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氟比洛芬酯对瑞芬太尼诱发切口痛大鼠疼痛过敏时脊髓p38 MAPK表达的影响
目的:观察氟比洛芬酯对切口痛大鼠疼痛过敏时脊髓丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响.方法:取成功建立切口痛模型的SD大鼠40只,随机分为5组(n=8):基础组(K组)、瑞芬太尼组(R组)、氟比洛芬酯1mg/kg组(F1组)、氟比洛芬酯2mg/kg组(F2组)及氟比洛芬酯3mg/kg组(F3组).实验开始时K组和R组大鼠分别在腹部皮下注射生理盐水0.2ml,F1、F2、F3组大鼠分别腹部皮下注射氟比洛芬酯1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg;5组大鼠均在戊巴比妥钠麻醉下行切口痛手术,K组大鼠切口痛手术后腹部皮下泵注生理盐水1μg/(kg·min)2h,其余4组大鼠腹部皮下泵注瑞芬太尼1μg/(kg·min)2h.所有大鼠均测定术前24h及术后6h、24h、48h左后爪的热缩足反射潜伏期(TWL);术后48h行为学检测后每组选取2只大鼠拉颈处死取L4～5脊髓处理后行Western blot检测.结果:5组大鼠切口侧跖底TWL基础值比较差异无统计学意义(P>0.05);与K组比较,R组大鼠在术后6h、24h、48h右后侧跖底TWL值降低(P<0.05).与R组比较,F2组 、F3组大鼠右后侧跖底TWL值增高(P<0.05);与K组比较,R组大鼠脊髓背角p38MAPK蛋白表达明显升高(P<0.05),与R组比较,F2、F3组大鼠脊髓背角p38MAPK蛋白表达显著降低(P<0.05).结论:氟比洛芬酯能在一定程度上抑制由瑞芬太尼诱发的切口痛大鼠痛觉过敏时脊髓p38MAPK蛋白的表达,这可能是氟比洛芬酯减轻瑞芬太尼诱发的疼痛过敏的机制之一.
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p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在羧甲基壳聚糖保护一氧化氮诱导软骨细胞凋亡中的作用及机制研究
目的 研究羧甲基壳聚糖(CMCS)对一氧化氮诱导大鼠软骨细胞凋亡的影响,并探索p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路在该过程中的作用及其机制.方法 体外培养大鼠膝关节软骨细胞,通过Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定软骨细胞；通过不同浓度硝普钠诱导软骨细胞凋亡；实验分为对照组、硝普钠处理组、硝普钠+不同浓度CMCS处理组、硝普钠+p38MAPK抑制剂SB203580处理组.通过流式细胞技术检测软骨细胞凋亡率,Hoechst33342染色观察凋亡细胞核形态变化,罗丹明染色观察软骨细胞线粒体膜电位的改变情况,通过蛋白印迹法检测p38与磷酸化p38(p-p38)的表达.采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 1～3 mmol/L硝普钠可以不同程度地诱导软骨细胞发生凋亡,随着硝普钠浓度的增加凋亡率也增加,当硝普钠浓度为3 mmol/L时其凋亡率为69.8％(P＜0.05)；硝普钠可以增加软骨细胞核碎裂发生率,其核碎裂细胞数明显高于对照组；硝普钠可降低软骨细胞线粒体膜电位水平,与对照组比较差异明显；硝普钠可以增加软骨细胞内p-p38的表达,与对照组比较增加4.3倍.不同浓度CMCS可以降低硝普钠诱导软骨细胞凋亡率,分别为51.0％、29.9％、15.2％,与3mmol/L硝普钠诱导组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；不同浓度CMCS可以降低硝普钠诱导软骨细胞核碎裂的数量；CMCS可以增加硝普钠诱导凋亡软骨细胞线粒体膜电位；CMCS可降低硝普钠诱导凋亡软骨细胞内p-p38表达水平.结论 CMCS对硝普钠诱导软骨细胞凋亡具有一定的保护作用,是通过抑制p38MAPK信号通路活性来完成的.
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大鼠肾脏缺血预处理中P38 MAPK、iNOS、COX2间信号转导关系的研究
目的:探讨大鼠肾脏缺血预处理中 P38 MAPK、iNOS与 COX2 间的信号转导关系. 方法:雄性 wistar 大鼠66只,随机分为6组,分别为:假手术( sham)组,缺血再灌注( IR)组,缺血预处理+缺血再灌注( IPC)组,SB203580药物干预(SB203580)组,AG药物干预(AG)组,NS398药物干预(NS398)组,在再灌注后24 h、48 h两个时间点取材,用苦味酸法测定血清肌酐反映肾功能变化情况;用Western blot法检测再灌注后48 h肾组织P38 MAPK、iNOS与COX2 蛋白的表达,进行半定量分析. 结果:血肌酐在IPC组较IR组低(P<0. 05)尤其在IPC后48 h明显(P<0. 01);P38MAPK、iNOS与COX2 在sham组,IR组,IPC组均有表达,尤在IPC组表达明显(P<0. 01);在SB203580组无P38MAPK蛋白的表达,iNOS、COX2 的表达均较IPC组低(P<0. 05);在AG组无iNOS蛋白的表达,COX2 蛋白的表达较IPC组低(P<0. 05);在NS398组无COX2 蛋白表达, P38MAPK、iNOS蛋白的表达与IPC组相差不明显(P>0. 05),在 AG与 NS398 组 P38 MAPK蛋白表达与 IPC组相差不明显(P>0.05). 结论:缺血预处理时P38MAPK、iNOS与COX2 蛋白均表达、活化,在其信号转导关系中,P38MAPK是iNOS的上游、并通过iNOS活化介导COX2 表达.
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P38MAPK 信号通路在高糖导致人腹膜间皮细胞 PARP -1激活、细胞外基质聚集及转分化的作用
目的：探讨人腹膜间皮细胞株 HMrSV5在高糖刺激下，P38MAPK 信号通路的活化情况及 PARP -1的蛋白表达情况。探讨 P38MAPK 抑制剂对腹膜间皮细胞外基质聚集及细胞转分化的作用及对 PARP -1的活性变化。方法：无血清培养 HMrSV5细胞株16~24 h 后，分别用高糖（终浓度138 mmol/ L 葡萄糖）刺激0 m、5 m、30 m、1 h、2 h、8 h、24 h，并选择等渗的甘露醇作为对照用。Western Blot 分别检测不同时间总的 P38MAPK 及磷酸化的 P38MAPK 的蛋白表达水平。同时用Western blot 检测在不同时间点 PARP -1的蛋白表达情况。无血清培养 HPMCs16~24 h 后，分为4各组：（1）低糖组（5．6 mmol/ L 葡萄糖）；（2）刺激组（138 mmol/ L 葡萄糖）；（3）抑制剂组（138 mmol/ L 葡萄糖+ SB203580P38抑制剂，浓度为10μmol/ L）；（4）DMSO 对照组。在24 h 收取细胞用 Western blot 检测 P38MAPK、PARP -1、FN、PAI -1、E - cadherin 及α-SMA 的蛋白水平变化。结果：高糖以时间依赖的方式刺激 HPMCs 后，磷酸化的 P38MAPK 表达增加。PARP -1的表达在高糖刺激下也呈时间依赖性增高，24 h 已很明显。用 P38MAPK 抑制剂 SB203580后，PARP -1及 FN、PAI -1及α- SMA 也下调，E - cadherin 表达上调，差异有统计学意义（P <0．05）。结论：高糖可使得人腹膜间皮细胞 P38MAPK 通路的活化。运用P38的抑制剂，均能使得 PARP -1活性下调，同时逆转腹膜间皮细胞外基质聚集及 HPMCs 转分化。这提示在高糖刺激腹膜间皮细胞时，P38MAPK 参与了 PARP -1的活化，并参与腹膜间皮细胞外基质聚集及人腹间皮细胞转分化。
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阿霉素诱导胰腺癌BxPC-3细胞凋亡过程中p38MAPK的表达
目的研究阿霉素诱导胰腺癌细胞凋亡过程中p38MAPK表达的变化,探讨p38MAPK在其中的作用.方法用膜联蛋白V-PI(annexinV-PI)染色及流式细胞技术分析阿霉素及应用p38MAPK抑制剂SB203580对胰腺癌细胞凋亡的影响,同时利用免疫细胞化学法观察经阿霉素及SB203580处理人胰腺癌BxPC-3细胞后,p38MAPK的表达水平.结果SB203580(20 μmol/L)干预组胰腺癌BxPC-3细胞凋亡率为(20.1±1.4)%,阿霉素作用24 h后诱导胰腺癌BxPC-3细胞凋亡,凋亡率为(31.1±2.7)%,加用SB203580抑制p38MAPK通路后可增强阿霉素诱导的凋亡作用,凋亡率达(40.4±2.6)%.采用单因素方差分析F=136.79,组间比较组与组之间差异有统计学意义.以20μmol/L阿霉素作用BxPC-3胰腺癌细胞24 h后可见p38MAPK在细胞染色后呈现深褐色颗粒散在分布于部分或整个细胞核及细胞质内,联合应用SB203580后可见p38MAPK表达颗粒密度减低,数量减少.结论阿霉素可以活化p38MAPK通路,p38MAPK可能起到保护胰腺癌BxPC-3细胞逃避阿霉素诱导的凋亡,阻断该通路可增强阿霉素诱导胰腺癌细胞凋亡的作用.
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P物质通过p38MAPK途径激活小胶质细胞参与大鼠热痛敏感的形成
目的 观察P物质激活脊髓小胶质细胞过程中p38MAPK的磷酸化,以及活化的脊髓小胶质细胞在参与大鼠热痛觉敏感产生的作用.方法 以离体培养的原代脊髓小胶质细胞为研究对象,用P物质直接孵育培养原代脊髓小胶质细胞;免疫荧光化学法检测形态变化观察P物质处理后的脊髓小胶质细胞的活化,免疫荧光化学法检测P物质处理的脊髓小胶质细胞p38MAPK的磷酸化.将P物质激活的小胶质细胞和未处理的对照小胶质细胞分别注入SPF级雄性SD大鼠(体质量180-200 g,n=6)脊髓蛛网膜下腔,通过检测大鼠缩足反射潜伏期观察对热痛敏感的影响.结果 P物质作用于原代培养的脊髓小胶质细胞后,小胶质细胞活化,表现为形态改变:突起回缩,胞体变大,标志性抗原OX-42表达增多,同时磷酸化的p38MAPK也增多;与注射前[(10.91±0.51)s]相比,注射活化的小胶质细胞的大鼠热刺激缩足反射潜伏期从6 h[(8.65±0.35)s]开始缩短,并可持续至24 h[(7.38±0.29)s](P<0.05).结论 P物质通过激活p38MAPK信号通路活化脊髓小胶质细胞参与大鼠脊髓热痛觉敏感的形成.
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紫杉醇通过p38MAPK通路对大鼠肾小管上皮细胞株自噬和凋亡的影响
目的 探讨紫杉醇(Taxol)通过p38MAPK通路对体外培养的大鼠肾小管上皮细胞株(RPTC)自噬和凋亡的作用.方法 体外培养的RPTC,将脂多糖(LPS)作为诱导剂,紫杉醇作为治疗物,分组进行检测自噬水平;分别用紫杉醇、p38MAPK抑制剂SB202190治疗LPS处理的RPTC,测定RPTC的自噬、凋亡和caspase活性.结果 Taxol能够通过降低p38磷酸化,上调LPS诱导的自噬水平,下调LPS诱导的RPTC凋亡.而SB202190逆转紫杉醇对LPS诱导的RPTC细胞凋亡的保护作用.结论 紫杉醇可能通过抑制p38MAPK活化,上调LPS诱导的自噬,减少LPS诱导的RPTC凋亡.
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MAPK转导通路在肿瘤发生发展中的作用
信号转导通路与肿瘤发病机制的关系已成为研究热点.丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传导通路,参与细胞的生长、发育、分化、凋亡等一系列细胞生理活动,该通路异常活化,导致细胞分化、调亡功能丧失,引起细胞恶性转化,异常增殖、肿瘤发生、侵袭力增强、导致肿瘤转移等.本文综述MAPK信号传导通路与肿瘤发病机制相关性研究,为治疗肿瘤寻找新的靶点提供实验依据.
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红茶多酚对主动脉内皮细胞增殖抑制作用
目的 观察红茶多酚对牛主动脉内皮细胞(BAECs)增殖的影响,并探讨其作用机制.方法 用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性,用蛋白免疫印迹测定p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化表达.结果 不同浓度红茶多酚对牛主动脉内皮细胞(BAECs)均有明显抑制作用,呈剂量时间依赖关系;红茶多酚(0.4mg/L) 以降低佛波酯(PMA)或血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激的细胞增殖(P＜0.05),这种作用可以用还原型辅酶Ⅱ(NADPH)化酶抑制剂apocynin或p38MAPK阻断剂SB203580预培养来实现;红茶多酚可以推迟血管紧张素Ⅱ刺激的p38MAPK磷酸化.结论 红茶多酚具有抑制内皮细胞增殖的作用,抑制PKC-NADPH氧化酶-p38MAPK信号途径可能是其重要机制之一.
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眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠MAPK信号转导通路的影响
目的:观察眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑缺血半暗带组织中MAPK信号转导通路的变化,探讨其作用机制.方法:健康SPF级雄性SD大鼠200只,体重(280 ±20)g.按体重随机分组,分为空白对照组(15只)、假手术组(40只)和模型复制组(145只).对模型复制组145只大鼠采用线栓法进行模型复制,模型评价后,筛选模型合格的大鼠进行亚组划分,分别为模型对照组、眼针对照组.即共分为4组:正常组、假手术组、模型组、眼针组.给予眼针组大鼠再灌注即刻进行针刺治疗之后每8h进行一次针刺治疗,至再灌注3h、24h、72 h,分别取材进行相关指标检测.采用Westem-blot法检测各组大鼠半暗带脑组织中磷酸化P38MAPK、ERK1/2和JNK蛋白表达水平.采用RT-PCR法检测各组大鼠半暗带脑组织中P38MAPK、ERK1/2和JNK mRNA表达水平.结果:与空白对照组比较,模型对照组和眼针组大鼠脑组织中P38MAPK、ERK1/2、JNK磷酸化水平及其mRNA表达水平均显著升高(P＜0.01);与模型对照组比较,眼针组大鼠脑组织中P38MAPK、ERK1/2、JNK磷酸化水平及其mRNA表达水平显著下降(P＜0.05).结论:眼针可能通过抑制p38-MAPK信号转导通路而发挥其脑保护作用.
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益气化瘀清热方及其拆方对大鼠肾小球系膜细胞表达p38MAPKmRNA及其蛋白的影响
目的:对益气化瘀清热方进行拆方,通过观察各类含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导下体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(primary mesangial cells,MsC)表达p38MAPKmRNA及其蛋白的影响,探讨不同中药的作用强度以及益气化瘀清热方治疗肾小球肾炎的作用机制.方法:RT-PCR法检测各组合药血清对MsC表达的p38MAPKmRNA.Wersten Blot法检测各组合药血清对大鼠MsC表达的p38MAPK蛋白.结果:①RT-PCR结果显示:各组合药血清均能抑制体外培养的MsC表达p38MAPKmRNA,复方组作用强(P<0.01),清热组与化瘀组比较无明显差异(P＞0.05),但优于益气组,差异显著(P＜0.01);②Wersten印迹结果显示:各组含药血清均能抑制体外培养的MsC表达p38MAPK蛋白,复方组作用强(P＜0.01),清热组与化瘀组比较无明显差异(P＞0.05),但优于益气组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:各类含药血清对大鼠MsC表达p38MAPK mRNA及其蛋白的影响在不同组中药的比较中,复方组作用强,化瘀组和清热组的作用明显优于益气组.
关键词： 肾小球系膜细胞 p38MAPK mRNA p38MAPK -
针刀疗法对第三腰椎横突综合征模型大鼠脊髓及DRG内p38MAPK/CREB信号通路的影响
目的:观察针刀疗法对第三腰椎横突综合征模型大鼠脊髓及DRG内p-p38MAPK、p-CREB的影响.方法:将36只SD大鼠分为正常组、模型组、电针组、针刀组,于造模后对相应组别进行针刀和电针干预.于造模后28 d,处死各组大鼠,取腰段脊髓及DRG,用Western Blot法检测p-p38MAPK、p-CREB的变化,并对结果进行统计学分析.结果:针刀组与电针组p-p38MAPK、p-CREB表达与模型组比较呈降低趋势.结论:针刀疗法影响第三腰椎横突综合征模型大鼠疼痛的机制可能与p38MAPK/CREB信号通路有关.
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升降散改善脓毒症大鼠心肌损伤的机制研究
目的:中药升降散改善脓毒症大鼠心肌损伤的机制研究.方法:雄性成年SD大鼠随机分为正常组、模型组、升降散组和p38抑制组.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型,术后4、8、12、24 h进行观察.升降散组和p38抑制组大鼠分别于术前2h和术后12h给予升降散灌胃和SB203580皮下注射.腹主动脉留取血标本和心脏组织作相关检测.观察和检测各时间节点:血清TNF-α水平,心肌TNF-αmRNA、iNOS mRNA和caspase-3表达,心肌病理变化.结果:(1)血清炎症因子:模型组大鼠血清TNF-α升高,升降散组各时间点TNF-α有所改善(P＜0.05),升降散组较p38抑制组TNF-α在4h和12 h改善更明显.(2)心肌p38MAPK及相关因子:模型组大鼠心肌p-p38MAPK水平升高,升降散组各时间点p-p38MAPK水平均有所改善(P＜0.05).模型组大鼠心肌caspase-3升高,p38抑制组在8h、12 h和24 h均有所改善(P＜0.05),升降散组在8h和12 h有所改善(P＜0.05).模型组大鼠心肌TNF-αmRNA和iNOS mRNA升高,升降散组和p38抑制组各时间点均有所改善(P＜0.05),升降散组24 hTNF-αmRNA下降优于p38抑制组(P＜0.05),升降散组和p38抑制组iNOS mRNA下降比较无差异(P＞0.05).(3)心肌病理变化:脓毒症大鼠出现心肌细胞变性、肌浆浓缩、间质水肿等病理变化,升降散组和p38抑制组大鼠心肌病理变化有所改善.结论:升降散改善脓毒症心肌损伤的分子机制可能是其下调脓毒症早期大鼠心肌p-p38MAPK水平,降低TNF-αmRNA和iNOS mR-NA表达,减少caspase-3水平,抑制过度炎症反应和细胞凋亡.
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大鼠肾缺血-再灌注后p38MAPK蛋白表达的变化及银杏达莫注射液对其的影响
目的:探讨银杏达莫注射液对肾缺血-再灌注损伤的保护作用及机制.方法:肾缺血1h再灌注1h建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型,用银杏达莫注射液分别按剂量0.9、1.8,3.6mL/kg预处理7天.通过检测肾组织丙二醛含量、超氧化物歧化酶的活性及血肌酐、血尿素氮的含量.电镜下观察各组肾组织的形态学变化,West-ern印迹法观察p38 MAPK蛋白的活化情况.结果:缺血再灌注损伤后,肾组织出现明显病理改变,肾组织丙二醛含量升高,超氧化物歧化酶活性下降,血肌酐、尿素氮水平升高,肾组织P-p38MAPK蛋白水平显著上升.银杏达莫注射液预处理能降低血肌酐、尿素氮水平及肾组织丙二醛含量,增强超氧化物歧化酶活性和下调P-p38MAPK蛋白水平,与模型组比较有显著性差异(P<0.05和P<0.01).电镜观察肾组织的病理改变也明显好转.银杏达莫注射液不同剂量组之间无明显差异.结论:银杏达莫注射液对肾缺血再灌注损伤有良好的保护作用,其机制可能是通过清除氧自由基、减轻脂质过氧化反应而下调p38MAPK蛋白的表达以减轻再灌注损伤程度,进而大鼠肾功能.
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外源性酸性成纤维细胞生长因子干预肠缺血-再灌注损伤中p38MAPK和成纤维细胞生长因子受体2的表达
背景:酸性成纤维细胞生长因子可以促进多种创面愈合,在内脏损伤修复中起重要促进作用.目的:观察外源性酸性成纤维细胞生长因子干预肠缺血-再灌注损伤大鼠后p38MAPK和成纤维细胞生长因子受体2的表达.方法:以大鼠肠系膜上动脉夹闭45 min造成肠缺血-再灌注损伤模型,于再灌注即刻应用改构体酸性成纤维细胞生长因子进行干预.分别于再灌注2,6,12,24 h取大鼠小肠组织标本,用于实验.结果与结论:在正常大鼠,成纤维细胞生长因子受体2主要分布在小肠绒毛上皮细胞的肠腔侧、侧壁和小肠隐窝朝向隐窝腔的一侧细胞膜上.缺血-再灌注初期,p38MAPK蛋白及成纤维细胞生长因子受体2蛋白和mRNA的表达未发生明显变化,随着再灌注时间的延长其逐渐增强,并于再灌注后6~12 h达高峰.经酸性成纤维细胞生长因子治疗后,大鼠小肠组织p38MAPK蛋白及成纤维细胞生长因子受体2蛋白和mRNA的表达进一步增强,小肠黏膜损伤程度减轻.说明酸性成纤维细胞生长因子可通过上调成纤维细胞生长因子受体2和p38MAPK的表达促进肠缺血-再灌注损伤的修复.
关键词： 酸性成纤维细胞生长因子 受体 p38MAPK 缺血-再灌注损伤 小肠 -
氧化应激对大鼠髓核细胞凋亡的影响
背景:细胞凋亡在椎间盘退变过程中发挥重要作用,而导致细胞凋亡的因素很多,氧化应激是导致细胞凋亡的一个重要因素.目的:从细胞内信号转导水平验证过氧化氢对大鼠髓饮细胞氧化应激损伤的影响.设计、时间及地点:单一样本观察.试验于2008 03/10在山东省创伤骨科研究所完成.材料:p38MAPK特异性阻断刺(SB203580)、JNK特异性阻断剂(SP600125)购自碧云天生物技术有限公司:大鼠椎间盘来自2只新生24 h SD大鼠.方法:原代培养大鼠髓核细胞,将生长良好的髓核细胞制成细胞悬液,随即分为4组:H202组:用0,50.100,200,400,800μmol/L H2O2刺激:对照组:不加刺激的细胞:SB203580+H2O2组:给予特异性p38MAPK阻断剂SB203580预孵育细胞,再给予H2O2刺激:SP600125+H2O2组:给予特异性JNK阻断剂SP600125预孵育细胞,再给予H2O2刺激.上述处理后检测相关指标.主要观察指标:以免疫组织化学检测P-p38和P-JNK的表达情况及表达位置:Western印迹法检测SAPKJJNK、p38MAPK及其磷酸化组分的表达.结果:H2O2能够激活髓核细胞内p38和JNK的活性:SB203580能够有效地抑制p38MAPK的活性,而SP600125则能够有效的抑制JNK的活性;免疫荧光显示P-p38MAPK和P-JNK在细胞质和细胞核均有表达中,而对照组未发现.结论:大鼠髓核细胞受氧化应激后可通过p38MAPK和JNK通路导致细胞凋亡.
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p38MAPK信号通路与应力介导成肌细胞的凋亡
背景:在体内条件下,细胞力学的功能研究因其所处生理环境的复杂性、实验条件的不易控制而很难得到满意结果.目的:在成功构建成肌细胞体外培养-力学刺激模型的基础上,研究p38MAPK信号通路在成肌细胞凋亡中的作用及其机制.方法:将体外培养的C2C12细胞分为对照组和SB203580组,SB203580组中加入 20 mmol/L的p38MAPK抑制剂SB203580.应用细胞应力加载装置Flecell Strain Unit-5000T给细胞提供15%的力值,分别施加0,6,12,24 h的周期性张应力.每分钟10个循环,每循环包括3 s牵张,3 s松弛.Hoechst 33258染色观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测促凋亡基因bax mRNA的表达;Western blot检测信号通路中p38MAPK和p-p38MAPK蛋白的表达.结果与结论:随着加力时间的延长,细胞逐渐出现核固缩及凋亡小体,凋亡率增加(P < 0.05),bax mRNA表达增多(P < 0.05);细胞p38MAPK和p-p38MAPK蛋白均在加力6 h达到低,此后逐渐升高.p38MAPK抑制剂SB203580可抑制加力引起的细胞凋亡,减少bax mRNA及p38MAPK和p-p38MAPK蛋白的表达(P < 0.05).说明p38MAPK信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中起到重要的作用.
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p38MAPK与新生大鼠成骨细胞的增殖、分化和凋亡
背景:p38MAPK是MAPK信号转导途径的通道之一.但是,p38MAPK如何参与成骨细胞增殖、分化的调控,是否与成骨细胞的凋亡有关,目前尚未见相关文献报道.目的:观察p38MAPK对新生大鼠成骨细胞增殖、分化和凋亡的影响.设计、时间及地点:单一样本观察,细胞学体外对比观察,于2007-05/2008-03在解放军兰州军区总院骨科研究所细胞培养室完成.材料:新生24 h SD大鼠9只用于分离成骨细胞;SB203580(p38MAPK的阻断剂)为Sigma公司产品.方法:取新生SD大鼠头盖骨成骨细胞.药物刺激组分别加入不同浓度(1×10-6,1×10-7,1×10-8mol/L)的17β-雌二醇、葛根素;含阻断剂组提前30 min添加10 μmol/LSB203580阻断信号转导通路,再加药物;设空白对照组.主要观察指标:作用72 h后用四甲基偶氮唑盐法与对硝基苯磷酸法测定细胞的增殖能力和碱性磷酸酶活性,AnnexinV-FITC/P1双标记流式细胞仪分析细胞早期凋亡.结果:加入17β-雌二醇或葛根素药物后,成骨细胞的增殖、分化明显增强,与空白对照组比较差异有显著性意义(P<0.05);阻断p38MAPK信号转导通路后,细胞增殖未受明显抑制(P>0.05);分化受到明显抑制,与未阻断组比较差异具有非常显著性意义(P< 0.01).流式细胞仪分析结果显示,与对照组相比,药物组细胞早期凋亡率明显降低(P< 0.05);与药物刺激组相比,含阻断剂组细胞早期凋亡率无明显变化(P>0.05).结论:17β-雌二醇、葛根素能促进成骨细胞的增殖和分化并抑制其凋亡;p38MAPK在成骨细胞分化过程中发挥重要作用,对成骨细胞的增殖、凋亡无明显影响.
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p38MAPK对小鼠成骨细胞增殖周期和凋亡的影响
目的 探讨p38MAPK对小鼠成骨细胞增殖周期和凋亡的影响.方法 2005-01-2006-02复旦大学附属妇产科医院采用酶消化法原代培养小鼠成骨细胞,药物刺激组加入17β-雌二醇或雷洛昔芬,含阻断剂组预先添加SB202190,阻断p38MAPK细胞信号转导通路,另设空白对照组.流式细胞仪分析DNA含量,Annexin VFITC/PI双标记流式细胞仪分析细胞早期凋亡.结果 流式细胞仪分析结果显示,与对照组相比,17β-雌二醇组和雷洛昔芬组S期和G2/M期细胞百分比明显增加,细胞增殖指数显著增高(P＜0.05);细胞早期凋亡率明显降低(P＜0.05);与药物刺激组相比,含阻断剂组细胞增殖指数显著降低(P＜0.05);细胞早期凋亡率无明显变化(P＞0.05).结论 17β-雌二醇和雷洛昔芬均能够促进成骨细胞的增殖周期并抑制其凋亡;p38MAPK在成骨细胞增殖周期的调控中发挥重要作用;对成骨细胞的凋亡无明显影响.
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蝎黄解痉治哮颗粒对哮喘小鼠模型中p38MAPK和Th1／Th2类细胞因子变化的影响
目的：探讨蝎黄解痉治哮颗粒对哮喘小鼠气道炎症和Th1／Th2类细胞因子变化的影响及其可能机制。方法将24只6～8周龄雄性小鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、小剂量中药组、大剂量中药组，每组6只。制备支气管哮喘模型，小剂量中药组、大剂量中药组分别给予蝎黄解痉治哮颗粒免煎制剂每日0．72、2．89 g ，按20 mL／kg配制成水混匀溶液灌胃每日2次，连续10 d；正常对照组和哮喘模型组小鼠给予等量生理盐水。分别采用酶联免疫吸附法和免疫印迹法检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素4（IL‐4）、IL‐5、γ干扰素（IFN‐γ）含量以及肺组织中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）的变化，并观察BALF中炎症细胞和肺组织病理学改变。结果哮喘模型组小鼠BALF中炎症细胞计数、IL‐4、IL‐5含量水平升高和IFN‐γ水平降低；肺组织中磷酸化p38MAPK表达水平升高，与正常对照组比较，差异有统计学意义（P＜0．05）。小、大剂量中药组小鼠BALF中炎症细胞计数、IL‐4、IL‐5含量水平下降和IFN‐γ水平升高；肺组织中磷酸化p38MAPK表达水平降低，与哮喘模型组比较，差异均有统计学意义（P＜0．05）。小、大剂量中药组比较，差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 p38MAPK可能参与了支气管哮喘的发病过程。蝎黄解痉治哮颗粒对哮喘小鼠具有保护作用，其机制可能与抑制 p38MAPK磷酸化、调节T h1／T h2平衡失调、减轻炎症细胞浸润有关。
