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RNF31表达下调抑制TNF-α刺激的NF-κB通路的激活
目的：利用慢病毒干涉下调内源性RNF31表达，研究NF-κB通路的活化及对细胞凋亡的影响。方法将人RNF31的shRNA片段克隆到慢病毒表达载体pGreenPuro中，瞬时转染HEK293T细胞，筛选出有效的干涉片段。将重组表达质粒与包装质粒PMD、SPA共转染293T细胞，在24 h、48 h分2次收集慢病毒上清，用流式细胞术检测病毒滴度。将获得的病毒感染HEK293细胞，提取细胞蛋白，Real-time PCR以及Western Blot检测RNF31干涉效果；报告基因实验检测敲低RNF31对NF-κB转录活性的影响；Real-time PCR检测干涉RNF31对TNF-α诱导的NF-κB下游靶基因的影响；Western Blot检测下调RNF31对IκBα活化的影响；Hochest染色检测下调RNF31对细胞凋亡的影响。结果成功构建RNF31干涉慢病毒pGreenPuro-RNF31载体并获得慢病毒颗粒，病毒滴度可达3×107 pfu/ml。在HEK293细胞中下调RNF31，抑制TNF-α刺激的NF-κB的转录活性，并抑制NF-κB下游靶基因的表达；下调RNF31抑制TNF-α刺激的IκBα的活化；此外，在TNF-α刺激细胞24 h时，RNF31表达下调使细胞凋亡增多。结论 RNF31表达下调抑制TNF-α刺激的NF-κB通路的激活。
关键词： E3泛素连接酶RNF31 慢病毒 NF-κB 转录调节 -
Th17在严重烧创伤等状态下对免疫系统的影响
严重烧创伤后常并发免疫功能紊乱，终可导致全身炎症反应综合征（SIRS）、脓毒症、多器官障碍综合征（MODS）等。而在细胞免疫中，辅助性 T（T helper，Th）细胞发挥着重要作用。传统上人们认为辅助性 T 细胞--CD4＋T 细胞通常分为 Th1型和 Th2型。成熟的 Th1细胞主要分泌 IFN －γ、IL －2和 TNF －β，主要介导细胞免疫，Th2细胞主要分泌IL －4、IL －5、IL －10和 IL －13，主要介导体液免疫反应。近年来，随着 Th 细胞亚群的不断发现，主要的 Th 细胞群包括Th1、Th2、Th9、Th17、Th22，各自在独有的转录调节下产生特定的效应细胞因子［1］。其中 Th17因其独特的效应性 T 细胞作用成为近年来免疫学界关注热点。有资料［2－9］表明 Th17在烧创伤早期、伤后感染及脓毒症免疫紊乱中发挥重要作用，且与调节性 T 细胞（Treg）在疾病进展过程中相互影响。但是，目前国内有关 Th17在烧创伤方面的研究较少，且仅局限于 Th17的检测，对其机制的探讨较少。因此，本文对Th17在严重烧创伤等状态下对免疫系统的影响作一综述，并展望其在烧创伤后免疫紊乱中的研究趋势以及应用于免疫治疗的前景。
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NF-κB参与小鼠β-防御素3基因急性时相表达的转录调节
目的分析急性时相反应时调节小鼠β-防御素3基因表达的转录因子.方法通过腹腔注射外源性脂多糖(LPS)建立小鼠急性时相反应,经Northern blot方法检测mBD3mRNA在组织中的表达;EMSA和Southwestern blot分析细胞核蛋白中的转录因子.结果内毒素注射后仅在肝脏组织中检测到mBD3mRNA;肝脏细胞核蛋白中有与mBD3基因调节区特异DNA片段结合的转录因子,分子量在(43.0～66.2)×103之间.结论小鼠急性时相反应时NF-κB参与β-防御素3基因在肝脏中表达的转录调节.
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抗凋亡基因Survivin转录调节的研究进展
Survivin基因作为目前所发现的强的凋亡抑制基因,具有强大的抗凋亡和调控细胞周期作用,并异常高表达于大部分肿瘤组织,显示出与肿瘤发生、发展及预后密切相关.有趣的是Survivin除了在胚胎和胸腺组织少量表达外,在其他大部分正常组织中均不表达,提示Survivin基因在肿瘤组织中的转录调节机理与在正常组织中的转录调节机理有所不同,深入探讨Survivin转录调节作用机理对Survivin今后成为肿瘤基因治疗的重要作用靶点有着十分深远的意义.
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长链非编码RNA在人类肿瘤及其他疾病中的研究进展
长链非编码RNA (lncRNAs)以RNA形式通过不同机制在多种层面上调控基因表达.越来越多的证据表明lncRNAs广泛存在于哺乳动物体内,参与细胞生命活动、染色质修饰、转录调节及RNA稳定性调节等,并可能参与肿瘤的发生、发展过程.随着越来越多肿瘤特异性lncRNAs被发现,lncRNAs不仅可能成为肿瘤早期诊断及预后的生物标志,而且还可能成为未来肿瘤治疗的靶点.研究证实,lncRNAs在肿瘤形成中发挥重要作用,故笔者就lncRNAs及其在肿瘤方面的研究进展作一综述.
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肿瘤树突状细胞疫苗研究进展
肿瘤转变涉及肿瘤抑制基因、原癌基因和转录调节基因突变多步过程,从而导致细胞异常表达蛋白和增殖失调控.而在这一系列过程中肿瘤细胞又通过下列途径逃脱机体的免疫监视和清除:(1)肿瘤抗原缺陷:肿瘤于克隆进化或初始阶段即下调表达或不表达其特异性抗原及MHC分子;肿瘤相关抗原(TAA)表达与机体正常细胞抗原交叉或肿瘤表达胚胎形成期抗原;抗原加工呈递过程缺陷:弱表达TAA蛋白、淋巴细胞功能相关蛋白(LFA-3)及细胞粘附分子(ICAM-1);(2)微环境异常:肿瘤及周围细胞分泌免疫细胞抑制因子如IL-10、INF、前列腺素、NO、TGF-β等,使抗肿瘤T细胞失活;或通过分泌细胞因子吸引Th2,而非细胞毒性T细胞;解剖学免疫屏障(血脑屏障、血睾屏障等)也参与肿瘤免疫逃逸;(3)T细胞信号途径成分质和量的异常:特异性T细胞前体缺失,T细胞TCRζ链下调,NF-RB表达和翻译异常等[1,2].肿瘤患者机体对肿瘤细胞的免疫缺陷是肿瘤发生、发展和转归的基础.因此,对肿瘤免疫监视和免疫清除的深入研究,将为肿瘤预防和肿瘤生物治疗开拓广阔的前景.
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“-GCT(A)GCGAGATC-”序列负向调控Nanog基因启动子-135/-230区活性研究
目的 探究Nanog启动子-332/+ 50区与双荧光素酶报告载体pGL4.10连接后负向调节Nanog-135/-230区活性的调节序列.方法 截短法将Nanog启动子-812-+171区不同片段与pGL4.10载体连接,脂质体转染法将各载体分别与内参载体pRL-TK共转入细胞,双荧光素酶系统报告系统检测报告基因的表达变化.结果 Nanog启动子-812/-332区、+50/+ 171区及-332/+51(或+56)区均不含Nanog-135/-230区的负向调控元件,改变Naong-332/+ 50区与报告载体pGL4.10的连接位点(Nhe I,BglⅡ)行成序列“-GCT (A)GCGAGATC-”即可消除Nanog启动子-332/+ 50对报告基因的正向调控作用.结论 待检测启动子与载体连接构成“-GCT(A) GCGAGATC-”序列后可负向调控Nanog-135/-230区的活性.
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SET/TAF-1β的研究进展
SET(patient SE translocation,SET)基因,又名模板活化因子-1(template activating factor,TAF-1),因首次鉴定于伴有该基因染色体异位的未分化型白血病患者SE而命名.SET蛋白具有多种生物功能,可以通过影响组蛋白乙酰化、转录调节、核小体装配等,参与基因表达调控、翻译后修饰、细胞凋亡等多个生物过程,是重要的细胞因子.一些消化和血液系统肿瘤、生殖与神经系统的疾病伴有SET表达或亚细胞定位异常,提示SET与这些疾病的发生发展相关.SET基因转录剪切产生TAF-1 α和SET/TAF-Iβ2个亚型,而SET/TAF-Iβ可能发挥着SET蛋白的主要生物学作用.
关键词： SET/TAF-1β 组蛋白乙酰化 转录调节 核小体装配 细胞凋亡 -
垂体腺瘤中c-fos、c-jun、c-myc癌基因蛋白表达的研究
目的检测c-fos、c-jun、c-myc基因蛋白在垂体腺瘤中的表达,探讨它们与肿瘤侵袭性的关系.方法采用免疫组化EnVision法检测c-fos、c-jun、c-myc蛋白的表达.结果垂体腺瘤中c-fos、c-jun、c-myc蛋白表达阳性率分别为38.3%、40%、46.7%;c-fos在不同功能类型垂体腺瘤中的蛋白表达差异无显著性(P＞0.05),而c-jun、c-myc蛋白表达差异有显著性(P＜0.05);在不同性别患者的垂体腺瘤中三者基因蛋白表达差异无显著性(P＞0.05);c-fos、c-jun在侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达差异无显著性(P＞0.05),c-myc侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达阳性率高于非侵袭性腺瘤,差异有显著性(P＜0.05).结论垂体腺瘤中c-fos、c-jun、c-myc蛋白表达程度不同,在垂体腺瘤的分子发病基础中可能起一定作用;c-jun在PRL细胞腺瘤中高表达,c-myc在GH细胞腺瘤中高表达;垂体腺瘤中c-fos、c-jun、c-myc蛋白表达与性别无关;c-myc蛋白在侵袭性垂体腺瘤中高表达,c-myc可做为衡量垂体腺瘤侵袭性的一个参考指标.
