首页 > 文献资料
-
白花丹醌对CIA大鼠滑膜细胞增殖及TNF-α、IL-1β和MMP-3表达的影响
目的 研究白花丹醌对脂多糖(LPS)诱导的体外培养CIA大鼠成纤维样滑膜细胞(CIA-FLS)的增殖及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和基质金属蛋白酶-3(MMP-3)表达的影响.方法 采用Ⅱ型胶原蛋白+弗氏完全佐剂建立大鼠关节炎模型(CIA);原代培养CIA-FLS,MTT法检测药物对CIA-FLS增殖的影响;随机设立CIA对照组、 LPS对照组、甲氨蝶呤组、白花丹醌1.0 μmol/L组、白花丹醌1.5 μmol/L组、白花丹醌2.0 μmol/L组;各药物与细胞共同孵育48 h后,ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-a、 IL-1β和MMP-3的含量;Western blot检测细胞内MMP-3的蛋白含量.结果 MTT显示,白花丹醌能不同程度抑制 CIA-FLS的增殖,呈浓度和时间依赖性;与LPS对照组比较,甲氨蝶呤或白花丹醌均能明显下调细胞培养上清液中TNF-α、 IL-1β和MMP-3的含量(P<0. 001),明显降低细胞中 MMP-3的蛋白含量(P<0.001).结论 白花丹醌能抑制 CIA-FLS的增殖,并能通过下调TNF-α、IL-1β和MMP-3的表达而抑制LPS诱导CIA-FLS的炎症反应.
-
肿瘤坏死因子-α增强血管紧张素Ⅱ对人成纤维样滑膜细胞的增殖、迁移与侵袭的作用及机制
目的 明确肿瘤坏死因子(TNF-α)增强血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖、迁移与侵袭的作用及其部分机制.方法 体外培养正常人FLS,用AngⅡ(10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L)、TNF-α(20 ng/ml)单用或联合使用,刺激48 h后,采用CCK8试剂盒检测FLS增殖功能;Transwell小室法检测迁移与侵袭功能;激光共聚焦、免疫荧光或蛋白免疫印迹法检测AngⅡ受体及G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)的表达.结果 AngⅡ(10-7、10-6、10-5 moL/L)能促进人FLS的增殖(P＜0.05),适浓度为10-7 mol/L;TNF-α(20 ng/ml)能显著增强FLS的增殖(P＜0.05);AngⅡ(10-7 moL/L)与TNF-α(20 ng/ml)联合使用可进一步促进FLS增殖(P＜0.05);单用AngⅡ(10-7 mol/L)、TNF-α(20 ng/ml)或者联合使用都能显著促进FLS的迁移(P＜0.01)与侵袭能力(P＜0.05);单用AngⅡ可显著升高FLS血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)的表达水平(P＜0.05),GRK2水平有上升趋势(P＞0.05);单用TNF-α可显著升高FLS的AT1R和GRK2的蛋白表达水平(P＜0.05);AngⅡ与TNF-α联合使用,AT1R与GRK2的表达水平显著升高(P＜0.05);GRK2抑制剂可以下调AngⅡ与TNF-α联合诱导的FLS迁移、侵袭功能(P＜0.01).结论 AngⅡ促进FLS增殖、迁移和侵袭,TNF-α可以促进AngⅡ介导的FLS增殖、侵袭和转移,其机制可能与上调FLS的AT1R和GRK2表达有关.
-
白藜芦醇诱导佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡
目的：探讨白藜芦醇对佐剂性关节炎( AA)大鼠滑膜细胞增殖和凋亡的影响。方法0．1 ml弗氏完全佐剂注射SD大鼠左后足跖皮内复制AA模型,28 d后,采用组织块培养法分离、培养大鼠踝关节滑膜细胞, CCK-8法检测白藜芦醇对滑膜细胞增殖的影响；Hoechst 33258荧光染色、琼脂糖凝胶电泳观察滑膜细胞凋亡情况。结果 CCK-8法表明白藜芦醇可以抑制滑膜细胞增殖,并且呈剂量依赖性趋势；高浓度白藜芦醇(20、50μmol/L )能诱导滑膜细胞凋亡, Ho-echst 33258染色观察到细胞核出现凋亡小体,电泳呈现出阶梯状条带。结论白藜芦醇可能会通过抑制AA大鼠滑膜细胞的增生,促进滑膜细胞的凋亡而达到治疗类风湿性关节炎的作用。
-
SIRT1在骨性关节炎滑膜中表达的相关研究
目的：探讨沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)在骨性关节炎(OA)正常滑膜组织及细胞中表达的差异性。方法膝关节滑膜细胞培养传代,甲苯胺蓝染色观察细胞形态,Western blot 法检测滑膜组织及细胞中 SIRT1的表达情况；免疫组织化学法对滑膜细胞检测 SIRT1表达情况及表达部位。结果甲苯胺蓝实验显示 OA 及正常滑膜细胞无明显形态学差异；免疫细胞化学法显示 SIRT1在滑膜细胞胞质中广泛表达,染色强度 OA 组较正常组明显降低(t =20．208, P <0．01)；Western blot 法显示在滑膜细胞中 OA 组 SIRT1表达明显低于正常对照组((t =8．619,P <0．01)；在滑膜组织中 OA 组 SIRT1的表达亦明显低于正常对照组(t =7．664,P<0．01)。结论 SIRT1与 OA 导致滑膜炎的发生发展密切相关,为 SIRT1可以作为 OA 治疗的靶点提供一个新的理论依据。
-
凝血酶敏感激素蛋白酶4/5在骨性关节炎滑膜中的表达及意义
目的 研究凝血酶敏感激素蛋白酶4/5 ( ADAMTS4/5)在骨性关节炎( OA)滑膜组织及滑膜细胞中的表达及意义. 方法 取6例正常者滑膜组织和6 例OA患者滑膜组织,Western blot法检测标本中ADAMTS4/5 的表达,离体培养正常者滑膜细胞. 白介素-1β( IL-1β)刺激正常滑膜细胞,测定滑膜细胞中ADAMTS4/5的表达量;IL-1RA( IL-1β阻滞剂)抑制IL-1β后,测定滑膜细胞中ADAMTS4/5的表达量.结果 ADAMTS4/5 在OA患者滑膜组织中表达较正常者滑膜组织均显著增加;IL-1β刺激滑膜细胞后,ADAMTS4/5升高,IL-1RA可明显降低IL-1β诱导的滑膜细胞中ADAMTS4/5的表达. 结论 IL-1β可以按照剂量依赖方式正向调节ADAMTS4/5的表达;ADAMTS4/5 和IL-1β在OA病变机制中发挥重要的作用.
-
白芍总苷对胶原性关节炎滑膜组织MAPKs信号通路的调控作用
目的 研究白芍总苷(TGP)对胶原性关节炎(CIA)大鼠滑膜丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)磷酸化水平的影响.方法 采用鸡Ⅱ型胶原诱导大鼠CIA模型,TGP灌胃给药,检测大鼠关节肿胀度,Western blot法检测滑膜MAPKs的磷酸化程度.结果 TGP[25、50、100 mg/(kg·d)]有效缓解CIA大鼠关节肿胀情况,抑制滑膜MAPKs的磷酸化水平,而对MAPKs总的蛋白表达没有影响;TGP体外给药可明显抑制由白细胞介素(IL)-1β诱导的滑膜细胞ERK1/2的磷酸化水平.结论 CIA大鼠滑膜MAPKs的磷酸化水平和滑膜炎病理机制相关,TGP对CIA的治疗作用可能与抑制滑膜细胞MAPKs磷酸化水平有关.
-
重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白联合芍药苷对人滑膜细胞增殖的影响及部分机制
目的 观察重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(rhTNFR:Fc)与芍药苷(Pae)联合应用对人成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖的影响,探讨其对肿瘤坏死因子受体(TNFR)信号通路的调节作用.方法 经知情同意,收集行髋关节置换术患者正常滑膜组织,采用组织块培养法对人滑膜细胞进行培养.取第3代人FLS,用肿瘤坏死因子α(TNF-α,20 μg/L)刺激,分别用rhTNFR:Fc(10 mg/L)、Pae(10-5 mol/L)及二者联合干预.MTT法检测人FLS的增殖反应,免疫组化法半定量分析肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、肿瘤坏死因子受体相关死亡结构蛋白(TRADD)在FLS中的表达情况.结果 rhTNFR:Fc与Pae联合用药对FLS增殖的抑制作用优于rhTNFR:Fc和Pae单独给药组.rhTNFR:Fc、Pae及联合用药均能明显下调FLS 中TNFR1和TRAF2表达,上调TRADD表达;与单独用药相比,联合用药能进一步上调TRADD表达,而对TNFR1和TRAF2的表达无明显影响.结论 rhTNFR:Fc和Pae联合用药对人FLS增殖的抑制作用优于单独给药,其作用机制可能与调节TRADD有关.
-
复方丹参注射液对RF滑膜细胞VEGF mRNA的影响
目的:观察复方丹参注射液对体外培养的类风湿关节炎(RA)滑膜细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响.方法:行关节腔镜手术取RA患者膝关节滑膜组织,消化分离滑膜细胞进行分组培养.对照组:含9.0 g/L氯化钠注射液+100 ml/L胎牛血清的达氏修正依氏培养基(DMEM)培养;复方丹参低剂量组:1.5 μg/ml复方丹参+100 ml/L胎牛血清的DMEM培养;复方丹参高剂量组:150 μg/ml复方丹参+100 ml/L胎牛血清的DMEM培养.提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组VEGF mRNA的表达.结果:复方丹参高低剂量组VEGF mRNA表达较对照组均明显降低(P＜0.05).结论:复方丹参注射液可以下调RA患者滑膜下细胞VEGF mRNA表达水平,从而可以通过抑制VEGF表达减轻滑膜血管翳增殖.
-
复方丹参注射液对CIA大鼠滑膜细胞IL-1β mRNA表达的影响
目的:研究复方丹参注射液对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠关节炎模型(CIA)滑膜细胞IL-1 β mRNA表达的影响.方法:用Ⅱ型胶原蛋白诱导大鼠关节炎模型,以逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)半定量法测定模型大鼠滑膜细胞IL-1 β mRNA的表达.结果:复方丹参大剂量可以明显下调CIA大鼠滑膜细胞IL-1β mRNA的表达水平.结论:复方丹参治疗类风湿性关节炎的机制可能与下调滑膜细胞IL-1β mRNA表达的水平有关.
关键词： 类风湿性关节炎 滑膜细胞 IL-1β mRNA 复方丹参注射液 -
复方丹参注射液对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞分泌IL-1β的影响
目的:研究复方丹参注射液对Ⅱ型胶原蛋白诱导性关节炎(collagen-Ⅱ induced arthritis,CIA)大鼠模型滑膜细胞分泌IL-1β的影响.方法:采用消化分离的方法获得滑膜细胞,放射免疫法检测大鼠滑膜细胞培养上清液中IL-1β的水平.结果:复方丹参注射液可以明显下调CIA大鼠滑膜细胞分泌IL-1β的水平.结论:复方丹参注射液治疗类风湿性关节炎的机制可能与下调滑膜细胞分泌IL-1β的水平有关.
-
肝素对类风湿关节炎滑膜细胞与炎症细胞粘附的作用
类风湿关节炎(RA)是一种以关节滑膜炎为特征的慢性自身免疫性疾病.本病侵犯多个关节,而常以手足小关节起病,多呈对称性.
-
兔关节滑膜细胞的分离、培养和纯化
目的 探讨兔关节滑膜细胞的体外分离、培养和纯化方法.方法 无菌条件下,从6月龄新西兰白兔的膝关节囊内剪取滑膜组织,采用组织块培养法和酶消化法分离滑膜细胞.经台盼蓝拒染计数,将细胞按1×106接种于培养瓶,传代培养.结果 经反复贴壁和多次消化达到形态学上的纯化要求,活性率为96%,纯度达95%以上,培养的细胞具有成纤维细胞形态和特征.结论 本研究建立了简单易行的滑膜细胞分离、培养和纯化方法.
-
骨关节布鲁氏菌病的研究进展
近年来布鲁氏菌病在一些国家和地区呈流行趋势,所致的骨与关节受损较为常见.其中骨关节受累常见的3种形式是骶髂关节炎、脊椎炎和外周关节炎.骨损伤机制逐渐被阐明:TNF-α和参与调节骨质代谢的核因子κB受体活化因子配体(RANKL)参与其中,并由单核巨噬细胞、中性粒细胞、CD4+T细胞和B细胞等炎性细胞介导.此外,布鲁氏菌可直接作用于骨细胞和打破骨重塑的稳态平衡.通过作用成骨细胞抑制骨基质沉积、改变细胞表型产生金属蛋白酶(MMPs)和分泌细胞因子,从而促进骨基质降解.布鲁氏菌还可通过诱导破骨细胞生成和增强破骨细胞活化,进而增加矿物质和有机骨基质吸收,加剧了骨损伤.关节组织的病理学实验发现滑膜组织除了诱导细胞分泌趋化因子的激活、生成炎性细胞因子和基质金属蛋白酶,布鲁氏菌感染也可抑制滑膜细胞凋亡.布鲁氏菌是一种细胞内细菌,在巨噬细胞的内质网中优先复制.近年来骨与关节布鲁氏菌病分子机制的研究揭示布鲁氏菌与人类免疫细胞及骨关节细胞之间的相互作用在骨与关节损伤中发挥了重要作用.
-
黄板树根提取液对骨性关节炎作用的实验研究
目的:探讨滑膜细胞体外培养方法,了解黄板树根在骨性关节炎(osteoarthritis,OA)中的作用及意义.方法:取OA患者(n=22)关节滑膜组织,随机分为对照组(n=11)和干预组(n=11),分别原代培养滑膜细胞,采用酶联免疫吸附测定法( ELISA)定量检测两组滑膜细胞培养上清液中炎性因子IL-18蛋白的表达水平.结果:酶消化加组织块贴壁培养法可适用于体外培养试验用滑膜细胞；ELISA检测OA患者对照组细胞培养上清液中IL-18的含量为(61.324±19.281) pg/mL,干预组细胞培养上清液中IL-18的含量为(20.823±2.746) pg/mL,具备组间统计学差异(P＜0.05).结论:黄板树根可以使OA关节滑膜细胞中炎性因子IL-18表达下调,提示其可能对OA有治疗作用.
-
透明质酸／壳聚糖/pEGFP纳米粒介导体外基因转染关节软骨细胞与滑膜细胞的比较
[目的]以透明质酸(HA)修饰的壳聚糖(CS)／质粒DNA(pDNA)纳米粒介导体外基因转染关节软骨细胞与滑膜细胞,以明确其作为非病毒基因载体治疗关节疾病的潜能.[方法]将HA修饰的CS与负载增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的pDNA以复凝聚法制成纳米粒,以扫描电镜检测纳米粒形态；激光粒度仪测定其粒径、Ze-ta电位及分散度(PDl)；凝胶电泳阻滞试验榆测HA/CS和pDNA的结合力及pDNA的释放；体外转染兔关节软骨细胞与滑膜细胞,以流式细胞仪及荧光显微镜检测转染效率.[结果]HA/CS/pDNA纳米粒多呈球形,粒径平均为(142.5±20.3)nm,表面Zeta电位平均为(25.99±8.48)mV,分散度平均为(0.283±0.089),可有效保护pDNA免受核酸酶的降解；通过调节pH值至7.5以上或加入壳聚糖酶可促使纳米粒中的pDNA释放；体外转染实验证明HA/CS/pDNA纳米粒能介导pEGFP转染软骨细胞和滑膜细胞并在细胞内表达绿色荧光蛋白,其对软骨细胞的转染能力较强,比裸pEGFP和CS/pEGFP纳米粒有更高的转染效率(P＜0.05)；但对滑膜细胞的基因转染效率较低,与CS/pEGFP纳米粒无明显差别(P＞0.05).[结论]复凝聚法制备的HA/CS/pDNA纳米粒是一种有效的新型非病毒基因转染载体,在体外可介导基因转染关节软骨细胞和滑膜细胞,其转染效率具有明显的细胞依赖性.
-
重组Furin蛋白对类风湿关节炎滑膜细胞生物学行为的影响
[目的]探讨重组弗林蛋白(Furin)对于类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,HA)滑膜细胞增殖、迁移、侵袭和细胞因子分泌的影响.[方法]从类风湿关节炎患者关节内提取RA滑膜组织后培养原代滑膜成纤维细胞(fibroblast-like synovial cells,FLS);将重组Furin蛋白按照不同浓度(250 ng/ml,500 ng/ml)加入RA滑膜细胞培养基中诱导培养并采用MTT、细胞划痕、Transwell、ELISA等方法检测重组蛋白处理对细胞增殖、迁移、侵袭和炎性因子分泌等生物学特性的影响.[结果]与空白对照组比,加入重组Furin蛋白处理24 h、48 h,对类风湿滑膜细胞增殖活动没有明显影响(P＞0.05).处理24 h后与空白对照组比,迁入划痕伤口内细胞数无显著区别(P＞0.05),滑膜细胞穿透基底膜细胞数明显减少(P＜0.05),且与剂量浓度呈正相关.培养液上清中IL-1α和IL-17含量升高(P＜0.05),而各组间IL-1β和TNF-α含量差异无统计学意义(P＞0.05).[结论]重组Furin蛋白诱导可抑制类风湿关节炎滑膜细胞侵袭能力同时可促进其分泌IL-1α和IL-17.
-
姜黄素对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞增殖的影响
目的 探讨姜黄素对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜细胞的影响.方法 将雄性Wistar大鼠皮内注射Ⅱ型胶原,建立CIA大鼠模型,取其滑膜组织用胶原酶消化后提取滑膜细胞进行原代培养,取3-5代的滑膜细胞进行后续实验.应用MTT比色法检测滑膜细胞的增殖水平.结果 5、10、20、40、80、160μmol/L的姜黄素作用24、48和72小时,均能明显抑制CIA大鼠滑膜细胞的增殖(P<0.05),且具有时间、剂量依赖性.结论 姜黄素能明显抑制CIA大鼠滑膜细胞的增殖并呈时间、剂量依赖性改变.
-
独活寄生汤含药血清对膝关节OA大鼠滑膜细胞TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10表达的影响及其机制
目的 探讨独活寄生汤含药血清对膝关节骨关节炎(0A)大鼠滑膜细胞炎症因子表达的影响及其可能机制.方法 采用Huhh法建立OA大鼠模型,分离膝关节滑膜细胞,采用酶原消化法进行培养,并将其分为模型组及低、中、高剂量组,以正常大鼠膝关节滑膜细胞为对照组.低、中、高剂量组分别加入经独活寄生汤中药0.85、1.7、3.4 mL/kg灌胃大鼠的含药血清,对照组与模型组加入等量20％ FBS,培养48 h.采用ELISA法检测各组细胞TNF-α、IL-6、IL-8及IL-10表达,超高效液相色谱-高分辨质谱法检测各组细胞脂氧素A4表达,Western blotting法检测各组细胞抗c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)、激活子蛋白1(AP-1)及磷酸化AP-1(p-AP-1)表达.结果 对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组和模型组细胞TNF-α、IL-6、IL-8表达均依次升高,IL-10、脂氧素A4表达依次降低,组间两两比较P均＜0.05.与对照组比较,模型组细胞AP-1、p-AP-1、JNK及p-JNK表达均升高(P均＜0.05);与模型组比较,高、中、低剂量组细胞AP-1、p-AP-1、JNK及p-JNK表达均降低,且高剂量组降低更明显(P均＜0.05).结论 独活寄生汤含药血清可降低膝关节OA大鼠滑膜细胞TNA-α、IL-6、IL-8、IL-10表达,并呈剂量依赖性;提高滑膜细胞脂氧素A4表达、抑制JNK、AP-1及其磷酸化通路可能是其作用机制.
-
类风湿性关节炎细胞水平建模四种方法比较
目的 比较四种方法 在培养类风湿性关节炎(RA)滑膜细胞(FLS)中的异同,为研究RA提供较好的体外实验模型建模方法 .方法 20例滑膜组织标本均用组织块法、单胶原酶消化法、单胰酶温消化法和双酶消化法四种方法 分离、培养RA FLS,均取培养第7日细胞计数,取第4代细胞鉴定,免疫组化鉴定细胞,测定分离细胞的数量和纯度.结果 四种培养方法 的培养时间比较,单胶原酶法>双酶消化法>组织块法>单胰酶法(P＜0.05).组织块法及双酶消化法所得细胞数较单胶原酶法及双酶消化法少(P＜0.05).第4代细胞均以FLS为主(>95%).结论 四种方法 体外培养可获得生物学特性稳定的RA FLS细胞系,其中组织块法是细胞水平建立RA体外实验模型成功率较高的方法 ,单纯胰酶法是较快速的方法 .
-
类风湿关节炎病因及其发病机制
类风湿关节炎(RA)的病因及发病机制仍不完全明了,推测可能为外源性感染作用于遗传易感个体,导致机体免疫系统紊乱,进而引起关节滑膜、软骨组织慢性炎症和破坏.因此,感染因素、遗传因素、T淋巴细胞及B淋巴细胞、滑膜细胞可能均参与了RA的发病.
