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Src介导ERK信号通路对宫颈癌细胞增殖凋亡的作用
目的 探讨Src介导ERK信号通路对宫颈癌细胞增殖凋亡的作用.方法 采用体外细胞实验方法,以宫颈癌细胞Hela(HPV阳性)和C33A(HPV阴性)为研究对象,施加Src激酶选择性抑制剂(PP2)对Src激酶进行抑制.于抑制前后采用流式细胞术(FCM)检测各组细胞的周期及凋亡情况,分别采用Real-time PCR法和Western-blot法检测各组细胞ERK 1/2、c-Fos和c-Jun的mRNA和蛋白表达水平.应用SPSS 20.0软件进行数据录入和分析.结果 Src抑制后,Hela和C33A细胞均显示增殖指数降低,凋亡率升高,处于G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期细胞比例降低,ERK 1、ERK 2、c-Fos和c-Jun的mRNA含量升高,ERK 1/2、磷酸化ERK 1/2 (p-ERK 1/2)和磷酸化c-Fos (p-c-Fos)蛋白表达水平降低,c-Jun和磷酸化c-Jun(p-c-Jun)蛋白表达水平升高.Hela细胞凋亡率、p-ERK 1/2和c-Fos蛋白在Src抑制前后的变化低于C33A细胞.结论 Src活化可以上调ERK信号通路中关键因子ERK 1/2和c-Fos磷酸化蛋白的表达,促进宫颈癌细胞的生长与增殖,在宫颈癌变中发挥重要作用.HPV感染可能对Src介导的ERK信号通路调节具有调节作用.
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补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠血小板Src,Akt和p38 MAPK蛋白的影响
目的:探讨补阳还五汤预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠体内血小板活化信号通路中酪氨酸激酶(Src),蛋白激酶B(Akt)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)蛋白及其磷酸化表达的影响.方法:将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、硫酸氢氯吡格雷组(7.81 mg·kg-1)和补阳还五汤高、中、低剂量组(29.69,14.84,7.42 g·kg-1).连续灌胃ig给药14 d后,大脑中动脉线栓法复制脑缺血再灌注损伤模型,并神经功能缺损评分;氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测算脑梗死体积;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测血小板活化信号通路中Src,Akt和p38 MAPK蛋白及其磷酸化表达情况.结果:与模型组比较,补阳还五汤各组及硫酸氢氯吡格雷组能明显降低脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能缺损评分和脑梗死体积比(P＜0.05);补阳还五汤不同剂量明显降低Src,Akt和p38 MAPK磷酸化水平(P＜0.05);硫酸氢氯吡格雷明显降低Src和Akt磷酸化水平(P＜0.05);各组大鼠血小板Src,Akt和p38 MAPK总蛋白表达水平无统计学差异.结论:补阳还五汤预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑组织保护作用,一定程度上是发挥抗血小板活化的作用,且可能与抑制Src家族激酶,PI3K-Akt和p38 MAPK信号通路有关.
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七叶皂苷钠通过抑制AKT, ERK上游信号SRC活性诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡
探讨七叶皂苷钠对乳腺癌MCF-7细胞的凋亡诱导作用及其可能的作用机制.运用MTT法检测七叶皂苷钠对MCF7细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜观察细胞形态学变化;DAPI染色后在荧光显微镜下检测细胞核变化;采用Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blotting检测凋亡相关蛋白(PARP,cleaved caspase-8,pro-caspase-3)和细胞存活相关信号分子(AKT,ERK)及其共同上游激酶SRC的磷酸化变化情况.结果显示,不同浓度七叶皂苷钠作用于乳腺癌MCF-7细胞后,以剂量依赖方式抑制MCF-7细胞增殖;诱导细胞凋亡(典型的凋亡形态学变化、细胞核改变和细胞凋亡率显著增加);细胞凋亡相关蛋白PARP切割增加,cleaved caspase-8表达增加,pro-caspase-3表达减少进一步验证了七叶皂苷钠的凋亡诱导作用;七叶皂苷钠显著抑制细胞存活相关信号分子(AKT,ERK)的磷酸化,其共同上游激酶SRC的活化亦显著下降.结果表明,七叶皂苷钠通过抑制SRC的活化,阻断信号向下游信号分子AKT,ERK的传递,抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖,诱导细胞凋亡.
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胰腺癌BxPC3细胞中Src激酶对Notch-1活化的调节
目的 探讨在胰腺癌细胞BxPC3中,Src激酶对Notch-1活化的影响.方法 用siRNA干扰的方法分别抑制Notch-1和c-Src的表达;加入Src激酶抑制剂PP2抑制Src激酶活性;MTT法检测细胞的生长;Western blot检测Notch-1蛋白活性形式NICD水平的变化.结果 抑制Notch-1表达及抑制Src激酶活性可明显抑制BxPC3细胞生长;抑制Src激酶活性及抑制c-Src蛋白表达可下调Notch-1 NICD水平.结论 Src激酶在胰腺癌细胞BxPC3中促进Notch-1的活化,促进BxPc3细胞的生长.
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Src激酶在胃癌细胞来源的exosome促进肿瘤细胞增殖中的作用
目的:研究胃癌细胞来源的外泌体(exosome)对肿瘤细胞增殖的影响,初步探讨Src蛋白激酶在此过程中的作用.方法:采用离心超滤和蔗糖密度梯度超速离心的方法从胃癌SGC7901细胞的上清液中分离出胃癌细胞来源的exosome.透射电子显微镜下观察exosome形态.MTT法检测细胞增殖能力,Western blot检测蛋白的表达.结果:透射电子显微镜下观察胃癌SGC7901细胞来源的exosome具有特征性的盘状结构.由双层膜构成,他们的直径30-1 00 nm.Westernblot结果显示exosome表面富含CD9和TSG101分子.MTT结果显示exosome能以时间和剂量依赖性的方式促进SGC7901细胞的增殖,200 mg/L和400 mg/L的exosome处理SGC7901细胞72 h,细胞的增殖比率分别是对照组的138%(P<0.001)和144%(P<0.001),在此过程中伴随有p-Src表达的上调.结论:胃癌细胞来源的exosome能促进肿瘤细胞的增殖,其机制可能与激活Src蛋白激酶有关.
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血管腔内成形术治疗对糖尿病足患者创面肉芽组织VEGF/VEGF-R2/SRC表达的影响
目的 探讨血管腔内成形术治疗对糖尿病足患者创面肉芽组织VEGF/VEGF-R2/SRC表达的影响.方法 将137例糖尿病足患者随机分为手术组69例和对照组68例,对照组予以常规治疗,手术组在常规治疗基础上给予经皮血管腔内球囊扩张成形术联合支架置入术治疗.监测两组患者创面愈合率;患肢病变血管内膜中层厚度、收缩期血管峰值血流速度、静息状态下血管管径、充盈状态下血管管径,并计算弹性程度;免疫组化及Real-time PCR检测创面肉芽组织VEGF、VEGF-R2、SRC含量及基因表达变化.结果 治疗后第2、4周手术组的创面愈合率较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);两组患者患肢内膜中层厚度、收缩期血管峰值血流速度等指标均有明显改善,而手术组疗效更明显(P<0.05);手术组患者创面肉芽组织VEGF、VEGF-R2、SRC含量及基因表达明显升高(P<0.05).结论 经皮血管腔内球囊扩张成形术联合支架置入术治疗可改善糖尿病足患者创面愈合,提高患肢血运功能,而其对创面愈合的促进作用可能是源于创面肉芽组织VEGF/VEGF-R2/SRC轴的表达增加.
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老年人自发性乙状结肠穿孔的临床诊治
自发性结肠穿孔(spontaneous rupture of colon,SRC)是指结肠在无任何病变(癌、憩室、粘连)及外伤的情况下,突然发生穿孔,继而发生弥漫性腹膜炎.该病好发于老年人,起病凶猛,发展迅速,术前常被误诊.我院自1994-2009年收治17例,现报告如下.
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山茱萸环烯醚萜苷对冈田酸拟阿尔茨海默病细胞模型PP2A催化亚基C磷酸化及其调节酶Src的影响
微管相关蛋白tau的异常过度磷酸化是阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的重要发病机制之一,蛋白磷酸酯酶2A (protein phosphatases 2A,PP2A)能够促进tau蛋白的去磷酸化.山茱萸环烯醚萜苷(CIG)是本室从山茱萸中提取的主要有效部位.本实验的目的是研究CIG对PP2A活性及其相关调节酶的影响,应用PP2A抑制剂冈田酸(okadaic acid,OA)与人神经母细胞瘤细胞株(SK-N-SH细胞)孵育制备拟AD细胞模型;采用PP2A试剂盒测定细胞内PP2A的活性;应用Western blot方法检测tau蛋白磷酸化、PP2A催化亚基C(PP2Ac)和Src的表达.结果显示:OA与SK-N-SH细胞孵育6h后,显著增高tau蛋白的磷酸化水平,降低PP2A活性,增高PP2Ac和Src的磷酸化水平.CIG与细胞预孵育24 h能够明显抑制OA模型细胞tau蛋白在Ser 199/Ser 202位点和Ser396位点的过度磷酸化,恢复PP2A活性,抑制PP2Ac在Tyr307位点的过度磷酸化和Src在Tyr416位点的过度磷酸化.提示CIG通过抑制Src在Tyr 416位点的磷酸化降低其活性而抑制PP2Ac的磷酸化,从而恢复PP2A活性,促进tau蛋白的去磷酸化,终抑制tau蛋白异常过度磷酸化.结果说明CIG可能有利于治疗AD.
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Src家族激酶的研究进展
Src酪氨酸激酶家族与细胞内多条信号传导途径有关,其相关基因参与许多重要的生理过程,如生长、分化、黏附、转录等,特异结构的改变属Src蛋白原癌基因的特性.本文中,我们综述了可获资料中有关于Src基因产物(Src激酶家族蛋白)的调节机制、非受体酪氨酸激酶的作用及一些相关蛋白.
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人胰腺癌细胞株HPAC和BxPC-3中Src/MAPK信号转导途径中pp60c-Src和pERK1/2表达的差异
目的 研究人胰腺癌细胞株HPAC和BxPC-3中Src/MAPK信号转导系统,探寻不同类型胰腺癌信号转导通路的差异,为研究靶点药物提供基础.方法 将1640培养的HPAC和BxPC-3经细胞计数相同后各分为4组,分别为对照组、TGF-α组、TGF-α+PP2组和TGF-α+PD组.细胞贴壁并达70%融合后,换无血清培养48 h.无血清处理作对照,用无血清培养基溶解终浓度为7 nmol/L的TGF-α刺激TGF-α组2 h,TGF-α+PP2组先加入终浓度为10umol/L的PP2刺激细胞20 min后加入7 nmol/L的TGF-α刺激2 h,TGF-α+PD组先加入30umol/L的PD98059刺激细胞20 min后加入终浓度为7 nmol/L的TGF-α刺激2 h.用蛋白印迹方法分析HPAC和BxPC-3的4组细胞pp60c-Src和pERK1/2的表达.结果 HPAC细胞pp60c-Src的表达:对照组显著高于TGF-α组、TGF-α+PD组(P<0.05)和TGF-α+PP2组(P<0.01);HPAC细胞pERK1/2的表达:TGF-α组显著高于对照组和TGF-α+PD组(P<0.01),与TGF-α+PP2组相比较差异无统计学意义(P>0.05).BxPC-3细胞pp60c-Src的表达:TGF-α组显著高于对照组(P<0.05)和TGF-α+PP2组(P<0.01),与TGF-α+PD组相比较差异无统计学意义(P>0.05);BxPC-3细胞pERK1/2的表达:TGF-α组显著高于对照组、TGF-α+PD组和TGF-α+PP2组(P<0.01).结论 HPAC和BxPC-3细胞中Src/MAPK信号途径存在差异.推测在BxPC-3细胞株中c-Src是活化Ras/Raf/MAPK途径的关键信号分子,应进一步研究在HPAC细胞株中c-Sic的作用.
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大鼠面神经缺血损伤后PAR-1、Src及p-Src的表达变化及意义
目的 研究大鼠面神经缺血损伤后面神经元中PAR-1、Src及Src磷酸化(p-Src)的表达变化及意义.方法 利用外科手术方法阻断大鼠鼓室段岩动脉导致面神经缺血损伤后,取60只SD大鼠,通过腹腔注射水蛭素,运用免疫印迹、RT-PCR方法对假手术组(SH)、岩动脉阻断损伤组(PAI)、PAI+生理盐水组(NS)、PAI+给药组(水蛭素)大鼠检测面神经核团中PAR-1、Src及p-Src的表达变化.结果 WB及RT-PCR结果显示,SH组各时间点(12、24、72h)PAR-1、Src、p-Src表达水平差异无统计学意义(P＞0.05);PAI与PAI+NS组各时间点PAR-1、Src、p-Src表达水平逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.05);PAI与PAI+NS组对应时间点比较无统计学意义(P＞0.05),而PAI+水蛭素组PAR-1、Src、p-Src表达水平与PAI组相比均显著下降(P＜0.05).相关分析显示,面神经缺血损伤后PAR-1表达水平与Src磷酸化表达水平呈显著正相关(r=0.884,P＜0.01).结论 大鼠面神经缺血后,PAR-1表达水平不断增加,引起Src及其磷酸化表达水平增加,抑制PAR-1表达后,Src及其磷酸化表达水平下降.说明在面神经损伤和修复中PAR-1对Src及其磷酸化水平有一定的调控作用.
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非受体酪氨酸激酶Src在脑缺血损伤中研究进展
Src家族成员都是由原癌基因编码的位于细胞质的非受体型酪氨酸蛋白激酶，Src分子量为60kD，是第一个被发现具有酪氨酸蛋白激酶活性的癌蛋白，参与细胞内多条信号传递途径，其在癌症中广受大家探讨，但在脑缺血中的研究不多，本文主要综述了Src激酶在脑出血中的相关研究及进展。
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膀胱移行细胞癌新生血管形成基因分子调控机制
目的:探讨膀胱移行细胞癌新生血管形成基因分子调控的机制.方法:利用术中取得的良性和恶性膀胱上皮组织,应用免疫组织化学及分子杂交方法检测微血管计数(MC)、血管内皮组织生长因子(VEGF)、血小板反应素-1(TSP-1)、SrcmRNA蛋白表达量之间的关系.结果:膀胱癌组织Scr mRNA表达水平越高则MC越高,VEGF也越高,Src mRNA表达水平与TSP-1表达无关.结论:膀胱癌发展过程中Src原癌基因的激活有可能导致VEGF表达增高,从而促进肿瘤组织中新生血管网络形成,TSP-1的减少也起了不可忽视的作用.
关键词： 膀胱肿瘤 癌 移行性细胞新生血管化 病理性内皮 血管内皮生长因子癌基因 Src -
软骨细胞迁徙能力与自体细胞软骨移植中整合的相关性
背景：在关节外科中常用自体细胞软骨移植技术修复软骨缺损，整合不良是导致修复失败的原因之一。软骨细胞迁徙能力被证明和整合有相关性，某些通路如Src-磷酸化磷脂酶Cγ1-细胞外调节蛋白激酶1/2已经被证实和软骨细胞的迁徙能力相关，但是否和整合相关还是个未知数。目的：阐明软骨细胞迁徙通路在自体细胞软骨移植中和整合之间的相关性。方法：将来源于猪膝关节的软骨细胞分成4组，为Src、磷酸化磷脂酶Cγ1、细胞外调节蛋白激酶1/2抑制组以及正常组，通过博伊登小室来量化4组软骨细胞的迁徙能力。将处理后的软骨细胞与软骨环建立共培养模型培养28 d后，进行组织学、生物化学、生物力学、免疫蛋白印迹以及细胞示踪等分析来观察正常组与抑制组之间的差异。结果与结论：当用抑制剂处理软骨细胞后，软骨细胞的迁徙能力明显下降。在软骨细胞软骨环共培养28 d后，免疫印迹蛋白分析表明通路抑制剂一直存在于整个培养周期中。同时正常组迁徙到整合区域中的软骨细胞数量和距离以及分泌的胶原、基质和力学强度明显高于其他3个抑制组。说明可以通过Src-磷酸化磷脂酶Cγ1-细胞外调节蛋白激酶1/2通路调节软骨细胞的迁徙能力从而影响软骨的整合能力。
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达沙替尼提高胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体敏感性机制研究
目的：探讨胃癌细胞中肝细胞生长因子受体( MET)活化的原因以及达沙替尼提高胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体( TRAIL)的敏感性。方法免疫印记法检测BGC823和MGC803胃癌细胞中MET、p-MET、Src、p-Src蛋白的表达,MTT法检测达沙替尼和TRAIL处理后胃癌细胞的增殖,免疫荧光法检测Src和MET之间的相互作用。结果 TRAIL作用BGC823和MGC803胃癌细胞后,诱导了Src和MET的磷酸化。 Src激酶抑制剂达沙替尼预处理后,抑制了TRAIL诱导的Src和MET的磷酸化。 TRAIL能明显提高BGC823胃癌细胞中Src和MET的结合,而达沙替尼联合TRAIL处理BGC823胃癌细胞,Src和MET的结合减少。与TRAIL和达沙替尼单纯用药比较,达沙替尼联合TRAIL对BGC823和MGC803胃癌细胞的增殖抑制作用增强,差异有统计学意义(P<0．05)。结论达沙替尼通过阻止Src与MET的结合进而抑制了Src与MET的活化,提高了胃癌细胞对TRAIL的敏感性。
关键词： 胃癌 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 肝细胞生长因子受体 Src -
Akt和SRC在Exosomes促进同源肺癌细胞增殖中的作用
目的 探索肺癌细胞分泌的Exosomes对其分泌细胞及其同源肿瘤细胞增殖的影响,以及PI3K/Akt和SRC信号通路在其中的作用.方法 采用密度梯度离心法从肺癌A549细胞的上清液中提取Exosomes,透射电子显微镜法观察Exosomes的形态,Western blotting法检测Exosomes标志蛋白的表达,MTT法检测细胞的增殖能力.结果 A549细胞来源的Exosomes的直径在30~100 nm之间,由双层膜构成.Western blotting检测到Exosomes中CD9的表达,且A549细胞来源的Exosomes以剂量和时间依赖性的方式促进其自身及同源肿瘤细胞HCC827细胞的增殖,并伴随Akt和SRC的活化.结论 肺癌A549细胞来源的Exosomes以时间和剂量依赖性促进其自身及同源肿瘤细胞的增殖,其机制可能与Akt和SRC的活化有关.
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芹菜素通过抑制Src通路抑制黑色素瘤细胞增殖
目的 探讨芹菜素如何通过调节Src通路来抑制黑色素瘤细胞增殖.方法 采用不同浓度的芹菜素处理黑色素瘤细胞系A375,使用HEK293细胞系(正常细胞系)作为对照,通过MTT实验观察芹菜素是否可以特异性抑制肿瘤细胞的增殖.进一步通过Western blot以及实时PCR检测芹菜素对A375细胞中Src通路增殖相关蛋白CDK4和CDK6的影响.结果 MTr检测结果发现芹菜素对HEK293细胞的增殖抑制作用不明显,但是10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L与80μmol/L的芹菜素分别作用于A375细胞后对细胞增殖的抑制率分别为(22.12±7.20)％、(27.08±4.37)％、(37.39±2.72)％和(39.00±1.57)％,而且随着药物的浓度增加对A375细胞增殖的抑制率增加.Western blot和实时PCR检测发现,20 μmol/L、40 μmol/L与80 μmol/L的芹菜素均可以抑制A375细胞中Src通路下游CDK4和CDK6蛋白的表达.结论 芹菜素可以通过抑制Src通路显著抑制黑色素瘤细胞系A375的增殖,对正常细胞作用较小,可以作为潜在的化疗药物应用于黑色素瘤的化疗.
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Akt和SRC在Exosomes促进同源肺癌细胞迁移中的作用
目的 研究肺癌细胞来源的Exosomes对其分泌细胞及同源肿瘤细胞迁移的影响,初步探讨PI3K/Akt和SRC信号转导通路在此过程中的作用.方法 采用密度梯度离心法,从肺癌细胞A549的上清液中分离出肺癌细胞来源的Exosomes,利用透射电子显微镜观察Exosomes的形态,用Western blotting实验观察蛋白的表达.Transwell实验检测细胞的迁移能力.结果 透射电子显微镜下观察肺癌A549细胞来源的Exosomes,其具有特征性的盘状结构,由双层膜构成,直径30～100 nm.Westernblotting结果显示Exosomes表面富含CD9分子.A549细胞来源的Exosomes以剂量依赖性的方式促进A549和其同源肿瘤细胞HCC827细胞的迁移,并伴随Akt和SRC的活化.结论 肺癌细胞来源的Exosomes能促进其分泌细胞和同源肿瘤细胞的迁移,其机制可能与Akt和SRC的活化有关.
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酪氨酸蛋白激酶Src和Fyn对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经细胞损伤的影响
目的 观察胞内可溶性酪氨酸蛋白激酶Src、Fyn蛋白对脑缺血再灌注后海马CA,区神经细胞存活的影响.方法 采用Pulsinelli-Brierley 4动脉阻塞(4-VO)大鼠全脑缺血模型,缺血前连续3d脑室注射Src、Fyn反义寡核苷酸(antisense oligodeoxy-nucletides,AS ODNs)抑制Src、Fyn蛋白的表达后缺血,复灌5d,石蜡切片,焦油紫染色,图像分析测定单位面积内焦油紫染色细胞面积总和,与缺血组及错义寡核苷酸组(missense oligodeoxy-nucletides,MS ODNs)比较进行形态学分析.结果 Src、Fyn反义寡核苷酸对脑缺血再灌注后海马CA,神经细胞均有明显保护作用,以Src AS ODNs保护作用更明显,与缺血组比较约有50%细胞存活(P<0.05).结论 胞内可溶性酪氨酸蛋白激酶Src、Fyn蛋白的含量降低对脑缺血再灌注后海马神经细胞有明显保护作用,且以Src作用更为明显.
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Src在胃癌中的作用
Src是非受体型酪氨酸激酶家族成员之一,通过广泛的信号转导通路参与HP感染、胃癌细胞粘附、受体调节、增殖和血管形成等.近年来研究表明,Src在胃癌组织中异常表达或活性增高,与胃癌的发生发展密切相关.因此,研究Src和胃癌的关系有着重要意义.目前,针对Src的靶向抑制刺已经进入临床试验.大量研究发现,Src抑制剂包括Dasatinib、AZD0530、Sunitinib等对胃癌有抑制作用,这将为胃癌的治疗开辟新的治疗途径.
