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基于络病学探讨内毒素“二次打击”急性肺损伤大鼠的Rho/ROCK机制及川芎嗪的保护作用
目的:研究内毒素血症“瘀滞络脉”急性肺损伤大鼠的Rho/ROCK机制及川芎嗪的保护作用.方法:以内毒素“二次打击”建立大鼠内毒素血症“瘀滞络脉”急性肺损伤模型,分别设正常对照组、模型组、川芎嗪低剂量组、高剂量组,测定呼吸频率、肺泡灌洗液中性粒细胞(PMN)百分率、肺湿/干重比、肺组织髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)活性、ROCKmRNA表达量,并观察、评估肺组织损伤严重程度.结果:与模型组相比,川芎嗪显著降低呼吸频率、PMN百分率、肺湿/干重比、MPO活性、ROCK mRNA表达量,减轻大鼠急性肺损伤病理改变.结论:川芎嗪可能通过抑制Rho/ROCK通路对内毒素血症“瘀滞络脉”大鼠急性肺损伤有较好的保护作用.
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三参饮对病毒性心肌炎慢性期Rho/Rock信号通路的作用
目的:观察小分子G蛋白(Rho)及Rho相关激酶(Rho/Rock)信号通路在病毒性心肌炎慢性期心肌纤维化形成中的作用及三参饮治疗机制.方法:将120只BALB/c小鼠于第1次ip含柯萨奇病毒(CVB3) 50％组织细胞感染量(TCID501×10-5)的1∶2 000病毒稀释液0.2 mL/只后,分别在第14,28天再次ip相同剂量,60 d后存活小鼠为病毒性心肌炎(VMC)心肌纤维化模型.将存活小鼠随机分为模型组、卡托普利组、三参饮高、中、低剂量组.灌胃治疗45 d后,采用ELISA检测血清Ⅰ型前胶原(P Ⅰ NP)、Ⅲ型前胶原(PⅢNP),采用半定量RT-PCR法检测Rock的基因表达;放免法检测血清血管紧张素Ⅱ(AngⅡ).采用雄性BALB/c小鼠间断多次ip CVB3的方法,建立VMC心肌纤维化模型.将存活小鼠随机分为模型组、卡托普利组、三参饮高、中、低剂量组.其中三参饮治疗组按高、中、低剂量3,2,1 g·kg-1,卡托普利治疗组按45 mg· kg-ig,模型对照组、正常对照组ig等量生理盐水,每日1次.治疗45 d后,ELISA检测血清PⅠ NP,PⅢNP,半定量RT-PCR法检测Rock的基因表达;放免法检测血清Ang Ⅱ.结果:与正常组相比,模型组小鼠心肌PⅠ NP,PⅢNP合成明显增高,与正常组相比差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较三参饮能够明显减少血清PⅠ NP,PⅢNP表达,差异有统计学意义(P ＜0.05);Rho/Rock信号通路在病毒性心肌炎慢性期中表达水平较正常组升高,而经三参饮治疗后表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05).模型组AngⅡ的含量也有相同的变化趋势(P＜0.05).结论:在慢性病毒性心肌炎心肌纤维化过程中,Rho/Rock信号通路是AngⅡ刺激成纤维细胞(CFBs)增殖和胶原合成的胞内信号转导机制之一,三参饮可通过阻断其传导抑制心肌纤维化.
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复健片对大脑中动脉闭塞大鼠脑组织Rho/ROCK的调控作用
目的:观察复健片对脑梗死大鼠脑组织RhoA、ROCK2、MLCP蛋白的影响,探讨其解除神经再生抑制的机制.方法:30只SD大鼠随机分为正常对照组(5只)、假手术组(5只)、模型组(10只)和药物组(10只).用改良的Longa E Z法制备大脑中动脉阻塞大鼠模型,药物组灌胃给予复健片水溶液,余各组分别灌胃给予同剂量的蒸馏水.用Western Blot观察模型大鼠梗死周边区脑RhoA、ROCK2、MLCP蛋白的表达.结果:药物组大鼠脑组织中RhoA、ROCK2、MLCP表达虽然较正常对照组增多,但较模型组明显减少,二者之间有显著性差异(P＜ 0.01).结论:复健片可抑制Rho/ROCK通路信号因子在脑梗死后的表达,从而促进神经发生.
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针药合用对神经性耳鸣的临床疗效及作用机理研究
目的:探讨聪耳通窍汤加针刺治疗神经性耳鸣的临床疗效及作用机制.方法:选择我院耳鼻喉科、五官科神经性耳鸣患者93例,按随机数字表法分为针刺组(31例)、聪耳通窍汤组(31例)及针药合用组(31例),3组均治疗3个疗程,每个疗程为10 d,观察治疗前后患者血液中5-HT及Rho/ROCK信号通路的变化.结果:3个疗程后对患者治疗前后进行比较,针刺组有效率71％,中药复方组55％,针药合用组87.1％,其中针药合用组相对于其他2组差异有统计学意义;通过HPLC检测患者血液中5-HT发现,治疗后相对于治疗前差异有统计学意义,western blot检测Rho/ROCK信号通路发现,治疗后患者ROCK蛋白明显下降.结论:针药合用治疗神经性耳鸣差异有统计学意义,其治疗效果可能与抑制5-HT/Rho/ROCK信号通路有关.
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PLGF通过激活Rho/ROCK信号通路介导人脑微血管内皮细胞间紧密连接开放
目的 探讨胎盘生长因子(PLGF)影响人脑微血管内皮细胞(HBMEC)间通透性的分子机制.方法 利用HBMEC构建体外血脑屏障模型,测定跨内皮细胞电阻抗(TEER)及检测HRP通过率,分析PLGF对血脑屏障完整性的影响；用Western blot法及免疫荧光法检测HBMEC间紧密连接相关蛋白质occludin和ZO-1的表达及分布,用蛋白激酶抑制剂干预和Western blot法检测Rho蛋白活性.结果 25 ng/mL PLGF 30 min显著降低体外血脑屏障模型TEER,使其通透性增高(P＜0.05)；增加S-occludin表达的同时降低了IS-occludin的表达,使ZO-1蛋白在细胞周边分布减少；此外,ROCK蛋白激酶抑制剂Y27632抑制了PLGF引起的体外血脑屏障透过性增高(P＜0.05),并激活细胞内Rho激酶活性.结论 PLGF通过激活HBMEC内Rho/ROCK信号通路,影响HBMEC间紧密连接完整性,进而改变血脑屏障的通透性.
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Rho/ROCK在血管平滑肌细胞迁移中的作用
血管平滑肌细胞(VSMC)从中膜向内膜的迁移是动脉粥样硬化斑块形成、血管狭窄以及血管介入术后再狭窄的关键步骤.Rho相关激酶(Rho-associated kinase,ROCK)作为RhoA下游的重要效应分子,通过调控微丝骨架组装和局部连接而在VSMC迁移和血管重构中发挥重要作用.醛固酮、一磷酸鞘氨醇、血小板源生长因子和血管紧张素Ⅱ等生物活性物质经相应受体激活Rho/ROCK信号通路调控VSMC迁移.研究Rho/ROCK在VSMC迁移中的作用对理解动脉粥样硬化、高血压等心血管疾病的病生理过程具有重要意义.
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阻断Rho/ROCK信号传导通路治疗大鼠脊髓损伤的实验研究
目的 观察阻断Rho/ROCK信号传导通路对大鼠脊髓损伤的治疗作用.方法 大鼠脊髓损伤动物模型随机分为3组,每组40只:1)假手术组:大鼠只行椎板切除术,不进行脊髓横断;2)对照组:大鼠脊髓横断损伤,腹腔注射生理盐水;3)Fasudil组:大鼠脊髓横断损伤,腹腔注射Fasudil.于不同时间点用RT-PCR检测RhoA mRNA水平、HE染色组织病理学观察及NF免疫荧光染色评价.结果 与对照组相比,脊髓损伤腹腔注射Fasudil组,BBB评分显著升高,RhoA mRNA水平显著降低,可见大量NF阳性纤维,部分纤维穿过脊髓横断部位,向尾端延伸.结论 阻断Rho/ROCK信号传导通路能较好地促进轴突再生及损伤脊髓运动和传导功能的恢复.
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Rho/Rho激酶信号通路与糖尿病肾病
糖尿病肾病(DN)是糖尿病重要的微血管并发症之一,其发病机制是多种因素共同作用的结果.近年来发现Rho/Rho激酶(Rho/ROCK)信号通路与多种组织重构如血管、心肌、肾纤维化等相关.高糖能够刺激肾脏细胞内Rho/ROCK信号通路的激活,后者通过调控转录因子的DNA结合活性上调多种基因的表达,从而引起各种炎性反应及肾小球纤维化,而应用此信号通路选择性抑制剂后可明显改善DN的发生和发展,从而认为Rho/ROCK信号转导通路可能在DN的发病机制中起关键作用.
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Rho/ROCK通路在脊髓损伤后神经轴突再生中的研究进展
通过介绍Rho/ROCK信号通路的相关概念及其对神经轴突再生的影响和作用机制，为研究通过抑制此信号通路来促进神经的再生及功能的恢复，从而进一步为临床治疗神经损伤及其他神经系统疾病提供理论依据。
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中枢神经轴突再生的细胞内信号转导机制研究进展
轴突不能有效再生是中枢神经系统损伤后功能缺损的主要原因,影响中枢神经轴突再生的原因比较复杂,细胞内级联信号转导通路的调控作用可能是其核心机制.近年来研究发现,Rho/ROCK和cAMP - PKA级联信号转导通路在调控轴突再生具有重要作用,现就轴突再生过程中Rho/ROCK和cAMP - PKA级联信号转导、调控机制进行阐述,为探讨中枢神经系统急性损伤及神经退行性疾病的治疗策略提供新的思路.
关键词： 轴突再生 信号转导 Rho/ROCK cAMP - PKA -
鳖甲煎丸通过RhoA/ROCK信号通路抑制肝癌细胞血管形成拟态的生成
目的 观察鳖甲煎丸对肝癌细胞血管生成拟态(VM)形成的作用及其对RhoA/ROCK通路信号分子和VE-cadherin、PI3K表达的影响,探讨鳖甲煎丸抑制肝细胞肝癌(HCC)转移侵袭的分子机制.方法 将40只雄性SD大鼠随机分为4组,分别以鳖甲煎丸高(H)、中(M)、低剂量(L)及生理盐水(N)灌胃,4d后采血,制备药物血清.肝癌HepG2细胞体外Matrigel三维培养,药物血清及RhoA/ROCK抑制剂Y-27632(P)干预24 h后,应用图像采集和分析系统检测各组VM形成情况,采用Western blotting技术检测各组细胞RhoA和ROCK1的表达水平,ELISA法检测各组细胞培养上清中VE-cadherin、PI3K的含量.结果 鳖甲煎丸可显著抑制HepG2细胞VM的生成,且VM管径显著高于阴性对照组(P＜0.01),Y-27632完全抑制了HepG2细胞VM的生成(P＜0.01);同时,鳖甲煎丸和Y-27632都能够抑制HepG2细胞中RhoA、ROCK1的表达(P＜0.05),降低细胞培养上清中VE-cadherin、PI3K的表达水平(P＜0.05).结论 鳖甲煎丸可抑制肝癌细胞VM的形成,其作用机制可能与其能抑制三维培养的HepG2细胞中RhoA/ROCK通路信号分子及VE-cadherin、PI3K的表达有关.
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Rho/Rho激酶信号通路介导新生大鼠神经元缺氧缺血损伤的作用机制研究
目的:探讨Rho/Rho激酶(ROCK)信号通路在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中的作用,为新生儿HIBD的治疗提供实验衣据.方法:以体外培养的新生SD大鼠皮质神经元作为研究对象,观察缺氧复氧(H/R)损伤后神经元突起长度、神经元RhoA和ROCK等蛋白的表达量、神经元细胞骨架等指标.结果:缺氧缺血损伤后神经元突起长度明显缩短(P＜0.05),法舒地尔处理后神经元长度较H/R组明显延长(P＜0.05).缺氧缺血损伤后神经元RhoA和ROCKII等蛋白的表达量显著增加(P＜0.05),法舒地尔干预后蛋白表达呈低水平且35 μmol组作用显著.缺氧缺血损伤后细胞骨架F-actin的表达减少且分布丧失规律性,fasudil干预后可部分逆转细胞骨架的分布且表达量显著增加.结论:缺血缺氧损伤通过激活Rho/ROCK信号通路引起神经元突起回缩、细胞骨架降解进而引起细胞凋亡,抑制Rho/ROCK信号通路则可促进神经元突起延长、细胞骨架重构,从而发挥保护作用.
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Y-27632对小鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响
目的：观察ROCK抑制剂Y－27632对体外缺血清培养的小鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响。方法原代分离培养小鼠骨髓单个核细胞，应用流式细胞术对细胞CD29、CD44、CD90、CD34表面标志进行检测。成骨、成脂肪、成软骨分化后分别进行茜素红、油红O及甲苯胺蓝染色。将第3代细胞随机分为3组：对照组、模型组（无血清）、Y－27632组（无血清＋10μmol／L Y－27632），分别于培养后24、48、72 h收集细胞进行流式细胞仪TUNEL法观察各组细胞凋亡率，培养后24 h Western blot法检测ROCK1及cleaved caspase 3表达。结果分离的骨髓单个核细胞CD29（＋）、CD44（＋）、CD90（＋）、CD34（－），三系分化后茜素红染色（＋），油红O染色（＋），甲苯胺蓝染色（＋）。 Y－27632能明显降低由于缺血清培养导致的BMSCs的凋亡率（P＜0.01），Y－27632能够明显降低ROCK及cleaved－caspase 3表达（ P＜0.01）。结论分离的骨髓单个核细胞就是骨髓间充质干细胞。Y－27632能够抑制由于缺血清培养导致的小鼠骨髓间充质干细胞的凋亡。
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Rho／Rock 信号通路在 TGF －β1刺激大鼠颈内动脉平滑肌细胞表型转化中的作用及可能机制
目的：探讨Rho／Rock信号通路在TGF－β1刺激大鼠颈内动脉平滑肌细胞（ ISMC）表型转化中的作用及可能机制。方法 ISMC随机分为两组：空白对照组和TGF－β1刺激组，以不同浓度（1、5、10、20、50 ng／mL） TGF－β1刺激细胞24 h，用荧光实时定量PCR法检测转凝蛋白（ SM22α）和骨桥蛋白（ OPN） mRNA的表达；再以上述得出的佳TGF－β1浓度刺激细胞，在不同时间（6、12、24、48 h）收集细胞，采用同样方法检测SM22α、OPN mRNA的表达水平；经无血清DMEM高糖培养基静止培养24 h后，随机分为以下各组：空白对照组、TGF－β1（10 ng／mL）刺激组及TGF－β1（10 ng／mL）＋法舒地尔（Fasudil）（10、30、50μmol／L）组，分别采用FQ－RT－PCR法检测SM22α、OPN、RhoA、Rock－1 mRNA的表达；Western blot法检测SM22α、OPN蛋白表达水平；根据实验结果用透射电镜观察各组细胞超微结构的相应变化。结果10 ng／mL TGF－β1刺激大鼠ISMCs 24 h达顶峰。 TGF－β1＋Fasudil组SM22αmRNA和蛋白表达水平较TGF－β1刺激组高（P＜0．01），且在Fasudil浓度为30μmol／L时达到高峰，随后下降；TGF－β1＋Fasudil组OPN mRNA表达水平较TGF－β1刺激组低，呈浓度依赖性，至30μmol／L达低（ P＜0．05），后又呈上升趋势。 Western blot结果显示TGF－β1＋Fasudil组的OPN蛋白表达水平较TGF－β1刺激组低，至Fasudil浓度为30μmol／L达低（ P＜0．05）。同时FQ－RT－PCR结果显示TGF－β1刺激组的RhoA和Rock－1 mRNA表达水平较空白对照组高（P＜0．01），在Fasudil浓度为30μmol／L时TGF－β1＋Fasudil组的RhoA和Rock－1mRNA表达水平较TGF－β1刺激组低（ P＜0．05）。电镜下观察各组细胞显示，空白对照组（×20000） ISMC高尔基体肥大，线粒体及粗面内质网正常，10 ng／mL TGF－β1刺激后细胞内线粒体增多，在上述基础上加入30μmol／L Fasudil后电镜下观察细胞又回到正常成熟结构状态。结论10 ng／mL TGF－β1刺激大鼠ISMC 24 h可成功刺激其表型转化，且该过程可能通过Rho／Rock信号通路实现；Rho／Rock信号通路抑制剂Fasudil可增加TGF－β1刺激的SM22α的表达，下调OPN的表达水平，抑制大鼠ISMCs表型转化。
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Rho/ROCK通路在肿瘤转移中的作用及靶向治疗研究进展
肿瘤转移是导致恶性肿瘤患者死亡的主要原因,因此成为当前肿瘤性疾病临床诊治中的难点和挑战.不同组织来源、病理类型的肿瘤在转移过程中其驱动基因、微环境信号、遵循的解剖路径各不相同,转移机制的复杂性和异质性给防控肿瘤转移带来巨大困难.
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Rho/ROCK信号通路参与肝纤维化形成机制的研究进展
Rho小G蛋白属于小G蛋白超家族,主要功能是调节细胞骨架.近年研究发现它可以通过激活下游的关键靶效应分子-Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(Rho associated coiled coil forming protein kinase,ROCK)调节肝星状细胞的多种生物学行为,包括表型、运动、生长分裂、凋亡、基因表达等,从而激活肝纤维化发生的中心环节.
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Rho/ROCK通路参与内毒素急性肺损伤的研究进展
急性肺损伤(acute lung injury,ALI)急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是指由心源性以外的各种肺内外致病因素所导致的急性低氧性呼吸功能衰竭,是临床常见的呼吸系统急危重症。Rho/ROCK信号通路是体内普遍存在的一条信号通路,通过结合GTP激活或者结合GDP失活来发挥"分子开关"的作用,广泛参与细胞形态维持、粘附与迁移、血管生成等多种生物学行为。本文就目前对Rho/ROCK通路的了解及其与血管通透性、炎症相关的研究进展进行综述。
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Rho/ROCK通路参与内毒素急性肺损伤的研究进展
急性肺损伤(acute lung injury，ALI)急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是指由心源性以外的各种肺内外致病因素所导致的急性低氧性呼吸功能衰竭，是临床常见的呼吸系统急危重症。Rho/ROCK信号通路是体内普遍存在的一条信号通路，通过结合GTP激活或者结合GDP失活来发挥"分子开关"的作用，广泛参与细胞形态维持、粘附与迁移、血管生成等多种生物学行为。本文就目前对Rho/ROCK通路的了解及其与血管通透性、炎症相关的研究进展进行综述。
