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昆明山海棠与类风湿关节炎滑膜细胞体外增殖和凋亡
背景:昆明山海棠应用于类风湿关节炎治疗已被证实有确切疗效,但对于其作用机制目前尚不明确.目的:验证昆明山海棠对类风湿关节炎滑膜巨噬样细胞和成纤维样细胞体外增殖活性及对其凋亡影响,分析其剂量效应关系.设计、时间及地点:细胞学体外分组对照实验,于2003-08/2007-06在汕头大学医学院第一附属医院中心实验室和南方医科大学细胞生物实验室完成.材料:类风湿关节炎6例及正常滑膜组织3例,来源于汕头大学医学院第一附属医院骨科和南方医院脊柱骨病科患者术中获得的标本.昆明山海棠制备水提取液,含生药0.667 g/mL..方法:收集获得的滑膜组织,通过消化法获得原代类风湿关节炎及正常滑膜细胞,第2-4代细胞用免疫磁珠法筛选滑膜CD68~+细胞和CD68~-细胞,在接种72 h后加入实验各组分别在培养液中加入终体积分数分别为5,10,20 mL/L的昆明山海棠药液处理24 h和48 h.同时设立不加药物的阴性对照及不加细胞空白对照.主要观察指标:相差倒置显微镜、扫描电镜观察细胞形态,用MTT法测定细胞增殖情况,流式细胞仪检测和TUNEL.法检测细胞凋亡.结果:分选后滑膜CD68~-细胞为成纤维样细胞,滑膜CD68~+细胞为滑膜巨噬样细胞.施予干预因素后,各组有部分细胞体积缩小,胞膜皱缩,微绒毛和伪足减少或消失,部分细胞可见团块脱落形成凋亡小体.当昆明山海棠体积分数为2%时,各组细胞均有不同程度抑制,显示昆明山海棠有细胞毒性,对类风湿关节炎滑膜CD68~-、CD68~+细胞的抑制效应和诱导细胞效应强于同种正常滑膜细胞(P<0.01).在药物体积分数为1%时,对类风湿关节炎滑膜细胞有明显抑制效应(P<0.01).昆明山海棠对诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡作用有明显时间依赖性和剂量依赖性,且凋亡率与相同条件下的抑制率表现出较好的直线相关关系(r=0.497,P<0.01).结论:昆明山海棠对于类风湿关节炎滑膜巨噬样细胞和滑膜成纤维样细胞有诱导凋亡和明显抑制异常增殖作用.在一定浓度下,昆明山海棠对于正常滑膜细胞毒性较小且对类风湿关节炎滑膜细胞的有较明显抑制异常增殖和诱导细胞凋亡的效应.
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可吸收生物材料聚羟基乙酸与滑膜细胞共同构建组织工程化腱鞘
目的:目前对于腱鞘的修复主要运用网腱膜、自体静脉和生物膜等腱鞘的替代品,其缺点是无生物学功能,不能达到真正意义上的结构与功能的重建.实验采用可吸收生物材料聚羟基乙酸与滑膜细胞共同构建组织工程化腱鞘,验证其可行性.方法:实验于2005-09/2007-03在上海市第九人民医院组织工程实验室完成.取Leghorn鸡滑膜腱鞘,体外消化培养获得滑膜细胞并大量扩增后,取第2代滑膜细胞与聚羟基乙酸生物材料复合,形成大小1.5 cmx1.0 cm,厚1.0 mm左右的细胞生物学支架,体外培养6 d后,将支架包绕在硅胶管上回植到裸鼠皮下及将支架直接回植于鸡爪原位腱鞘缺损处,以未接种细胞的单纯聚羟基乙酸包绕硅胶管为对照组,体内培养3,6周后取材观察.整个实验过程中对滑膜细胞及两种情况下构建形成的组织工程化腱鞘进行形态学和组织学观察.结果:①所获得的滑膜细胞分为A、B型滑膜细胞,A型滑膜细胞形态呈巨噬细胞样,B型滑膜细胞形态呈成纤维样,且随着滑膜细胞的扩增,A型滑膜细胞比例逐渐减少,到第2代时,基本全部为B型细胞.②在裸鼠皮下构建的组织工程化腱鞘第3周、第6周时有新生组织产生,且具有弹性,失去支撑后仍可保持形状,而单纯聚羟基乙酸对照组在第3周时只有少量新生组织,到第6周时新生组织消失.③在Leghorn鸡原位处构建的组织工程化腱鞘第3周时内壁光滑,与肌腱无粘连,第6周时形成与正常腱鞘相似鞘膜.结论:应用组织工程技术可以构建与正常组织相似的组织工程腱鞘.
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前列腺素E2干预后交叉韧带成纤维细胞和滑膜细胞的迁移
背景:细胞迁移是组织损伤后修复过程中的重要环节之一,但是膝关节交叉韧带损伤后局部产生的细胞因子前列腺素E2对后交叉韧带成纤维细胞和滑膜细胞迁移的影响尚未见报道.目的:在后交叉韧带成纤维细胞与滑膜细胞单培养和共培养的条件下,研究前列腺素E2对此2种细胞迁移的影响.方法:体外培养人后交叉韧带成纤维细胞和滑膜细胞,分别进行2种细胞的单培养和Transwell共培养,并用质量浓度10 μg/L的前列腺素E2干预.比较单培养和共培养下细胞生长状态;细胞划痕试验检测24 h时细胞的迁移率.结果与结论:共培养使后交叉韧带成纤维细胞和滑膜细胞的迁移率较单培养增高128%和48%.前列腺素E2分别使单培养下后交叉韧带成纤维细胞和滑膜细胞的迁移率降低了28%和14%;使共培养下细胞的迁移率较相应的共培养组未处理细胞下降37%和24%.证实,在前列腺素E2的刺激下,后交叉韧带成纤维细胞和滑膜细胞迁移率均明显降低,尤其对共培养下后交叉韧带成纤维细胞迁移率的抑制更显著.
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通痹灵对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠模型滑膜细胞凋亡的影响
目的研究通痹灵对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠关节模型(CIA)滑膜细胞凋亡的影响.方法原位细胞凋亡检测试剂盒检测各组原代大鼠滑膜细胞凋亡的水平.结果通痹灵组CIA大鼠滑膜细胞的凋亡数明显增加.结论通痹灵治疗类风湿性关节炎的机制可能与诱导滑膜细胞凋亡有关.
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复方丹参注射液对 CIA大鼠滑膜细胞凋亡及关节功能的影响
目的研究复方丹参对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠关节模型 ( CIA) 滑膜细胞凋亡的影响 , 恢复关节功能的机制 . 方法原位细胞凋亡检测试剂盒检测各组原代大鼠滑膜细胞凋亡的水平 . 结果复方丹参组 CIA大鼠滑膜细胞的凋亡数明显增加 , 有利于受累关节功能的恢复 . 结论复方丹参治疗类风湿性关节炎的机制可能与诱导滑膜细胞凋亡有关 .
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青藤碱对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的影响
目的研究青藤碱对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠关节模型(CIA)滑膜细胞凋亡的影响.方法原位细胞凋亡检测试剂盒检测各组原代大鼠滑膜细胞凋亡的水平.结果青藤碱组CIA大鼠滑膜细胞的凋亡数明显增加.结论青藤碱治疗类风湿性关节炎的机制可能与诱导滑膜细胞凋亡有关.
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复方丹参对Ⅱ型胶原蛋白诱导性关节炎大鼠滑膜细胞白介素-6mRNA表达的影响
目的研究复方丹参对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠关节炎模型(CIA)滑膜细胞白介素-6mRNA(IL6mRNA)表达的影响.方法用Ⅱ型胶原蛋白诱导大鼠关节炎模型,以逆转录-多聚酶链反应(RTPCR)半定量法测定模型大鼠滑膜细胞IL6mRNA的表达,以及复方丹参对其的影响.结果复方丹参可以明显下调CIA大鼠滑膜细胞IL6mRNA表达的水平.结论复方丹参治疗类风湿性关节炎的机制可能与下调滑膜细胞IL6mRNA的表达水平有关.
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透骨消痛胶囊含药血清对膝骨关节炎关节滑膜细胞uPA系统及炎性因子的影响
背景：透骨消痛胶囊是治疗骨性关节炎的临床验方，作用机制尚未完全阐明。尿激酶型纤溶酶原激活系统参与软骨细胞外基质降解和滑膜增生，在骨性关节炎发生、发展中起重要作用。
目的：观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养的膝骨性关节炎大鼠滑膜细胞表达尿激酶型纤溶酶原激活剂、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体、纤溶酶原激活剂抑制剂、基质金属蛋白酶3、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的影响，探讨透骨消痛胶囊防治膝骨性关节炎的作用机制。
方法：采用4%木瓜蛋白酶注射关节腔复制大鼠膝骨性关节炎模型；胶原酶消化法原代培养正常滑膜细胞与骨性关节炎滑膜细胞，将所培养滑膜细胞分为正常组、模型组和透骨消痛胶囊组，前2组细胞用空白血清培养，透骨消炎胶囊用含药血清培养；透骨消痛胶囊含药血清作用骨性关节炎滑膜细胞72 h后，采用Western Blot法检测滑膜细胞中尿激酶型纤溶酶原激活剂、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体、纤溶酶原激活剂抑制剂、基质金属蛋白酶3、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α蛋白的表达。
结果与结论：透骨消痛胶囊含药血清组尿激酶型纤溶酶原激活剂、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体、基质金属蛋白酶3、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α蛋白表达量均降低，纤溶酶原激活剂抑制剂表达量升高，与模型组相比均有显著性差异，提示透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制骨性关节炎滑膜细胞尿激酶型纤溶酶原激活剂、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体、基质金属蛋白酶3、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的表达，提高纤溶酶原激活剂抑制剂的表达。 -
栀子苷对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞中IL-17水平影响
目的:探讨栀子苷对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞中IL-17水平的影响,为认识类风湿性关节炎的发病机制和临床治疗类风湿性关节炎提供实验依据.方法:用弗氏完全佐剂制备佐剂性关节炎模型,造模成功取滑膜细胞进行培养,体外给一定剂量的栀子苷,并用酶联免疫吸附法测定IL-17水平的变化.结果:AA大鼠造模成功后,以酶联免疫法检测大鼠滑膜细胞中IL-17的含量.模型组大鼠IL-17水平明显升高,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).与模型组比较,各给药组均能显著降低IL-17水平(P＜0.01).结论:栀子苷有显著降低AA大鼠滑膜细胞中IL-17水平的作用,提示栀子苷对佐剂性关节炎治疗作用可能与抑制炎性细胞因子IL-17有关.
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风湿性关节炎与趋化因子
风湿性关节炎(RA)以慢性多发性关节炎症为特征,炎症局部的滑膜组织随着滑膜细胞的增殖可出现明显的炎症细胞浸润.其炎症细胞主要是T细胞、B细胞、巨噬细胞样滑膜细胞(A型滑膜细胞)、树突状细胞样滑膜细胞(D型滑膜细胞)等.这些细胞通过炎症局部的血管浸润滑膜组织,参与RA病态的形成.与趋化因子-趋化因子受体的相互作用,明显地参与炎症细胞的浸润.另外,趋化因子不仅参与细胞的游走,还参与细胞活化、血管新生等,故趋化因子抑制剂可能对RA的治疗有一定效果.本文主要介绍与RA滑膜组织的炎症浸润等相关的趋化因子,另外对趋化因子阻断剂治疗RA的可能性作以概述.
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高分子聚乙烯颗粒负荷对体外培养滑膜细胞的影响研究
目的 探讨高分子聚乙烯颗粒对界面滑膜细胞生长特性的影响.方法 以体外培养正常人膝关节滑膜细胞系为模型,加入高分子聚乙烯颗粒,观察滑膜细胞的生长曲线和倍增时间及其对颗粒的毒性反应.结果 与空白对照相比,高分子聚乙烯颗粒对细胞生长有促进作用,倍增时间220.2 h(空白对照为253.1 h),至第8天细胞全部死亡,其毒性作用与颗粒浓度有关.结论 高分子聚乙烯颗粒促进体外滑膜细胞的生长.
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不同灸法对实验类风湿性关节炎模型滑膜细胞NF-κB信号通路的影响
目的 探索不同灸法(温和灸、直接灸和隔姜灸)对实验性类风湿性关节炎(RA)模型关节滑膜细胞NF-κB信号通路的影响.方法 日本大耳白兔随机分为空白对照组、RA模型组、温和灸组、直接灸组、隔姜灸组,用福氏完全佐剂塑造实验型RA模型,造模后第7天开始分别温和灸、直接灸、隔姜灸“肾俞”“足三里”穴进行治疗,采用S-P免疫组化法检测滑膜组织NF-κBp65、NF-κBp50、IKK的含量.结果 与空白对照组相比较,RA模型组关节滑膜组织NF-κBp65、NF-κBp50、IKK积分灰度值显著增高(P＜0.01);与RA模型组比较,各艾灸治疗组均能明显降低滑膜组织NF-κBp65、NF-κBp50、IKK积分灰度值(P＜0.01),且隔姜灸组与温和灸组、直接灸组比较降低幅度大(P＜0.05).结论 不同灸法对实验性RA滑膜细胞NF-κB信号通路的异常激活有明显抑制作用,其中以隔姜灸作用更为明显;艾灸可能通过降低IKK活性对NF-κB通路进行有效调控.
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IL-35在类风湿关节炎中的研究进展
类风湿关节炎( Rheumatoid arthritis , RA )是一种以慢性关节滑膜炎症为主的自身免疫性疾病,目前病因及发病机制尚未完全明确. RA滑膜细胞及滑膜组织中浸润的单核/巨噬细胞、淋巴细胞等产生大量细胞因子作用于多种细胞并相互调节,促进了RA的发生和发展. 白细胞介素35 ( Interleukin-35 , IL-35 )是近几年发现的IL-12 家族新成员,具有EB病毒诱导基因3 ( Epstein-Barr virus-induced gene 3 , EBI3 )和p35亚基组成的异质二聚体结构特点. 研究证明, IL-35可以增强调节性T细胞( regulatory T cell,Treg)、抑制辅助性T细胞17 ( T-helper cell 17 , Th17)分化、抑制效应性T细胞( effector T cell,Teff)增殖,是一种免疫抑制性细胞因子. 深入研究IL-35的生物学功能和作用机制对自身免疫性疾病的治疗具有重要意义.
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IL-17在类风湿性关节炎发病机制中的作用
类风湿性关节炎(RA)是一种以滑膜持续炎症和关节软骨及骨破坏为特征的自身免疫性疾病.RA的发展伴随着滑膜细胞增生、新生血管形成,以及局部大量T细胞浸润[1].IL-17是主要由Th17细胞分泌,并在RA滑膜中表现出与疾病严重程度相关的炎性因子[2].体外实验表明IL-17通过活化滑膜细胞而侵蚀关节,是RA病理过程中的重要调节因子[3].小鼠关节炎模型证实缺乏或拮抗IL-17A可以产生明显的抗炎作用[4,5].近,两种针对IL-17的单克隆抗体在RA早期临床试验中表现出安全性和有效性[6,7].本研究就近年来IL-17的亚型及其受体、信号通路以及IL-17在RA发病机制中的作用研究进展作一综述.
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NF－κB在类风湿关节炎中的研究进展
类风湿关节炎（ Rheumatoid arthritis，RA）是一种以慢性关节滑膜炎症为主要表现的自身免疫性疾病，损害关节软骨、骨、关节囊，严重时可导致关节畸形和功能丧失，目前病因及发病机制尚未完全明确。血管翳是引起关节破坏的病理基础，主要由新生血管、增生的滑膜细胞、炎性细胞及机化的纤维素构成，抑制血管生成的药物被证实可有效缓解RA的病情［1］。在RA患者滑膜组织可检测出高表达的活化的核因子（ Nuclear factor，NF）－κB［2］，NF－κB可被多种炎症因子激活，进而上调多种炎症因子，促进滑膜炎、骨和软骨破坏，抑制骨和软骨修复，促进血管翳生成。 RA患者NF－κB基因表达过高，其负向调节因子基因表达过低，甲氨蝶呤可以通过影响lincRNA－p21基因降低NF－κB活性，而小干扰RNA可以进一步使NF－κB治疗更具有特异性。本文就NF－κB在RA领域的研究做一综述。
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Anti-DR5 mAb诱导佐剂型关节炎大鼠滑膜细胞凋亡及机理初探
目的:探讨Anti-DR5 mAb诱导佐剂型关节炎(Adjuvant Arthritis,AA)大鼠滑膜细胞凋亡作用及其可能机理.方法:注射弗氏完全佐剂建立AA大鼠模型,分离并体外培养大鼠滑膜细胞.MTT检测、DNA倍体分析及流式细胞术分析Anti-DR5 mAb 对大鼠滑膜细胞的凋亡作用,Western blot检测大鼠滑膜细胞Caspase-3、Bcl-2蛋白的表达,Caspase抑制剂实验分析Anti-DR5 mAb 对大鼠滑膜细胞凋亡作用的机制.结果:MTT实验表明Anti-DR5 mAb能抑制大鼠滑膜细胞的增殖,流式细胞术分析这种作用模式为细胞凋亡.Anti-DR5 mAb处理后的大鼠滑膜细胞中Caspase-3蛋白水平上升,Bcl-2蛋白水平下调.Caspase抑制剂实验证明Anti-DR5 mAb 诱导大鼠滑膜细胞的凋亡是通过Caspase途径实现的.结论:Anti-DR5 mAb诱导大鼠滑膜细胞的凋亡,这种作用与滑膜细胞表面Caspase-3、Bcl-2蛋白表达相关.
关键词： Anti-DR5 mAb 佐剂型关节炎 滑膜细胞 细胞凋亡 -
促炎症细胞因子刺激人类关节滑膜B型细胞表达粘附分子
目的：透析相关性淀粉样变（DRA）病人关节滑膜组织粘附分子表达增强，并与局 部炎细胞浸润密切相关。旨在探讨DRA时诱导滑膜细胞粘附分子表达上调的机制。 方法：分离正常人关节滑膜B型细胞，与晚期糖基化终产物修饰的β2微球蛋白（AGE-β2m） 、天 然β2m、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（ IL-1β）在体外共同培养 ，用荧 光单克隆抗体染色，流式细胞仪检测定量分析滑膜B型细胞表面细胞间粘附分子-1（ICAM- 1 ）、血管细胞间粘附分子-1（VCAM-1）、E-选择素（E-selectin）的表达。结果：正常关节 滑膜B型细胞表达ICAM-1、VCAM-1，但不表达E-selectin。IL-1β、TNF-α能以时间和 剂量 依赖的方式上调滑膜B型细胞ICAM-1、VCAM-1的表达，但无诱导E-selectin表达的作用。 AG E-β2m和β2m对B型细胞粘附分子的表达无直接影响。结论： DRA时关节组织存在的促炎 症细胞因子可能上调滑膜细胞粘附分子的表达，从而促使局部的单核细胞浸润。
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类风湿关节炎患者滑膜组织和外周血CD4+T细胞的凋亡分析
类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis ,RA)是一种累及全身多关节的自身免疫性炎症性疾病,其病理特征之一为炎性滑膜浸润大量CD4+ T细胞,滑膜细胞增生及血管翳形成,其机理仍未阐明.有学者认为RA的发病与细胞凋亡过程异常有关,并有多种细胞参与,包括滑膜细胞、成纤维细胞、淋巴细胞、软骨细胞等[1].本实验应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)和流式细胞术,探讨细胞凋亡在RA发病机制中的作用.
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氨基葡萄糖对体外培养人骨关节炎滑膜细胞中炎性细胞因子表达的影响
目的 研究氨基葡萄糖对体外培养人骨关节炎(OA)滑膜细胞中白细胞介素(IL)-18、白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α表达的影响,探讨其治疗OA的机制.方法 滑膜细胞采自OA患者,采用分阶段酶消化法体外原代培养人滑膜细胞,给予实验兔以氨基葡萄糖临床等效剂量灌胃后,抽取含药血清培养细胞.采用ELISA定量检测药物对体外培养的人滑膜细胞培养上清液中IL-18、IL-1β、TNF-α的浓度,采用免疫细胞化学方法观察IL-18、IL-1β、TNF-α在2组滑膜细胞间表达的差异.结果 氨基葡萄糖含药血清组体外培养滑膜细胞的IL-18、IL-1β、TNF-α分泌量较正常兔血清分泌量明显要低(P＜0.01),并随氨基葡萄糖浓度的增加,IL-18、IL-1β、TNF-α分泌量逐渐降低；免疫细胞化学方法显示IL-18、IL-1β、TNF-α在正常兔血清组检出率较高,氨基葡萄糖含药血清组检出率相对较低(P＜0.01).结论 氨基葡萄糖能够显著下调IL-18、IL-1β、TNF-α在OA滑膜细胞中的表达,减轻滑膜炎症反应.
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中药治疗类风湿关节炎的机制研究进展
类风湿关节炎(RA)是一种慢性的、系统性的、非感染性的自身免疫疾病,以关节滑膜炎为主要特征.其病理特征主要表现为滑膜增生、血管翳形成、软骨破坏等,临床表现为关节红肿、疼痛,晚期关节畸形、强直和功能障碍,致残率较高.
