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乙型肝炎患者e抗原-抗体系统的变化与HBV复制
目的:探讨乙肝患者治疗过程中e抗原-抗体系统的变化与HBV复制的关系.方法:运用荧光定量PCR技术对164例血清HBeAg(+)的乙肝患者治疗过程中HBV-DNA血清水平进行监测.结果:治疗前HBeAg(+)患者HBV-DNA阳性率为98.2%.治疗过程中,97例出现HBeAg(-)/抗-HBc(+),此时HBV-DNA阳性率为48.5%;75例出现HBeAg(-)/抗-HBe(+),其HBV-DNA检出率为32.0%;42例出现抗-HBe(+)/抗-HBc(+),其HBV-DNA检出率为7.1%;30例出现抗-HBe(+)/抗HBs(+)(包括抗-HBe(+)/抗-HBe(+)/抗-HBc(+)),其HBV-DNA检出率为6.7%;在7例抗-HBc(+)及5例全阴的标本中,也有HBV-DNA检出.结论:在乙肝的治疗过程中血清HBeAg的消失及抗-HBe的产生,标志着HBV复制水平的下降,了解各阶段病毒复制程度对乙肝治疗及疗效评价有重要意义.
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高危HPV、TCT、DNA定量对宫颈癌及癌前病变的诊断价值
目的 探讨高危型HPV与DNA定量、TCT及其联合检测在宫颈癌及癌前病变中的诊断价值.方法 选择2012年8月-2014年2月来本院妇科检查的患者246例,用PCR-反向杂交检测HPV、染色法检测DNA定量、TCT检测,三项指标任一阳性者行阴道镜取活检,以病理诊断为金标准,Logistic回归联合预测概率的ROC曲线下面积,对单一及组合方式的敏感性、特异性进行比较分析.结果 HPV+ DNA、TCT+ DNA、TCT+ HPV组合模式Logistic回归曲线联合预测概率(Pre)曲线下面积分别为0.954、0.898、0.727,HPV+ DNA、TCT+ DNA、TCT+ HPV并联诊断宫颈癌前病变的敏感度分别为96.4％(134/139)、87.8％ (122/139)、89.2％(124/139),3种组合敏感度比较差异有统计学意义(x2=7.355,P＜0.05),其中HPV+ DNA组合与TCT+ HPV组合以及TCT+ DNA组合分别比较(x2=5.388,P＜0.05;x2=7.108,P＜0.017),3种组合特异度分别为59.8％ (64/107)、59.8％ (64/107)、60.7％(65/107)(x2=0.554,P=0.758＞0.05),差异无统计学意义.结论 HPV+ DNA、TCT+ DNA、TCT+ HPV 3种组合均可作为宫颈癌前病变的筛查指标,但HPV+ DNA组合的筛查灵敏度更高.
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乙型肝炎患者乙肝两对半模式和乙肝病毒DNA定量相关性研究
[目的]探讨乙肝病毒感染患者中乙肝两对半模式和乙肝病毒DNA定量相关性.[方法]以在三亚市人民医院就诊的乙型肝炎患者500例为研究对象,分别采用酶联免疫吸附法及荧光定量PCR法测定其乙肝两对半及乙肝病毒DNA(HBV DNA)定量,观察两者之间的相关性.[结果]共纳入乙型肝炎患者500例,其中大三阳患者HBV-DNA定量对数值显著高于其他组(P＜0.05;e抗原定量与HBV-DNA对数定量相关分析显示:e抗原阳性患者中,e抗原定量值与HBV-DNA对数定量呈高度线性相关(r=0.81);e抗原阴性患者e抗原定量值与HBV-DNA对数定量呈中度线性相关(r=0.52).[结论]乙型肝炎患者中乙肝两对半模式与HBV-DNA定量值存在明显相关性,两者联合检测可准确反映乙型肝炎患者体内乙肝病毒复制情况,值得临床借鉴参考.
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深圳献血员HBsAg阴性HBVDNA阳性的追踪分析
目的对酶联检测结果阴性NAT筛查为HBVDNA阳性标本8份中的6份进行HBVDNA定量追踪分析,以期发现血清转换期标本.方法采用国产及进口试剂同时检测乙肝表面抗原(HBsAg),丙型肝炎抗体(抗-HCV),爱滋病抗体(抗-HIV),梅毒螺旋体抗体(抗-TP),丙氨酸氨基转移酶(ALT),对各项结果均为阴性者进行核酸检测(HAT)筛查,对HBVDNA阳性献血员进行核酸定量追踪.结果从1 651 2人份标本中筛出8份HBVDNA阳性,其中7例HBVDNA定量检测均能检测出HBVDNA的拷贝数,1例因HBVDNA含量过低不能检出拷贝数;随后追踪标本中HBVDNA含量均无显著性变化,未发现血清转换期献血员.结论所用酶联检测试剂及NAT筛查试剂均有较高灵敏度,核酸定量检测试剂定量较准确,HBVDNA定性检测结果为阳性并不一定说明体内有较高含量的HBVDNA拷贝数;应加大核酸筛查力度,才能发现血清转换期标本,从而为卫生部门制定相关政策提供科学依据.
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细胞DNA定量分析法与巴氏染色细胞学诊断宫颈癌及癌前病变的对比分析
目的：对比细胞DNA定量分析与巴氏染色细胞学诊断宫颈癌及癌前病变的效果。方法接受宫颈细胞学检查者共1327例[正常1299例，宫颈炎3例、宫颈上皮内瘤变（ CIN）Ⅰ3例、CINⅡ5例、CINⅢ6例、宫颈癌11例]。两种检查结果任一出现阳性即建议病患进行阴道镜病理活检，共34例行病理活检。以病理诊断为“金标准”，分别计算巴氏染色细胞学检查和细胞DNA定量分析法诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值。结果巴氏染色细胞学诊断共检出27例（2．0％）阳性病例，细胞DNA定量分析法共检出28例（2．1％）阳性病例，细胞DNA定量分析法诊断CINⅢ以上灵敏度、阴性预测值均高于巴氏染色细胞学诊断结果，但两者特异度、阳性预测值相差不大。结论细胞DNA定量分析法诊断宫颈癌及癌前病变的灵敏度较巴氏染色细胞学诊断高，且两者特异度相当。
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溶血对乙型肝炎病毒DNA定量检测的影响
目的 了解用实时荧光定量PCR技术检测乙肝病毒DNA拷贝数时,溶血对乙型肝炎病毒DNA定量检测的影响. 方法 采集30例乙型肝炎患者血液,分离血清,置于-20℃冰箱保存备用,并同时配制出含不同浓度Hb血清管.采用实时荧光定量PCR方法,检测含不同Hb浓度及不含Hb血清的乙型肝炎病毒DNA拷贝数,用配对t检验进行统计处理.结果 当标本中Hb浓度小于32 g/L时,Hb对检测血清乙型肝炎病毒DNA拷贝数无显著影响(P＞0.05).结论 当Hb浓度较低时,Hb对血清乙型肝炎病毒DNA定量检测无显著影响,因此较低浓度溶血标本可以进行乙型肝炎病毒DNA的定量检测.
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抗凝剂对定量检测乙型肝炎病毒DNA的影响
目的 探讨用实时荧光定量PCR技术检测乙型肝炎病毒DNA拷贝数时,不同抗凝剂对乙型肝炎病毒DNA定量检测的影响. 方法 采集40例乙型肝炎患者血液,分别置于不含抗凝剂及舍肝素钠、枸缘酸钠、EDTA-K2抗凝剂的无菌试管中,分离血清和血浆后于-20℃冰箱保存备用.采用实时荧光定量PCR方法 检测血清和血浆中乙型肝炎病毒DNA的拷贝数,用配对t检验对检测结果 进行统计处理. 结果 40例乙型肝炎患者不含抗凝剂组的乙型肝炎病毒DNA拷贝数的对数均数为5.66±2.10,含肝素钠组的对数均数为5.42±2.26,含枸缘酸钠组的对数均数为5.36±2.11,含EDTA-K2组的对数均数为5.58±2.16.三种含抗凝剂的标本分别与不含抗凝剂的血清组标本中的乙型肝炎病毒DNA拷贝数转换为对教经配对t检验统计处理,含肝素钠组和枸缘酸钠组的DNA拷贝数与不含抗凝剂组DNA拷贝数差异有统计学意义(P＜0.05),而含EDTA-K2组的DNA拷贝数与不含抗凝剂组的的DNA拷贝数差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 实时荧光定量PCR技术检测乙型肝炎病毒DNA拷贝数,应避免使用含肝素钠和枸缘酸钠的血浆标本,使用不含抗凝剂或含EDTA-K2抗凝剂的无茵试管收集标本.
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乙型肝炎病毒DNA定量检测及意义
目的检测血清中乙型肝炎病毒DNA拷贝数,并了解HBV感染的不同血清学指标组合相应的HBV-DNA含量分布,以指导临床. 方法采用AmpliSensor PCR定量方法,检测208份不同临床类型血清标本的HBV-DNA含量,再用ELISA方法测定HBV-M,统计不同免疫指标组合的HBV-DNA平均含量. 结果病毒量分为高、中、低三度,大于107拷贝.mL-1为高滴度;107～105拷贝.mL-1为中等滴度;105拷贝.mL-1以下为低滴度. 60例HBsAg(+) HBeAg(+) HBcAb(+)血清,HBV-DNA全部阳性,平均含量为1.8×108拷贝.mL-1;48例HBsAg(+) HBeAb(+) HBcAb(+)血清,HBV-DNA平均含量为6.4×106拷贝.mL-1;30例HBsAg(+) HBcAb(+)血清,HBV-DNA平均含量为8.5×105拷贝.mL-1 ;13例HBsAb(+) HBeAb(+) HBcAb(+)血清, HBV-DNA平均含量为2.1×105拷贝.mL-1. 结论定量PCR可真实反应HBV感染、复制及病 程变化,对乙型肝炎临床诊断及治疗均有较大的指导意义.
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探讨乙肝两对半模式与乙肝病毒DNA定量的相关性
目的 探讨乙肝两对半模式与乙肝病毒DNA定量的相关性,为临床治疗乙型肝炎提供参考.方法 采用荧光定量法对我院2012年2月～2014年2月收治的240例疑似乙肝患者乙肝病毒HBV-DNA含量进行测定,同时采用ELISA法进行两对半指标的检测,对比分析检测结果.结果 125例HBV-DNA呈阳性,占52.08％;115例-HBV-DNA呈阴性,占47.92％.定量为5.0×102IU/m1～5.0×108IU/ml.125例HBV-DNA阳性标本中,小二阳14例阳性,小三阳35例阳性,大三阳76例阳性.结论 HBcAg与HBV-DNA拷贝数呈正相关性,为临床制定合理的乙肝治疗方素提供了依据,有利于抑制乙肝病毒的传染.
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金菌灵胶囊在HBV DNA低水平复制慢性乙型肝炎的应用
目的 观察金菌灵胶囊对HBV DNA低水平复制的HBeAg阳性和HBeAg阴性慢性乙型肝炎(CHB)的治疗效果.方法 治疗组92例患者中有43例HBeAg阳性和49例HBeAg阴性,均给予金菌灵胶囊治疗.对照组110例,其中 49例HBeAg阳性和61例HBeAg阴性,给予口服水飞蓟素等基础护肝药, 疗程两组均为12周.两组患者在治疗前和治疗12周时均进行HBVM、HBV DNA定量和肝功能检测.结果 治疗组肝功能恢复更显著( P ＜0.01),治疗组12周时有44例HBV DNA转阴,其中HBeAg阳性患者中有18例出现HBeAg阴转或转换,16例HBV DNA转阴;对照组中只有16例HBV DNA转阴,其中HBeAg阳性患者中只有6例出现HBeAg阴转或转换,7例HBV DNA转阴( P ＜0.01);治疗组中HBeAg阴性患者HBV DNA转阴率显著多于HBeAg阳性者( P ＜0.01).结论 金菌灵胶囊对HBV DNA低水平复制的CHB有显著的抗病毒和护肝作用.
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Chelex-100提取生物检材DNA实时PCR定量研究
目的 研究Chelex-100法提取的生物检材DNA用量与复合STR分型成功率的关系.方法 113份各种生物检材采用Chelex-100法提取DNA,应用Quantifiler人类DNA定量试剂盒在ABI 7500荧光定量PCR仪上进行实时PCR定量,同时用Identifiler复合扩增系统在ABI 3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型. 结果 各种生物检材提取的DNA浓度分别为: 37份滤纸、纱布血痕0.042～5.28ng/μl,16份口腔拭子1.15～4.21ng/μl,18份烟头0.016～1.46ng/μl,10份肋软骨0.531～14.40ng/μl,8份肌肉5.75～24.80ng/μl,7份指甲0.788～11.50ng/μl,17份精斑0.79～99.50ng/μl.在建立的8μl扩增体系中,根据上述结果,调整用于复合STR扩增的DNA模板量在0.5～3ng之间,大部分样品可获得完全的STR分型.结论 Chelex-100法提取的检材DNA模板用量在0.5～3ng之间可得到有效STR扩增,浓度为0.5ng/μl以上的DNA样品,用小体积模板(1μl)比大体积(3μl)模板扩增效果好.
关键词： 法医物证学 实时定量PCR Chelex-100法 DNA定量 复合STR扩增 -
福尔马林固定石蜡包埋组织3种DNA提取方法比较
目的 探讨经福尔马林固定ld石蜡包埋组织(FFPET)提取DNA的简易有效方法.方法 比较水浴加热、微波加热和二甲苯脱蜡的效果.组织脱蜡后分别采用Chelex-100+层析柱纯化法、DNA IQTM试剂盒磁珠提取法和Chelex-100+磁珠纯化法提取DNA；实时荧光定量PCR技术定量DNA；荧光标记毛细管电泳技术进行STR分型.结果 二甲苯脱蜡的效果好于其他两种加热的脱蜡方法(P＜0.05).Chelex-100+层析柱纯化所获得的DNA量显著高于其他两种方法(P＜0.05).结论 二甲苯脱蜡、Chelex-100+层析柱纯化法是一种简单、有效的FFPET处理方法.
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人体接触检材前处理方式对磁珠法提取DNA效果的影响
目的 比较3种常见的接触检材前处理方式对磁珠法提取DNA效果的影响.方法 收集烟蒂、牙刷、纱线手套各10份；分别采用95℃、70℃直接裂解和TNE、SDS、PK预消化方式进行前处理,再用磁珠法提取纯化DNA,并进行DNA定量,统计提取的接触DNA量和IPC CT值；同时用Sinofiler复合扩增系统进行STR分型检测.结果 3种方法前处理后用磁珠提取的DNA纯度均较高,IPC CT值在26.63～ 27.19之间.用预消化法获得的DNA量高于裂解法,而95℃裂解与70％裂解方法提取的DNA量无显著性差异.STR扩增检测结果亦表明,采用预消化法处理的样品STR分型成功率高于裂解法,95℃与70℃裂解方法处理的样品STR分型成功率无显著性差异.结论 人体接触检材采用预消化磁珠法提取DNA,有助于提高STR检验成功率.
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国产磁珠结合自动化工作站批量提取生物检材DNA的应用
目的 建立国产磁珠结合自动化工作站批量提取案件中牛物检材DNA的方法.方法 采用国产磁珠结合Bio-Robert Universal System自动化工作站对案件中常见的生物样本进行DNA提取,检测Identifiler系统16个STR基因座,在ABI3130XL遗传分析仪上进行STR分型.其中210份样品同时在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量.结果 9 100份10类生物检材应用国产磁珠结合自动化工作站,大部分可提取到足够的DNA进行STR检验.STR检验成功率高的为口腔拭子、肌肉,达100%,接触细胞检材的成功率较低,为50.0%.结论 国产磁珠结合自动化工作站可用于案件中常见的大部分生物样本的DNA提取.
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用"咖啡环"法估测DNA含量
目的 探讨DNA-溴化乙锭形成的"咖啡环"用于DNA含量的测定.方法 将DNA与溴化乙锭混合,滴加在载玻片等载体上,蒸发后用凝胶成像系统观察、拍照,分析DNA的成环条件、环荧光强度与DNA浓度的相关性,以及"咖啡环"法评价DNA的灵敏度、适用范围等.结果 DNA-溴化乙锭溶液在载玻片、透明聚苯乙烯板等载体表面蒸发后可形成荧光环.在玻片上2μL点样时,DNA检出限可达到2ng/μL.在2ng/μL~1000ng/μL范围内,DNA浓度与环积分光密度拟合Logistic方程(R2=0.999).结论 "咖啡环"法简单、快速,设备要求低,可用于DNA含量的高效、快速测定.
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全血中DNA 6种提取方法的比较
目的 比较经典有机法、改良有机法、常规Chelex-100法、IQ法、Qiagen法及SP法6种方法在提取DNA纯度和得率上的差异.方法 收集10名健康志愿者的静脉全血各5mL,分别采用6种方法提取基因组DNA,通过紫外分光光度仪和荧光定量分析技术检测产物的纯度和浓度,计算得率,并使用统计软件对结果进行分析.结果 常规Chelex-100法所得DNA的纯度明显低于其他方法,而另外5种方法所得DNA纯度的差异不具有统计学意义.改良有机法得率低,IQ法得率高.统计结果表明试剂盒方法抽提全血DNA的得率明显高于经典有机法、常规Chelex-100法和改良有机法,其差异具有统计学意义.结论 与有机法和常规Chelex-100法相比,高质量试剂盒类方法更有利于法医学检材的DNA抽提.
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放置时间对烟蒂上DNA含量及STR分型的影响
目的 探讨不同放置时间对烟蒂上DNA含量及STR分型的影响.方法 以lO名志愿者的40枚"红双喜"烟蒂为检材(每人4枚),用chelex-100法分别在第1、4、7和1O周时提取烟蒂样本外层烟纸和海绵上的DNA,用Quantifiler人类DNA定量试剂盒进行DNA定量.并同时用AmpFL STR Profiler和IdentifilerrM试剂盒(AB公司)进行PCR扩增及STR分型. 结果放置第1、4、7和10周的烟蒂烟纸DNA质量浓度范围分别为0.104～2.52、0.110～2.41、0.096 0～2.32和0.085 0～2.28ng/μL,16个基因座检出率分别为100%、90%、75%和62.5%.海绵DNA质量浓度范围分别为0.0180～2.40、0.0171～2.25、0.0165～2.15和0.0160～2.15ng/μL,16个基因座检出率分别为97.5%、82.5%、50%和12.5%. 结论放置时间对烟纸和海绵上的DNA含量影响不大,对STR分型影响显著,STR分型受海绵的影响比烟纸明显.放置时间越久.检出率越低.
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微量口腔脱落细胞检材的DNA检验
目的 寻求提高微量口腔脱落细胞检材的DNA检验成功率的简便有效的提取方法.方法 对不同载体上的100份微量口腔脱落细胞检材采用小体积Chelex-100法提取DNA,在ABI7500型荧光定量PCR仪上进行定量,同时用IdentifilerTM复合扩增系统扩增.在ABl3130遗传分析仪上进行STR分型.结果 从25根饮料吸管上提取的DNA量在0.72～116.7.8 ng,16个水杯杯缘提取的DNA量在2.15-142.5 ng, 31个饮料瓶(罐)口提取的DNA量在1～34.65ng,10根筷子上提取的DNA量在3.35～26.6ng,12个果核中提取的DNA量在0.294～21.4ng,6份吃剩的骨头中提取的DNA量在0.88～5.88ng.100份检材性别及9个以上STR位点分型成功率平均为59.38%.除了使用者的个人原因外,检材的提取送检方式、检材的质地、饮料的性质对提取的DNA量有显著影响,是否加蛋白酶K对提取的DNA量无显著影响. 结论 采用小体积Chelex-100法可对60%左右的微量口腔脱落细胞检材提取DNA进行STR分型.
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DNA定量技术在死亡时间推断中的研究进展
死亡时间推断是法医病理学研究的热点及难点之一.随着分子生物学技术的发展,DNA的定量已广泛应用于死亡时间推断的研究.本文主要对机体死后不同组织和器官中DNA含量随时间的降解情况,以及单细胞凝胶电泳、Feulgen染色图像分析技术、流式细胞仪等近年来新的DNA定量技术应用于死亡时间推断研究中的进展进行了综述.
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阿德福韦酯联合拉米夫定治疗YMDD变异的慢性乙型肝炎的疗效相关因素分析
目的:观察阿德福韦酯(ADV)联合拉米夫定(LAM)治疗YMDD变异的慢性乙型肝炎(CHB)的疗效预测指标,为个体化抗乙型肝炎病毒(HBV)提供参考依据.方法29例拉米夫定(LAM)治疗后发生YMDD变异的CHB患者,分别予口服ADV、LAM,每日1次.每次均1片,每片剂量分剐为10mg、100mg,治疗52周;检测治疗前、24周和52周时的HBV DNA定量、肝功能,采用均数的t检验和X2检验分析对比.结果:52周时.获得HBV DNA阴转者与未阴转者在治疗前两组HBV DNA定量相比有高 度显著差异(P<0.01)、两组ALT相比无显著差异(P>0.05).早期病毒学应答者(24周时HBV DNA定量下降至小于1.0X103拷 贝/m1)与未早期病毒学应答者在52周时的HBV DNA阴转率相比有显著差异(P<0.05).结论:ADV联合LAM治疗YMDD变异的CHB患者时,治疗前HBV DNA低水平、早期病毒学应答是52周疗效好的预测指标;治疗前ALT水平与52周疗效无紧密关系.
