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接尘工人对含矽粉尘的基因易感性研究
目的 探讨人类白细胞抗原A位点、B位点、DRB1位点等位基因与矽肺易感性的关系.方法 应用聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)的原理,利用DNA对HLA-Ⅰ类、Ⅱ类抗原的等位基因进行分型检测,分析45名矽肺病人和50名正常人群对照组基因型及分布频率等差异.结果 矽肺组与对照组A、B、DRB1位点相同基因型分布频率的卡方检验,差异均无统计学意义.但矽肺组与对照组A、B、DRB1位点均有独有的某基因型.如矽肺组A位点32型4例(4.4%),36型1例;B位点40型3例(3.3%),55型6例(6.7%),8型、12型、15型、56型各1例(1.1%);DRB1位点3型4例(4.4%).正常对照组A位点69型1例,B位点37型1例,38型5例(5%),71型5例(5%);DRB1位点17型3例(3%).经卡方检验,各工龄组与矽肺期别之间差异无统计学意义.结论 接尘工龄长短与矽肺期别无关(P＞0.05).矽肺组B位点55与对照组相比差异有统计学意义,提示此位点可能参与矽肺的发病.而对照组中,B位点38、B位点71出现频率较高,但无统计学意义.各工龄组与矽肺期别之间差异无统计学意义.
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广东地区CML患者中HLA-A,B,DRB1的表达与分析
为了调查慢性髓系白血病(CML)患者中HLA-A、B、DRB1基因多态性的表达,探讨HLA与CML之间的可能关联,采用DNA扩增基础上的反向序列特异性寡核苷酸杂交(PCR-RSSO)技术,对广东地区293例CML患者和随机同期采集的406名汉族健康献血者的HLA-A、B、DRB1位点进行基因多态性分型,并对2组间基因频率进行了比对分析.结果显示:CML组HLA-A*24基因频率为15.53%,显著低于对照组22.09%(RR=0.63,P=0.005),HLA-B*13基因频率为10.41%,与对照组6.74%相比则显著增高(RR=1.68,P=0.016),HLA-DRB1*14基因频率为7.51%.与对照组11.89%相比显著降低(RR=0.58,P=0.008).结论:HLA-A*24、HLA-DRB1*14在广东地区CML患者中表达较正常人明显减低,HLA-B*13在广东地区CML惠者中表达较正常人明显升高.I-ILA-A*24、HLA-DRB1*14是否为广东地区CML患者的保护性基因标记及HLA-B*13是否为其易感性基因标记尚需进一步研究明确.
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一例HLA-A新等位基因A*2459的测序分析
本研究探讨HLA新等位基因HLA-A*2459的分子机制.样本DNA抽提采用PEL-FREEZ抽提试剂盒,利用单链特异性引物PCR方法扩增先证者HLA-A基因的第2-4外显子,PCR产物直接进行第2,3、4外显子双向测序分析.结果显示:先证者样本中存在2个HLA-A等位基因,其中1个等位基因为HLA-A*1101,另1个经B1ast验证其为新的等位基因,新的等位基因序列已递交GenBank(DQ313255,DQ313256,DQ313257).与接近的HLA-A*24020101等位基因序列相比,新的等位基因仅在第3外显子上有1个核苷酸不同,即第527位T→C;这导致氨基酸第152位Val→Ala.结论:该等位基因为新的HLA-A等位基因,被世界卫生组织HJ-A因子命名委员会正式命名为HLA-A*2459.
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中国人HLA-A和B位点血清学分型错误的分析
对27例HLA-A和-B位点血清学分型错误进行分析.结果表明,HLA-A和-B位点的误检型错误均高于漏检型错误(P＜0.05),A和B位点分型间则无显著差别.中国人分型错误频率高的有A1(66.7%),A3(50.0%),A11(13.5%),A9(11.8%)和A19(7.1%)及B16(50.0%),B48(43.9%),B15(16.7%),B40(11.1%),B13(10.0%)和B17(9.1%)等抗原.结论:血清学分型方法应与基因分型技术互为补充.
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HLA-A、-B、-DRB1等位基因多态性与儿童获得性再生障碍性贫血的易感相关性研究
本研究探讨儿童再生障碍性贫血(AA)易感与HLA-A、-B、-DRB1等位基因多态性之间的相关性.获得性AA患儿80例,其中男48例、女32例,平均年龄8.1岁.在80例AA患者中非重型AA( nsAA)6例,重型AA(sAA) 74例.同地区随机选择健康献血者109例作为对照.采用PCR-SSP方法进行HLA-A、-B、-DRB1高分辨等位基因分型.基因频率差异分析采用Pearson x2检验或连续性校正x2检验或Fisher精确概率法.结果表明,与健康对照组比较,80例AA儿童患者中,HLA-B* 48:01、DRB1* 09:01表达频率升高(均P＜0.05,OR分别为12.000和3.403)；HLA-B* 51:01、DRB1* 03:01、DRB1* 11:01表达频率降低(均P＜0.05,OR分别为0.207、0.266和0.139).研究还发现,在74例SAA患儿中HLA-B* 48:01、DRB1* 09:01的表达频率与健康对照组相比亦呈显著升高,而HLA-B* 51:01、DRB1*03:01、DRB1* 11:01的表达频率与健康对照组相比均显著降低.结论:HLA-B*48:01、DRB1* 09:01与儿童期AA相关联,可能是罹患儿童期SAA的易感风险基因.HLA-B* 51:01、DRB1* 03:01、DRB1* 11:01在儿童AA中低表达,是否为相对的保护基因有待进一步研究.
关键词： 获得性再生障碍性贫血 HLA-A HLA -B HLA -DRB1 -
中国鲁南地区汉族人群HLA-A,B,DRB1高分辨等位基因多态性分析
本研究旨在分析中国鲁南地区汉族人群HLA-A、B、DRB1等位基因的高分辨多态性分布特征.采用PCR-SBT对中国鲁南地区688名无血缘关系的汉族健康人群进行HLA-A、B、DRB1位点高分辨基因分型,并对分型结果做统计学分析.结果表明:688例样本A、B、DRB1座位分别检出31、63、39个等位基因,其中频率大于0.05的常见等位基因为A *24∶02、A*30∶01、A*11∶01、A*02∶01、A*33∶03、A*02∶06、B*13∶02、B*44∶03、B*51∶01、B*46∶01、B*15∶01、B*58∶01、DRB1*07∶01、DRB2*15∶01、DRB1 *09∶01和DRB1*08∶03.上述A、B、DRB1位点常见等位基因累计基因频率分别为0.7223、0.4432、0.5453.常见的A*-B*-DRB1*单倍型是A*30∶01-B*13∶02-DRB1*07∶01 (0.1151),常见的两位点连锁单倍型分别是A*30∶01-B* 13∶02(0.1303)、A*30∶01-DRB1*07∶01(0.1157)和B*13∶02-DRB1 *07∶01(0.1307).结论:获得了中国鲁南汉族人群HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因和单倍型分布特征,为评估该地区患者找到HLA匹配供者的机率,为合理选择移植供者及移植免疫、HLA与疾病相关性研究提供了参考数据.
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一例HLA-A新等位基因HLA-A*3113的测序分析
目的 研究HLA新的等位基因HLA-A*3113的分子机制.方法 样本DNA抽提采用PEl-FREEZ抽提试剂盒,利用PCR方法扩增先证者HLA-A基因的第1～8外显子,PCR产物直接经TOPO TA克隆转染到质粒载体中获得等位基因的单链,对所得克隆进行第2、3、4外显子双向测序分析.应用序列特异性引物PCR方法证实测序所发现的突变.结果 先证者样本克隆测序得到两个等位基因,其中一个等位基因为A*2402,另一个经BLAST验证其为新的等位基因,新的等位基因序列已递交CenBank(DQ206619,DQ206620,DQ206621).与接近的A*310102等位基因序列相比,新的等位基因在第3外显子上有1个核苷酸不同,第456位G→C,导致第128位氨基酸E→D.结论 该等位基因为新的HLA-A等位基因,被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-A*3113.
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中国北方汉族人群PHN发病与HLA-A等位基因相关性研究
目的:探讨中国北方汉族人群中带状疱疹后神经痛(postherpetic neuralgia,PHN)的发病与人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)的相关性.方法:收集2013年12月至2015年1月就诊于中国医科大学附属第一医院疼痛科PHN患者42例,及该院体检中心100例健康人血样,采用直接测序分型(PCR-SBT)的方法对142例样本进行HLA-A等位基因检测,并比较其分布频率及差异与PHN发病的相关性.结果:本研究中健康人群组中共检出17种HLA-A等位基因型,符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律.PHN患者中的HLA-A*2601、-A*3004、-A*3303的基因频率明显高于健康人组(P＜0.05).而PHN患者中HLA-A*0201的基因频率明显低于健康人组(P＜0.05).结论:HLA-A*2601、-A*3004、-A*3303、-A*0201与中国北方汉族人群PHN发病相关,其中HLA-A*2601、-A*3004、-A*3303为PHN发病的易感基因,而HLA-A*0201为其保护性基因.
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人类群体遗传结构的图论主成分分析方法
目的提出基因频率矩阵的图论主成分分析方法,探讨该法在人类群体遗传结构研究中的应用.方法 从分析基因频率矩阵的结构特征入手,将主成分分析与图论中的小生成树有机结合,构建人类群体遗传结构的图论主成分模型,并以中国26个汉族人群HLA-A基因座遗传结构分析为例,验证图论主成分分析的科学性和适用性.结果 图论主成分分析的基本步骤可概括为:①对中心化基因频率的协方差矩阵进行主成分分析;②按图论原理求过m维空间n个点的小生成树;③利用求"颈"法分割小生成树;④将小生成树整合到二维主成分散点图中构建图论主成分分类图.根据此步骤,对中国26个汉族人群HLA-A基因座遗传结构进行了图论主成分分析,分析结果符合中华民族源与流的客观规律.结论图论主成分分类图既可显示各群体的遗传结构特性,又可利用小生成树的链接关系揭示各群体间的内在联系;图论主成分分析是分析人类群体遗传结构的一种较好方法.
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辽宁地区斑秃患者与HLA-A、HLA—B等位基因相关性研究
目的探讨HLA-A、HLA-B等位基因与斑秃的相关性。方法采用LABTypeTM SSO技术检测44例斑秃患者和200例正常对照的HLA-A、HLA-B等位基因频率。结果 HLA-A＊11（χ2=6.08,P〈0.05）、HLA-B＊13（χ2=29.80,P〈0.01）、HLA-B＊40（χ2=8.04,P〈0.01）、HLA-B＊46（χ2=5.86,P〈0.05）和HLA-B＊51（χ2=8.82,P〈0.01）的等位基因频率显著增高。结论 HLA-A＊11、HLA-B＊13、HLA-B＊40、HLA-B＊46和HLA-B＊51可能是斑秃的易感基因。
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HLA-A，B血清学分型与DNA分型的比较
目的：比较136例样本HLA-A，B血清学分型与DNA分型结果。方法：应用聚合酶链反应 -序列特异性引物（PCR-SSP）技术，设计38对引物，检测常见的HLA-A，B基因。 结果：136例 样本中有60例血清学分型与DNA分型结果不符合（44.1%）；HLA-A特异性血清学分型错误 率 在纯合子中分别占23.3%与9.4%（共11.2%）,在HLA-B中分别占47.4%与18.4%(共20.6 %)；HL A-A特异性血清学分型假阴性6.6%，假阳性2.5%，错误指认特异性2.1%，HLA-B特异性 则分别 为6.7%,3.6%,10.3%。结论： HLA-A纯合子血清学分型错误率明显高于杂合子（P<0.05）； HLA-B纯合子血清学分型错误率也明显高于杂合子(P<0.005);HLA-B特异性血清学分 型错误率显著高于HLA-A特异性（P<0.005）。
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乙肝后肝硬化患者HLA-A、DRB1等位基因多态性研究
目的:了解乙肝后肝硬化患者的HLA-A、DRB1等位基因多态性.方法:用基因芯片分型方法分析比较61例慢性乙肝后肝硬化患者与146例正常人HLA-A、DRB1等位基因的多态性.结果:HLA-A位点中的HLA-A02、11、24与HLA-DRB1位点中的HLA-DRB1*12、09、04为正常人群常见等位基因.乙肝后肝硬化患者组HLA-A02(43.4% vs 29.1%,OR:1.87,P=0.005,95% CI:1.21-2.89)与HLA-DRB1*07(13.9% vs 5.1%,OR:3.00,P=0.002,95% CI:1.48-6.07)、HLA-DRB1*08(16.4% vs 6.8%,OR:2.67,P=0.003,95% CI:1.40-5.08)、HLA-DRB1*11(12.3% vs 5.8%,OR:2.27,P=0.025,95% CI:1.11-4.64)的出现频率较正常对照组明显升高.在HLA-A位点中,乙肝后肝硬化患者组的纯合子比例较正常组有升高趋势,但无统计学意义.结论:HLA-A02与HLA-DRB1*07、08、11可能是乙肝后肝硬化的易感基因.
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HLA-A基因频率与HBV感染的相关性研究
从分子遗传学角度探讨HLA-A与乙肝感染发展及转归的关系.应用PCR-SSP技术,分别对慢性乙肝(CHB)患者30例,HBV携带者30例,自行感染恢复者30例,正常人50例进行HLA-A基因分型.结合临床病型作相关性分析.济南市汉族正常人以A0201位点常见.其基因频率为52%.CHB患者A0201基因频率明显下降(P＜0.05).A0301基因频率有所升高,相对危险度为2;A1101基因多见于HBV携带者,急性感染恢复者A0201基因频率有所增高.HLA-A0201、A0301基因与济南汉族乙肝患者的转归相关,HLA-A1101与HBV携带者相关;免疫遗传因素参与慢乙肝的发病机制.
关键词： HBV感染 HLA-A 基因分型 聚合酶链反应(PCR) -
汉滩病毒感染血管内皮细胞后上调HLA I类分子的表达
目的:观察汉滩病毒感染血管内皮细胞(EVC304)前后,HLA-I类分子中HLA-A、HLA-B、HLA-Cw3、HLA-Cw5表达上的差异.方法:以汉滩病毒76-118株感染EVC304细胞作为实验组,以无任何刺激的EVC304细胞作为阴性对照组.6h后用RT-PCR的方法对HLA-A、HLA-B、HLA-Cw3、HLA-Cw5的mRNA进行反转录和基因片段的扩增,在mRNA水平上检测其表达差异.结果:在HTNV感染以后,EVC304细胞中HLA-A、HLA-B、HLA-Cw3、HLA-Cw5 mRNA表达均呈升高现象,其中HLA-A、HLA-B和HLA-Cw5的mRNA表达与未感染细胞相比明显升高.结论:HTNV感染血管内皮细胞后,可以诱导HLA-A、HLA-B、HLA-Cw3、HLA-Cw5的表达升高,从而诱发机体特异性免疫应答,导致免疫损伤的发生.这或许是肾综合症出血热的发病机制之一.
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慢性乙型肝炎与HLA-A和DRB1基因关联研究
乙肝病毒(HBV)的清除和预后转归在很大程度上取决于宿主的免疫应答.人类白细胞抗原(HLA)复合体是调节机体免疫应答的重要基因群,为此,我们利用基因芯片技术分析了上海地区慢性乙型肝炎患者HLA I类中的A位点与HLA II类中的DRB1位点的基因分布,以探索乙型肝炎慢性化与HLA-A和HLA-DRB1的可能关联.
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中国华南地区慢性乙型肝炎患者HLA-A等位基因分布的初步调查及其意义
目的 了解中国华南地区慢性乙型肝炎(CHB)患者HLA-A11、A2、A24、A33等位基因的分布状况,并为筛选HBV特异性CTL新表位提供必要背景资料.方法 以267例CHB患者和300例健康献血员为研究对象,提取其外周血染色体基因组DNA,用PCR-SSP法进行HLA-A11、A2、A24、A33等位基因检测型,并进行统计学比较.结果 CHB组HLA-A11、A2、A24、A33的基因频率分别为57%、41%、21%、7%,以HLA-A11常见,较HLA-A2的基因频率高16%.健康对照组四种HLA-A等位基因的频率分别为57%、46%、24%、14%,HLA-A11较HLA-A2的频率高¨%.HLA-A33的频率在两组间有显著差异(x2=7.556,P=0.006).CHB组HLA-A2/A11、A2/A24、A2/A33、A11/A24、A11/A33、A24/A33的基因频率分别为17%、4%、1%、16%、4%、0.4%,健康人群则为18%、8%、4%、11%、5%、1%,各种基因组合的出现率在两组间近似.HBeAg(+)与HBeAg(-)CHB组比较,HLA-A11(x2=3.324,P=0.072)、A2(x2=0.324,P=0.569)、A24(x2=0.308,P=0.579)、A33(x2=1.159,P=0.282)等位基因的频率分布在两组间无显著性差异.结论 中国华南地区CHB患者和健康人群的主要HLA-A等位基因均为HLA-A11、A2、A24及A33,以HLA-A11为多见,提示鉴定HLA-A11限制性HBV特异性CTL新表位具有十分重要的意义;此四种等位基因及其组合模式与CHB患者的HBeAg状态无明显相关,但与HBV感染的其他临床特点及抗病毒治疗应答之间的关系有待研究.
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ICA,PJM逆转肿瘤细胞恶性表型及其机制的研究
目的:研究ICA,PJM逆转肿瘤细胞恶性表型,提高免疫效应细胞识别和杀伤的作用和机制.方法:MTT法检测ICA,PJM对PG细胞增殖的影响以及对CD3AK杀伤敏感性的影响;RT-PCR法检测ICA,PJM对bcl-2和c-fos基因mRNA表达水平的影响;流式细胞术检测细胞表面HLA-A,B,C抗原表达的变化以及c-fos,bcl-2蛋白表达水平的变化.结果:ICA,PJM对PG细胞有明显的增殖抑制作用,可以提高细胞表面HLA-A,B,C分子的表达和c-fos蛋白的表达,抑制bcl-2基因的表达,提高CD3AK细胞对PG细胞的杀伤活性.结论:ICA,PJM可以逆转肿瘤恶性表型,提高免疫效应细胞对肿瘤细胞的识别和杀伤.
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贵州地区麻风与人白细胞抗原A及人白细胞抗原B等位基因的小样本关联性研究
目的:研究分析人白细胞抗原(HLA)-Ⅰ类基因HLA-A、HLA-B等位基因与贵州地区麻风相关性.方法:采用序列特异性引物聚合酶链反应法(PCR-SSP)对43例麻风患者及23例健康对照组进行HLA-A、HLA-B等位基因的检测、分型,采用x2检验比较分析两组之间等位基因频率的差异.结果:麻风组HLA-A*02等位基因频率低于健康对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);瘤型麻风组HLA-A*02等位基因频率低于健康对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);瘤型麻风组HLA-B*46等位基因频率低于健康对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:HLA-B*46可能是瘤型麻风的保护基因;HLA-A*02可能是麻风的保护基因.
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HLA-A等位基因与急发型自身免疫性糖尿病遗传易感性关系的研究
目的:研究江苏地区HLA-A基因型与急发型自身免疫性糖尿病的相关性.方法:选取江苏地区64例自发酮症急性起病、依赖胰岛素治疗的糖尿病患者,从外周血中提取细胞基因组DNA,利用聚合酶链反应-寡核苷酸探针序列特异性引物(PCR-SSO)技术,进行HLA-A的分型,以直接计数法计算等佗基因频率.结果:在64例1型糖尿病患者中检出的HLA-A等位基因种类与健康对照组HLA-A基因种类无显著差别(P>0.05),部分等位基因频率存在显著差异:糖尿病组与健康对照组相比,HLA-A*03(7.82%vs 2.43%,P<0.05);A*24(26.04%vs 16.78%,P<0.05);A*01(1.72% vs 3.07%,P<0.05);A*11(15.67%vs 21.7%,P<0.05);HLA-A*31(0.1% vs 3.7%,P<0.05).结论:HLA-A*03和A*24在急发型自身免疫性糖尿病患者中均呈现有统计学意义的升高,可能义寸急发型自身免疫性糖尿病存在易感性;HLA-A*01、A*11和A*31呈现有统计学意义的降低,可能存在保护作用.
关键词： 急发型自身免疫性糖尿病 HLA-A 基因 -
乙型肝炎病毒L60V、I97L变异核壳蛋白对HepG2细胞HLA-A表达的影响
目的 研究L60V、I97L变异核壳蛋白对HepG2细胞HLA-A表达的影响.方法 构建EGFP-野毒株核壳蛋白、L60V、I97L变异核壳蛋白表达载体,酶切和测序鉴定,克隆扩增后转染HepG2细胞,筛选阳性细胞株;荧光显微镜观察荧光蛋白的表达,Western blotting检测核壳蛋白的表达RT-PCR检测HLA-A mRNA的表达,流式细胞术观察HLA-A蛋白的表达.结果 成功建立了融合表达蛋白表达载体;荧光显微镜显示细胞内融合蛋白表达,Western blotting检测各细胞系蛋白表达的量基本相同RT-PCR和流式细胞术结果表明,与野毒株相比I97L变异核壳蛋白表达细胞株HLA-A mRNA和蛋白表达均上调(P＜0.05),而L60V变异核壳蛋白表达细胞株则均明显下调(P＜0.05).结论 L60V、I97L变异核壳蛋白对HepG2细胞HLA-A表达与野毒株核壳蛋白的影响不尽相同,其在功能上与野毒株核壳蛋白存在差异.
