作用。
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墓头回提取物诱导K562细胞凋亡的实验研究
目的 探讨墓头回提取物体外抗白血病作用,为墓头回提取物抗肿瘤活性单体的筛选提供理论依据.方法 采用MTT法测定墓头回对K562细胞的增殖抑制率,计算出IC50值;台盼蓝拒染法、流式细胞仪PI染色观察墓头回对K562细胞的促凋亡活性,用免疫细胞化学法检测墓头回对凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白表达的影响.结果 墓头回对K562细胞增殖具有明显的抑制作用,且在一定的剂量范围内其抑制作用具有明显的剂量依赖性,IC50为36.03 mg/L.墓头回作用于K562细胞后,倒置显微镜下可见典型的凋亡细胞的形态学特征.流式细胞仪检测结果显示,实验组细胞凋亡率明显高于对照组,与对照组相比差异显著(P＜0.05).结论 墓头回作用于K562细胞,可以明显抑制K652细胞增殖.此外,诱导K562细胞凋亡可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一.
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MiR-126在大鼠心肌缺血再灌注早期的表达及抗凋亡作用
目的 探讨miR-126在大鼠心肌缺血再灌注(I/R)早期的表达及抗凋亡作用.方法 48只SD大鼠随机分为假手术(Sham)、I/R 2 h、I/R 4 h、I/R 6 h组,每组12只大鼠,比较各组缺血区心肌细胞凋亡蛋白水平及miR-126表达水平.构建重组腺病毒rAAV9-ZsGreen-pre-miR-126载体,24只SD大鼠随机分为:①I/R组:大鼠转染空白病毒后I/R 2 h;②I/R+miR-126组:大鼠转染rAAV9-ZsGreen-premiR-126后I/R 2 h,再次比较各组缺血区心肌细胞凋亡蛋白水平.结果 与Sham组相比,I/R 2 h、4h、6h组大鼠心肌缺血区miR-126表达进行性降低(P＜0.05),非缺血区miR-126表达进行性升高(P＜0.05);心肌凋亡蛋白BAX及CASPASE-3表达水平升高(P＜0.05),抗凋亡蛋白BCL-2表达水平降低(P＜0.05).与I/R组相比,I/R+miR-126干预组心肌凋亡蛋白BAX及CASPASE-3表达水平明显减少,抗凋亡蛋白BCL-2表达水平增加(P＜0.05).结论 在I/R早期大鼠心肌缺血区miR-126表达随再灌注时间延长进行性下降,并伴随心肌细胞凋亡进展;过表达miR-126可减少I/R导致的心肌细胞凋亡,发挥保护心功能的作用.
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夏枯草注射液诱导K562细胞凋亡的实验研究
目的探讨夏枯草注射液体外抗白血病作用,为临床应用夏枯草注射液治疗白血病提供实验依据.方法采用MTT法测定夏枯草注射液对K562细胞的增殖抑制率,计算出IC50值;绘制夏枯草注射液(50、100 mg/mL)作用于K562细胞的生长曲线.用倒置显微镜、姬姆萨染色法、MTT染色法光镜下观察细胞形态,台盼蓝拒染法、流式细胞仪PI染色观察夏枯草注射液对K562细胞的促凋亡活性,用免疫细胞化学法检测夏枯草注射液对凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白表达的影响,并用图文分析系统进行定量分析.结果夏枯草注射液对K562细胞增殖具有明显的抑制作用,且在一定的剂量范围内抑制作用具有明显的剂量依赖性(r=0.985 0),IC50为0.113 mg/mL.夏枯草注射液(50 mg/mL)作用于K562细胞后,倒置显微镜、姬姆萨染色、MTT染色光镜下观察,均可见典型的凋亡细胞的形态学特征.流式细胞仪检测结果显示,处理组细胞凋亡率[(37.15±1.46)%]明显高于对照组细胞凋亡率[(5.56±0.68)%](P＜0.01).夏枯草注射液(50 mg/mL)作用于K562细胞48 h,bcl-2蛋白表达增强,而bax表达减弱,与对照组相比差异显著(P＜0.01).结论夏枯草注射液可明显抑制K562细胞增殖,可望成为新的抗白血病药物,诱导K562细胞凋亡可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一.
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基于线粒体靶向机制的石蒜碱抗肝癌作用研究
目的 研究石蒜碱诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的作用及其机制.方法 噻唑蓝(MTT)法检测石蒜碱对HepG-2细胞的生长抑制作用;倒置显微镜、荧光显微镜观察HepG-2细胞凋亡形态;透射电镜观察HepG-2细胞超微结构;流式细胞术检测HepG-2细胞凋亡率;激光共聚焦扫描显微镜检测线粒体膜电位;激光共聚焦显微镜检测HepG-2细胞线粒体膜通透性转换孔(MPTP);酶标仪检测Caspase-3蛋白活性;Western blotting法检测细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cyt-C、Caspase-9的表达.结果 石蒜碱对HepG-2细胞具有生长抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)为5.73μmol/L;形态学观察发现石蒜碱作用48 h后,细胞生长密度变疏、皱缩,且细胞生长呈现不规则形状,出现凋亡小体,随着给药浓度升高,凋亡小体也逐渐增多;透射电镜下可见细胞出现典型的凋亡特征;与对照组比较,随着石蒜碱给药浓度的增加,细胞凋亡率随之升高,线粒体膜电位下降,MPTP开放;石蒜碱作用48 h后,HepG-2细胞内Caspase-3蛋白相对活性升高,细胞内Cyt-C蛋白、Caspase-9蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达量降低,Bax蛋白表达量升高,且呈浓度依赖性关系,与对照组比较,具有统计学意义;结论 石蒜碱对HepG-2细胞具有生长抑制作用,并可通过启动线粒体途径诱导HepG-2细胞发生凋亡.
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黄芩素调节心肌缺血/缺氧损伤相关信号通路的研究进展
心肌缺血/缺氧通常会导致心脏结构和功能的损伤,黄芩素是广泛分布的一种黄酮类物质,近年研究发现黄芩素能够通过调节细胞信号通路,干预信号通路中关键信号分子的磷酸化过程,对缺血/缺氧心脏发挥保护作用.这些信号通路包括磷脂酰肌醇-3-激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶(PI3K/Akt)、丝裂原活化蛋白激酶家族(MAPKs)和核因子-κB (NF-KB)等,及其下游通路蛋白HMGB1、MMP-2/-9、eNOS和凋亡蛋白.现就黄芩素与心肌缺血/缺氧相关信号通路的相互作用机制进行综述.
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慢性特发性血小板减少性紫癜患者B淋巴细胞的研究
特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)分为急性和慢性两种,是一种以出血和血小板减少为主要特征的自身免疫性疾病[1].近年来众多的研究显示,T、B淋巴细胞亚群失衡以及细胞凋亡与自身免疫相关性疾病关系密切.为了探讨慢性ITP的发病机制,我们对慢性ITP患者外周血总B淋巴细胞、CD5+B淋巴细胞的数量、B淋巴细胞膜Fas蛋白、胞浆内凋亡蛋白Bcl-2的表达水平进行了测定,报告如下.
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十六味冬青散对COPD大鼠血清炎性因子及肺脏凋亡蛋白的影响
目的 分析十六味冬青散对COPD大鼠血清炎性因子及肺脏凋亡蛋白的影响机制.方法 选取60只清洁型的SD雌性大鼠,按照随机原则分成5组:A组COPD模型组、B组十六味冬青散高剂量组、C组十六味冬青散低剂量组、D组氨溴索治疗组、E组健康大鼠组.应用免疫组化法检测并比较各组肺脏中的相关凋亡蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase-3)的浓度.采用血清酶联免疫吸附法(ELISA)检测并比较各组大鼠血清炎性因子(IL-6、IL-8、TNF-α)的表达.结果 A组炎性反应水平高,E组炎性反应水平低.C组炎性反应水平低于A组,但差异无统计学意义(P>0.05).B组和D组炎性反应水平低于A组和C组,且D组研究反应水平低于B组,差异均有统计学意义(P<0.05).A组Bax、Caspase-3水平高,Bcl-2、Bcl-2/Bax水平低,E组Bax、Caspase-3水平低,Bcl-2、Bcl-2/Bax水平高.B组和D组的Bax、Caspase-3水平低于A组和C组,Bcl-2、Bcl-2/Bax水平高于A组和C组,差异均有统计学意义(P>0.05).A组和C组的Bax、Caspase-3、Bcl-2、Bcl-2/Bax水平比较差异无统计学意义(P>0.05).B组和D组Bax、Caspase-3、Bcl-2、Bcl-2/Bax水平比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 COPD的起病原因可能与肺部炎症及肺脏细胞的凋亡有关,十六味冬青散在COPD肺组织治疗中可以起到抗炎、抗细胞凋亡的作用,其具体机制可能是调节凋亡途径中的Bax、Bcl-2以及Caspase-3等相关蛋白的表达,阻止细胞炎性因子的表达,从而起到调节肺功能的作用.
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口腔黏膜白斑凋亡相关蛋白 Bcl－2和 Bax 的表达及意义
目的：通过探讨凋亡相关蛋白在口腔白斑病变过程中细胞凋亡状况和凋亡蛋白 Bcl－2、Bax 的表达的研究，探讨白斑发病机制及恶变机理。方法采用免疫组织化学检测法，与正常口腔粘膜对照，观察分析29例口腔白斑中 Bcl－2、Bax 蛋白的表达水平。结果上皮异常增生各组的凋亡指数均高于正常，Bcl－2、Bax 在上皮单纯增生、异常增生显过度表达，表达强度、分布也发生了改变。结论癌前病变中，上皮细胞凋亡状况发生了改变，Bcl－2可能对增生组织向恶变的转化发挥阶段性的促进作用，促凋亡因子 Bax 作用加强；凋亡因子的发挥即相互协同又相互制约。
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口腔黏膜白斑上皮组织中凋亡相关蛋白Bax的表达研究
目的 探讨凋亡相关蛋白Bax在上皮增生性病变改变中的生物学行为及癌变与Bax蛋白的关系.方法 采用免疫组织化学法检测法,观察分析29例口腔白斑、25例正常口腔黏膜上皮中细胞凋亡状况及凋亡相关蛋白Bax的表达.结果 Bax蛋白在白斑上皮组织中显过度表达.结论 Bax蛋白可能参与了增生性病变向恶性转化时的早期事件,起到一定的负调控作用.
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Livin和Caspase-3在上皮性卵巢癌中的表达及相关性研究
Livin又称ML－凋亡蛋白抑制蛋白(IAP)或KIAP是与肿瘤发生发展密切相关的凋亡抑制蛋白家族中的新成员,能够与内源性IAP抑制剂SNAC和Casoase-3,Caspase-7,Caspase-9 结合发挥抗细胞凋亡的作用[1].
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Livin基因过表达与肿瘤耐药的研究进展
Livin是凋亡蛋白抑制子(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族的重要成员,Livin的结构比较特殊,它由α和β亚基组成,这两个亚基各有一个baculovirus inhibitory repeat(BIR)序列,完整的Livin结构是一种能抑制细胞凋亡的细胞内蛋白质,它能与半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3,7,9结合,抑制caspase活性,阻断死亡信号的转导.
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胞二磷胆碱对神经细胞凋亡保护作用
目的 探讨胞二磷胆碱对6-羟基多巴胺所致的神经细胞凋亡的保护作用机制.方法 采用流式细胞仪检测神经细胞的凋亡百分比及Bax、Bc1-2蛋白表达.结果 将1,0.1,0.01和0.001 mmol/L胞二磷胆碱+6-羟基多巴胺组,与6-羟基多巴胺组比较,凋亡百分比明显降低(P＜0.01);各组Bax蛋白的表达率明显下降,0.1 mmol/L胞二磷胆碱组明显低于对照组;1,0.1和0.01 mmol/L胞二磷胆碱组Bcl-2表达率显著升高;Bax/Bcl-2比值下降,0.1 mmol/L胞二磷胆碱组Bax/Bcl-2比值低于对照组(P＜0.01).结论 胞二磷胆碱通过减少Bax和增加Bcl-2蛋白的表达,使Bax/Bcl-2比值下降、细胞凋亡减少,发挥其神经保护作用.
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川红拔瘤膏对小鼠脑胶质瘤生长的影响及作用机制
目的:观察川红拔瘤膏外敷对小鼠G422脑胶质瘤生长的抑制作用及其抗肿瘤的机制.方法:选取清洁级小鼠50只,随机分为:对照组、环磷酰胺组、川红拔瘤膏高、中、低3个剂量组.中药组右腋下皮肤涂抹给药,给药量为0.5mL.连续给药14天,阳性对照组连续给药7天.连续观察川红拔瘤膏对肿瘤生长的抑制情况,末次处死后,取肿瘤组织,流式细胞仪检测细胞周期变化与细胞凋亡.RT-PCR法检测肿瘤组织中caspase-3的表达.结果:拔瘤膏高浓度组的瘤重(0.516±0.107)g与其他组比较(除环磷酰胺组)对实体瘤的生长具有显著的抑制作用(P＜0.05).高浓度组肿瘤抑制率为31.28%.流式细胞仪结果显示,与空白组比较川红拔瘤膏高荆量组明显将小鼠肿瘤组织细胞阻滞于G0/G1期(P＜0.05),S期细胞数明显减少(P＜0.05).细胞凋亡分析可知,高荆量组作用的肿瘤细胞的凋亡率为(23.6±4.35)%,明显高于对照组(8.86±1.23)%,差异有统计学意义(P＜0.05).其他组与对照组比较,差异无统计学意义.caspase-3分析结果显示,与低剂量组、中剂量组,caspase-3表达强度无明显改变[(8.23±0.43),(7.96±0.52)vs (7.24±0.36),P＞0.05].高剂量组的caspase-3表达显著增加[(23.45±2.31)vs(7.24±0.36),P＜0.01].结论:川红拔瘤膏对小鼠G422脑胶质瘤具有抑制生长的作用,其作用可能与其抑制肿瘤细胞DNA合成、周期阻滞、诱导凋亡及上调凋亡基因caspase-3袁达有关.
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病毒性心肌炎小鼠T淋巴细胞凋亡的调控与清心胶囊的干预作用
目的:观察病毒性心肌炎(VMC)T细胞凋亡与凋亡蛋白表达的变化以及清心胶囊对这一环节的干预作用.方法:复制VMCBALB/c小鼠模型,给予清心胶囊治疗后,采用光镜和透射电镜观察心肌病理改变,Annexin v/PI 双染色流式细胞术和透射电镜观察T淋巴细胞凋亡;流式细胞术检测Fas、FasL、bcl-2及Bax蛋白在T细胞上的表达.结果:(1)模型组小鼠心肌病变明显,治疗组心肌病理改变明显减轻,正常组心肌无明显病理改变.(2)与正常组比较,VMC小鼠脾T细胞的凋亡率均显著升高(P＜0.01);与模型组比较,治疗组小鼠脾T细胞的凋亡率均显著降低(P＜0.01),但与正常组比较,仍有显著性差异(P＜0.01).透射电镜下可见正常T细胞和凋亡T细胞的典型形态,模型组T细胞凋亡增多.(3)与正常组比较,模型组小鼠脾T细胞Fas、FasL表达均显著升高(P＜0.01),bcl-2表达均显著降低(P＜0.01);与模型组比较,治疗组小鼠脾T细胞FasL表达均显著降低(P＜0.01),bcl-2表达均显著升高(P＜0.01、),Fas表达无统计学差异(P＞0.05);与正常组比较,治疗组小鼠脾T细胞FasL表达无显著性差异(P＞0.05),Fas、bcl-2表达仍有显著性差异(P＜0.05);而Bax表达各组间均无显著性差异(P＞0.05).结论:VMC发病过程中存在T细胞过度凋亡现象,这与Fas、FasL表达升高和bcl-2表达降低有关;清心胶囊能够显著抑制T细胞的过度凋亡,与其下调FasL表达和上调bcl-2表达有关.
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过表达雌激素相关受体α干预沉默Bak1、Bcl2重组腺病毒载体转染MG63细胞的增殖与分化
背景:雌激素缺乏是绝经后骨质疏松症的主要发病机制,而关于雌激素相关受体α(estrogen-related receptor alpha,ERRα)与骨质疏松症的相关性研究较少,ERRα在骨质疏松症中的具体作用及其机制在目前尚不明确.目的:研究过表达ERRα对沉默Bak1、Bcl2重组腺病毒载体转染的MG63细胞和相关蛋白的影响.方法:构建过表达ERRα和沉默Bak1、Bcl2腺病毒载体,将培养好的MG63细胞分成空载病毒组、Ad-shBak1组、Ad-shBcl2组、Ad-shBak1+shBcl2组,过表达ERRα进行干预.MTT法检测细胞增殖,考马斯亮蓝蛋白定量检测碱性磷酸酶活性,流式法测定钙离子浓度,Western blot法分析骨调节蛋白(骨形态发生蛋白4、结缔组织生长因子、骨桥蛋白、Runt相关转录因子2、肿瘤坏死因子α)的表达.结果与结论:①与空载病毒组对比,Ad-shBak1组的细胞活性、碱性磷酸酶活性均升高,钙离子浓度降低,各骨调节蛋白除肿瘤坏死因子 α 降低外,其余均升高;Ad-shBcl2组细胞活性、碱性磷酸酶活性、结缔组织生长因子均降低,但无显著性意义(P>0.05),钙离子浓度、骨形态发生蛋白4、Runt相关转录因子2均降低,骨桥蛋白、肿瘤坏死因子α显著升高(P<0.01);Ad-shBak1+shBcl2组的细胞活性、碱性磷酸酶活性稍升高,钙离子浓度稍降低,各骨调节蛋白水平均升高,但差异不明显(P>0.05);②与Ad-shBcl2组比较,Ad-shBak1组与Ad-shBak1+shBcl2组细胞活性、碱性磷酸酶活性升高,钙离子浓度显著降低,除肿瘤坏死因子α水平显著降低外,其余骨调节蛋白水平显著升高(P<0.01或P<0.05);③结果提示,过表达ERRα可提高重组腺病毒Bak1转染后的MG63细胞增殖和碱性磷酸酶活性,降低钙离子浓度,且对骨调节蛋白有一定影响作用.
