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子宫内膜异位症患者子宫内膜caspase 3的表达研究
目的:研究子宫内膜异位症患者子宫在位内膜和异位内膜的caspase 3表达,探讨caspase 3在子宫内膜异位症发病机制中的意义.方法:用免疫组织化学方法检测正常人子宫内膜和子宫内膜异位症患者的子宫在位内膜与异位内膜caspase 3蛋白的表达.结果:各组标本caspase 3蛋白的表达均阳性,子宫内膜异位症患者子宫在位内膜与异位内膜的caspase 3表达灰度值分别为63.74±2.35,55.18±1.84,均低于对照组正常人子宫内膜(70.82±2.39),差异有显著性(P＜0.05);子宫内膜异位症内患者子宫在位内膜与异位内膜的caspase 3表达水平差异有显著性(P＜0.05).结论:caspase 3在子宫内膜异位症患者在位和异位内膜的低水平表达,介导细胞调亡的失调可能是影响子宫内膜异位症形成和发展的重要因素之一.
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Avastin对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响
目的 评价Avastin(贝伐单抗)在体外对翼状胬肉成纤维细胞的增殖抑制作用以及细胞毒性.方法 通过不同浓度Avastin(0.25 g·L-1、0.50 g·L-1、1.00 g·L-1、1.50 g·L-1、2.50 g·L-1)处理人翼状胬肉成纤维细胞12h、24 h、48 h、72 h,观察成纤维细胞的增殖抑制、药物细胞毒性以及凋亡蛋白的表达. WST-1试剂检测细胞增殖,LDH试剂盒检测细胞毒性,Western blot方法检测增殖蛋白以及凋亡蛋白的表达.结果 48 h及72 h Avastin组与正常组相比光密度(0D)值差异有统计学意义(P =0.034、P =0.016).与12 h相比,0.25 g·L-1Avastin组及0.50 g·L-1Avastin组作用24 h、48 h、72 h后细胞增殖抑制率均无明显提高(均为P＞0.05),1.50 g·L-1Avastin组及2.50 g·L-1Avastin组作用48 h、72 h后细胞增殖抑制率均明显提高(均为P ＜0.05).与0.25 g·L-1Avastin组相比,0.50g·L-1Avastin组在各个时间点(除12 h外)细胞增殖抑制率均无明显提高(均为P＞0.05),1.50g·L-1Avastin组、2.50 g·L-1Avastin组在各个时间点抑制率均明显提高(均为P＜0.05).Avastin各浓度组与LDH大释放组(加入裂解酶)对翼状胬肉成纤维细胞LDH释放率差异均有统计学意义(均为P＜0.05),各浓度组之间差异均无统计学意义(均为P＞0.05).Avastin可抑制p-CyclinD1表达,促进Caspase3的表达,与细胞对照组相比差异均具有统计学意义(均为P ＜0.05).结论 Avastin可以通过抑制p-CyclinD1以及促进Caspase3的表达抑制翼状胬肉成纤维细胞的增殖,但无细胞毒性,进一步证实了该药物的安全有效性.
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Cyt C和Caspase 3在STZ诱导糖尿病大鼠晶状体上皮细胞中的表达
目的 研究Cyt C和Caspase 3在STZ诱导糖尿病大鼠晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)中的表达,为糖尿病性白内障的发生机制提供新的线索.方法 60只健康雄性SD大鼠分为实验组和对照组,每组各30只,实验组大鼠腹腔注射STZ溶液,对照组腹腔注射柠檬酸缓冲液.每4周监测大鼠血糖并用裂隙灯观察大鼠晶状体混浊情况,12周末取大鼠晶状体前囊膜,应用免疫组织化学和Western blot检测LEC中Cyt C和Caspase 3的表达.结果 12周末实验组大鼠空腹血糖为(24.04±2.40) mmol·L-1,对照组为(5.13 ±0.37)mmol·L-.裂隙灯观察显示实验过程中实验组大鼠晶状体出现混浊,而对照组大鼠晶状体均透明.免疫组织化学结果显示:实验组大鼠LEC中Cyt C和Caspase 3表达呈阳性,而对照组则为阴性.Western blot结果显示实验组胞浆内Cyt C含量(0.928 0±0.029 7)大幅度上升,远高于对照组(0.525 0±0.025 8),差异有统计学意义(P＜0.05),而实验组大鼠线粒体内Cyt C含量(0.510 5 ±0.0264)则大幅度下降,远低于对照组(0.846 0±0.033 5),差异有统计学意义(P＜0.05);实验组大鼠LEC中Caspase 3的表达量(0.906 0±0.027 6)明显高于对照组(0.430 5±0.025 2),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 STZ诱导糖尿病大鼠LEC中Cyt C由线粒体释放入胞浆且Caspase 3表达量增加,高血糖可能通过刺激LEC释放Cyt C和激活Caspase 3,诱导LEC凋亡从而形成白内障.
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姜黄素诱导食管癌Eca-109细胞凋亡机制的研究
目的 观察姜黄素诱导食管癌Eca-109细胞凋亡,并初步探讨其作用机制.方法 通过CCK-8法检测姜黄素不同浓度、不同时间点作用于Eca-109细胞的增殖抑制率.应用Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性.流式细胞技术检测细胞早期凋亡.免疫细胞化学法检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达情况.结果 随浓度增加时间延长各组细胞生长抑制率有明显增高,且呈剂量浓度依赖性,组间差异有显著性(P＜0.01).Caspase-3活性检测发现:姜黄素20μmol·L-1、40μmol·L-1作用24 h后OD值与对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术检测到姜黄素作用后,细胞凋亡率明显升高.免疫细胞化学染色显示,随着姜黄素浓度的增高和作用时间的增长,Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强.结论 姜黄素可能是通过诱导caspase-3表达活性增高,上调促凋亡基因Bax及下调抗凋亡基因Bcl-2的表达,诱导Eca-109发生凋亡.
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姜黄素对人胃癌MGC803的体外抑制作用
[目的]观察姜黄素对人胃癌MGC803细胞的生长抑制作用,观察药物作用时间浓度的关系并探究其诱导凋亡的机制.[方法]MTT法建立细胞剂量效应、时间效应曲线;caspase 3、caspase 9活性检测试剂盒及WesternBlot实验分别检测caspase 3、caspase 9活性变化情况和Bax、Bcl-2蛋白表达情况.[结果]姜黄素对人胃癌MGC803细胞有明显的剂量-时间依赖效应;姜黄素干预后,caspase 3、caspase 9活性明显升高;Bcl-2蛋白水平显著下降,Bax蛋白表达明显升高.[结论]姜黄素在体外对人胃癌MGC803细胞的增殖具有抑制作用,其促凋亡可能是通过调控Bax、Bcl-2、caspase 3、caspase 9蛋白来实现的.
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基底动脉中Caspase3、8的表达与蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的关系
目的 探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3、8(Caspase 3、8)在蛛网膜下腔出血(SAH)后在基底动脉中的表达及其与脑血管痉挛的关系.方法 新西兰大白兔36只,随机分成对照组(n=6)和实验组(n=30),后者杆随机分为SAH后1、3、5、7、10 d等5个亚组,每亚组各6只.采用枕大池二次注血法建立SAH模型,应用免疫组化和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记法分别检测基底动脉内皮细胞Caspase 3、8表达和凋亡.结果 凋亡细胞在实验组SAH后第1天出现,第7天凋亡水平达到高.实验组Caspase 3、8表达水平明显高于与对照组(P<0.05).Caspase3、8的表达在SAH后第1天就可观察致到,第5天和第7天出现强烈表达,第10天表达明显减弱.结论本结果提示在兔脑血管痉挛的基底动脉中存在细胞凋亡;Caspase 3、8可能参与了SAH后脑血管痉挛的发生和发展.
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鱼藤素降低小鼠神经母细胞瘤细胞Neuro-2 A存活率的实验研究
目的：研究鱼藤素对小鼠神经母细胞瘤细胞Neuro-2A ( N2A)存活率及凋亡的影响。方法： N2A细胞以5×104· ml-1密度接种到细胞培养板中,1×10-8 mol·L-1鱼藤素处理后6,12,24,48,72 h等5个时间点上测定细胞存活率；加入鱼藤素0,1×10-11,1×10-10,1×10-9,1×10-8,1×10-7,1×10-6 mol·L-1等7个不同浓度干预48 h后测定细胞存活率。2×10-8 mol·L-1鱼藤素干预24 h,测定细胞匀浆中caspase 3活力。结果：5×104·ml-1 N2A细胞以含10%胎牛血清DMEM培养基培养,第48 h达到细胞生长曲线的峰值。1×10-8 mol·L-1鱼藤素干预24~72 h,时间依赖性显著降低N2A细胞存活率(P<0.05)；在鱼藤素干预48 h时间点上,1×10-8~1×10-6·mol·L-1浓度范围内剂量依赖性可显著降低N2A细胞存活率(P<0.05),其IC50=1.6×10-8 mol·L-1。鱼藤素作用于N2A细胞24 h可显著提高caspase 3活力,约达到对照组的5.6倍。结论：鱼藤素可时间依赖性且剂量依赖性降低N2A细胞存活率,可能与增加caspase 3活力有关。
关键词： 鱼藤素 neuro-2a细胞 细胞存活率 Caspase 3 -
细胞凋亡在脑死亡状态致肺脏损伤中的作用
目的:观察兔脑死亡后不同时间点肺组织的细胞凋亡情况和相关基因的表达变化,探究脑死亡状态致肺损伤发生的分子机制.方法:40只健康家兔随机数表法分为2组,假手术组(n=20):行气管插管、股动脉插管及钻孔开颅手术,置入Foley 3F气囊导管后不加压;脑死亡组(n=20):成功建立兔脑死亡模型.各组在术后2,6及8h记录动脉血压和心率变化,RT-PCR检测各组Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达,免疫组织化学法检测肺组织caspase 3的表达,并用TUNEL法检测肺组织的细胞凋亡情况.结果:脑死亡后2,6,8h家兔动脉m压、心率差异无统计学意义(P＞0.05).脑死亡组各时间点caspase 3阳性表达细胞数较假手术组均有升高(P＜0.05).TUNEL染色显示,脑死亡组细胞凋亡指数在6h和8h达到80％,提示肺损伤逐渐加重,这与促凋亡基因BaxmRNA表达的趋势一致.结论:脑死亡状态可导致肺脏损伤,随着脑死亡时间的延长逐渐加重,且该变化与相关凋亡基因的过表达有关.脑死亡状态维持6h以上,肺脏细胞凋亡情况为严重.
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A20和Caspase 3在异基因CD8+ T细胞致人脐静脉内皮细胞凋亡中的表达及意义
目的 探讨异基因造血干细胞移植时,供体CD8+T细胞致受体人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡中A20蛋白及Caspase 3的表达及意义.方法 采用密度梯度法分离人周围血单个核细胞,CD8+ T细胞亚群阴性分选柱试剂盒分选出CD8+T细胞.HUVEC细胞株经过5 ng/ml TNF-α处理后与CD8+T细胞进行混合培养.以AnnexinⅤ和PI双标后,流式细胞仪对HUVEC进行凋亡分析,用全波长荧光分光光度计测定凋亡相关蛋白Caspase 3的活性.Western blot法检测HUVEC中A20蛋白的表达.结果 异基因CD8+T细胞在与HUVEC混合后可引起HUVEC凋亡,流式细胞仪检测显示24 h时的早期凋亡率高,达(83.6±0.42)%.而晚期凋亡相关蛋白Caspase 3活性在48 h时达高峰,荧光强度为(13.585±0.269), 此后显著降低,与对照组比较差异有极显著性意义(P<0.01).A20蛋白的表达与HUVEC的凋亡率呈负相关(r=-0.839, P<0.05).结论 体外供体CD8+T细胞致受体HUVEC凋亡过程中,信号蛋白Caspase 3的激活介导了凋亡的发生,而A20可能对其起负调节作用.
关键词： 异基因CD8+T细胞 人脐静脉内皮细胞 细胞凋亡 Caspase 3 A20 -
蝙蝠葛酚性碱抗神经元缺血再灌注损伤的作用机制
目的 探讨蝙蝠葛酚性碱(PAMd)抗神经元细胞缺血再灌注损伤的作用机制.方法 体外培养小鼠神经母细胞瘤细胞株N2a,缺糖、缺氧和缺血清(OGSD)培养90 min,更换正常培养液并加入不同浓度的PAMd,继续培养不同时间后,收集细胞培养液,测定乳酸脱氢酶(LDH)活性和神经递质含量;收集细胞,测定以下指标:①MTT法检测细胞生存活力;②荧光光度法分析胞质活性氧(ROS)含量;③激光共聚焦分析线粒体跨膜电位;④Western blot检测胞质细胞色素C(Cyt C);⑤采用Caspase 3可见光底物DEVD-pNa测定Caspase 3活性.结果 ①PAMd促进OGSD处理后的N2a细胞存活;②PAMd抑制OGSD处理后的N2a细胞释放兴奋性神经递质;③PAMd直接清除细胞内的ROS;④PAMd能维持线粒体跨膜电位的稳定;⑤PAMd抑制线粒体Cyt C释放和抑制胞质Caspase 3活性.结论 PAMd通过阻断线粒体凋亡途径和抗氧化作用发挥神经元保护作用.
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凋亡相关蛋白Survivin 及Caspase3 在肾细胞癌中的表达及其与凋亡的关系
目的探讨凋亡相关蛋白Survivin及Caspase 3在肾细胞癌表达及其与肾细胞癌凋亡的关系. 方法应用SP免疫组织化学法检测60例肾细胞癌石蜡切片中Survivin和Caspase 3表达的情况,并用原位末端标记法(in situ end-labeling,ISEL)标记凋亡细胞,结合临床资料进行分析. 结果 Survivin在肾细胞癌标本中的表达阳性率为88.3%(53/60),而正常对照组中无一例呈阳性表达;Caspase 3在肾细胞癌标本中的表达阳性率为81.6%(49/60),与对照组相比差异无显著性意义.Survivin 的表达与肾细胞癌的组织学分级和临床病理分期均显著相关(均P<0.01),但与组织学分型无关.Caspase 3的表达与肾细胞癌的组织学分级、临床分期及组织学分型均无关.肾细胞癌中Survivin与Caspase 3的表达没有相关性.Survivin阳性组凋亡指数明显低于阴性组(P<0.01). 结论 Survivin的表达与肾细胞癌的分化程度和临床病理分期密切相关,Caspase 3蛋白的表达情况与肾细胞癌关系不密切.Survivin 能显著抑制癌细胞的凋亡,但不能抑制Caspase 3的表达.
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细胞凋亡在热打击致大鼠大脑皮质神经元损害中的作用及机制
目的 探讨热打击后大鼠大脑皮质神经元凋亡及easpase-3的表达变化.方法 将Wistar大鼠随机分为正常对照组和热打击组,正常对照组大鼠始终置于(25±0.5)℃,相对湿度(35±5)％环境下;热打击组置于人工智能气候舱内100 min,舱内温度(40±0.5)℃,相对湿度(60±5)％.TUNEL染色观察大鼠大脑皮质神经元的凋亡情况;免疫组织化学方法及荧光定量PCR检测大鼠大脑皮质神经元caspase-3的表达.结果 热打击1d后大脑皮质神经元出现凋亡,第3天达高峰.caspase-3于热打击2d后开始表达,于第3天表达明显.荧光定量PCR检测结果显示,caspase-3在1d、2d、3d和7d各时间点含量与正常对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),3d时caspase-3含量高.结论 热打击可激活caspase-3表达,诱导皮质神经元凋亡.
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不育症患者精液中Caspase 3和Caspase 8检测的临床意义
目的 探讨不育症患者精子和精浆中Caspase 3和Caspase 8与精液常规参数的关系,并推测其可能的临床意义.方法 收集来该院门诊和海南医学院生殖中心就诊的患者标本76份,其中生育组20份,弱精组19份,少弱精组20份,无精组17份.所有标本均进行精子计算机辅助精子分析(CASA),然后分离精子精浆,采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测精子和精浆中Caspase 3和Caspase 8的含量.结果 ①所有被检测样本的精子和精浆中都检测到了Caspase 3和Caspase 8.②精浆中Caspase 3的平均含量和Caspase 8的平均含量均高于精子,且有统计学意义[(Caspase 3:(9.00±9.20)pmol/L vs(6.36±5.81)pmol/L,P＜0.05；Caspase 8:(17.32±11.23)pmol/L vs(12.72±7.42)pmol/L,P＜0.05].③精子中Caspase 8的平均含量都分别与精子密度、活动性和A级呈负相关；精浆中Caspase 8的平均含量分别与精子的A级呈负相关；精浆中Caspase 8的平均含量与精子密度呈负相关,均有统计学意义.④与生育组相比,仅少弱精组精子中Caspase 8含量较高,且差异有统计学意义(P＜0.05).结论 精浆中也存在Caspase,精子和精浆中Caspase 8含量可以反映精子的质量,主要与精子活动性相关.
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细胞色素C在ATP耗竭诱导的肾小管上皮细胞凋亡中的作用
目的研究线粒体细胞色素C的释放在ATP耗竭导致的肾小管上皮细胞凋亡中的作用和机制.方法应用代谢抑制剂暂时性阻断细胞内ATP的生成,诱导细胞凋亡.利用JC-1测定线粒体膜电位的变化.以间接免疫荧光和Western印迹检测细胞色素C在细胞内的分布.荧光肽法测定Caspase3的活性.琼脂糖凝胶电泳分析DNA碎解.结果肾小管上皮细胞内ATP耗竭时,线粒体膜电位显著降低,细胞浆内细胞色素C的含量增多,Caspase 3活性增强.细胞内ATP再恢复时,细胞色素C的释放和Caspase 3活性继续增加,并出现DNA的碎解.结论肾小管上皮细胞ATP耗竭时,线粒体细胞色素C的释放在介导Caspase依赖的细胞凋亡通路中发挥重要作用.
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冰片与苯扎氯铵合用对兔角膜上皮细胞凋亡的作用
目的 观察冰片与苯扎氯铵合用对兔角膜上皮细胞凋亡的作用.方法 以200 μg· mL-1冰片与不同浓度的苯扎氯铵(2,4 μg· mL-1)联合作用于兔角膜上皮细胞,用噻唑蓝(MTT)法检测上皮细胞的活性;Annexin-V/PI染色流式细胞仪法检测上皮细胞的凋亡情况;Real time RT-PCR法检测细胞凋亡相关基因Fas、Caspase3 mRNA的表达;Western Blot法检测Fas、Caspase3蛋白的表达.结果 冰片与苯扎氯铵合用可明显增强苯扎氯铵对兔角膜上皮细胞活性的抑制作用(P＜0.01);增强苯扎氯铵的促凋亡作用(P＜0.01);促进角膜上皮细胞Fas、caspase3的mRNA表达(P＜0.01)及蛋白表达(P＜0.05,P＜ 0.01).结论 冰片与苯扎氯铵合用,可增强苯扎氯铵的细胞毒性,促进兔角膜上皮细胞的凋亡及Fas、caspase3 mRNA和蛋白的表达.
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Y-27632对小鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响
目的：观察ROCK抑制剂Y－27632对体外缺血清培养的小鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响。方法原代分离培养小鼠骨髓单个核细胞，应用流式细胞术对细胞CD29、CD44、CD90、CD34表面标志进行检测。成骨、成脂肪、成软骨分化后分别进行茜素红、油红O及甲苯胺蓝染色。将第3代细胞随机分为3组：对照组、模型组（无血清）、Y－27632组（无血清＋10μmol／L Y－27632），分别于培养后24、48、72 h收集细胞进行流式细胞仪TUNEL法观察各组细胞凋亡率，培养后24 h Western blot法检测ROCK1及cleaved caspase 3表达。结果分离的骨髓单个核细胞CD29（＋）、CD44（＋）、CD90（＋）、CD34（－），三系分化后茜素红染色（＋），油红O染色（＋），甲苯胺蓝染色（＋）。 Y－27632能明显降低由于缺血清培养导致的BMSCs的凋亡率（P＜0.01），Y－27632能够明显降低ROCK及cleaved－caspase 3表达（ P＜0.01）。结论分离的骨髓单个核细胞就是骨髓间充质干细胞。Y－27632能够抑制由于缺血清培养导致的小鼠骨髓间充质干细胞的凋亡。
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Caspase 3与肺炎链球菌引起的肺泡上皮细胞凋亡的关系
目的:通过肺炎链球菌体外感染肺泡上皮细胞探讨凋亡蛋白caspase 3的活性和肺泡上皮细胞凋亡率的变化及凋亡蛋白caspase 3对肺泡上皮细胞凋亡的作用.方法:体外培养肺泡上皮细胞A549,用肺炎链球菌R6体外感染A549,TUNEL法检测A549细胞凋亡,RT-PCT法检测caspase 3基因转录强度,化学荧光测定法检测caspase 3.结果:肺炎链球菌能时间依赖性地诱导A549凋亡;Caspase 3的基因翻译强度与蛋白活性随感染时间延长呈上升趋势,而且与A549细胞凋亡变化同步.结论:Caspase 3在肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡过程中起重要作用.
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Bcl-2基因转染对小鼠心脏移植中细胞凋亡的影响与作用机制的研究
目的探讨Bcl-2基因转染在小鼠心脏移植急性排斥反应模型中对心肌细胞凋亡的影响和作用机制.方法通过TDT介导的原位末端标志(TUNEL)、DNA阶梯及Western免疫印迹(Western Blot)等检测方法,分析了小鼠心脏移植模型急性排斥反应时细胞凋亡的情况,并结合心脏移植急性排斥反应的组织学分级,探讨了心肌细胞凋亡在急性排斥反应中的作用.同时应用免疫组织化学染色(SABC法)分析活化型Caspase 3蛋白的表达,探讨了Bcl-2基因转染对心肌细胞凋亡的影响及可能作用机制.结果与同种异体移植组比较,Bcl-2基因转染后能显著减少急性排斥反应中的心肌细胞凋亡现象,同时,活化型Caspase 3蛋白的表达从9.75±2.71被下调到3.56±0.62(P＜0.01).结论小鼠心脏移植急性排斥反应过程中存在心肌细胞的凋亡.它是小鼠心脏移植急性排斥反应中心肌组织损伤的主要机制,Bcl-2基因转染能有效地抑制心肌细胞的凋亡,可能主要通过阻断细胞凋亡信号传导途径的中下游阶段,达到阻止Caspase 3蛋白酶活化而发挥抗心肌凋亡作用.
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Survivin和Caspase 3蛋白在大肠黏膜癌变过程中的表达及意义
Survivn可能在大肠黏膜癌变过程及大肠癌的浸润、转移中起重要作用,Survivin可能通过抑制Caspase 3的表达,促进大肠癌的发生.
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Caspase 3在类风湿性关节炎滑膜细胞凋亡中活性研究
[目的]类风湿性关节炎(RA)、正常人(normal control)滑膜细胞体外原代培养,并检测三氧化二砷(arsenic trioxide,AS2O3)对滑膜细胞凋亡的作用过程中caspase 3活性变化.[方法]双酶消化法体外培养人关节滑膜细胞,采用比色法对培养的滑膜细胞凋亡过程caspase 3活性进行分析.[结果]比色法检测发现不同浓度的AS2O3作用48 h后滑膜细胞裂解液中CASPASE-3的活性显著增强.并且在10～80 μmol/L浓度范围内其作用呈一定剂量依赖性.[结论]caspase 3在AS2O3对滑膜细胞凋亡诱导过程中起到重要作用,并且其活性显著增强.
