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脂肪间充质干细胞源exosomes对乳腺癌细胞系MCF7中microRNA表达谱的影响
目的 观察脂肪间充质干细胞源exosomes的生物学特性,初步探讨其对乳腺癌细胞系MCF7中microRNAs表达谱的影响.方法 收集脂肪间充质干细胞培养上清液,以超滤和超离的方法提取exosomes;电镜下观察形态;用Western blot检测exosomes表面蛋白标志物的表达情况;用Dil染料标记exosomes后加入到乳腺癌细胞MCF7上清中,荧光显微镜下观察MCF7对exosomes的内吞作用;用microRNA芯片检测MCF7在exosomes处理24 h后microRNAs表达谱的变化以及exosomes中含有的microRNAs种类.结果 脂肪间充质干细胞分泌30 ～ 100 nm的exosomes,exosomes表达CD63和HSP70,可被乳腺癌细胞MCF7内吞;exosomes作用24 h,可引起MCF7中244个microRNAs表达发生变化(其中174个表达上调,70个表达下调,倍数＞2倍);对脂肪间充质干细胞exosomes中microRNAs的分析提示MCF7中microRNAs的上调大部分是内源性的,不是exosomes输入的.结论 脂肪间充质干细胞源exosomes可以诱导乳腺癌细胞MCF7micmRNA表达谱发生变化,揭示了间充质干细胞影响乳腺癌细胞发生和发展的一个新机制.
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乳腺癌细胞源Exosomes在促肿瘤血管生成中的作用及机制
目的 观察乳腺癌细胞源Exosomes对脐静脉内皮细胞(HUVECs)的生物学效应,初步探讨肿瘤细胞源Exosomes在恶性肿瘤血管病理新生中的作用.方法 收集乳腺癌MDA-MB-231细胞培养上清液,以超速及密度梯度离心提取Exosomes;MTT法检测细胞增殖;用流式细胞仪测定细胞周期;Transwell小室法检测迁移能力;基质胶成管实验观察成管结构的形成;PCR检测EGFR及VEGF mRNA表达;用ELISA及Western blot检测细胞EGFR及其下游ERK、Akt及VEGF/VEGFR2表达.结果 乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes以时间-剂量依赖性促进HUVECs细胞增殖(P＜0.05).并且,在作用24h后,S期细胞比例增加,G1/S期细胞比例下降(P＜0.05);同时,HUVEC迁移及体外管腔形成能力显著提高(P＜0.05).并且MDA-MB-231源Exosomes促进了HUVECs细胞EGFR蛋白的表达,使得磷酸化ERK与Akt蛋白的表达增加,同时促进了VEGF蛋白的分泌,并促进了VEGF/VEG-FR2蛋白表达(P＜0.05).结论 乳腺癌细胞源Exosomes促进HUVECs的增殖、迁移及体外成管能力,其机制可能与EGFR蛋白与其下游MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路的持续活化,以及VEGF/VEGFR2蛋白的表达有关.
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葡萄球菌肠毒素A真核表达质粒的构建及其在喉癌Hep-2细胞来源exosomes中的表达
目的 构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)与糖基化磷脂酰肌醇(GPI)的真核表达质粒pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI并转染人喉癌细胞株Hep-2细胞,检测Hep-2细胞分泌的exosomes中SEA的表达.方法 利用NOT I酶切原核生物质粒pGSI-SEA-GPI粘性末端,琼脂糖凝胶电泳分离、提纯目的基因SEA-GPI,利用T4连接酶连接真核表达质粒pmiR-RB-REPORT与SEA-GPI构建真核表达质粒pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI.脂质体法转染pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI至Hep-2细胞,荧光定量实时PCR(qRT-PCR)检测Hep-2细胞SEA-GPI mRNA的表达.提取Hep-2细胞分泌的exosomes,免疫印迹测定SEA在exosomes中的表达.结果 琼脂糖凝胶电泳显示成功构建真核表达质粒pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI.qRT-PCR检测显示,pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI转染的Hep-2细胞SEA-GPI mRNA显著表达.免疫印迹显示Hep-2细胞分泌的exosomes中存在SEA蛋白表达.结论 SEA可能通过GPI结构锚定于exosomes膜上,为制备含有SEA-GPI锚定蛋白的SEA-eoxsomes瘤苗提供了依据.
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热休克E.G7-OVA肿瘤细胞来源的exosomes的抗肿瘤作用
目的 本研究探讨热休克E.G7-OVA肿瘤细胞来源的exosomes的体内抗肿瘤效应.方法 通过分级离心和蔗糖密度梯度离心法分离和纯化E.G7-OVA肿瘤细胞来源的exosomes.热休克E.G7-OVA肿瘤细胞来源的exosomes和未热休克E.G7-OVA肿瘤细胞来源的exosomes分别命名为Exo/HS和Exo.通过电镜观察exosomes的形态,Western blot检测exosomes的蛋白成分.以Exo、Exo/HS、PBS免疫小鼠,用E.G7-OVA肿瘤细胞进行攻击,观察各组免疫保护效应;建立E.G7-OVA荷瘤小鼠模型,观察各组免疫治疗效应.通过LDH法检测各组免疫小鼠脾细胞CTL活性.结果 电镜下exosomes为双层膜的囊泡样结构,直径为40～100 nm.Western blot结果 表明:Exo和Exo/HS都含有HSC70、HSP70、HSP60、HSP90、MHC Ⅰ和OVA分子,而Exo/HS中HSP70和MHC Ⅰ分子的含量更高.免疫保护试验发现,Exo/HS组免疫小鼠90 d的无瘤率显著高于Exo组和PBS组(50%、20%、0%,P<0.01);对荷瘤小鼠的免疫治疗显示,Exo/HS对荷瘤小鼠的肿瘤抑制效应显著高于Exo组和PBS组(P<0.01).CTL结果 表明,Exo/HS免疫小鼠诱导的OVA抗原特异性的CTL活性显著高于Exo组和PBS组(P<0.01).结论 热休克E.G7-OVA肿瘤细胞来源的exosomes可作为有效的肿瘤疫苗.
关键词： 热休克 E.G7-OVA细胞 exosomes 抗肿瘤效应 -
蔗糖密度梯度离心联合超滤技术分离恶性胸腹水来源的exosomes
目的:对常规的蔗糖密度梯度离心方法进行改进,以获取高质量和高数量的exosomes.方法:采用常规的蔗糖密度梯度离心方法,再联合超滤技术分离恶性胸腹水来源的exosomes,经透射电镜观察其形态.结果:离心超滤方法只需超速离心1次,可显著减少超速离心次数,缩短分离操作时间,降低样品污染和损失,回收率高;所获exosomes在透射电镜下呈圆形或椭圆形膜性囊泡状结构,直径30～100 nm,分散均匀.结论:蔗糖密度梯度离心法联合超滤技术提纯恶性胸腹水来源exosomes的方法简便、高效.
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乳腺癌细胞来源Exosomes提取和鉴定
目的:从MDA-MB-231乳腺癌细胞培养上清中分离获得Exosomes,并进行形态学观察鉴定.方法:通过低速离心、高速离心、超滤及超高速离心等方法,从MDA-MB-231乳腺癌细胞培养上清中分离Exosomes,用透射电子显微镜观察其形态特征,Lorry方法蛋白定量,通过用免疫印记进行MHC分子鉴定.结果:MDA-MB-231乳腺癌细胞上清中分泌大量的Exosomes,电镜下观察呈椭圆形或圆形的双层膜的囊泡,直径为50～100 nm,具有完整的细胞膜.结论:用离心的方法可从MDA-MB-231乳腺癌细胞培养上清中提取Exosomes,有可能作为乳腺癌免疫治疗的潜在抗原.
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乳腺癌耐药细胞来源的Exosomes的分离鉴定及其在耐药传递中的作用
目的 探讨乳腺癌多西紫杉醇(DOC)耐药细胞(MCF-7/DOC)和阿霉素(ADM)耐药细胞(MCF-7/ADM)对Exosomes的分泌功能及其在耐药性传递中的作用.方法 采用超速分级离心的方法,从乳腺癌耐药细胞培养液上清中提取Exosomes,透射电镜下观察其形态特征,Western blot法检测乳腺癌耐药细胞和Exosomes中标志蛋白的表达情况.利用重组慢病毒载体构建稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的乳腺癌亲本敏感细胞系GFP-MCF-7/S,通过细胞间耐药实验和Exosomes传递耐药性实验观察耐药性传递现象.结果 与MCF-7/S细胞相同,MCF-7/DOC和MCF-7/ADM细胞也分泌Exosomes,均为圆形或椭圆形的膜性囊泡,直径为30 ～ 100 nm.Exosomes仅表达Exosomes标志性蛋白Tsg101,不表达内质网标志蛋白Calnexin.MCF-7/S、MCF-7/DOC或MCF-7/ADM细胞与GFP-MCF-7/S细胞共培养72 h后,荧光显微镜下观察各组细胞的荧光表达情况无明显差别.但在加入化疗药物DOC或ADM处理24 h后,MCF-7/DOC+ GFP-MCF-7/S组细胞的荧光细胞平均存活率为65.5％,明显高于MCF-7/S+ GFP-MCF-7/S组细胞(25.5％,P＜0.001);MCF-7/ADM+ GFP-MCF-7/S组细胞的荧光细胞平均存活率为53.6％,亦明显高于MCF-7/S+ GFP-MCF-7/S组细胞(25.4％,P＜0.001).MCF-7/S、MCF-7/DOC或MCF-7/ADM细胞来源的Exosomes与GFP-MCF-7/S细胞共培养48 h后,荧光显微镜下观察各组细胞的荧光表达情况无明显差别.但在加入化疗药物DOC或ADM处理24h后,MCF-7/DOC来源的Exosomes+ GFP-MCF-7/S组细胞的荧光细胞平均存活率为59.9％,明显高于MCF-7/S来源的Exosomes+ GFP-MCF-7/S组细胞(32.4％,P＜0.001);MCF-7/ADM来源的Exosomes+GFP-MCF-7/S组细胞的荧光细胞平均存活率为58.3％,亦明显高于MCF-7/S来源的Exosomes+ GFP-MCF-7/S组细胞(27.2％,P＜0.001).结论 乳腺癌细胞间存在着耐药性传递的现象,Exosomes可能是耐药信息传递的转运载体.
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白细胞介素2锚定的exosomes的制备及其对膀胱癌细胞的诱导杀伤效应
目的 制备白细胞介素2(IL-2)锚定的肿瘤细胞来源的exosomes疫苗,探讨其体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的抗肿瘤效应.方法 构建含糖基化磷脂酰肌醇(GPI)信号肽序列与人IL-2的融合基因的pEGFP-N1-IL2gpi质粒,建立稳定表达GPI-IL-2的T24细胞系(T24/GPI-IL-2).采用超速和蔗糖梯度密度离心法提取Ex/GPI-IL-2(即T24/GPI-IL-2细胞培养液中提取的exosomes),并对其进行形态学观察和分子标志检测.通过混合淋巴细胞实验和细胞毒实验,观察Ex/GPI-IL-2对T细胞的增殖和诱导杀伤效应.结果 成功构建重组质粒pEGFP-N1-IL2gpi,建立了稳定表达GPI-IL-2蛋白的细胞系.Ex/GPI-IL-2为直径约30～90nm的类圆碟形小囊泡,表达细胞间黏附分子1(ICAM-1)、热休克蛋白70(HSP70)、MAGE-1和GPI-IL-2等免疫相关蛋白.Ex/GPI-IL-2经过树突状细胞负载后,能更有效地诱导T细胞的增殖和细胞毒效应(P＜0.05).结论 通过基因转染技术,可以将IL-2锚定到肿瘤细胞来源的exosomes上,获得的Ex/GPI-IL-2能够诱导CTL对肿瘤细胞产生更强的诱导杀伤效应,为以exosomes为基础的肿瘤免疫治疗提供了新的途径.
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5-脱氧杂氮胞苷对肝癌细胞分泌exosomes及其免疫相关分子的影响
目的 探讨5-脱氧杂氮胞苷(5-Aza-Cda)对肝癌细胞分泌exosomes及其负载的肿瘤相关抗原和免疫相关分子含量的影响.方法 采用离心超滤联合蔗糖密度梯度离心方法,分离和纯化经5-Aza-CdR处理和未处理的HepG2和Hep3B肝癌细胞释放的exosomes,并对exosomes进行计数和蛋白定量测定.采用免疫电镜和Western blot技术,观察exosomes表达HSP70、HLA-Ⅰ和NY-ESO-1蛋白的变化;以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测5-Aza-CdR处理前后HepG2和Hep3B细胞野生型p53基因mRNA的表达.结果 经5-Aza-CdR处理后,HepG2和Hep3B细胞p53基因mRNA表达较未处理组均明显增加,exosomes数量和蛋白含量均较未处理组显著增加(P<0.05).经免疫电镜和Western blot鉴定,exosomes上均附载有HSP70、HLA-Ⅰ和NY-ESO-1蛋白,且两种细胞来源的exosomes经5-Aza-CdR处理后,HSP70、HLA-Ⅰ和NY-ESO-1蛋白含量均明显增加.结论 DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR可使肝癌细胞分泌更多数量的exosomes,增加exosomes中的免疫相关分子含量,其机制可能与p53基因上调和DNA去甲基化有关.
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乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes对内皮细胞增殖的影响及MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路的作用
目的 研究人乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的促增殖作用,并初步探讨MAPK/ERK和PI3K/Akt信号转导通路在此过程中的作用.方法 低温超速离心及密度梯度离心法提取乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes.采用MTT法分别检测50、100、200、400μg/ml Exosomes对HUVECs促增殖作用的影响,流式细胞仪测定200μg/ml Exosomes对HUVECs细胞周期的影响,Western blotting检测200μg/ml Exosomes诱导下HUVECs细胞内细胞外调节蛋白激酶(ERK)和蛋白激酶B (Akt)蛋白的表达水平.结果 乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes可促进HUVECs细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性.200μg/ml Exosomes作用HUVECs细胞24h后,S期细胞比例(27.8％±3.37％)较对照组(15.34％±0.71％)增加(P＜0.05),G1/S期细胞比例(2.22％±0.37％)与对照组(4.67％±0.47％)比较下降(P＜0.05).Western blotting结果显示,200μg/ml Exosomes作用HUVECs细胞24、48、72h后,磷酸化ERK表达(0.3378±0.0415,0.4967±0.0511,0.9205±0.0462)与磷酸化Akt蛋白表达(0.4091±0.0361,0.5484±0.0382,0.7496±0.0481)与对照组(磷酸化ERK 0.1836±0.0324,磷酸化Akt 0.2582±0.0215)相比有所增加(P＜0.05).结论 乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes能促进HUVECs的增殖,其机制可能与细胞周期改变,以及MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路的持续活化有关.
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一种新的细胞间的通讯方式:Exosomes
在多细胞生物中,细胞问的信息传递是由一系列信息分子参与完成的有序的级联反应,为维持机体的稳定状态,以适应各种生命活动是必不可少的.相对于已知的细胞通讯方式,目前一种起源于细胞内吞途径中的多泡体(Multivesicular body,MVB)的膜性小囊泡Exosomes在细胞信息传递中的作用日渐受到重视.Exosomes存在于血清、唾液、尿液等细胞外液中,并能将其携带的蛋白质、mRNAs及microRNAs递送至受体细胞而发挥生物学作用,揭示了Exosomes在细胞间的信息传递作用[1].
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5-脱氧杂氮胞苷修饰的肝癌细胞来源胞外体对淋巴细胞增殖功能的影响
目的 研究经5-脱氧杂氮胞苷(5-Aza-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理的肝癌细胞HepG2分泌的胞外体(exosomes)对免疫细胞增殖能力的影响.方法 采用离心超滤等方法将经5-Aza-CdR处理和未处理过的肝癌细胞系HepG2细胞分泌的exosomes分离和纯化.Ficoll淋巴细胞分层液分离外周血单个核细胞(PMBC);将实验分为exosomes实验组(加药组)、exosomes对照组(未加药组)、加药exosomes提取后上清组、未加药exosomes提取后上清组、空白对照组.H3-TdR掺入法检测PBMC细胞增殖状况.结果 exosomes对照组及其上清液对淋巴细胞增殖功能有明显的抑制作用,与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.05);而exosomes及其上清液实验组对淋巴细胞增殖功能的影响明显减弱,与exosomes和上清液对照组比较存在显著的统计学差异(P＜0.05),而与空白对照组无统计学上的差异(P＞0.05).结论 经5-Aza-CdR修饰的exosomes及其上清液显著改善HepG2来源的exosomes对淋巴增殖功能的抑制作用.
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Exosomes及其在肿瘤治疗中的作用
Exosomes是多种活细胞体内分泌的小囊泡体,表面含有大量的与其来源和功能密切相关的蛋白质和脂质成分.大量研究表明在体内外,exosomes能诱发和增强机体的免疫反应,表现出一定的抗肿瘤能力.近年来,exosomes的免疫调节作用在肿瘤治疗中的应用受到越来越多的人的关注.本文着重从exosomes的生物起源、生物学特性以及在肿瘤治疗中的营养方面的研究进展进行综述.
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非酒精性脂肪肝患者血清中exosomes的水平及意义
目的:探讨非酒精性脂肪肝患者血清中exosomes的水平及其对肝细胞脂代谢的影响.方法:通过Western-blotting,透射电镜、Nanosight鉴定exosomes;并通过BCA蛋白定量的方法检测19例NAFLD患者(NAFLD组),18例健康对照(健康对照组)血清中exosomes内蛋白含量;将10 μg的exosomes与HepG2细胞共培养,48 h后,收集细胞,GPO-PAP法检测其中总胆固醇(TC)和总甘油三酯(TG)的表达;通过Western-blotting检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的磷酸化水平.结果:exosomes高表达CD9、CD63、CD81,呈圆形或椭圆形,直径在40~210(110.00±21.36) nm.NAFLD组中的exosomes蛋白水平明显高于健康对照(P<0.05).exosomes与HepG2细胞共培养后,其TC、TG的表达水平与对照组相比明显上调,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:exosomes可影响AMPK通路的活性,在肝细胞的脂代谢过程中发挥了重要作用,促进了非酒精性脂肪肝的发展.
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树突细胞分泌的exosomes生物学特性及功能的初步研究
目的 建立树突细胞(DC)分泌的exosomes的制备方法,分析其生物学特性及其在抗肿瘤免疫中的功能.方法 从正常人外周血单个核细胞中诱导未成熟DC(imDC),并使其负载K562细胞的抗原,然后用脂多糖(LPS)诱导DC成熟(mDC),通过超速离心结合膜超滤的方法分别提取imDC和mDC分泌的exosomes.检测exosomes的粒径并通过电子显微镜分析exosomes的形态,Western blot法检测exosomes的表面分子.比较mDC和imDC分泌的exosomes引起的针对K562抗原特异性T细胞的增殖、CD69的上调、细胞因子IFN-γ的分泌及对肿瘤细胞的杀伤能力.结果 制备的exosomes为碟状小囊泡,平均直径为72.3 nm,表达CD80、CD86、HLA-DR、FasL、CD54和乳脂肪球-表皮生长因子-因子Ⅷ(MFG-E8).与imDC相比,mDC分泌的exosomes CD80表达较高而MFG-E8的表达较低,并且在体外mDC分泌的exosomes能够更显著地引起特异性T细胞的增殖和免疫应答:在exosomes适浓度下,T细胞增殖的吸光度值为0.50±0.01,激活T细胞的CD69上调,并且有(13.4±5.8)%T细胞扩增,(22.8±2.4)%的T细胞产生细胞因子IFN-γ,对肿瘤细胞的杀伤率为(21.3±8.6)%.结论 建立了简便、快速的exosomes分离纯化方法,所分离的exosomes具有引起抗肿瘤免疫应答的功能.
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急性冠状动脉综合征患者外周血树突状细胞来源Exosomes表型与冠状动脉病变严重程度的相关性分析
目的 分析急性冠状动脉综合征患者外周血树突状细胞来源Exosomes表型与冠状动脉病变严重程度的相关性.方法 选择2015年9月-2016年5月在第二军医大学附属长征医院心内科初次行冠状动脉造影(CAG)检查的患者122例作为研究对象,根据病史及检查结果分为对照组(NC组)34例,稳定性心绞痛组(SA组)30例,急性冠状动脉综合征组(ACS组)58例,收集患者一般情况、危险因素(吸烟史、高血压病史及糖尿病病史等情况),分析总胆固醇(TC)、三酰甘油 (TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)等指标,术中留取外周静脉全血,使用抽提试剂盒提取Exosomes,经流式细胞仪检测其表面抗原CD11c表达水平,根据冠状动脉造影检查结果计算Gensini积分,评价冠状动脉病变严重程度,比较不同组之间Exosomes表型CD11c水平的差异并与Gensini评分进行相关性分析.结果 ACS组CK、CK-MB、Gensini评分、外周血CD11c表达水平均显著高于UA组和NC组(F=3.671、4.263、2.971、3.162,P<0.05).外周血CD11c水平与Gensini积分CK、CK-MB呈正相关性(r=0.844、0.513、0.571,P<0.05或P<0.01).Logistic回归分析结果表明,CD11c为Gensini积分的独立危险因素(OR=2.221,P=0.000).结论 外周血树突状细胞来源Exosomes(即CD11c阳性表型)水平与急性冠状动脉综合征患者冠状动脉病变严重程度密切相关,提示树突状细胞来源的Exosomes可能参与了动脉粥样硬化病变的发展.
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Exosomes介导的细胞与细胞之间的信息传递
Exosomes是一种可由多种细胞分泌的纳米级膜性囊泡，在电镜下其外观是一种特征性的“蝶形”小体，直径为30~100 nm。Exosomes内含有细胞特异性的信号分子、蛋白质、mRNA和 miRNA。体外实验表明这些遗传物质可以在靶细胞中翻译表达，在细胞与细胞之间进行信息传递。Exosomes作为生物信息传递的载体或是生物标志物在心血管领域有非常广阔的应用前景。
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肝癌细胞来源的exosomes提取方法的改进及电镜观察
目的:分离提纯两种肝癌细胞HepG2细胞和Hep3B细胞来源的exosomes,并在透射电镜下观察exosomes的形态特征,为肿瘤免疫治疗寻找肿瘤新抗原提供实验材料.方法:采用离心超滤联合蔗糖密度梯度离心等方法分离出HepG2和Hep3B细胞释放exosomes,经透射电镜观察其超微结构.结果:HepG2和Hep3B细胞分泌释放的exosomes为直径50～100nm的膜性微囊结构,圆形或椭圆形,腔内为低电子密度成分.结论:离心超滤和蔗糖密度梯度离心法分离提纯exosomes方法是较为简便高效,对肿瘤细胞培养上清提纯exosomes而言具有可行性.
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Akt和SRC在Exosomes促进同源肺癌细胞增殖中的作用
目的 探索肺癌细胞分泌的Exosomes对其分泌细胞及其同源肿瘤细胞增殖的影响,以及PI3K/Akt和SRC信号通路在其中的作用.方法 采用密度梯度离心法从肺癌A549细胞的上清液中提取Exosomes,透射电子显微镜法观察Exosomes的形态,Western blotting法检测Exosomes标志蛋白的表达,MTT法检测细胞的增殖能力.结果 A549细胞来源的Exosomes的直径在30~100 nm之间,由双层膜构成.Western blotting检测到Exosomes中CD9的表达,且A549细胞来源的Exosomes以剂量和时间依赖性的方式促进其自身及同源肿瘤细胞HCC827细胞的增殖,并伴随Akt和SRC的活化.结论 肺癌A549细胞来源的Exosomes以时间和剂量依赖性促进其自身及同源肿瘤细胞的增殖,其机制可能与Akt和SRC的活化有关.
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Akt和SRC在Exosomes促进同源肺癌细胞迁移中的作用
目的 研究肺癌细胞来源的Exosomes对其分泌细胞及同源肿瘤细胞迁移的影响,初步探讨PI3K/Akt和SRC信号转导通路在此过程中的作用.方法 采用密度梯度离心法,从肺癌细胞A549的上清液中分离出肺癌细胞来源的Exosomes,利用透射电子显微镜观察Exosomes的形态,用Western blotting实验观察蛋白的表达.Transwell实验检测细胞的迁移能力.结果 透射电子显微镜下观察肺癌A549细胞来源的Exosomes,其具有特征性的盘状结构,由双层膜构成,直径30～100 nm.Westernblotting结果显示Exosomes表面富含CD9分子.A549细胞来源的Exosomes以剂量依赖性的方式促进A549和其同源肿瘤细胞HCC827细胞的迁移,并伴随Akt和SRC的活化.结论 肺癌细胞来源的Exosomes能促进其分泌细胞和同源肿瘤细胞的迁移,其机制可能与Akt和SRC的活化有关.
