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反义mTOR逆转录病毒载体对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用
目的 观察反义雷帕霉素靶蛋白(mTOR)逆转录病毒载体对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活性的影响.方法 采用脂质体介导转染包装细胞后构建mTOR的反义重组逆转录病毒载体(pLXIN-AmTOR)感染VSMC,检测mTOR及其下游底物包括真核细胞启动子4E结合蛋白1(4E-BP1)和核糖体蛋白S6激酶(p70S6 k)的表达变化,以及VSMC细胞增殖周期和增殖活性的改变.结果 反义逆转录病毒载体转染PT67细胞后感染VSMC,能显著抑制mTOR的mRNA和蛋白产物表达,mTOR通路下游p70S6k表达相应减少,而4E-BP1的表达却显著增强;感染后的VSMC的分裂、增殖过程受阻,更多细胞停滞在G1期.结论 成功构建反义mTOR逆转录病毒载体;感染VSMC后能明显抑制VSMC的分裂、分化和增殖.
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血管平滑肌细胞在糖尿病血管病变中的作用
糖尿病血管病变是常见的糖尿病并发症之一,可危及全身各个器官,是糖尿病患者死亡的重要原因.目前常规治疗手段对严重的糖尿病血管病变的效果有限.血管平滑肌细胞(VSMC)在糖尿病血管病变的进程中发挥重要作用,因此,通过调控VSMC来逆转糖尿病血管病变有广泛的应用前景.笔者就VSMC的生物学特征及其在糖尿病中的表型转换特点与VSMC调控应用于糖尿病的治疗策略进行综述.
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大隐静脉源性血管平滑肌细胞表型转化的研究进展
血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化是血管重塑的细胞学基础.收缩表型和合成表型VSMCs反映不同的功能,且两者之间可相互转化.笔者就大隐静脉源性VSMCs表型转化的概念及特点、表型标记物、细胞增殖和迁移,以及基质金属蛋白酶及其抑制物、细胞凋亡、表观遗传学与其表型转化的关系等研究进展进行归纳叙述,旨在为寻找防治静脉曲张相关的药物作用靶点提供理论基础.
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ROCKI/II在转化生长因子β1诱导的主动脉平滑肌细胞表型转化中的作用
目的:探讨ROCKI/II在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人主动脉平滑肌细胞(HA-VSMC)表型转化中的作用.方法:将HA-VSMC分别转染ROCKI和ROCKII的siRNA后荧光显微镜观察转染情况,并用Western blot方法检测不同处理的HA-VSMC(ROCKI siRNA转染、ROCKII siRNA转染、+TGF-β1、ROCKI siRNA转染+TGF-β1、ROCKII siRNA转染+TGF-β1)中ROCKI和ROCKII蛋白的表达;分别用Western blot和RT-PCR方法检测不同处理的HA-VSMC(+TGF-β1、ROCKI siRNA转染+TGF-β1、ROCKII siRNA转染+TGF-β1、ROCK非特异性抑制剂Y-27632预处理+TGF-β1)中细胞收缩表型标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌22α(SM22α)与合成表型标志物骨桥蛋白(OPN)的蛋白与mRNA表达,均以无处理的HA-VSMC为空白对照.结果:免疫荧光观察与Western blot检测表明两种siRNA均成功转染;TGF-β1处理后,HA-VSMC中ROCKI蛋白表达明显升高(P<0.05),但ROCKII蛋白表达无明显变化(P>0.05),ROCKI siRNA转染后TGF-β1上调ROCKI的作用被明显抑制(P<0.05).与空白对照组HA-VSMC比较,TGF-β1处理后的HA-VSMC中α-SMA、SM22α的蛋白和mRNA表达明显降低,而OPN蛋白与mRNA表达明显升高(均P<0.05),ROCKI siRNA转染或Y-27632预处理后,TGF-β1的上述作用均明显减弱(均P<0.05),ROCKII siRNA转染对TGF-β1的上述作用均无明显影响(均P>0.05).结论:TGF-β1可诱导HA-VSMC由收缩表型向合成型表型转化,ROCKI表达的升高可能在这一转化中起主要作用.
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乳腺癌间质成纤维细胞的平滑肌分化及意义
目的观察乳腺癌间质成纤维细胞平滑肌分化情况,评价临床病理学意义.方法对69例乳腺癌标本进行α-SMA免疫组织化学染色,以8例无癌区域乳腺组织(距癌肿边缘5cm以上)为对照,分析浸润性乳腺癌间质成纤维细胞平滑肌分化与年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级和雌激素受体状态的关系.结果无癌区域乳腺组织和原位癌间质无成纤维细胞平滑肌分化现象,55.5%的浸润性乳腺癌间质成纤维细胞有α-SMA阳性表达(P<0.05);68.3%(28/41)的淋巴结转移病例出现间质成纤维细胞平滑肌分化,且明显高于无淋巴结转移者(26.3%,P<0.05);组织学Ⅱ,Ⅲ级的浸润性乳腺癌间质成纤维细胞平滑肌分化(26/39)明显多于组织学Ⅰ级(7/21,P<0.05).结论间质成纤维细胞平滑肌分化与乳腺癌的浸润和恶性程度有关,肌成纤维细胞可能在乳腺癌的浸润和转移中发挥重要的旁分泌作用.
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哮喘气道重构时平滑肌细胞增殖周期的研究
目的探讨哮喘气道重构时平滑肌细胞增殖周期的改变及意义.方法建立大鼠哮喘模型,支气管-肺组织行HE染色,光镜及图像分析系统研究支气管内管壁、气道平滑肌的病理改变,流式细胞仪检测气道平滑肌细胞增殖周期分布.结果⑴哮喘组大鼠支气管内管壁厚度、平滑肌层厚度较对照组明显增厚(P＜0.01).⑵哮喘组大鼠G0/G1期气道平滑肌细胞比例显著低于对照组(P＜0.01);S期、G2/M期气道平滑肌细胞比例显著高于对照组(P＜0.01).结论哮喘气道重构时平滑肌细胞异常增殖,处于增殖状态的细胞比例明显增多,抑制平滑肌细胞的细胞周期转换有可能阻止气道重构,可望成为治疗哮喘的新途径.
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内皮素-1促进人肺血管平滑肌细胞中细胞周期依赖激酶2的表达
目的探讨内皮素-1对人肺血管平滑肌细胞(HPASMCs)增殖过程中细胞周期依赖激酶2 (CDK2)的影响.方法取材肺癌周围的正常组织,将培养的HPASMCs统一到G0期接种,随机分为4组(每组4个样本):对照组不加任何干预因素,ET-1组 10-7 mol/L;ET-1拮抗剂BQ123组 10-6 mol/L;混合组 ET-1 10-7 mol/L + BQ123 10-6 mol/L.采用免疫印迹方法,流式细胞仪分别检测了CDK2蛋白质的表达、细胞周期时相的变化.结果 Western blot分析结果表明:对照组,混合组CDK2蛋白质表达基本相同; ET-1组表达高,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01); BQ123组CDK2蛋白质表达降低,但与对照组比较无明显差异, ET-1组与BQ123组比较CDK2蛋白质表达差异有统计学意义 (P＜0.01); 流式细胞仪测定结果显示: 与对照组比较,ET-1组表现为HPASMCs中G1相的比例减少,而S相增高(P＜0.01); BQ123的G1相变化略有增高、S相变化略有减少; 对照组,混合组变化基本相同,混合组、BQ123组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05); ET-1组与BQ123组各个时相比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论内皮素-1促进人肺血管平滑肌细胞CDK2的表达,在肺血管平滑肌细胞增殖方面可能有着重要的病理生理学意义.
关键词： 内皮缩血管肽1 肌 平滑 血管 细胞周期蛋白质依赖激酶类 -
硝普钠诱导体外哮喘大鼠支气管平滑肌细胞凋亡
目的观察一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)是否诱导哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)凋亡.方法 Wistar大鼠10只,用卵白蛋白作为致敏原建立大鼠哮喘模型,分离出大鼠的气道平滑肌细胞,用SNP(NO的供体)干预,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长率的变化,用原位末端标记法和流式细胞术检测SNP对哮喘大鼠气道平滑肌细胞细胞凋亡的影响.结果⑴MTT法测定:SNP+哮喘组的细胞抑制率明显高于哮喘组细胞存活率,(n＝8,P＜0.05),且呈浓度依赖关系.⑵TUNEL(原位末端标记)法检测:SNP+哮喘组的凋亡指数明显高于哮喘组,(n＝4,P＜0.05).⑶流式细胞术测定SNP+哮喘组的平滑肌细胞凋亡率明显高于哮喘组,(n＝4,P＜0.05).结论硝普钠能抑制哮喘大鼠气道平滑肌细胞的增殖,并且能诱导哮喘大鼠气道平滑肌细胞的凋亡,这种作用可能与治疗哮喘的气道重建有关.
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川芎嗪在抑制人肺血管平滑肌细胞黏着斑激酶中的表达
目的 探讨川芎嗪对人肺血管平滑肌细胞(HPASMCs)黏着斑激酶(FAK)的影响.方法 实验分成4组:对照组不加任何干预因素; fibronectin(FN)组 (作为刺激剂) 40 μg/ml;川芎嗪组100 μg/ml; 联合组FN 40 μg/ml + 川芎嗪 100 μg/ml.采用免疫印迹方法,流式细胞仪及TUNEL法分别检测FAK蛋白质的表达、细胞周期、细胞凋亡的变化.结果 FAK蛋白质在对照组与川芎嗪组中无表达,FN组中高表达(5438±679);联合组(川芎嗪 + FN 组)中表达降低(3860±435),联合组与FN组比较差异有统计学意义(t＝39.3,P＜ 0.01);流式细胞仪测定结果示:FN组表现为HPASMCs中G1相的比例减少,S相增高,凋亡率降低,川芎嗪组表现刚好相反.凋亡率比较:依次为川芎嗪组＞对照组＞联合组＞FN组.结论 川芎嗪通过减少FAK形成抑制HPASMCs增生,促进细胞凋亡,在防治HPASMCs增生方面有着重要的作用.
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全反式视黄酸对体外培养的人体大隐静脉内膜平滑肌细胞增殖与凋亡的影响
目的研究全反式视黄酸(atRA)对体外培养的人体大隐静脉内膜增厚、平滑肌细胞增生与凋亡的影响.方法30小段(1 cm长)人体大隐静脉(HSV),随机分成HSV组、atRA组和对照组(n=10),atRA组和对照组均体外培养14 d.atRA组:培养液中含atRA100μM;对照组:培养液中含同等量无水酒精(atRA溶剂).对HSV组及培养后的atRA组、对照组标本进行取材固定,Masson染色,免疫组化测定增殖细胞核抗原(PCNA)及TUNEL法检测平滑肌细胞凋亡,计算机图象分析仪测量血管内膜厚度、计算内膜增生指数及细胞增殖和凋亡百分比.结果体外培养人体大隐静脉能产生明显的内膜增生和平滑肌细胞增殖(P＜0.05);atRA组内膜厚度、增生指数及PCNA阳性细胞百分数均明显低于对照组(P＜0.05).而凋亡细胞百分数则明显高于对照组(P＜0.05).结论atRA可以抑制体外培养人体大隐静脉内膜增厚及平滑肌细胞增生,促进平滑肌细胞凋亡.
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p38丝裂原活化蛋白激酶在低氧鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的表达
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在低氧引起的鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用.方法 采用细胞培养方法,免疫印迹技术,流式细胞仪方法测定在低氧情况下p38 MAPK的表达及其细胞周期的变化.结果 低氧情况下细胞中p38 MAPK表达增加,细胞呈现增殖性变化.结论 p38 MAPK在低氧情况下参与了鼠肺动脉平滑肌细胞增殖,具有重要的病理生理学意义.
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碱性成纤维细胞生长因子对人脑动静脉畸形血管平滑肌细胞增殖和表达骨桥蛋白的影响
目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养的人脑动静脉畸形(CAVM)血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和表达骨桥蛋白的影响.方法:应用胶原酶消化法培养人CAVM的VSMC,MTT法检测VSMC的增殖,免疫印迹法检测VSMC骨桥蛋白的表达.结果:bFGF作用于VSMC后,细胞增殖活性明显增加.实验组骨桥蛋白的表达显著高于对照组(P＜0.05).结论:体外条件下,bFGF可以刺激CAVM的VSMC增殖,并能促进其表达骨桥蛋白.
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血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂抑制动脉损伤后中膜平滑肌细胞血小板源性生长因子的表达及细胞迁徙
目的:研究球囊导管损伤后早期血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)拮抗剂对损伤后大鼠动脉中膜平滑肌细胞血小板源性生长因子(PDGF)的表达及细胞迁徙影响.方法:12周雄性Wistar大鼠颈动脉用球囊导管损伤,分成实验组和对照组,分别于术前2 d给予血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂CV-11974(5 mg·kg-1·d-1)和溶剂,术后2 d、3 d、5 d和14 d处死.用原位杂交、免疫组织化学和病理组织学进行研究.结果:实验组术后第2 d、3 d和5 d中膜平滑肌细胞PDGF-A mRNA和PDGF-A、PDGF B、PDGF-α(R)、β(R)阳性细胞率以及迁徙率明显低于对照组(P＜0.01).实验组的中膜平滑肌细胞表型处于收缩型.结论:血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂明显抑制损伤后动脉中膜平滑肌PDGF及其受体的表达和平滑肌迁徙.
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银杏叶提取物对人血管平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达的影响
目的:观察银杏叶提取物(Egb)对血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡相关蛋白Bcl-2的影响.方法:采用酶消化法结合组织贴块法培养胎儿主动脉VSMC.加不同浓度Egb干预不同时间段,形态学观察凋亡现象,流式细胞仪技术检测Bcl-2蛋白的表达量变化.结果:随着时间的延长,Egb浓度的增加,细胞表面Bcl-2蛋白表达率明显少于对照组.结论:Egb可以抑制VSMC凋亡相关蛋白Bcl-2的表达,并且这一作用呈时间及浓度依赖性.
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阿司匹林抗大鼠血管平滑肌细胞增生及与细胞周期的关系
目的:研究阿司匹林抑制大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增生与细胞周期的关系. 方法: 记数大鼠A10 VSMC在不同浓度阿司匹林处理下细胞增殖数量的变化,测定细胞培养液中乳酸脱氢酶活性以确定有无细胞毒性.用Western免疫印迹技术观察细胞周期中各类分子的变化. 结果: 阿司匹林抑制大鼠A10 VSMC增生,此作用非细胞毒性所致.阿司匹林使p21、p27、非磷酸化 p107和cyclin A 表达增加. 结论: 大剂量阿司匹林能够在体外抑制大鼠VSMC增生,与阻断细胞周期的进程有关,可能有益于血管增生性疾病的防治.
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同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞分泌金属蛋白酶组织抑制剂-1的影响
目的:观察同型半胱氨酸(Hcy)对血管平滑肌细胞(VSMCs)分泌金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的影响.方法:体外培养大鼠VSMCs,加入不同浓度的Hcy培养48 h,应用Western blot技术观察Hcy对VSMCs分泌基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和TIMP-1的影响,并通过半定量RT-PCR方法观察TIMP-1 mRNA表达的变化.结果:Hcy减少VSMCs MMP-1的分泌,上调TIMP-1 mRNA的表达,使TIMP-1分泌增加,并呈剂量依赖效应.结论:提示Hcy减少胶原降解可能是致动脉粥样硬化的发病机制之一.
关键词： 高半胱氨酸 肌 平滑 血管 金属蛋白酶组织抑制剂 -
白介素10抑制晚期糖基化终产物诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖
目的:观察重组人白介素10(rhIL-10)对晚期糖基化终产物刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响.方法:体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,应用不同浓度的AGE分别刺激VSMCs并设立对照组进行比较,将不同剂量的rhIL-10与AGE共同作用并设立对照组进行比较,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖程度.结果:与对照组相比,晚期糖基化终产物对血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用(P＜0.05).rhIL-10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响(P＞0.05).在晚期糖基化终产物刺激下,rhIL-10可明显抑制血管平滑肌细胞的生长(P＜0.05).结论:结果提示rhIL-10可抑制晚期糖基化终产物诱导的血管平滑肌细胞增殖.
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血管紧张素转换酶抑制剂抑制血管平滑肌细胞增殖的机制
目的: 探讨血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)抑制动脉平滑肌细胞增殖及向内膜迁徙的机理.方法: 球囊导管损伤Wistar大鼠颈总动脉,实验组于术前2d开始给与ACEI(temocapril-HCl 10 mg*kg-1*d-1),术后2 d、3 d、5 d分批处死.用抗人PDGF-A、-B及其受体,抗人MMP-1、MMP-9等抗体以ABC法行免疫染色.动脉组织行放射自显影乳剂原位酶谱分析.电镜下观察细胞质内小器官及细胞周围弹性、胶原纤维的密度.结果: 给ACEI后,PDGF及其受体、MMP-1、-9蛋白阳性细胞率及明胶酶活性显著降低,并抑制了中膜平滑肌细胞的表型转换.结论: ACEI可能通过继发地抑制PDGFs、MMPs蛋白表达,阻碍细胞表型转换,从而阻止中膜平滑肌细胞增殖及向内膜迁徙.
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雌激素诱导胎儿血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2分泌和活化
目的:探讨雌激素对胎儿血管平滑肌细胞(HVSMC)基质金属蛋白酶-2(MMP-2)分泌及其活化的影响.方法:分别以不同浓度的雌二醇与体外培养的HVSMC作用24 h,明胶酶谱法检测细胞培养上清液中明胶酶活性.结果:随着雌二醇剂量增加,MMP-2的酶原形式(pro-MMP-2) 和MMP-2活性形式逐渐增强.0.1 nmol/L、1 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L雌二醇组pro-MMP-2分别比对照组高9.4%±8.2%(P＞0.05)、73.0%±13.7%(P＜0.05)、229.2%±42.2%(P＜0.01)、428.4%±72.3%(P＜0.01), MMP-2活性形式分别比对照组高39.8%±12.9%(P＞0.05)、 127.2%±20.4%(P＜0.01)、 428.4%±37.6%(P＜0.01)、 683.4%±50.9% (P＜0.01).结论: 雌二醇以剂量依赖性方式促进pro-MMP-2分泌和活化.
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雌激素对培养的兔平滑肌细胞增殖与移行的影响
目的: 探讨雌激素对培养的兔平滑肌细胞增殖与移行的影响.方法: 分别测定不同浓度雌激素作用下兔血管平滑肌细胞 [3H]-TdR掺入量、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达、血管平滑肌细胞(VSMC)移行的变化.结果: 低浓度(1nmol/L)的雌激素组的培养细胞[3H]-TdR掺入量及VSMC平均光密度值、VSMC移行细胞数与对照组相比无明显差异(P＞0.05),较高浓度(10 nmol/L 、100 nmol/L )的雌激素可以显著降低培养的VSMC [3H]-TdR掺入量及培养VSMC平均光密度值,并能显著减少VSMC移行细胞数目(P＜0.01).结论: 雌激素可抑制血管平滑肌细胞的增殖与移行,从而发挥抗动脉粥样硬化作用.
