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镉影响腺垂体-肾上腺皮质系统的整体实验
目的 观察CdCl2作用后腺垂体-肾上腺皮质系统的变化。方法 采用完全随机的方法将48只雄性SD大鼠分为4组，每组12只，分别为对照组、低剂量组(1.0 mg/kg)、中剂量组(2.0 mg/kg)、高剂量(4.0 mg/kg)。
关键词： 镉 腺垂体-肾上腺皮质系统 细胞凋亡 Caspase-9 -
亚慢性镉中毒鸡体内镉与金属硫蛋白含量的测定
镉是人类较早认识的环境毒物,1996年Carrollr 流行病学调查就已发现镉接触和心血管疾病之间有关联[1].镉的毒性取决于接触剂量的大小和摘触时间的长短[2].
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应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术分析镉中毒大鼠尿液蛋白质组学变化
多年来,镉引起的健康危害受到高度关注,特别是长期接触镉引起的毒性效应已成为当今研究的重点.表面增强激光解析电离.飞行时间质谱(Surface enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术是近年来新起的一种蛋白质组检测技术,其原理是蛋白质选择性地与生物芯片活力表面结合,然后用质谱仪快速扫描,从而获得蛋白质图谱.
关键词： 表面增强激光解析电离飞行时间质谱 镉 蛋白质组学 -
不同食物对镉致小鼠肝细胞DNA损伤的影响
目的探讨猕猴桃、茶花粉和枸杞对镉致小鼠肝细胞急性DNA损伤作用的影响.
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镉对雌激素与雌激素受体结合能力影响的实验研究
镉(Cd)是一种重要的环境和工业毒物,也是一种半减期很长的多器官、多系统毒物.镉对雌性哺乳动物的生殖系统具有明显的毒作用[1-3].研究发现,镉能诱导去除卵巢的大鼠子宫增生,推测镉诱导子宫增生是由于镉在大鼠体内模拟和发挥了雌激素样作用;镉也能刺激雌激素受体(ER)丰富的MCF-7细胞增殖约5.6倍[2],揭示了镉可能通过ER介导发挥内分泌干扰作用.而激素(配体)与受体结合的强度不仅取决于受体数量(Bmax),还取决于亲和力(Kd).那么镉是否对雌激素与子宫ER的结合能力产生影响,国内外报道甚少.而这些问题的解决在评价镉的环境内分泌作用中具有重要意义.我们应用体外多剂量放射配基竞争结合试验分析镉对3H-雌二醇(3H-E2)与ER结合能力的影响,进而分析和探讨其内分泌干扰作用.
关键词： 镉 环境内分泌干扰物 雌激素受体 放射配基竞争结合试验 -
镉的免疫毒性与促肾上腺皮质激素释放因子的关系
对CdCl2和CdCl2+α-hCRF(α螺旋促肾上腺皮质激素释放因子)分别染毒的SD大鼠,用[3H-TdR]掺入法测定大鼠脾T、B淋巴细胞增殖转化功能,垂体前叶细胞培养法测定中枢下丘脑和外周血浆中的CRF含量.结果表明单独染镉组有丝分裂原诱导的鼠脾T、B淋巴细胞增殖转化均受到明显抑制,具有剂量-效应关系(P<0.05);动物下丘脑CRF含量伴随着染镉剂量升高(P<0.05);外周血浆CRF含量各组间差异无显著性(P>0.05).当使用拮抗剂α-hCRF后,在含镉染毒各剂量组间鼠脾T、B细胞功能抑制差异无显著性(P>0.05);下丘脑CRF含量在各含镉联合染毒组间差异无显著性(P>0.05),但均较对照组高(P<0.05);外周血浆CRF水平有升高趋势.结果提示单独染镉可引起下丘脑CRF含量升高和免疫功能抑制,联合使用α-hCRF后则能部分改善镉对大鼠脾细胞的免疫功能抑制.镉对大鼠脾淋巴细胞免疫毒作用过程中存在中枢CRF介导的免疫调节机制.
关键词： 镉 免疫毒性 促肾上腺皮质激素释放因子 下丘脑-垂体-肾上腺轴 -
镉对大鼠胰岛素水平的影响
目的研究镉对机体胰岛素水平的影响.方法采用随机区组方法,96只SD大鼠给予不同剂量的镉(CdCl2 0、50、100和200mg/L),饮水染毒30天、60天、90天.测定不同染毒时间大鼠血胰岛素、血液、尿液中镉含量的改变以及肝、肾和胰脏中镉含量的改变.结果染毒组大鼠在染毒30天中、高剂量组和染毒60天的中剂量组血清胰岛素水平显著降低.各剂量组大鼠血、尿和胰脏中镉含量有显著增加.但胰脏中镉含量低于肾脏和肝脏.结论镉可以在胰脏组织蓄积,引起胰岛素水平降低.
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铅镉联合作用对大鼠肾小管上皮细胞脂质过氧化的影响
为观察铅镉联合作用对大鼠肾小管上皮细胞脂质过氧化的影响,对原代大鼠肾小管上皮细胞提取、纯化、鉴定、培养后,采用3×3析因设计方法进行染毒实验,A组:醋酸铅0.02mmol/L;B组:醋酸铅0.1 mmol/L;C组:氯化镉0.001 mmol/L;D组:氯化镉0.004 mmol/L;E组:醋酸铅0.02mmol/L+氯化镉0.001 mmol/L;F组:醋酸铅0.02mmol/L+氯化镉0.004 mmol/L;G组:醋酸铅0.1 mmol/L+氯化镉0.001 mmol/L;H组:醋酸铅0.1 mmol/L+氯化镉0.004 mmol/L.染毒时间为6小时.经超声波粉碎细胞后,测定细胞内谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的含量,以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性.与对照组比较,联合染毒组GSH、GSH-Px、SOD水平显著降低,MDA水平显著升高,析因分析表明,铅镉联合作用在对大鼠肾小管上皮细胞GSH、SOD、MDA改变方面有交互作用(P<0.05),即铅镉联合作用呈现增毒作用;在对GSH-Px改变方面未见交互作用.
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镉诱导LLC-PK1细胞凋亡与bcl-2、p53蛋白表达关系的研究
目的 探讨镉诱导LLC-PK1细胞凋亡及与bcl-2、p53(mtp53)蛋白表达的相互关系.方法采用透射电镜观察凋亡小体、流式细胞仪分析凋亡率、琼脂糖凝胶DNA 电泳方法确定镉对 LLC-PK1细胞诱导的凋亡作用,以及流式细胞仪分别测定bcl-2和p53基因表达产物bcl-2蛋白、mtp53蛋白.结果透射电镜观察发现40μmol/L CdCl2作用LLC-PK1细胞12h后,出现典型的凋亡小体;流式细胞仪分析其凋亡率为32.61%,并高于对照组(1.08%)(P<0.01);琼脂糖凝胶DNA电泳呈明显梯形条带.0、10、20、40μmol/L CdCl2作用LLC-PK1细胞4h、8h,8h后,bcl-2基因表达逐渐下降,并呈良好的剂量-反应关系(r=-0.910, P<0.05);作用4h、8h 后mtp53蛋白表达均明显下降,并有剂量-反应关系(r值分别为-0.716、-0.972, P值均<0.05).结论镉诱导LLC-PK1细胞凋亡可能与镉抑制bcl-2、mtp53蛋白表达有关.
关键词： 镉 LLC-PK1细胞凋亡 基因表达 bcl-2和mtp53蛋白 肾 -
镉影响大鼠脾细胞β-受体及镉的免疫毒性
本实验应用了单独染镉和β-肾上腺素能受体阻断剂与镉联合作用两种动物模型,探讨了不同剂量镉对大鼠脾细胞β-肾上腺素能受体密度的影响,同时检测了T淋巴细胞亚群(CD+4,CD+8,CD+4/CD+8)和T淋巴细胞的增殖功能.结果表明镉可刺激并使脾细胞膜上的β-受体密度增加,镉对T细胞的免疫毒性表现为抑制T淋巴细胞的增殖功能,改变T细胞亚群的分型;而在β-受体被阻断后,镉的这种免疫毒性作用减轻:T淋巴细胞增殖功能不再受影响,T细胞亚群所受的影响也减少.因此,β-肾上腺素能受体机制可能是镉的细胞免疫毒性机制的一个重要部分.
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镉诱导人外周血淋巴细胞金属硫蛋白-1基因亚型的表达
目的研究金属硫蛋白-1(MT-1)基因在人外周血淋巴细胞(HPBLs)中的基础表达和镉诱导表达水平.方法应用RT-PCR方法检测HPBLs中7种有功能的MT-1基因亚型的mRNA基础表达水平和不同时间、不同浓度镉诱导的表达水平.结果HPBLs MT-1各亚型中,mRNAs的基础转录水平从高到低依次为MT-1X、MT-1A、MT-1H、MT-1F、MT-1E、MT-1G,而MT-1B没有表达,其中男性MT-1E的基础表达明显高于女性(P＜0.05).在未引起细胞损伤时,80μmol/L CdCl2诱导12小时可使MT-1A,MT-1E,MT-1X mRNA的转录水平开始显著增加(P＜0.05),40μmol/L CdCl2诱导4小时出现MT-1F mRNA,20μmol/L CdCl2诱导4小时出现MT-1G mRNA,80μmol/L CdCl2诱导4小时出现MT-1H mRNA的转录水平开始显著增加(P＜0.05),MT-1BmRNA表达无明显变化.结论镉可诱导人外周血淋巴细胞MT-1F、MT-1G、MT-1H、MY-1X mRNA表达增加,并表现出剂量-时间-效应关系,可作为潜在的镉接触生物标志物.
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氯化镉对人胚肺成纤维细胞的恶性转化作用
为研究氯化镉致人胚肺成纤维细胞的恶性转化作用,用染色体分析、3H-TdR掺入实验和流式细胞术检测了转化细胞染色体畸变、各细胞周期时相细胞的比例和DNA合成情况.结果显示,氯化镉在0.004μmol/L、0.02μmol/L、0.04 μmol/L 3个实验浓度都可使人胚肺成纤维细胞生长排列紊乱,失去方向性和密度调节作用,重叠生长,形成明显的转化灶;染色体发生畸变:数目增多或减少,结构出现断片、双着丝粒体;S期细胞比例增大;细胞DNA合成异常旺盛,其中实验组DNA合成量约为阴性对照组的2.4～3.8倍.
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全血化学发光法测定镉对鼠中性粒细胞吞噬功能的影响
采用全血化学发光分析法和硫代苯巴比妥酸(TBA)检测方法研究氯化镉对中性粒细胞(PMN)的免疫毒性和对肝脂质过氧化作用的影响.结果表明,在体外,0.1～10mmol/L的氯化镉可增加大鼠全血化学发光强度,而1000 mmol/L的氯化镉则抑制全血化学发光.小鼠尾静脉注射氯化镉2h之后,1和100μg/kg剂量组能显著诱导全血化学发光,而500和1000μg/kg剂量组则对全血化学发光有抑制作用;1μg/kg剂量的低浓度镉诱导肝脂质过氧化作用.结果提示,低浓度的镉对PMN具有免疫促进作用,高浓度的镉则对PMN具有细胞毒性.可能低浓度的镉能促进吞噬细胞的吞噬能力,吞噬作用使机体产生过量的活性氧,从而加剧了活性氧对组织细胞的脂质过氧化作用,终造成机体的氧化损伤.
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反义TIF3逆转镉转化BALB/c-3T3细胞的致癌性
为探讨反义TIF3能否逆转镉转化细胞的致癌性,用磷酸钙介导转染法和G418细胞筛选技术,建立CdCl2转化BALB/c-3T3细胞反义TIF3稳定表达系统,再用软琼脂检测和裸鼠致瘤试验对这些转基因细胞的致癌性逆转情况进行鉴定.结果显示CdCl2转化BALB/c-3T3细胞中反义TIF3表达可逆转这些细胞的转化表型,与非转染细胞和载体转染对照细胞比较,转染反义TIF3的镉转化细胞在软琼脂上所形成的锚非依赖性生长集落减少25%～70%.转染反义TIF3基因的镉转化细胞可延迟裸鼠出现肿瘤的时间,而且这些肿瘤的大小显著变小,肿瘤重量平均下降50.8%～55.1%.提示反义TIF3mRNA表达可逆转镉转化细胞的致癌性;应用反义TIF3阻断TIF3癌基因表达对镉诱发的肿瘤可能有治疗价值.
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镉对大鼠肝细胞凋亡的影响
采用体内染毒方式,用末端标记法(TUNEL)、DNA梯状电泳、流式细胞术研究了CdCl2对大鼠肝细胞凋亡作用的影响.结果表明,5、10和20μmol/kg的CdCl2均可引起大鼠肝细胞TUNEL阳性细胞并产生大鼠肝细胞DNA电泳的梯状条带.用流式细胞术检测细胞凋亡率,该三种浓度的CdCl2引起的大鼠肝细胞凋亡率均较对照组显著增高, P<0.01.结果提示CdCl2对大鼠肝细胞凋亡具有一定的诱导作用.
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镉诱导大鼠腺垂体细胞凋亡及与p38 MAPK＆ERK1/2途径介导机制关系的初步研究
目的了解CdCl2对腺垂体的损伤以及细胞凋亡发生与p38 MAPK、ERK1/2表达的关系,为了解镉致腺垂体毒作用的分子机制提供科学依据.方法采用健康雄性SD大鼠进行整体试验(n=12),分别每天经口灌胃给予0、1.0、2.0、4.0mg/kg bw CdCl2,6周后取腺垂体进行指标检测;离体试验采用酶解分离大鼠之原代腺垂体细胞,分别以0、1.56、3.12、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00μmol/L CdCl2处理,收获细胞进行检测;特异性阻断剂阻断凋亡效应的试验采用2.65μmol/L p38 MAPK的特异阻断剂SB203580或10μmol/L ERK1/2激酶的特异阻断剂U0126处理细胞,然后以3.12μmol/L或100.00μmol/L的CdCl2处理细胞后进行相应的检测.检测指标包括:TUNEL法和流式细胞术等检测凋亡.结果整体实验和离体实验结果均显示CdCl2以剂量依赖方式诱导腺垂体细胞发生凋亡(P<0.05);特异性阻断剂效应的研究结果显示2.65μmol/L SB203580和10μmol/L U0126对TUNEL阳性细胞的相对灰度和凋亡细胞率均有一定的影响.结论在一定的剂量条件下,CdCl2影响腺垂体激素分泌水平,并导致发腺垂体细胞凋亡,MAPKs家族成员p38 MAPK和ERK1/2激酶通路在凋亡发生过程中可能发挥一定的作用.
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金属硫蛋白在镉致睾丸氧化损伤中的保护作用
应用不同剂量的氯化镉(0.2、0.4和0.8mg/kg BW)对成年雄性SD大鼠进行腹腔染毒,连续染毒7天后将动物处死,分离睾丸,测定其中金属硫蛋白(MT)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等抗氧化酶活性和脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量.结果显示,低剂量组MT含量虽有所升高,但与对照组比较差异无显著性,中剂量组MT含量显著升高,高剂量组MT含量反而显著降低.睾丸SOD、GSH-Px等抗氧化酶的活性和MDA含量在低、中剂量组变化不明显,而在高剂量组,SOD和GSH-Px的活性显著降低,MDA含量显著升高.结果揭示,MT对镉所致的睾丸氧化损伤起重要的保护作用,镉的雄性生殖毒性可能与MT及其他抗氧化物质的抗氧化失衡有关.
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镉对大鼠肝细胞原癌基因c-fos、c-jun表达的影响
应用Northern斑点杂交方法研究氯化镉对大鼠肝细胞原癌基因c-fos、c-jun表达的影响.结果表明,5、10和20μmol/kg氯化镉腹腔一次注射后,大鼠肝细胞c-fos、c-jun mRNA较对照组明显增多.结果提示,氯化镉可以引起大鼠在体肝细胞原癌基因c-fos、c-jun表达增强.
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几丁聚糖对氯化镉诱导HepG2细胞产生ROS水平的影响
目的 研究不同浓度几丁聚糖对氯化镉诱导HepG2细胞产生活性氧(ROS)的清除作用.方法 实验分设6组:正常对照组(仅含10%新生牛血清的培养液,无氯化镉和几丁聚糖)、20μmol/L氯化镉组、0.50mg/m1几丁聚糖组、20μmol/L氯化镉+几丁聚糖三个联合作用组(浓度分别为0.02、0.10和0.50mg/ml).HepG2细胞处理时间为4h.以氯化镉诱导HepG2细胞产生ROS,运用DCFH-DA作为荧光探针,采用流式细胞检测技术检测几丁聚糖与氯化镉联合作用下HepG2细胞内ROS水平.结果 20μmol/L氯化镉可使HepG2细胞内ROS水平显著增加(P＜0.01);0.50mg/ml几丁聚糖处理HepG2细胞后,细胞内ROS水平较正常对照组略有降低,但并无显著性差异;与氯化镉染毒组相比,几丁聚糖和氯化镉联合作用组细胞内ROS水平随几丁聚糖浓度的增加,其DCF密度值由275.593逐渐降低到174.597,并且在中、高剂量几丁聚糖(0.1mg/ml和0.5mg/m1)和氯化镉联合作用组差异有极显著性(P＜0.01).结论 几丁聚糖对HepG2细胞内由氯化镉诱导而产生的ROS水平具有明确的调节作用.
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脉络丛对镉的屏护作用及其病理形态学改变
为研究脉络丛对镉的屏护作用及其病理形态学改变,给兔耳缘静脉注射CdCl2 1.0,2.0 和4.0 mg/kg,4、24h处死兔,采集组织样品,分别测定血液、脑脊液、侧脑室脉络丛、大脑皮质、肝脏和肾皮质镉含量;脉络丛样品冲洗、固定后,制成组织切片,用光镜、电镜观察脉络丛的病理形态学改变.结果显示脉络丛镉明显高于血液、脑脊液、大脑皮质,高剂量组脑脊液镉含量明显高于其它组.光镜可见脉络丛上皮细胞变性、坏死,电镜可见脉络丛上皮鲁米那平面破损,纤毛缺失,核变性,胞质空泡,溶酶体增加,粗面内质网肿胀,细胞连接间隙变宽.提示脉络丛能浓缩和屏护镉,阻止镉从血液进入脑组织.当染镉达到一定剂量时,这种屏护作用减弱甚至消失,侧脑室脉络丛也发生一定的病理形态学改变.
