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MMP13在骨性关节炎患者滑膜细胞中的表达
目的观察在膝关节骨性关节炎(osteoarthritis,OA)患者的滑膜细胞中是否有基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinases-13, MMP13)的mRNA表达.方法分别取临床上5例确诊为膝关节骨性关节炎患者的滑液培养滑膜细胞,经形态学和免疫组化法鉴定其为成纤维细胞后,用RT-PCR检测其中MMP13的mRNA表达.结果所培养的细胞呈成纤维细胞样,Vimentin蛋白表达阳性,RT-PCR可检测到MMP13的mRNA表达,片断大小和文献报道的相一致.结论骨性关节炎患者滑膜细胞中有MMP13 的mRNA表达.
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原花青素对佐剂关节炎大鼠滑膜细胞Bcl-2、Bax表达的影响
目的:研究原花青素(PC)对佐剂关节炎大鼠滑膜细胞 Bc1-2、Bax表达的影响.方法:采用大鼠佐剂性关节炎(AA)模型,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定各组大鼠滑膜细胞 Bcl-2、Bax mRNA的水平,免疫印迹法(Western blotting)检测各组大鼠滑膜细胞Bcl-2、Bax蛋白表达,分析滑膜细胞caspase-3酶原的裂解,比色法测定大鼠滑膜细胞caspase-3的相对活性.结果:正常大鼠滑膜细胞Bcl-2和Bax均有表达,模型组大鼠Bcl-2、Bax表达均高于正常组.PC (6,30 mg/kg)治疗组可明显下调Bcl-2 mRNA和蛋白的表达,上调Bax mRNA和蛋白表达;而caspase-3酶原的表达随药物浓度的增加而减少,药物组大鼠caspase-3与对照组相比活性升高.结论:PC可通过下调滑膜组织中Bcl-2表达、上调 Bax表达,诱导caspase-3活化,从而诱导滑膜细胞凋亡,这可能是其治疗佐剂性关节抗炎的机制之一.
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类风湿关节炎中HIF-1α的研究进展
类风湿关节炎(RA)的病理特征是滑膜的增生及多种炎症细胞的浸润.滑膜衬里层的增生将造成滑膜血管和滑膜细胞之间的距离增加,超过了氧的弥散距离;此外,滑膜细胞的增生、炎症细胞的浸润及无功能血管网的形成都将增加耗氧量,这些都将造成受累关节滑膜的缺氧.缺氧是炎症性关节微环境的一个特征性表现.
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丙酮酸乙酯对滑膜细胞HMGB1的影响及机制
目的 探讨丙酮酸乙酯对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞高迁移率族蛋白-1(HMGB1)表达的影响及分子机制.方法 将培养的RA滑膜细胞分为正常对照组、TNF-α组和丙酮酸乙酯+TNF-α组;采用RT-PCR法检测细胞HMGB1 mRNA表达;ELISA法检测细胞培养上清液中HMGB1、IL-6和IL-8含量;采用Western blot法分别检测滑膜细胞胞质和核内NF-κB变化;采用免疫荧光法观察NF-κB在细胞中的分布.结果 丙酮酸乙酯可抑制TNF-α诱导滑膜细胞IL-6、IL-8、HMGB1的分泌和HMGB1 mRNA的表达,以及NF-κ B(p65)在滑膜细胞核内的表达和移位.结论 丙酮酸乙酯能下调滑膜细胞HMGB1表达和抑制NF-κB信号通路活化,可能对RA发挥抗炎作用.
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HIF-1α及 VEGF 在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达及意义
目的研究类风湿性关节炎（RA）患者滑膜细胞在体外常氧和缺氧培养条件下缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的差异性及意义。方法对RA患者及骨关节炎（OA）患者的关节滑膜细胞在体外常氧和缺氧条件下分别进行培养，根据培养条件分为常氧组、缺氧6h组及缺氧12h组；采用免疫印迹法分别检测各组成纤维样滑膜细胞的HIF-1α及VEGF的表达情况。结果与常氧组相比，缺氧6h及12h的RA和OA患者滑膜细胞的HIF-1α及VEGF的表达均显著增加，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。同时RA和OA患者缺氧12h组滑膜细胞HIF-1α及VEGF的表达高于缺氧6h组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。RA和OA患者3组滑膜细胞的HIF-1α及VEGF的表达均呈正相关（均P＜0.05）。常氧组RA与OA患者滑膜细胞的HIF-1α及VEGF的表达均无统计学差异（均P＞0.05）；而缺氧6h和12h组中RA滑膜细胞HIF-1α及VEGF的表达均高于OA滑膜细胞，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论在缺氧条件下RA患者滑膜细胞HIF-1α及VEGF表达显著升高且密切相关，可能缺氧-HIF-1α-VEGF这一信号途径在RA的发生、发展中起着重要作用。
关键词： 类风湿性关节炎 骨关节炎 滑膜细胞 缺氧诱导因子- 1α 血管内皮生长因子 -
白细胞介素-1、肿瘤坏死因子-α、滑膜细胞产生的转录因子核因子与类风湿性关节炎
类风湿性关节炎(RA)是一种慢性自身免疫性疾病,其基本的病理特征是滑膜增生伴关节软骨和骨组织的破坏.其中白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、滑膜细胞产生的转录因子核因子(NF-κB)在RA的发病和进程中起着关键作用.
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重组人内抑素对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织凋亡相关基因表达的影响
目的:观察重组人内抑素(rh-end)对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织p53、fas和bcl-2基因表达的影响.方法:采用SYBR Green I实时荧光定量PCR方法,定量检测该药对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织p53、fas和bcl-2 mRNA表达的影响.结果:与模型组相比,rh-end治疗组大鼠滑膜组织fas和bcl-2 mRNA表达水平增加,p53 mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论:rh-end可经fas介导诱导佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡,且不依赖于p53,不能被bcl-2所抑制.
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类风湿关节炎细胞凋亡的研究现状
类风湿关节炎是一种自身免疫病,有关于类风湿关节炎细胞凋亡的研究成为近年来的研究热点,本文探讨了类风湿关节炎滑膜细胞的凋亡异常和影响其凋亡的因素如凋亡基因和细胞因子等,并简要阐述了与类风湿关节炎滑膜细胞凋亡有关的信号转导途径.了解此方面内容的研究进展必将有助于类风湿关节炎的临床治疗和新药开发.
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黄芪总提物对佐剂性关节炎的抗氧化作用
目的研究黄芪总提物(total extract of astragalosides,TEA)对佐剂性关节炎(AA)大鼠的治疗作用与其抗氧化作用的关系.方法测量(AA)大鼠非致炎侧足爪容积和滑膜细胞LPO;测量兔滑膜成纤维细胞的增殖量;间接测量体外超氧阴离子自由基()和羟自由基(.OH)产生量.结果 TEA对AA大鼠的阶段性治疗(90mg.kg-1.d-1,d15～23,ig),不仅有抗关节炎作用,且可使AA鼠过高的滑膜细胞MDA水平降至正常;对低水平氧化应激诱导兔滑膜成纤维细胞的增殖反应,TEA(10～40μg.ml-1)有明显抑制作用.TEA(5～80μg.ml-1)对黄嘌呤(X)-黄嘌呤氧化酶(XO)体系以及非酶体系产生有明显抑制作用,高浓度TEA(80μg.ml-1以上)对XO的活性还有抑制作用;TEA(0.05～160μg.ml-1)对Fenton反应(Fe2+-H2O2)产生.OH引起苯甲酸羟化也有明显的浓度依赖性抑制作用.结论 TEA对AA鼠的治疗作用可能与其抗氧化作用有关.
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枫杨乙醇提物对胶原诱导性关节炎大鼠的治疗作用及其机制研究
目的 观察湖北枫杨乙醇提取物对SD大鼠CIA模型的治疗作用,并对其抗炎和促凋亡的机制进行初步探索.方法 构建CIA模型后,测量其体质量、足跖肿胀率、关节炎指数;通过药物灌胃治疗后,观察各组大鼠膝关节滑膜病理形态变化,血清TNF-α、IL-1β、ALT、AST、BUN、SCr变化,膝关节滑膜内NF-κB p65磷酸化(p-p65)、cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax表达.结果 不同剂量湖北枫杨乙醇提取物组及雷公藤组使大鼠体质量增加,足跖肿胀率、关节炎指数下降(P<0.05);膝关节滑膜中炎性细胞减少,凋亡滑膜细胞增多;血清TNF-α、IL-1β降低(P<0.05);滑膜内p-p65、Bcl-2表达减少,cleaved caspase-3、Bax表达增加;湖北枫杨乙醇提取物各组ALT、AST、BUN、SCr下降(P<0.05).结论 湖北枫杨乙醇提取物对SD大鼠CIA模型有很好的治疗效果,其机制可能与调控相关炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的表达及诱导滑膜细胞凋亡有关,同时该提取物可改善CIA大鼠肝、肾损伤.
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原花青素二聚体B2对大鼠滑膜细胞NF-κB核转运及炎症因子表达的影响
目的 通过观察原花青素二聚体B2(procyanidins dimer B2,PCB2)对大鼠滑膜细胞NF-κB核转运及相关炎症因子表达的影响,探讨其抗炎的分子机制.方法 免疫荧光法观察NF-κB/p65在细胞中的定位,RT-PCR检测PCB2对诱导细胞的COX-2 mRNA表达,Western blot分析COX-2蛋白含量变化,ELISA测定各处理组细胞上清液中IL-1β、VEGF的含量变化.结果 TNF-α(10 μg·L-1)诱导RSC-364细胞NF-κB从细胞质转运至细胞核,50 μmol·L-1 PCB2明显抑制NF-κB/P65核转运;PCB2剂量依赖性抑制COX-2基因和蛋白的表达;PCB2下调了TNF-α诱导的IL-1β、VEGF的水平.结论 PCB2能有效抑制COX-2、IL-1β及VEGF的表达,其机制可能与抑制TNF-α诱导的NF-κB核转运,抑制NF-κB活化有关.
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重组人内抑素诱导佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的研究
目的 以弗氏完全佐剂诱导的佐剂性关节炎(AA)大鼠为动物模型,观察重组人内抑素诱导AA大鼠滑膜细胞凋亡的作用.方法 分离、培养滑膜细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测重组人内抑素体内用药对滑膜细胞增殖的影响;用缺口末端标记法(TUNEL)及流式细胞仪检测重组人内抑素对AA滑膜细胞凋亡的影响.结果 AA大鼠表现为滑膜细胞异常增殖,rh-End(1.25、2.5、5.0 mg·kg-1)体内治疗给药及rh-End 6.25～50 mg·L-1浓度范围体外给药可抑制AA大鼠成纤维样滑膜细胞的增殖反应.rh-End体内用药可诱导AA大鼠滑膜组织及细胞的凋亡,rh-End体外用药作用48h,Annexin V/PI双染色法观察到大鼠AA FLS凋亡率为1.77%,rh-End(25 mg·L-1)可诱导AA大鼠FLS的凋亡,其凋亡率为6.67%.结论 rh-End可不同程度抑制FLS的增殖反应,并诱导其凋亡的发生,减轻AA大鼠增生性滑膜炎.上述结果提示炎症增生的滑膜细胞可能是rh-End的另一个作用靶点.
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芍药苷对胶原性关节炎大鼠滑膜细胞G蛋白偶联信号的调节作用
目的 研究芍药苷(paeoniflorin,Pae)对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜细胞G蛋白偶联信号转导的调节作用.方法 用鸡Ⅱ型胶原诱导胶原性关节炎.在免疫后d 16～23,胶原性关节炎大鼠灌胃给予 Pae (25、50、100 mg·kg-1).通过足爪肿胀和关节炎指数评价关节炎.采用Western blot技术检测滑膜细胞中抑制性G蛋白(Gi)表达.用放免法检测滑膜细胞中cAMP水平,用激酶发光分析法测定滑膜细胞中蛋白激酶A(PKA)的活性.结果 胶原性关节炎大鼠出现明显的继发性炎症反应.滑膜细胞中Gi蛋白表达增加,而cAMP水平和PKA活性明显降低.Pae抑制胶原性关节炎大鼠的炎症应答.在100 mg·kg-1, Pae抑制Gi的表达.在50 mg·kg-1和 100 mg·kg-1剂量, Pae提高cAMP水平和PKA活性.体外研究发现,Pae (2.5、12.5、 62.5 mg·L-1)降低滑膜细胞中Gi的表达,而提高降低的cAMP水平和PKA活性.结论 胶原性关节炎大鼠滑膜细胞中G蛋白偶联的信号转导与滑膜炎病理机制密切相关;Pae对胶原性关节炎大鼠的抗炎作用是通过调节G蛋白偶联的信号转导实现的.
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重组人内抑素对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞增殖及产生细胞因子的影响
目的 观察重组人内抑素对体外培养佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞的增殖功能及产生细胞因子的影响,探讨其治疗佐剂性关节炎的作用机制.方法 采用弗氏完全佐剂(CFA)诱导的佐剂性关节炎 (AA) 大鼠模型,用足容积法测量关节肿胀度;采用collagenase type Ⅱ消化法分离、培养滑膜细胞,MTT法检测重组人内抑素体内用药对滑膜细胞增殖的影响;放免法检测滑膜细胞上清液中IL-1β、TNF-α的含量.结果 CFA致炎后d 10,AA大鼠出现继发性炎症,此时皮下注射重组人内抑素(1.25,2.5,5 mg·kg-1),连续7 d,对照组于d 10给予MTX(1.0 mg·kg-1).各剂量组能明显抑制AA 大鼠的继发性足肿胀;重组人内抑素体内用药可明显减少AA 大鼠滑膜细胞数量,抑制滑膜细胞的增殖,并呈剂量依赖关系;各剂量组均可明显抑制AA大鼠滑膜细胞产生过高的IL-1β和TNF-α.结论 重组人内抑素抑制AA大鼠滑膜细胞过度的增殖及过高的细胞因子是其治疗AA的途径之一.
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CCK-8对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖的影响
目的 研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞增殖的影响及相关机制.方法 应用噻唑蓝(MTT)比色法检测CCK-8对IL-1β诱导RSC-364细胞增殖的影响;应用Western blot检测CCK-8对IL-1β诱导RSC-364细胞p38 MAPK磷酸化的影响.结果 CCK-8剂量依赖性(10-12、10-10、10-8、10-6 mol·L-1)抑制IL-1β诱导的RSC-364细胞增殖;CCK-8剂量依赖性(10-10、10-8、10-6 mol·L-1)抑制了IL-1β诱导的RSC-364细胞p38 MAPK的磷酸化;且CCK-8 A、B受体拮抗剂CR1409或CR2945均减弱了CCK-8的抑制效应.结论 CCK-8剂量依赖性抑制了IL-1β诱导的RSC-364细胞增殖,该作用由CCK-AR和CCK-BR介导,并可能通过抑制p38 MAPK磷酸化而实现的.
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MAPKs信号转导在类风湿性关节炎滑膜细胞中作用
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-actived protein kinase,MAPK)是真核生物信号传递网络中的重要途径之一,在基因表达调控和细胞质功能活动中发挥关键作用.在哺乳动物机体中,5种不同的MAPK信号转导通路中ERK1/2信号转导通路调控细胞生长和分化,JNK和p38 MAPK信号转导通路在炎症与细胞凋亡等应激反应中发挥重要作用.信号转导途径的活化是类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)慢性滑膜炎的典型特征,通过这一途径诱导滑膜细胞胞质蛋白磷酸化,使转录因子和核蛋白如c-Fos、c-Jun、AP-1和NF-κB等磷酸化,从而促进细胞增殖和活化.上述机制研究对于RA发病机制的深入了解以及研制开发治疗RA的新型药物具有重要的意义.
关键词： 类风湿性关节炎(RA) MAPKs 滑膜细胞 -
MAPKs信号转导在类风湿关节炎滑膜细胞中作用及其药物的影响
MAPKs信号转导途径的活化是RA慢性滑膜炎的典型特征,通过这一途径诱导滑膜细胞胞浆蛋白磷酸化,进而使转录因子和核蛋白如c-fos、c-jun、AP-1和NF-κB等磷酸化,从而促进细胞增殖和活化.上述机制研究对于RA发病机制的深入了解以及研制开发治疗类风湿关节炎的新型药物具有重要的意义.
关键词： MAPKs 类风湿关节炎(RA) 滑膜细胞 药物治疗 -
调节类风湿关节炎滑膜细胞基质金属蛋白酶表达的信号转导和相应的药物作用靶点
影响类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞基质金属蛋白酶表达的胞外信号包括T淋巴细胞、细胞因子、生长因子、干扰素和神经肽等,它们引起的信号在胞内主要依赖G蛋白偶联跨膜受体介导的途径和丝裂原激活的蛋白激酶途径转导.作用于这些信号或其转导过程的药物正成为治疗RA、预防RA关节破坏的新策略之一.
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雷公藤多苷含药血清对大鼠成纤维样滑膜细胞增殖及MIF表达的影响
类风湿关节炎(rheumatioid arthritis,RA)是临床常见的炎性关节病和主要致残因素之一.传统抗湿中药雷公藤可减少或替代糖皮质激素和(或)甾体抗炎药,具有明显的高效低毒优势.
关键词： 雷公藤多苷 雷公藤 含药血清 滑膜细胞 巨噬细胞移动抑制因子 -
类风湿关节炎滑膜细胞信号转导机制研究进展
滑膜细胞因子IL-1、TNF-α、EGF、TGF-β、PDGF、IGF-1在RA发病过程中可活化细胞内两条重要的信号通路:受体蛋白酪氨酸蛋白激酶-Ras-MAPK途径和非受体蛋白酪氨酸蛋白激酶-JAK-STAT途径,其中受体蛋白酪氨酸蛋白激酶-Ras-MAPKs信号转导路径异常是RA慢性滑膜炎的典型特征.研究G蛋白-AC-cAMP信号转导通路及该通路与酶偶联受体-Ras-MAPKs信号转导通路间的交互联系将具有十分重要的意义.
