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Src家族激酶及其在心肌肥大信号转导中的作用
Sre家族激酶作为一种非受体型蛋白酪氨酸激酶,不仅在细胞分化、运动、增殖和存活过程中发挥关键作用,而且其家族成员之一的Sre蛋白还参与多条与心肌肥大有关的信号通路,如整合素介导的信号通路及G蛋白偶联受体介导的信号通路.本文就Src家族激酶及其在心肌肥大信号通路中的作用进行综述.
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悬浮培养GLC-82肺肿瘤细胞积聚体与蛋白激酶FAK、AKT、ERK和SRC活化的关系
背景与目的:蛋白激酶FAK部分介导肿瘤细胞在悬浮培养下细胞积聚体的形成,从而阻止细胞发生凋亡和促进细胞增殖,但是参与细胞积聚体形成的FAK下游通路尚不清楚.本研究旨在研究蛋白激酶FAK及其可能的下游分子ERK、AKT和SRC活化在悬浮状态肺癌GLC-82细胞积聚中的作用.方法:用polyHEMA悬浮培养观察肺正常细胞HBE和肿瘤细胞GLC-82积聚体形态;细胞凋亡用DNA琼脂糖凝胶电泳检测梯状DNA分析;细胞转化能力用软琼脂糖集落形成实验分析;磷酸化蛋白激酶水平用免疫印迹实验检测;RNA干扰实验降低FAK蛋白水平的表达.结果:GLC-82肺腺癌细胞在polyHEMA悬浮状态下能够存活和形成积聚体,肺正常细胞HBE在polyHEMA悬浮状态下发生凋亡和不形成积聚体.磷酸化FAK、ERK、AKT和SRC的水平和GLC-82积聚体有关.沉默FAK蛋白的表达,能够部分地阻断肿瘤细胞积聚体的形成,降低磷酸化ERK和AKT水平,以及降低软琼脂集落形成能力.FAK RNA干扰前后的GLC-82细胞软琼脂集落形成率分别为(12.2±1.1)%和(3.6±0.7)%(P=0.001).结论:GLC-82肺癌细胞积聚体的形成部分由FAK信号通路介导,ERK和AKT是FAK的下游通路蛋白.
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PYK2介导H460肺肿瘤细胞失巢凋亡抗性的机制
[目的]研究蛋白激酶PYK2对悬浮状态下的肺癌细胞H460失巢凋亡抗性的作用和PYK2的下游通路蛋白。[方法]RNA干扰实验采用逆转录病毒载体介导的稳定表达系统降低PYK2蛋白的表达；细胞悬浮培养实验用polyHEMA培养方法：用PARP断裂带和DAPI荧光染色检测细胞凋亡情况；细胞侵袭能力用侵袭小室实验；磷酸化蛋白激酶水平用免疫印记实验检测。[结果]用RNA干扰沉默能够降低H460细胞中PYK2蛋白的表达。抑制PYK2的表达能够降低悬浮培养H460细胞增殖能力和促进细胞凋亡增加。此外，沉默PYK2的表达能使肿瘤细胞侵袭能力下降，并降低磷酸化Paxillin和Src的水平，但不能降低磷酸化JNK、AKT和ERK的水平。[结论]PYK2信号通路在H460肺癌细胞失巢凋亡抗性中起重要作用,Paxillin和Src可能是PYK2的下游通路蛋白。
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抑制Src激酶对慢性粒细胞白血病细胞的抑制作用
目的 探讨抑制Src激酶对K562及其衍生的imatinib耐药K562/G细胞体外和体内抗肿瘤作用及分子机制.方法 先在体外检测ZD6474直接抑制Src激酶对细胞凋亡的影响;然后建立裸鼠皮下移植瘤模型,利用灌胃给药的方式给予ZD6474,剂量为25～100 mg/(kg*d),连续给药18 d,观察移植瘤生长情况,并用免疫组化方法分析肿瘤组织的增殖和Src激酶表达情况.结果 ZD6474在体外呈剂量依赖性直接抑制Src激酶活性;特异性抑制Src可以诱导K562和K562/G细胞凋亡,并上调Bax/Bcl-2的比例,但不影响STAT3的活性.口服给予ZD6474可以显著抑制K562、K562/G裸鼠移植瘤的生长(P<0.05);并抑制肿瘤组织中增殖细胞核抗原和Src激酶的表达.结论 ZD6474直接抑制Src激酶,从而抑制imatinib耐药的K562/G和亲本K562细胞增殖,诱导凋亡,并以剂量依赖方式显著抑制K562、K562/G裸鼠移植瘤生长,其机制与ZD6474显著抑制Src激酶活性有关.
关键词： K562 Imatinib 耐药 Src ZD6474 -
Cx43磷酸化及其与ZO-1、Src相互作用的研究进展
缝隙连接(Gap Junction,GJ)是沟通相邻细胞胞质的细胞间通道,介导缝隙连接细胞间通讯(GJIC),缝隙连接蛋白(Connexin,Cx)是实现GJIC的结构基础,主要通过对细胞信号的传导来发挥作用.近年来随着分子生物学发展,有学者认为这种传导主要由Cx43完成[1].
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Src、FAK对E-cadherin和integrin介导的串联以及肿瘤浸润、转移的影响
钙黏蛋白(E-cadherin)和整合素(Integrin)在协调控制细胞基本的生理和病理过程中扮演着重要的角色,包括形态发生、组织分化、伤口愈合、免疫监视、炎症反应、肿瘤进展和转移等.然而,目前调节钙黏蛋白和整合素之间通信的根本性分子机制仍然不是很清楚.尽管大量的证据支持两种黏附受体家族间存在有精细调控的串联,而且这种串联可以影响他们的表达、翻转、定位和/或功能,并可根据细胞内外的环境背景来增强或抑制黏附连接,然而这些重要的现象中涉及到的分子和分子调控机制目前还不完全清楚.近越来越多的证据表明,非受体酪氨酸激酶Src和FAK与整合素和钙黏蛋白调控的细胞间黏附和信号转导的过程密切相关,本文主要是综述Src及FAK在串联中的重要作用,及探讨这种串联对肿瘤细胞的集体迁移、浸润和转移的潜力的影响.
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胶质细胞源性神经生长因子家族成员及其受体介导的胞内信号转导
GDNF家族成员是TGF-β生长因子超家族的一个亚家族,在神经元的存活,生长,分化,再生,轴突生长,神经损伤和神经退行性疾病中都有重要作用.神经细胞中存在GDNF的RET依赖性和非RET依赖性两条信号转导途径.本文就GDNF家族成员及其受体介导的胞内信号转导机制研究的新进展进行简述.
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Src在胃癌腹腔转移多细胞团簇抗失巢凋亡中的作用
目的 探讨Src蛋白对体外三维培养的胃癌多细胞团簇(multicellular aggregates,MCAs)增殖及凋亡的影响.方法 体外三维培养人胃腺癌细胞BGC823和MKN45成MCAs,Western blot检测MCAs和单层贴壁培养的胃癌细胞中Src蛋白表达情况.siRNA法干扰Src表达,转染胃癌细胞后检测其对胃癌细胞BGC823和MKN45 MCAs形态学的影响.分别采用CCK-8和流式细胞术检测干扰Src表达对胃癌BGC823和MKN45 MCAs细胞活力和细胞凋亡率的影响.结果 利用BGC823和MKN5成功建立胃癌MCAs体外三维培养模型,Westem blot检测结果表明,与对照组比较,MCAs中Src的表达水平明显高于单层贴壁培养的胃癌细胞[BGC823:(0.615 ±0.068)vs(0.219 ±0.017),P＜0.01;MKN45:(0.657 ±0.087) vs (0.420 ±0.015),P＜0.05].干扰胃癌细胞BGC823和MKN45 Src表达,可以显著降低MCAs形成能力,并明显影响MCAs活力.流式细胞术检测结果表明,干扰Src表达可以显著诱导MCAs发生凋亡[BGC823:(9.456±0.209)vs(3.026±0.201),P＜0.01;MKN45:(9.356 ±0.416) vs(2.541 ±0.251),P＜0.05].结论 Src是胃癌MCAs抗失巢凋亡的关键分子,抑制Src表达可以显著抑制胃癌BGC823 MCAs和MKN45 MCAs形成,影响胃癌MCAs增殖,并诱导胃癌MCAs凋亡.
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PP2对人肝癌细胞HepG2中Tec信号转导作用的研究
目的 研究Src抑制剂PP2对人肝癌细胞HepG2中Src及Tec(tyrosine kinase expressed in hepatocellular carcinoma)的作用.方法 用免疫细胞化学方法检测Src、Tec在HepG2细胞中的表达;RT-PCR和Western blot方法检测不同浓度PP2处理细胞后,HepG2细胞中Src、Tec mRNA及蛋白表达;并用细胞黏附实验及MTT法检测PP2对细胞黏附及生长的影响.结果 Src、Tec在人肝癌细胞HepG2中均呈高表达,用Src抑制剂PP2处理HepG2后,Src、Tec mRNA及蛋白表达明显降低,且细胞黏附能力及生长明显被抑制,并呈剂量依赖性,PP2浓度为40μg/ml时细胞抑制明显.结论 Tec是肝癌信号转导过程中重要的联接和调控分子,与Src存在cross-talk,抑制Tec可能影响肝癌细胞的生长和侵袭等生物学行为.
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IL-6、IL-8上调卵巢癌细胞雄激素受体表达的作用分别依赖MAPK途径和Src活化
目的 探讨IL-6、IL-8促进卵巢癌细胞增殖的分子机制.方法 在以往工作的基础上,选择兼有IL-6、IL-8受体及雄激素受体(androgen receptor,AR)表达的卵巢癌细胞系SKOV-3和OVCAR-3作为研究模型,观察AR阻断剂氟他胺(flutamide,Flu)对IL-6、IL-8诱导的促卵巢癌细胞增殖作用的影响,在此基础上进一步探讨两种细胞因子对AR表达的调节作用及相关信号传导通路.结果 ①AR阻断剂Flu不能阻断反而增强IL-6、IL-8诱导的促卵巢癌细胞增殖效应.②在无雄激素的条件下,IL-6、IL-8不仅能增加AR表达而且还能活化AR基因启动子,后者可被Flu完全阻断.③IL-6诱导的AR水平增加可被p38 MAPK、MEK1/2及ErbB2 MAPK阻断剂阻断,而IL-8诱导的AR水平增加则可被Src阻断剂阻断.结论 IL-6、IL-8很可能通过提高AR水平和AR活性从而增强卵巢癌细胞对雄激素的敏感性,由此通过产生的放大信号通路促进卵巢癌的生长和发展.IL-6、IL-8的上述活性分别依赖MAPK途径和Src活化.
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ROS/Src/JNK信号通路在香烟诱导气道上皮细胞黏液高分泌中的作用
目的 探讨在香烟诱导气道上皮细胞黏蛋白MUC5AC表达过程中Src/JNK信号通路的作用.方法 香烟抽提物预处理的人气道上皮A549细胞,分别以活性氧(ROS)清除剂DMTU、JNK特异性抑制剂SP600125及Src激酶抑制剂PP2干预.测定各组细胞中ROS的含量,采用RT-PCR、ELISA法观察细胞黏蛋白(MUC)5AC转录水平及培养上清液中MUC5AC蛋白水平的改变,以Western blot法检测细胞表皮生长因子受体(EGFR)的蛋白表达.结果 细胞暴露于不同浓度的香烟抽提物中,ROS的量呈浓度递增;ROS清除剂DMTU显著降低香烟所致的Src磷酸化;Src特异性抑制剂PP2处理组中的JNK磷酸化水平与对照组比较有明显下降,MUC5AC的表达水平也明显降低;JNK特异性抑制剂SP600125组中MUCSAC的蛋白表达和基因转录水平较对照组均明显降低.结论 ROS-Src-JNK信号通路可能参与A549上皮细胞中MUCSAC的表达调控.
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磷酸化细胞外信号调节激酶1/2定位于成骨细胞的局部黏附时需要Src活性
目的 探讨血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)刺激成骨细胞,对磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(phosphorylation extracellular signal-regulated kinase1/2,pERK1/2)位置的影响.方法 出生3 d清洁级健康小鼠10只,雌雄不拘,体重6～9 g.取小鼠颅骨,分离培养原代成骨细胞.取第6代成骨细胞,1%血清培养液培养12 h后,随机分成经10μmol/L PP2处理30 min组(实验组)和未处理组(对照组),每组再随机分成2个亚组:其中一组用PDGF(20 ng/ml)刺激10 min,另一组不用PDGF刺激,采用免疫组织化学染色检测pERK1/2分布.另取第6代成骨细胞,当细胞生长至80%融合时,用细胞刮随机分成2组,一组用10μmol/L PP2预处理30 min(实验组),另一组不用PP2作用(对照组),再用20 ng/ml PDGF培养12 h,采用划痕愈合法检测PP2对成骨细胞在PDGF刺激下迁移能力的影响.另取第6代成骨细胞,调整细胞浓度1×106/ml,随机分成2组,分别经DMSO(对照组)和10μmol/LPP2(实验组)预处理30 min,每组再随机分成2个亚组:其中一组用PDGF(20 ng/ml)刺激10 min,另一组不用PDGF刺激,采用Western blot检测细胞骨架蛋白内pERK1/2活性.结果 免疫荧光染色结果显示,PDGF促进pERK1/2定位于成骨细胞的局部黏附和细胞核内;而PP2显著抑制了由PDGF刺激引起的pERK1/2定位于成骨细胞的局部黏附,但并不影响pERK1/2定位于细胞核内.细胞划痕愈合实验显示,PP2明显抑制了由PDGF所诱导的成骨细胞迁移.Western blot检测结果显示,PP2明显抑制了由PDGF所诱导的成骨细胞局部黏附内ERK1/2的磷酸化.结论 PDGF通过激活Src活性,促进pERK1/2定位于成骨细胞的局部黏附内;PP2通过抑制pERK1/2定位于成骨细胞的局部黏附,从而抑制由PDGF所诱导的成骨细胞迁移.
关键词： Src 磷酸化细胞外信号调节激酶1/2 血小板源性生长因子 成骨细胞 -
巨噬细胞中oxLDL对TLR4-Src信号通路激活的调控
目的 探讨氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,oxLDL)对于巨噬细胞中Toll样受体4 (toll like receptor 4,TLR4)-Src信号通路激活的调控作用.方法 oxLDL (50 ug/mL)按不同时间(0、15、30和60 min)刺激巨噬细胞,同时采用特异性siRNA抑制巨噬细胞内TLR4表达后,Western blot检测Src-Y418位点磷酸化水平;并利用免疫共沉淀法及细胞免疫荧光法检测TLR4与Src及其家族相似蛋白Fyn和Lyn的体外结合情况.结果 oxLDL诱导巨噬细胞内Src-Y418磷酸化水平显著性升高,且呈时间相关性.而抑制TLR4表达则可显著性削弱oxLDL对于Src的激活作用(P＜0.01).此外,oxLDL诱导细胞内TLR4与磷酸化Src (p-Src)相互结合并共定位于细胞膜表面,而不与Src其他家族成员Fyn及Lyn结合.结论 oxLDL通过诱导TLR4与Src相互结合,从而激活Src磷酸化水平,进而诱发动脉粥样硬化过程中脂质累积及炎症反应.
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Src与FAK的相互作用及其在心肌肥大信号转导中的作用
心肌肥大的启动和发展涉及到多种细胞外信号及相应的多条细胞内信号转导通路,Src激酶家族和FAK作为非受体蛋白酪氨酸激酶是整合素信号的早期调控因子,在黏着斑FAK-Src信号复合物的形成在心肌肥大的信号转导通路中起重要作用.本文综述了Src与FAK的相互作用及其在心肌肥大信号转导中作用研究的新进展.
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FAK和Src在甲状腺乳头状癌中的表达及其在肿瘤侵袭转移中的临床意义及机制研究
目的：探讨黏着斑激酶（FAK）和Src在甲状腺乳头状癌侵袭转移中的临床意义。方法：利用免疫组化检测FAK和Src在100例甲状腺乳头状癌组织中的表达，并分析其与患者临床病理参数的关系。利用Western blot以及qRT－PCR检测FAK和Src在甲状腺癌细胞株中与上皮间质转化（EMT）的相关性。结果：FAK与甲状腺乳头状癌的年龄（P＝0．000）、T分期（P＝0．176）、N分期（P＝0．000）、M分期（P＝0．000）、临床分期（P＝0．038）、局部复发（P＝0．000）、淋巴结侵袭（P＝0．014）以及与患者较低生存期（P＜0．0001）密切相关；Src与甲状腺乳头状癌的N分期（P＝0．000）、M分期（P＝0．002）、淋巴结侵袭（P＝0．000）、包膜侵袭（P＝0．029）以及患者的较低生存期（P＜0．0001）密切相关。并且高表达FAK与Src的细胞其N－cadherin、Vimentin的表达增高，而E－cadherin的表达降低。结论：FAK以及Src与甲状腺乳头状癌的侵袭转移密切相关，并可能通过EMT的方式促进其侵袭和转移。
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环孢素A通过活化Src信号通路促进人绒毛膜癌细胞株JEG-3侵袭
目的:探讨Src信号通路在环孢素A(cyclosporin A,CsA)促进人滋养细胞侵袭中的作用.方法:应用Transwell侵袭实验观察CsA对人绒毛膜癌细胞株JEG-3侵袭能力的影响,应用Western blotting检测CsA作用于JEG-3细胞后Src的活化水平,并观察Src特异性抑制剂PP2对CsA作用后JEG-3细胞侵袭能力及E-钙粘蛋白表达水平的变化.结果:CsA可明显促进JEG-3细胞的侵袭(P＜0.05),并可提高JEG-3细胞Src的活化水平(P＜0.05),降低E-钙粘素蛋白的表达.PP2可明显抑制JEG-3细胞CsA诱导的Src活化(P＜0.05),阻抑CsA对细胞侵袭的促进作用(P＜0.05)和恢复CsA下调的E-钙粘蛋白表达水平(P＜0.05).结论:CsA可通过增强Src信号通路活化促进JEG-3细胞侵袭,并下调E-钙粘蛋白的表达,提示Src信号通路可能参与CsA对人滋养细胞生物学行为的良性调节作用.
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Src蛋白及其抑制剂与肿瘤关系的研究进展
随着细胞内信号通路的研究进展,肿瘤分子靶向治疗逐渐成为研究的热点.Src蛋白与肿瘤的关系十分密切,在多种肿瘤细胞中高度活化和/或过量表达,与体内的多条信号通路相联系,可被多条信号转导途径所激活,并能够促进肿瘤的发生和发展.因此,达沙替尼、塞卡替尼、博舒替尼等Src蛋白的抑制剂在肿瘤中的作用逐渐引起人们的关注.
