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白虎追风丸对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞分泌TNF-α的影响
目的：研究白虎追风丸对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响。方法：采用消化分离的方法获得滑膜细胞，放免法检测原代大鼠滑膜细胞培养上清液中TNF-α的水平。结果：白虎追风丸可明显下调AA大鼠滑膜细胞分泌TNF-α的水平。
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TNF-α诱导类风湿关节炎滑膜细胞NF-κB信号通路活化的探讨
目的 研究TNF-α对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞NF-κB信号转导通路活化的影响.方法 原代培养类风湿性关节炎滑膜细胞；应用Western blot检测滑膜细胞p65-NF-κB和IκBα蛋白的表达变化；应用免疫荧光技术分析NF-κB核移位的变化.结果 TNF-α刺激不同时间后p65-NF-κB蛋白在滑膜细胞核内表达增加,而在胞浆表达减少,30 min时明显；同时,免疫荧光显示TNF-α可促使NF-κB向滑膜细胞核内移位；TNF-α刺激20 min后IκBα蛋白降解明显增加.结论 TNF-α诱导类风湿关节炎滑膜细胞NF-κB信号通路活化,可能与类风湿关节炎炎症进程有关.
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乙酰唑胺对类风湿关节炎滑膜细胞增殖及TNF-α及IL-1β的影响
目的 观察乙酰唑胺(AZ)对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞(FLS)的增殖影响,及AZ对RA FLS培养上清中TNF-α和IL-1β水平的影响.方法 从RA患者关节液中分离滑膜细胞体外培养,小同浓度AZ(10-4,10-6,10-8 mol/L)处理RA FLS 24,48,72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测AZ对RA FLS增殖影响；ELISA法检测AZ处理后培养上清中TNF-α和IL-1β水平.结果 不同浓度AZ处理的RA FLS吸光度值比较无统计学差异(P＞0.05),随着时间延长,各组间细胞增殖有抑制趋势,与不加药对照组相比差异有统计学意义(P＜ 0.05)；AZ可呈剂量及时间依赖性抑制RA FLS分泌TNF-α和IL-1β(P＜0.05).结论 AZ可以抑制RA FLS增殖及减少RA FLS分泌IL-1β和TNF-α.
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不同来源人滑膜细胞体外培养的比较
目的 对滑膜细胞分离培养的不同实验方法进行比较研究.方法 取患者关节滑膜组织和游离的关节液,分别采用滑膜组织培养法和关节液培养法分离培养细胞,观察滑膜细胞的生长情况.结果 采用组织培养法获得的滑膜细胞数量较多,细胞形态典型,增殖较快.关节液培养法培养的滑膜细胞,数量少,增殖慢,培养周期较长,所获得的滑膜细胞均能满足后续实验的需要.结论 两种方法各有优缺点,可达到互为补充的效果.在临床上可根据病人的情况进行选择.
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新型关节炎注射液-羧甲基壳聚糖的研究
利用壳聚糖分子C6位上羟基与氯乙酸反应制得了水溶性羧甲基壳聚糖(O-CMC),电导法测定羧甲基的取代度为0.76.对其进行了溶解性表征及动物造模试验.试验结果表明O-CMC具有润滑关节,有效抑制兔膝关节内成纤维细胞增殖的作用,有利于病理性关节软骨的修复,对兔类风湿性关节炎有较好的疗效.
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无滑膜肌腱滑膜化的组织工程学研究
我们将兔趾腱鞘内滑膜组织进行体外培养，经原代培养和传代培养，制成 滑膜细胞悬液，再把兔腱鞘外无滑膜肌腱段放入滑膜细胞悬液中混合培养。经光镜、扫描电 镜和免疫组织化学检测，结果显示，滑膜细胞爬行并覆盖了无滑膜肌腱段的表面，使无滑膜 肌腱形成了有滑膜肌腱。
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高迁移率族蛋白1在骨关节炎滑膜细胞中的表达及意义
目的 比较OA与正常膝关节滑膜细胞中高迁移率族蛋白1(high mobility group box chromosomal protein 1,HMGB1)的差异,探讨HMGB1在OA中的作用.方法 取OA与正常膝关节滑膜组织,采用组织块培养法分离培养关节滑膜细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态,应用免疫荧光染色、免疫组织化学染色以及Western blot检测比较两种滑膜细胞HMGB1表达差异.构建HMGB1小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)的真核表达载体Pgenesil-1/HMGB1 siRNA,转染至OA滑膜细胞中(siRNA转染组),以Pgenesil-1质粒转染至OA滑膜细胞(空载体转染组),以OA滑膜细胞(未转染组)作为对照.Western blot检测各组OA滑膜细胞中HMGB1蛋白的表达,ELISA法检测各组滑膜细胞培养上清液中IL-1β及TNF-α含量.结果 原代培养的OA与正常膝关节滑膜细胞呈长梭状,为成纤维细胞样细胞.免疫组织化学染色及免疫荧光染色观察示,OA滑膜细胞中HMGB1以细胞质分布为主、细胞核中较少,而正常滑膜细胞则相反.Western blot检测示,OA滑膜细胞中HMGB1高表达,表达量为0.687±0.025,显著高于正常滑膜细胞的0.172±0.030(t=32.159,P=0.000).酶切鉴定显示成功构建siRNA表达载体Pgenesil-1/HMGB1 siRNA.Western blot检测显示,siRNA转染组HMGB1蛋白表达为0.134±0.048,显著低于空载体转染组的0.581±0.032及未转染组的0.514±0.069 (P＜0.05).ELISA法检测siRNA转染组IL-1β及TNF-α含量均显著低于空载体转染组及未转染组(P＜o.05).结论 膝关节滑膜细胞中HMGB1表达的上调和表达位置的改变(从细胞核移位至细胞质)与OA密切相关,应用siRNA技术抑制HMGB1表达可明显降低OA滑膜细胞分泌IL-1β和TNF-α的能力,延缓OA的炎性反应.
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骨保护素与类风湿关节炎
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是由多种因素引起的一种自身免疫性疾病,终导致关节畸形使生活能力下降.RANKL/RANK信号系统是破骨细胞(osteoclast,OC)分化活化过程中关键的正调节因素,RA患者外周血及滑膜细胞中RANKL及RANK的表达升高,导致RA中OC活性增强.骨保护素(osteoprotegerin,OPG)是RANKL的伪受体,可以阻断RANKL结合至RANK进而阻断OC的成熟活化.体外试验提示OPG治疗RA可能有效,与传统的DMARDs及生物制剂联合使用可能阻断骨质破坏,同时能降低炎症反应.
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艾灸对实验性类风湿关节炎滑膜细胞原癌基因 c-fos和c-myc mRNA表达的影响
目的观察艾灸对实验性类风湿关节炎滑膜细胞原癌基因c-fos、c-myc mRNA表达的影响,初步探讨艾灸对RA滑膜细胞内分子信号传导的调控.方法在日本大耳白兔右后足踝关节部皮内注射福氏完全佐剂造模,经过艾灸治疗,通过半定量RT-PCR测定c-fos和c-myc mRNA的表达量.结果治疗组c-fos和c-myc mRNA表达量显著低于造模组(P＜0.01).结论艾灸治疗能够降低c-fos和c-myc mRNA的表达,影响生长因子信号传导系统.
关键词： 实验性类风湿性关节炎 c-fos c-myc 滑膜细胞 艾灸 -
苗药金乌健骨方总提物对类风湿关节炎滑膜细胞抗炎作用研究
目的:探讨苗药金乌健骨方总提物对类风湿关节炎滑膜细胞(RASF) IL-1β、IL-6和IL-8分泌的影响及其抗炎作用.方法:培养原代RASF,将细胞分成空白对照组、金乌健骨方高、中、低剂量组、雷公藤多苷和来氟米特对照组,并加入相应药物干预24h后,采用倒置显微镜观察细胞生长形态,ELISA法检测IL-1β、IL-6和IL-8分泌情况.结果:空白对照组RASF持续增殖,各给药组细胞形态均有不同程度改变,以金乌健骨方高剂量组和来氟米特对照组细胞形态差,细胞死亡率高.ELISA检测结果显示,与空白对照组比较,各给药组细胞上清液IL-1β、IL-6、IL-8的分泌量均有所下降(P＜0.05),以苗药金乌健骨方高剂量组明显(P＜0.01).结论:苗药金乌健骨方总提物能够下调RA患者滑膜细胞IL-1β、IL-6和IL-8的分泌,降低RA滑膜炎症的作用.
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中药大血藤对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞MMP-2、MMP-9的影响
类风湿性关节炎(Rheumatold Arthritis,RA)是一种以累及周围关节为主的多系统性炎症性自身免疫性疾病.
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兔类风湿性关节炎模型的建立及成纤维样滑膜细胞的培养
目的:建立卵蛋白诱导的兔类风湿性关节炎模型,明确兔类风湿性滑膜细胞培养的条件,储备后期用于实验研究的滑膜细胞,为后期体外细胞实验提供佳实验条件.方法:健康大耳白兔8只,随机分为正常组4只,模型组4只,模型组建立卵蛋白诱导的类风湿性关节炎动物模型,动物模型建成后第2周取模型组兔膝关节滑膜细胞培养、传代、收集冻存细胞,1月后复苏细胞.结果:模型组兔膝关节病理切片见炎性细胞浸润,滑膜细胞增生明显,血管翳形成,并侵蚀和破坏软骨;培养的滑膜细胞具有成纤维细胞的形态和特征,呈长梭形极向生长,成功储备及复苏滑膜细胞.结论:成功建立兔类风湿性关节炎模型,成功地培养出了兔膝关节类风湿性滑膜细胞.
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长链非编码RNA(lncRNA)与类风湿性关节炎关系的研究进展
长链非编码RNA (lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸,能够与DNA、RNA和蛋白结合,其中少量具有蛋白编码潜能.lncRNA的生物学功能多种多样,其在人类疾病发生,特别是在调控免疫应答发生、活化和维持免疫系统自身稳态的过程中扮演的重要角色引起众多学者的关注.类风湿性关节炎(RA)是一种发病率较高的慢性自身免疫性疾病,慢性滑膜炎长期反复发作,导致关节内软骨和骨不可逆破坏.lncRNA与RA的滑膜细胞持续增生、抑炎因子、促炎因子之间平衡破坏,以及血管翳的形成有密切关系.若能明确RA中lncRNA的作用机制,将为诊断、治疗RA以及其他自身免疫性相关疾病提供新思路.
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儿童掌腕部皮下滑膜肉瘤误诊1例
讨论：滑膜肉瘤是一种高度恶性软组织肿瘤，既不起自滑膜，又无滑膜分化的特征，只因与滑膜细胞相似[1]。较常见，约占软组织肉瘤的5%~10%。好发于20~40岁青壮年[2]，本例10岁，少见。肿块较小时(<5 cm)容易误诊为良性肿瘤，本例肿块1.1 cm。好发部位为四肢大关节旁，约占90%[2-3]，一般位置较深。本例位于皮下表浅部位，罕见。肿块一般边界清楚，无真包膜，可有假包膜[4]。
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滑膜细胞中蛋白酪氨酸激酶的克隆和鉴定
0 引言在类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis, RA)中,关节内滑膜细胞(Fibroblast-l ike synovial cells, FLS)的过度增生是造成关节软骨破坏和关节畸形的根本原因,所以研究滑膜细胞发生过度增殖的机理及找到控制其增殖的关键环节对于阻止RA病人发生关节功能障碍具有重要意义. 目前关于滑膜细胞发生恶性增殖的机理尚不清楚. 蛋白酪氨酸激酶(Pr otein tyrosine kinases, PTKs)是一大类介导细胞增殖分化和凋亡的细胞内信号分子,它们的活化将直接或间接导致细胞发生增殖或凋亡行为. Williams等研究发现,在RA滑膜组织中蛋白酪氨酸激酶活性明显高于骨性关节炎[1],所以滑膜细胞的过度增殖行为可能与细胞内某些或某种PTKs的异常表达或异常激活有关. 研究滑膜细胞中表达的PTKs的种类和水平将有助于进一步寻找与其增殖相关的PTKs. 由于正常滑膜细胞很难培养,所以不能首先获得正常滑膜细胞中的PTKs表达情况,只能先从RA病人滑膜细胞入手.
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用改良消减法克隆类风湿性关节炎滑膜细胞中的高表达基因
0 引言在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis， RA)中，关节内滑膜细胞（fibroblast-like synovial cells， FLS)的过度增生是造成关节软骨破坏和关节畸形的关键环节，为了研究滑膜细胞发生增殖的机制，我们采用赵忠良等人设计的改良消减杂交法［1］,并以骨性关节炎（osteoarthritis， OA）滑膜细胞为对照筛选RA滑膜细胞中的高表达基因.
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用差示PCR法筛选类风湿性关节炎滑膜细胞中的高表达基因
目的筛选类风湿性关节炎（RA）滑膜细胞中的高表达基因,以探讨RA滑膜细胞发生肿瘤样增殖和侵蚀软骨的分子机理. 方法以骨性关节炎（osteoarthritis, OA) 滑膜细胞作对照，采用差示PCR (differentially display PCR)方法，克隆RA滑膜细胞中高表达的cDNAs片段，经反向点杂交排除假阳性克隆后，将阳性克隆进行基因序列分析. 结果共回收76个差异条带，得到42个有插段的克隆，经反向点杂交后得到22个阳性克隆，对其中19个克隆进行基因序列分析表明，长片段为501 bp长，短片段为145 bp长，大部分在300 bp. 有13个克隆为已知基因，其中包括组织蛋白酶，其它6个克隆为未知序列，这些未知序列中除一个序列外都为基因的非编码区. 结论差示PCR方法在筛选差异表达基因方面存在着很大的局限性；组织蛋白酶B可能与RA滑膜细胞的软骨侵蚀性有关.
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类风湿性关节炎滑膜细胞凋亡研究进展
类风湿关节炎(RA)是一种主要累及小关节的慢性自身免疫性疾病.研究表明,RA滑膜细胞与疾病的发展存在着某些相关性.RA来源的滑膜细胞主要是指淋巴细胞、巨噬细胞、树突状细胞、B细胞和内皮细胞以及成纤维细胞,近来研究发现滑膜细胞的凋亡在RA的发病过程中起着十分重要的作用.
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滑膜间充质干细胞软骨分化能力的实验研究
目的 探讨滑膜间充质干细胞软骨分化能力.方法 无菌状态下获取兔颞下颌关节滑膜组织,酶消化法进行滑膜间充质干细胞原代培养,并进行传代扩增.第3代细胞消化后离心成为细胞团块,用软骨诱导液培养,并以鸡尾酒法添加生长因子人重组转化生长因子β1(recombined human transforming growth factorβ1,rhTGF-β1)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF),即前3天2种生长因子共同使用,之后只用rhTGF-β1继续培养18d.细胞团块培养21 d后,免疫组织化学染色检测Ⅱ型胶原的表达.细胞团块培养在普通培养基中不添加rhTGF-β1和bFGF作为对照组.结果 滑膜间充质干细胞经过传代培养后,成为形态一致的梭形细胞;细胞团块经软骨诱导液、rhTGF-β1和bFGF培养后,免疫组织化学染色可见Ⅱ型胶原在细胞之间的细胞外基质中明显显色,并且细胞团块的周边要比中央浓染;原本二维培养状态下的梭形滑膜间充质干细胞变为球形的软骨样细胞形态.结论 滑膜间充质干细胞具有很强的成软骨能力,可以作为髁突软骨组织工程的种子细胞.
关键词： 滑膜细胞 软骨分化 人重组转化生长因子β1 碱性成纤维细胞生长因子 -
中医药对类风湿关节炎滑膜细胞作用机制影响的研究评述
文章总结了中医药对类风湿关节炎滑膜细胞治疗研究现代的进展，归纳了研究中存在的问题和难点，并提出了研究思路。
