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高效液相色谱衍生化法测定脑脉康中冰片含量
目的: 建立一种测定脑脉康中冰片含量的新方法. 方法: 柱前衍生化在乙腈中反应,以3, 5-二硝基苯甲酰氯为衍生化试剂(与冰片的摩尔比为20倍),4-二甲氨基吡啶为催化剂(与冰片的摩尔比为40倍). 然后在ODS柱上,以甲醇∶水(88∶12)为流动相,检测波长225 nm,高效液相色谱测定脑脉康中冰片含量. 结果: 冰片在1～10 nmol范围内,色谱峰面积与进样量呈线性关系(R2=0.9996, P<0.01). 两批脑脉康中冰片的含量分别为7.9%和7.1%, RSD分别为1.0%和1.5%(n=5). 平均回收率为99.9%,RSD为1.8%(n=4). 结论: 高效液相色谱衍生化法用于测定脑脉康中的冰片含量方法简便、准确、可行.
关键词： 冰片 高效液相色谱法 衍生化 3 5-二硝基苯甲酸冰片酯 -
衍生化气相色谱法测定生物样品中游离脂肪酸
气相色谱法分析生物样品中游离脂肪酸,常用的衍生化方法有烷化作用(包括酯化)、硅烷化作用、胺化作用等.烷化作用采用的衍生化试剂有烷基卤代物、重氮烷烃、酯化试剂(五氟苯甲基酯化试剂,硫酸-甲醇及三氟化硼-甲醇等)；硅烷化反应主要涉及N-甲基-N-三甲硅基三氟乙酰胺和N-O-双(三甲硅基)三氟乙酰胺两种试剂；胺化主要涉及二甲胺和双(2-甲氧基乙基)胺三氟化硫试剂.
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GC、GC-MS 法定性定量法检测血液和尿液中阿片类毒品及其代谢物的含量
目的：建立检测血液、尿液中阿片类毒品及其代谢物含量的气相色谱（GC）法或气-质联用（GC-MS）法。方法尿样或血样中的阿片类毒品，加0．1 mol／mL （pH＝6）磷酸缓冲溶液调节 pH 为5～6，将样品添加于固相萃取柱（SPE），用去离子水和0．1 mol／mL HCl 淋洗，再次用 CH3 OH 洗涤 SPE 柱子，由含2％氨水的 CH2 Cl2／CH3 CH2 OHCH3混合液萃取提取，吹干，用 BSTFA＋TMCS（99∶1）试剂衍生化，以 SKF-525a 作为内标，利用色谱柱为 DB-5MS 的 GC、GC-MS 仪选择离子（m／z）扫描模式（SIM）和全扫描（Full Scan）模式进行测试分析。结果海洛因、吗啡、可待因、6-乙酰吗啡、6-乙酰可待因、乙基吗啡在25～400 ng／mL 范围内与峰面积呈良好的线性关系，相关系数 r ＞0．9907，平均加内标回收率为95．9％～101．6％，相对标准误差（RSD）为2．13％～8．59％，低检测限（LOD）为1 ng／mL，低定量限（LOQ）为25 ng／mL。案件样品尿液检测出可待因、吗啡成分、6-乙酰吗啡成分，可待因含量＞400 ng／mL，吗啡为384 ng／mL，6-乙酰吗啡为278 ng／mL，血液检测量极小，确证了吸食海洛因的违法事实。结论本方法简单、快速、灵敏度高、准确定性定量，适用于吸毒或毒品滥用者血样、尿样的筛查与确认试验。
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高效液相衍生化法测定大蒜氨基酸指纹图谱
目的 参照<中药材指纹图谱研究的技术要求(暂行)>,建立大蒜中氨基酸指纹图谱及技术参数.方法 高效液相色谱法,以邻苯二甲醛为衍生化试剂,以0.045 mol/ml磷酸盐缓冲液:乙腈:1,4-二氧六环:四氢呋喃(69.9:25.0:2.9:2.2)为流动相,337 nm检测.10个不同产地大蒜所得的色谱图用<中药色谱指纹相似度评价系统(2004年A版)>分析评价.结果 精密度、重现性、稳定性实验RSD不大于3%.指纹图谱共有峰6个,相似度在0.90以上.结论本方法稳定、准确,为进一步控制大蒜的质量提供依据.
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化学图谱与编辑
化学分析中的色谱分析、光谱分析以及两谱连用技术构成了化学分析领域中主要和基本的研究手段和方法:充分利用各种色谱技术(包括必要的前处理,如裂解、衍生化等)的高效分离和高灵敏的检测装置(包括质谱等)以获取大量的信息,继之联机或脱机,借助于计算机辅助进行目标检索、数据处理或模式识别,使得化学分析有可能取得突破性进展[1].
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气相色谱-质谱联用法分析肠炎小鼠短链脂肪酸代谢
目的 建立气相色谱-质谱联用(GC/MS)的短链脂肪酸(SCFAs)分析方法,分析肠炎小鼠SCFAs代谢情况.方法 盐酸饱和氯化钠溶液酸化生物样本,醋酸乙酯提取SCFAs后衍生化,建立GC/MS方法进行生物样本中SCFAs测定;考察盐酸溶液提取和盐酸饱和氯化钠溶液提取SCFAs总离子流图谱;考察SCFAs混合物衍生化前后的稳定性,粪便、血清、小肠、结肠、肝脏组织中SCFAs测定方法的线性、精密度及准确度、提取回收率和基质效应.运用建立的方法对正常及硫酸葡聚糖(DSS)慢性肠炎小鼠血、肝、小肠、结肠、结肠内容物以及盲肠内容物中发挥重要作用的SCFAs进行测定.结果 用盐酸饱和氯化钠溶液进行SCFAs提取后,建立的GC/MS法可同时测定甲酸、乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、异己酸、己酸、乳酸、琥珀酸共11种SCFAs;方法学考证显示,该方法具有较好的准确度、精密度以及提取回收率;除乙酸外,其余SCFAs基质效应均较好,不能完全除去乙酸的基质效应,但其RSD均小于3.8％,说明基质的影响效应相对稳定,对结果准确性影响较小.与对照组比较,慢性肠炎小鼠结肠内容物SCFAs蓄积;盲肠内容物SCFAs整体下调,乳酸蓄积,提示肠炎小鼠SCFAs代谢紊乱.结论 建立了生物样品中SCFAs提取和检测方法,并应用于慢性肠炎小鼠SCFAs代谢分析,肠炎小鼠SCFAs代谢紊乱.
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雷丸中16种氨基酸的柱前衍生化RP-HPLC法含量测定
目的:测定雷丸中16种氨基酸的含量.方法:样品以6 mol·L-1盐酸于150℃水解1h,以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂衍生后进行HPLC分析.采用Phenomenex Luna C18(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,柱温为43℃；流动相A为O.1mol·L-1醋酸钠缓冲液(以醋酸调pH 6.5)-乙腈(93∶7),流动相B为乙腈-水(4∶1),梯度洗脱,流速为1.0mL· min-1；检测波长为254 nm.结果:16种氨基酸浓度在1.16 ～47.32 μg·mL-1范围内呈良好的线性关系(r=0.9998 ～1.000)；平均回收率在93.3%～107.2%之间；RSD均小于3.0%.结论:本方法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,可用于雷丸中氨基酸的检测.
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表面响应曲面法优化牛磺罗定衍生化条件的研究
目的:在单因素实验的基础上,利用表面响应曲面法(RSM)对HPLC-UV法测定牛磺罗定含量中的牛磺罗定衍生化条件进行优化.方法:以衍生化试剂不同的浓度、反应时间和反应温度为因子,以反应后衍生化产物的量(用峰面积表示)为响应因子,对衍生化条件进行优化.结果:佳衍生化条件是反应温度为100℃,衍生化试剂浓度为20g·L-1,反应时间为88min.结论:本方法结果准确可靠,可应用于牛磺罗定的衍生化.
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柱前衍生-反相高效液相色谱法在盐酸伪麻黄碱合成中质量控制的应用
目的:利用柱前衍生-反相高效液相色谱法,完善在合成盐酸伪麻黄碱生产过程中的杂质的限度检查,为生产过程的杂质控制提供依据.方法:以(1S)-(+)-氯甲酸薄荷醇酯作为手性衍生化试剂,采用Phenomenex Luna C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-水-醋酸-三乙胺(29:20:0.2:0.01)为流动相,流速1.0 mL·min-1,在254 nm处检测.结果:盐酸伪麻黄碱、盐酸左伪麻黄碱、盐酸右麻黄碱、盐酸麻黄碱的浓度均在0.033～0.667 μg·mL-1范围内线性关系良好(r＞0.99);检测限(S/N=3)分别为56,56,58.56 ng;定量限(S/N=10)分别为210,204,226,216 ng;各对映体均达到基线分离.结论:方法快速、简便,重复性好,灵敏度高,可用于对合成盐酸伪麻黄碱生产过程中产生的光学异构体进行控制.
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GC/MS分析尿液中丁丙诺啡
目的:建立尿液中丁丙诺啡GC/MS分析方法.方法:在含丁丙诺啡的尿液中,加入β-葡萄糖醛酸酶溶液,50℃水解2h,加入内标长春西汀,加pH 7缓冲溶液,用三氯甲烷提取,提取物经N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺衍生化后进行GC/MS分析.GC/MS条件:HP-5 MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm)石英毛细管柱,柱温:初温240℃保持2 min,以20℃·min-1速率升至280℃保持18 min.结果:线性范围为0.5～100 μg·L-1,检出限为0.2 μg·L-1.结论:该方法灵敏度高,可用于涉毒案件尿液中丁丙诺啡的分析.
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气相色谱法拆分扁桃酸甲酯对映体及手性识别机理探讨
目的:采用气相色谱法拆分扁桃酸甲酯对映体,并通过对映体分离过程中的热力学参数计算,探讨扁桃酸甲酯对映体分离过程中的驱动力及其拆分机理.方法:在β-环糊精(Cyclodex B)手性毛细管柱上分离扁桃酸甲酯对映体.结果:在柱温为118℃,载气流速为1 mL·min-1时,扁桃酸甲酯对映体在β-环糊精(Cyclodex B,30m×0.25 mm×0.25μm)手性毛细管柱上具有较好的分离效果,其分离因子(α)和分离度(R)分别为1.02和1.55.扁桃酸甲酯对映体lnk'与1/T和lnα与1/T之间具有较好的线性关系.并从Van't Hoff曲线求得(R)-扁桃酸甲酯和(S)-扁桃酸甲酯焓变(△H)分别为-59.29 kJ·mol-1和-60.64 kJ·mol-1,两者的焓变差[△(△H)]和熵变差[△(△S)]分别为-1.34 kJ·mol-1和-3.25 J·mol-1·K-1.结论:扁桃酸甲酯对映体的拆分过程主要是一个焓控过程,且β-环糊精外表面与扁桃酸甲酯之间的相互作用在其分离过程中起了重要作用.
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柱前衍生化HPLC法同时测定阿胶中4种主要氨基酸的含量
目的:建立阿胶中羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸4种氨基酸的含量测定方法.方法:样品以6 mol·L-1盐酸于150℃水解1 h,以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂衍生后进行HPLC分析,采用Phenomenex C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温为43℃;流动相A为0.1 mol·L-1醋酸钠-乙腈(93:7),流动相B为乙腈-水(4:1),梯度洗脱,流速:1.0 mL·min-1;检测波长为254 nm.结果:羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸的线性范围分别为0.016～0.239μg(r=0.9999),0.032～0.483 μg(r=0.9998),0.013～0.188μg(r=0.9998),0.018～0.271μg(r=0.9999);加样回收率(n=6)分别为96.20%(RSD=1.3%),98.46%(RSD:1.2%),99.28%(RSD=0.9%),98.65%(RSD=1.7%).结论:该方法准确、可靠,具有良好的重复性和稳定性,可用于阿胶中羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸的检测.
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RP-HPLC测定重组人促卵泡激素中唾液酸含量
目的:建立简便、快速、灵敏、准确的适用于重组人促卵泡激素中唾液酸的含量测定方法.方法:采用弱酸水解重组人促卵泡激素(rhFSH),释放出唾液酸,用邻苯二胺衍生化,采用反相高效液相色谱法测定.色谱柱为Jupiter C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为A-B(87:13),其中流动相A为含0.15%1-氨基丁烷、0.5%磷酸、1%四氢呋喃的水溶液,流动相B为流动相A与乙腈比例为1:1的溶液;流速为1.0 mL·min-1;柱温为25℃;检测波长为214 nm.结果:唾液酸进样量在54.5～2180 ng范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999).低、中、高3种浓度平均加样回收率(n=3)为98.83%,100.6%,102.6%;RSD分别为2.7%,0.03%,0.17%.结论:本法简便、快速,结果准确、可靠,重复性好.
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毛细管气相色谱法测定云芝糖肽的单糖组成
目的:对多孔菌科真菌云芝的的活性成分云芝糖肽的单糖组成进行研究.方法:从云芝中提取得到云芝糖肽精品,经三氟乙酸水解后用硼氢化钠还原,然后对其进行乙酰化衍生化,用标准单糖作为对照,肌醇为内标,产物用气相色谱法分析,色谱条件为程序升温:180 ℃(2 min)3 ℃*min-1230 ℃(20 min).结果:云芝糖肽的单糖组成为葡萄糖、半乳糖、甘露糖、岩藻糖、鼠李糖、木糖,其摩尔比为0.544∶ 0.188∶ 0.180∶ 0.062∶ 0.009∶ 0.018.结论:建立了毛细管气相色谱测定云芝糖肽的单糖组成的方法,并得到云芝糖肽的单糖组成的结果.
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柱前衍生化-反相高效液相色谱法拆分酮洛芬对映异构体
目的:建立一种用柱前衍生化反相高效液相色谱法分析酮洛芬对映异构体的方法.方法:采用二氯亚砜和S-(-)-1-(1-萘基)乙胺作为衍生化试剂,S-(+)-酮洛芬和R-(-)酮洛芬衍生化后生成一对非对映异构体.选用Hypersil C1s柱.以乙腈水乙酸-三乙胺(58:42:0.1:0.02)为流动相,在254 nm下检测.色谱流份经电喷雾离子阱多级质谱分析验证结果:非对映异构体色谱峰的保留时间分别为7.3 min和8.5 min,分离度为1.9.结论:衍生化产物稳定,方法灵敏度高.重现性好,操作简单,可用于药品质量控制和对映体选择性药物动力学研究.
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HPLC测定当归补血片中黄芪甲苷的含量
目的:建立当归补血片中黄芪甲苷的含量测定方法.方法:以吡啶-苯甲酰氯(2.5:1)为衍生化试剂,对黄芪甲苷进行苯甲酰化,采用HPLC测定样品中黄芪甲苷含量.色谱柱:Phenomenex Gemini C18柱(50 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈-0.1%三乙胺溶液(98:2)洗脱30 min;流速1.0 mL·min-1;检测波长230 nm;柱温20℃;进样量10 μL.结果:黄芪甲苷进样量在0.074～0.925 μg范围内线性关系良好(r=0.9999),重复性好(RSD=0.17%),平均回收率(n=3)为98.6%～99.9%(RSD=0.32%～0.95%).结论:该法样品前处理简单,专属性强、准确度高、灵敏度高、重现性好.
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固相萃取GC/NPD检测人血浆中丁丙诺啡
目的:建立血浆中丁丙诺啡GC/NPD分析方法.方法:血浆中丁丙诺啡,加入内标长春西汀,加pH 10..8缓冲溶液后用401有机担体吸附、三氯甲烷洗脱.提取物经N,O-双三甲硅烷基三氟乙酰胺衍生化后进行GC/NPD分析.结果:方法的检出限为1 μg·L-1.线性范围为5～100 μg·L-1.结论:该方法灵敏度高,可用于涉毒案件血浆中丁丙诺啡的分析.
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HPLC法测定复方醋酸棉酚片中棉酚异构体含量
目的:建立测定复方醋酸棉酚片中(-)-棉酚及(+)-棉酚含量的高效液相色谱方法.方法:以M,N-二甲基甲酰胺为溶剂,(R)-(-)-2-胺基-1-丙醇为衍生化试剂,90℃下水浴加热30 min进行衍生化反应.含量测定使用Agilent XDB-C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm,5μm),流动相为10 mmol·L-1磷酸二氢钾缓冲液(pH =3.0)-乙腈(20∶ 80),流速1.0 mL·min-1,检测波长247 nm,柱温40℃.结果:(-)-棉酚和(+)-棉酚浓度分别在1.88～37.6 μg·mL-1和1.98 ～ 30.7 μg·mL-1范围内呈良好线性关系;(-)-棉酚及(+)-棉酚的平均回收率分别为101.0％和101.2％,RSD分别为2.3％和2.0％.结论:该方法可以准确测定复方醋酸棉酚片中(-)-棉酚及(+)-棉酚含量,有效提高其现有标准的质量控制水平.
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水解蛋白注射液中游离氨基酸含量的测定及分析
目的:建立二硝基氟苯(DNFB)柱前衍生化法测定水解蛋白注射液中游离氨基酸含量,并对水解蛋白注射液质量进行分析.方法:采用DNFB为衍生化试剂进行衍生,色谱柱为Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.05 mol·L-1醋酸钠溶液(含1％N,N-二甲基甲酰胺,调pH为6.4)与50％乙腈水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长360nm.结果:各氨基酸的线性关系良好；平均回收率(n=6)为98.7％ ～ 100.8％,RSD为0.46％ ～3.3％.结论:本研究建立了水解蛋白注射液游离氨基酸测定方法,为质量标准中游离氨基酸含量测定限度的制定提供了依据.
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柱前衍生化HPLC法测定维U颠茄铝胶囊中维生素U的含量
目的:对维U颠茄铝胶囊中维生素U含量测定的方法进行改进,根据维生素U的特殊结构,建立柱前衍生化HPLC检测法测定其含量.方法:以二硝基氟苯(FDNB)为柱前衍生剂,在碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(pH 10.0)介质中进行衍生化反应;以HPLC法测定含量,采用Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以0.01 mol·L-1乙酸钠溶液(用乙酸调pH至6.5)-乙腈(70∶30)为流动相,流速1.0mE·min-1,检测波长360 nm.结果:2种结构维生素U(氯甲基蛋氨酸和碘甲基蛋氨酸)的衍生产物色谱分离效果均良好,氯甲基蛋氨酸和碘甲基蛋氨酸质量浓度分别在为20.12～201.20和29.23～292.31 μg·mL-1范围内线性关系良好,氯甲基蛋氨酸和碘甲基蛋氨酸的加样回收率分别为97.33％～98.74％和97.71％～99.24％,RSD(n=6)分别为1.95％～2.52％和1.85％～2.78％;以本文的柱前衍生化HPLC法测得的不同厂家的3批样品中维生素U含量分别为99.06％、99.73％、100.52％,传统滴定法测得的含量分别为101.07％、102.26％、99.79％,两法结果基本一致.结论:方法学验证结果表明,本文建立的方法可以用于测定维U颠茄铝胶囊制剂中维生素U的含量.
