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海水淡化阻垢剂遗传毒性试验观察
目的 用体外彗星试验和流式细胞术体外微核试验检测不同海水淡化阻垢剂作用于CHO细胞的遗传毒性效应.方法 改性聚羧酸阻垢剂、聚丙烯酸阻垢剂(DM101)和马来酸阻垢剂3种阻垢剂的IC50值分别为2.781、2.401和1.347 mg/mL,将不同阻垢剂的IC50值作为试验的高剂量.高、中、低不同剂量的3种阻垢剂分别处理CHO-K1细胞3h,以浓度为1 μg/mL的K2Cr2O7为阳性对照组,以尾部DNA百分比(tail DNA％)和尾距(tail moment)作为DNA损伤的指标;3种阻垢剂流式细胞术体外微核试验分为高、中、低三个剂量组,试验分为+S9短时处理组(0.1 μg/mL环磷酰胺和1μg/mL秋水仙碱作为阳性对照)和-S9持续处理组(0.1 μg/mL丝裂霉素C和0.1μg/mL秋水仙碱作为阳性对照),采用EMA和SYTOX green双色标记,流式细胞仪分析微核率.结果 与阴性对照组相比,3种阻垢剂的尾部DNA百分比和尾距在高、中剂量组的浓度上均出现统计学显著性差异.与阴性对照组相比,在-S9的条件下,马来酸聚合物阻垢剂高剂量组试验结果为阳性;在+S9的条件下,马来酸聚合物阻垢剂在高、中和低剂量组实验结果为阳性,聚丙烯酸阻垢剂(DM101)和马来酸阻垢剂在高剂量组试验结果为阳性.结论 在本试验条件下,3种阻垢剂具有遗传毒性.
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抗血小板药物对TIA患者CD62p和PAC-1表达率的作用
目的 观察短暂性脑缺血发作(TIA)患者血小板活化状态的改变.探讨TIA患者应用氯吡格雷、阿司匹林和缓释双嘧达莫3种抗血小板药物治疗对血小板活化抑制作用的机制,比较3种药物联用和单用的不同效果.方法 选择年龄在40岁以上初入院的TIA患者60例作为试验组,随机分为3组,每组20例.第一组患者分别给予缓释双嘧达莫200 mg和阿司匹林25 mg,2/d;第二组患者分别给予氯吡格雷75 mg和阿司匹林80 mg,1/d;第三组患者给予氯吡格雷75 mg,1/d,同时随机抽取40岁以上健康体检者30名作为对照组.采用流式细胞技术分别检测对照组和3个试验组患者入院治疗前、治疗7d和治疗15 d后的血小板活化标志物p-选择素(CD62p)和血小板膜暴露纤维蛋白原受体(PAC-1)的表达率,并比较3组药物对血小板活化的抑制作用.结果 与健康对照组相比,TIA患者各试验组初入院时血小板活化标志物CD62p和PAC-1表达均升高,但各试验组间没有明显差别.3组抗血小板药物对TIA患者血小板活化标志物CD62p和PAC-1表达的抑制作用明显不同.第一组在治疗7d后对血小板PAC-1没有明显抑制作用,只对血小板CD62p有明显的抑制作用,而治疗15d后能明显抑制血小板CD62p和PAC-1的表达;第二组在治疗7d和15d后抑制血小板PAC-1表达的作用显著,但对CD62p表达的抑制作用较小;第三组单独给药比第二组联合用药的抑制作用明显减弱.结论 TIA患者血小板活化状态明显高于健康人.在TIA患者中,3组药物对血小板活化的抑制方式不同.缓释双嘧达莫+阿司匹林是治疗TIA、抑制血小板CD62p和PAC-1表达的有效药物,但其作用效果呈明显的时间依赖性.
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老年2型糖尿病患者与健康老年人血小板CD148和P-选择素及糖蛋白Ⅱb/Ⅲa活化差异研究
目的 探讨2型糖尿病患者血小板中CD148、P-选择素(CD62P)及糖蛋白Ⅱb/Ⅲa复合物(PAC-1)活化检测及临床意义.方法 采用流式细胞术以单克隆抗体分子作为探针,检测健康老年人(对照组40例)和糖尿病患者(实验组55例)血小板膜上CD148的阳性百分率(CD148％)、CD148的几何荧光强度(CD148 MFI)、CD62P的阳性百分率(CD62P％)、CD62P的几何荧光强度(CD62P MFI)、PAC-1及PAC-1的几何荧光强度(PAC-1MF1)的表达量.结果 糖尿病患者和健康老年人的血小板膜CD148、CD148MFI表达量比较,差异有统计学意义(6.18 vs 1.47,P＜0.01;48.12 vs 24.12,P＜0.01)；CD62P、CD62P MFI表达量相比较,差异有统计学意义(5.74 vs 0.69,P＜0.01；21.23 vs 13.68,P＜0.05)；PAC-1及PAC-1 MFI的表达量(20.21vs 1.44;34.26 vs 18.41)比较,差异有统计学意义(P＜0.01),与当日血糖有相关关系.结论 CD 148、CD62P及PAC-1是血小板活化的敏感指标,2型糖尿病患者有血小板活化现象,2型糖尿病患者除了充分降糖治疗,还需抗血小板治疗提供了理论依据.
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老年颈动脉粥样硬化与早期血小板活化标志物表达的关系
目的 探讨特异的早期血小板活化表面标志物CD41a-FITC和PAC-1-FITC与老年颈动脉粥样硬化(CAA)的关系.方法 采用流式细胞仪检测30例CAA(CAA组)患者,平均年龄(77.5±8.5)岁,外周血早期血小板活化因子PAC-1-FITC和CD4 1a-FITC阳性表达率；采用免疫透射比浊法测定血中高敏C-反应蛋白(hs-CRP)；生化自动分析仪测定血低密度脂蛋白(LDL)的含量；并与20例健康查体老年人(对照组),平均年龄(73.5±7.5)岁比较.以两组的CD41 a-FITC、PAC-1-FITC与颈动脉血流各项指标进行相关分析.并将CRP和LDL与早期血小板活化标志物CD41a-FITC及PAC-1-FITC进行相关性研究.结果 CAA组PAC-1-FITC、C D41 a-FITC和CRP、LDL的阳性表达(分别为96.6± 11.8、29.2±13.8、4.0±1.5、3.3±2.3)高于对照组[分别为84.5±11.7、21.3±12.7、3.0±0.5、3.0±0.8(P＜0.05)]；CAA组血小板活化标志物PAC-1-FITC和CD41a-FITC阳性表达率(35.3％,98.8％)高于对照组[分别为15.8％、97.6％(P＜0.05)].在PAC-1-FITC和CD41a-FITC与颈动脉血流相关研究中发现:CAA组左颈内动脉收缩期血流(Vd)与早期血小板活化标志物呈负相关性(P＜0.05),CD41a-FITC与Vd、Vm、PI呈负相关(P＞0.05).结论 老年CAA患者早期血小板活化标志物PAC-1-FITC和CD41a-FITC检测可谬估血小板早期活化状态,标志物的增高可能与动脉粥样硬化脑血管病有关.
关键词： 颈动脉粥样硬化 流式细胞术 早期血小板活化标志物 -
140例手足口病患儿T淋巴细胞亚群特点分析
目的:研究140例手足口病(HFMD)患儿T淋巴细胞及其亚群的特点,探讨其在病情判断和疗效评估中的价值.方法 收集山东大学齐鲁儿童医院手足口病房140例HFMD患儿和健康查体儿童166例,流式细胞仪检测不同年龄组T 淋巴细胞亚群百分率.结果 HFMD患儿CD3+T细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞的百分率较健康儿童明显降低(P<0.01),CD8+T细胞的数量没有显著地下降(P>0.05).HFMD并发脑炎组T淋巴细胞均较非脑炎患儿明显减低(P<0.05).结论 HFMD患儿T淋巴细胞较健康儿童明显受损;并发脑炎患儿T细胞亚群均较非脑炎者明显减低.
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去唾液酸糖蛋白受体在乙型肝炎病毒感染者精子中表达的初步研究
目的 检测乙型肝炎病毒(HBV)感染者精子中去唾液酸糖蛋白受体(ASGP-R)的表达,并与HBV阴性男性精子比较,探讨ASGP-R是否参与介导HBV侵入人精子.方法 用ASGP-R单抗,通过免疫印迹(Western blot)和流式细胞术检测ASGP-R在乙肝表面抗原(+)/乙肝e抗原(+)[HBsAg(+)/HBeAg(+)]者(双阳性组,n=16)、HBsAg(+)/HBeAg(一)者(单阳性组,n=28)和HBsAg(-)者(阴性组,n=35)精子中表达差异.结果 ASGP-R于人精子的胞质中高表达,于胞膜低表达；胞质中ASGP-R水平在阴性组、单阳性组及双阳性组中逐渐升高,双阳性组和单阳性组的胞膜上ASGP-R的阳性率均高于阴性组(P均＜0.05).结论 人精子胞膜和胞质中均存在ASGP-R; HBV可能通过人精子表面的ASGP-R进入精子,且HBV可能通过某种机制使ASGP-R的表达量增加.
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精子优选后冷冻保存对活性氧生成的影响
目的 观察优选技术在精液冷冻保存中对常规精液参数、线粒体膜电位(△Ψm)和活性氧(ROS)的影响.方法 分别用计算机辅助精子分析仪(CASA)、流式细胞仪(FCM)检测优选或未优选的精子在冷冻前后常规精液参数、△Ψm和精子细胞内ROS的变化. 结果 各冻融组精子活率、a级精子、(a+b)级精子、正常形态率均比冷冻前有不同程度降低,有显著性差异;而优选冻融组和优选加精浆冻融组间常规精液参数无显著性差异(P＞0.05),但都明显高于原始冻融组(P＜0.01).原始精液冷冻后比冷冻前△Ψm下降(P＜0.05),ROS显著上升(P＜0.01).优选冻融组和优选加精浆冻融组与冷冻前相比,以及组间无显著性差异(P＞0.05);但与原始冻融组分别比较,△Ψm均显著提高(P＜0.05),ROS均显著减少(P＜0.01).各冻融组△Ψm和 ROS都有明显相关性,相关系数(r)依次为-0.528、-0.537、-0.606(P＜0.001). 结论 精液优选后冷冻可以在保持良好的△Ψm同时,减少ROS生成,因此建议临床可应用该技术冷冻保存精子.
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三色荧光标记鉴定早孕蜕膜及外周免疫细胞组成
目的 建立早孕妇女蜕膜免疫细胞高纯度的分离方法,流式细胞术多色荧光直接标记分析早孕蜕膜及外周血主要免疫细胞的构成比.方法 经胶原酶消化、Percoll密度梯度离心、短期培养结合的方法分离纯化蜕膜免疫细胞,采用三色、双色及单色荧光直接标记流式细胞术分别检测早孕妇女和对照组中蜕膜、外周血CD3-CD56+CD16-和CD3-CD56+CD16+NK细胞、NKT和γδT细胞、T细胞和单核细胞的阳性率.结果 与外周血相比,蜕膜免疫细胞以CD3-CD56+CD16-数量多,约占免疫细胞总数的(67.02±18.33)%,T细胞占(11.05±7.22)%,单核细胞占(5.28±0.29)%,NKT细胞占(2.35±1.62)%;早孕妇女外周血T淋巴细胞较正常生育期妇女明显下降(P＜0.05),而早孕妇女外周血中NK细胞、NKT细胞、单核细胞数量与对照组相比无显著差别.结论 早孕妇女蜕膜中具有与外周血不同的免疫细胞组成,应用多色荧光标记的流式细胞术能够简单、直接地鉴定各免疫细胞亚群.
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金银花菌子实体对小鼠免疫功能调节作用的实验研究
目的 探讨金银花菌子实体对ICR正常小鼠的免疫调节作用.方法 240只ICR小鼠随机分为4组,每组60只,设置溶剂对照组,低、中和高剂量组(1.25、2.50和7.50 ml/kg·bw).灌胃金银花菌子实体提取液30 d后,通过测定小鼠T淋巴细胞转化能力、迟发型变态反应、抗体生成细胞、血清溶血素、巨噬细胞吞噬活性及NK细胞活性来评价金银花菌子实体对免疫功能的影响.结果 金银花菌子实体各剂量组能明显增强小鼠迟发型变态反应,中高剂量组抗体生成细胞数和巨噬细胞吞噬活性,高剂量组提高T淋巴细胞转化能力和NK细胞活性.结论 金银花菌子实体能增强ICR小鼠的免疫功能.
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硫酸镍诱导大鼠睾丸细胞凋亡的研究
镍(Ni)既是人体的必需微量元素,参与人体的许多正常代谢过程,又是常见的环境污染物之一.属于一种多器官、多系统毒物,并且对生殖系统具有一定的损伤,但其详细机制不清[1].本研究拟通过雄性动物整体染毒硫酸镍(NiSO4),探讨Ni对男性生殖系统睾丸的损伤及其机制,为Ni毒性的防治提供实验室理论依据.
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辐射诱导大鼠肺细胞凋亡及相关基因表达
细胞凋亡(Apoptosis)是指由基因控制的细胞程序性死亡.辐射作为一种确定的诱发凋亡的方法[1],被长期应用于肿瘤的治疗,而有关辐射诱导离体正常细胞及肿瘤细胞凋亡的研究已成为热点.另一方面,对动物整体辐射后肺细胞凋亡的研究很少报道.我们采用流式细胞术,检测γ-射线整体照射后大鼠肺细胞的DNA含量及凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达,以探讨诱发凋亡的剂量和时间效应关系.
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药物致敏性与小鼠局部淋巴结细胞表型关系的探讨
目的 分析5种阳性致敏药物对小鼠耳后淋巴结7种免疫细胞表面分子表达和6个细胞亚型百分比的变化,探讨药物致敏中淋巴结特意免疫细胞表型的变化.方法 选用24只健康小鼠,每组4只,在本实验室驯化1周后分别使用致敏药物耳后涂抹刺激后,提取耳后淋巴结细胞,使用流式细胞仪检测CD45 +CD3+％,CD3+ CD4+％,CD4+CD154+％,CD4+CD28+％,CD45+ CD19+％和CD45+ CD69+％细胞亚群的百分比情况.结果 丁子香酚和2-己基肉桂醛致敏后7种表面分子表达与空白对照组相应表型表达出现明显差异;戊二醛、2,4-二硝基氯苯和巯基苯并噻唑致敏后出现部分表达的差异性变化.结论 可以初步判断CD4和CD28的表达可能参与了致敏效应,可能成为初筛药物致敏效应的细胞表型.
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丙烯酰胺对小鼠睾丸生精细胞周期的影响
目的 研究丙烯酰胺(Acrylamide,AA)对小鼠睾丸生殖细胞周期的影响.方法 将7～8周龄40只清洁级健康雄性昆明种小鼠随机分为正常对照组(蒸馏水),不同剂量的AA(10、20和40 mg/kg)组.对小鼠连续灌胃5周,每周6d.于首次染毒后第36天处死小鼠,采用流式细胞仪检测小鼠生精细胞的周期.结果 FCM结果显示,与对照组相比,各剂量染毒组的1C细胞明显减少,2C细胞的比例显著提高(P＜0.01),且10和20 mg/kg剂量组1C和2C细胞的比例差异无统计学意义(P＞0.05).10和20 mg/kg剂量组4C细胞的比例较对照组增加,40 mg/kg组4C细胞的比例低于前两组,但仍高于对照组,且均有统计学意义(P＜0.01).各染毒组1C∶4C,及1C∶2C均明显低于对照组(P＜0.01),但各染毒组两两比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).4C∶2C仅在40 mg/kg剂量组与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 AA对小鼠生精细胞有一定的抑制作用,降低了精原细胞转化为精子的效能,使生精过程发生障碍.其致细胞凋亡作用的靶细胞可能是精原细胞.
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比较流式细胞术和鸡红细胞法检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能
目的 比较流式细胞术和鸡红细胞法检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的一致性.方法 取昆明种小鼠分为4组,某保健食品蛋白粉以0.13、1.33和4.00 g/kg·BW 3个剂量按0.3 ml/10 g·BW经口灌胃,另设阴性对照组给予去离子水.于30 d后用流式细胞术观察小鼠腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球的能力.另取昆明小鼠40只,以同样方法分组和灌胃,用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的方法进行比对.结果 2种方法中,中、低剂量组与对照组相比,吞噬百分率( percentage of phagocytosis,PP)及吞噬指数(phagocytosis index,PI)差异均无显著性(P＞0.05)；高剂量组两种方法PP与对照组比差异均有极显著性(P＜0.01),但PI有所不同,流式细胞术法与对照组比差异有极显著性(P＜0.01),但鸡红细胞法差异有显著性(P＜0.05).结论 应用流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能指标,与传统方法检测结果具有良好一致性.
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硫酸镍对大鼠生殖细胞的影响
镍(Ni)是人体必需的微量元素,也是环境污染物之一,过量的Ni摄入可造成机体多系统,多器官损伤.研究发现,Ni可透过血睾屏障,对雄性动物的生殖功能造成不良影响[1].
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用流式细胞术探讨颗粒物对细胞免疫的功能
大气颗粒物是大气环境中组成复杂危害严重的污染物，颗粒物的毒性与其粒径的大小和组成有关。研究发现大气中细颗粒与粗颗粒的比率逐年增加，同时发现细颗粒比粗颗粒含有较多的重金属和多环芳烃。因此，研究大气中粗、细颗粒物有毒金属元素的含量及其对小鼠细胞的免疫毒性，对于了解大气污染对人群健康的危害有着重要意义。
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苯扎溴铵对人精子线粒体功能的影响
苯扎溴铵(benzalkonium bromide,BKB)是一种常用的消毒防腐剂,现广泛用于皮肤、粘膜和手术器械的消毒.由于其具有较大的表面张力,对细胞膜具有破坏作用,而且具有较强的杀菌作用,因此本研究考虑将其开发为新型的杀精剂用于节育领域.
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hMTH1缺陷细胞株建立及生物学特性研究
目的建立hMTH1缺陷细胞株,观察该缺陷所引起的生物学效应.方法用hMTH1基因反义RNA绿色荧光蛋白真核表达载体(pEGFP-C1-T)转染人胚肺成纤维细胞(HLF),半定量RT-PCR鉴定其对hMTH1基因mRNA表达的抑制效果.同时观察转染细胞生长形态,绘制生长曲线,用流式细胞术观察细胞周期,软琼脂培养法鉴定恶性程度.结果 pEGFP-C1-T载体在转染细胞内可较稳定表达,缺陷细胞株hMTH1 mRNA表达水平比HLF细胞下降了47%.hMTH1缺陷细胞生长形态无明显变化,细胞倍增时间为0.89 d,与HLF细胞0.93 d接近,细胞周期各时相未受影响,软琼脂培养未见细胞集落.结论 hMTH1缺陷细胞株成功建立,该缺陷不足以单独引起可观察的生物学效应.
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D-半乳糖对小鼠肝脏影响的流式细胞术分析
目的以流式细胞术探讨D-半乳糖不同剂量、不同时间对小鼠肝脏活性氧(ROS)水平及细胞凋亡的影响.方法SPF级25～30 g KM种雄性小鼠按体重随机分组(n=6).剂量-反应关系设阴性对照组、80、150和450 mg/kg D-半乳糖剂量组;时间-反应关系研究设阴性对照组、腹腔注射80 mg/kg半乳糖4、8和16周.实验结束后,取肝组织制备单细胞悬液,流式细胞术分析肝细胞ROS水平及细胞凋亡率.结果肝细胞ROS水平和细胞凋亡率的流式细胞术分析显示,随着D-半乳糖给予剂量的增加,各剂量组指标明显升高(P＜0.01);80 mg/kg D-半乳糖连续给予8、16周后,指标亦明显增高(P＜0.01).结论在一定给予剂量及给予时间范围内,D-半乳糖可明显增加实验动物肝细胞ROS水平,诱导肝细胞凋亡,ROS水平的高低与细胞凋亡的发生具有一致性的变化趋势.
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氯化锰对脉络丛Z310细胞增殖及细胞周期的影响
目的 探讨氯化锰( MnCl2)对永生化的脉络丛上皮细胞系Z310细胞增殖作用及细胞周期的影响.方法采用MTr法检测低剂量MnCl2(0.00005、0.0005、0.005、0.05、0.5、5、20和50 μmol/L)和高剂量MnCl2( 50、100、200、400、800、1000和1600 μmol/L)对Z310细胞增殖的影响,同时在光学显微镜下观察MnCl2作用后细胞的形态变化,在透射电镜下观察细胞超微结构的变化,并采用流式细胞术检测不同剂量MnCl2对细胞周期时相的影响.结果 在一定范围内的低剂量MnCl2对Z310细胞增殖起促进作用,随着剂量的增高,MnCl2对细胞增殖的影响转变为抑制作用.200、400及800 μmol/L的MnCl2作用48 h后,Z310细胞与对照组相比细胞数量明显减少,排列不紧凑,且多边形态不明显,呈类梭状生长,核膜皱缩,核质浓缩、边缘化,线粒体出现缺嵴空泡化,胞质空泡化.染毒组与对照组相比,100、200、400及800 μmol/L的MnCl2作用于Z310细胞24 h后,处于G0/G1期的细胞比例较对照组从1.8％增加到7.6％,48 h后从5.0％增加到19.2％.结论 低剂量(0.00005～5μmol/L)和高剂量(100～1600μmol/L) MnCl2对脉络丛上皮细胞Z310细胞增殖分别具有低剂量促进和高剂量抑制的作用.高剂量MnCl2能将Z310细胞周期阻滞在G0/G1期,且具有剂量-效应关系,同时高剂量MnC12还可造成Z310细胞形态及超微结构发生病理性改变.
