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HPLC-MS/MS法测定血浆中莪术醇浓度及Beagle犬体内的药代动力学研究
建立HPLC-MS/MS法测定血浆中莪术醇含量,研究其在Beagle犬体内药代动力学特征.Beagle犬9只,随机分为3组,分别静脉推注不同剂量(7.5,10.0和12.5 mg·kg-1)的莪术油脂肪乳剂,按设定时间股静脉取血,采用HPLC-MS/MS法测定莪术油脂肪乳剂主要有效成分莪术醇血浆浓度,计算莪术醇药代动力学参数.莪术醇血浓度线性范围为0.25～100 ng·mL-1;相对回收率为91.33%～103.17%,绝对回收率为31.61%～37.20%,单次静脉注射不同剂量莪术油脂肪乳剂后,其主要有效成分莪术醇Beagle犬体内代谢过程基本符合三室模型,莪术醇主要药代动力学参数AUC呈明显剂量相关性.本法操作简便、快速、灵敏度高、专属性强,可用于莪术醇体内药代动力学的研究.
关键词： 莪术油脂肪乳剂 莪术醇 药代动力学 HPLC-MS/MS -
莪术醇通过下调Bcl-2蛋白表达介导抗乳腺癌的机制研究
目的 研究莪术醇体内外诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制.方法 (1)细胞实验:体外培养人乳腺癌细胞MCF-7,空白对照组给予不含药物的培养基,溶媒对照组给予1％无水乙醇,实验组分别给予25,50,100 μmol·L-1莪术醇,处理24,48,72 h.用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测莪术醇对细胞的增殖抑制作用;以流式细胞术检测细胞凋亡率;以实时荧光定量PCR法检测细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关Ⅹ蛋白(Bax)蛋白的表达.(2)动物实验:建立荷人乳腺癌MCF-7移植瘤裸鼠模型,模型组给予0.9％ NaCl,空白组给予不含药物的脂质体,对照组给予榄香烯口服乳125 mg·kg-1,实验组给予莪术醇脂质体100 μmol·kg-1,进行荷瘤裸鼠体内药效实验.结果 (1)细胞实验:莪术醇可抑制MCF-7细胞的增殖.3个浓度(25,50,100 μmol·L-1)莪术醇处理MCF-7细胞24h后,细胞凋亡率分别为(12.80±2.41)％,(22.10±1.46)％和(33.10±3.25)％,与空白对照组(5.36±0.81)％相比,差异均有统计学意义(均P＜0.05).莪术醇可下调Bcl-2蛋白的表达并上调Bax蛋白的表达,实验组与空白对照组相比,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).(2)动物实验:莪术醇可抑制荷瘤裸鼠肿瘤的生长.结论 莪术醇体内外诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制可能下调Bcl-2/Bax比例有关.
关键词： 莪术醇 乳腺癌 细胞凋亡 B淋巴细胞瘤-2 B淋巴细胞瘤-2-相关Ⅹ蛋白 -
莪术醇脂质体的制备及表征
目的:探讨制备方法对莪术醇脂质体包封率的影响,考察其制备的影响因素,优化处方工艺,并对其性状进行表征.方法:采用乙醇注入法将莪术醇制成大单室脂质体(LUV),通过单因素考察,筛选出莪术醇脂质体的佳处方,优化了制备方法,得到了重现性好、包封率高、简单易行的制备工艺,并对其包封率、粒径、Zeta电位和形态进行综合评价.结果:终处方莪术醇包封率在70％以上,扫描电镜下观察脂质体为类球状单室结构.用激光散射法测得平均数目径为118 nm.Zeta电位的测定表明脂质体荷负电,约为-31.7 mV.经过加速、光照以及低温留样观察,表明将药物制成脂质体后,与其水溶液相比降解速度减慢,对光的稳定性增加,在安瓶中充氮低温放置6个月,各项指标无显著性变化.结论:乙醇注入法制备的莪术醇脂质体理化性质良好.
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PI3K/AKT/mTOR信号通路在诱导胶质瘤细胞凋亡中的作用
目的:观察莪术醇对胶质瘤U87细胞凋亡的诱导作用及其作用机制.方法:采用MTT法检测细胞增殖,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测蛋白表达及磷酸化水平,采用mTOR的特异性抑制剂雷帕霉素探讨莪术醇的作用靶点.结果:莪术醇对U87细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性,莪术醇显著诱导了U87细胞凋亡.莪术醇和雷帕霉素均下调了PI3K,p-AKT,pmTOR,eIF4E蛋白的表达,雷帕霉素部分废除了莪术醇的药理作用.结论:莪术醇诱导U87细胞凋亡的分子机制涉及PI3K/AKT/mTOR信号通路.
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莪术醇亚微乳剂含量及有关物质测定方法的建立
目的:建立莪术醇亚微乳剂中莪术醇及有关物质的毛细管气相色谱测定方法.方法:采用气相色谱方法,HP-5柱(30.0 m×0.32 mm,0.25 μm);进样体积2μL,分流比10:1,进样口温度250℃;柱温(炉温)180℃,柱流量1.0 mL·min-1;检测器FID,检测器温度250℃,载气为氮气(N2).结果:莪术醇与相关杂质及降解产物均分离良好;空白乳剂对测定无干扰.莪术醇在0.01～2.0 g·L-1范围内具有良好的线性关系(r=1.0000);平均回收率为100.79%(RSD为1.47%).结论:该方法用于莪术醇亚微乳剂的质量评价,操作简便,定量准确,专属性强,灵敏度高,重现性好.
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复方莪术油栓中呋喃二烯及莪术醇的测定
目的:建立复方莪术油栓中呋喃二烯和莪术醇的含量测定方法.方法:采用<中国药典>2010年版复方莪术油栓[含量测定]项下色谱条件.结果:呋喃二烯在85.89~2579.4 ng范围内,莪术醇在16.272~488.16 ng范围内,线性关系良好,平均回收率分别为99%和97%,RSD分别为3.9%与4.0%(n=9).结论:药典标准色谱条件可同时控制呋喃二烯和莪术醇的含量,为进一步完善复方莪术油栓质量标准提供了参考依据.
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基于BP神经网络和遗传算法优化莪术超临界萃取工艺
目的以莪术醇含量为响应指标,用BP神经网络和遗传算法优化莪术有效成分的超临界CO2萃取工艺.方法采用气相色谱法测定莪术醇的含量,建立神经模型,通过均匀试验设计,利用遗传算法(GA)对网络模型进行优化,并对优化后的网络进行寻优,获得佳提取工艺.结果莪术的超临界CO2佳萃取工艺为萃取压力20MPa,萃取温度45℃,动态萃取时间80 min,改性剂用量25mL,夹带剂浓度72%,静态平衡时间27 min;测试样本的网络预测值和实际测量值的相对误差小于4%.结论遗传算法优化的BP网络模型可对中药药效物质基础的超临界萃取结果进行预测,GA优化的萃取工艺比常规小二乘法的优化结果优越.
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HPLC同时测定莪术油及其注射液中3种成分的含量
目的 建立同时测定莪术油注射液中3种成分含量的方法.方法 采用VP-ODS C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm).流动相:0.1%磷酸水溶液一乙腈(梯度洗脱),流速1.0 mL·min-1,检测波长:210 nm.结果 4种成分线性关系良好.r＞0.999 7,平均回收率均大于99.0%,RSD均小于2.0%.结论 该方法准确、灵敏度高,可作为制剂质量控制.
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莪术醇对梗阻性肾病大鼠IRE1调控TRAF2、XBP1抑制细胞凋亡的影响
目的 探讨莪术醇对梗阻性肾病大鼠肌醇必需酶1(inositol requiring enzymel 1,IRE1)调控肿瘤坏死因子受体相关因子2(tumor necrosis factor receptor-associated factor 2,TRAF2)、X-盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)抑制细胞凋亡的影响.方法建立单侧输尿管梗阻诱导大鼠肾间质纤维化动物模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、依那普利组、莪术醇高、中、低剂量组;术后14 d处死大鼠并采集血清检测血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平;采用HE染色观察肾脏的病理改变及评定肾小管损伤指数;Masson染色观察肾间质胶原沉积的面积;采用TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡;采用Western blot免疫印迹法检测肾组织糖调节蛋白78(GRP78)、IRE1、p-IRE1、TRAF2、XBP1蛋白表达水平.结果 各治疗组与模型组比较,肾小管损伤指数,肾间质胶原分布相对面积,血清Scr和BUN水平及GRP78、IRE1、p-IRE1、TRAF2、XBP1,表达均有差异(P＜0.05,P＜0.01).莪术醇高剂量组与依那普利组比较,Scr和BUN降低(P＜0.05),肾小管间质损伤、肾间质胶原分布相对面积和肾小管上皮细胞凋亡降低(P＜0.05),肾组织中GRP78、IRE1、p-IRE1、TRAF2、XBP1的表达降低(P＜0.05).结论 莪术醇能够通过抑制IRE1磷酸化介导下游TRAF2蛋白表达,干预IRE1-XBP1信号通路活化,阻止细胞凋亡,从而减缓肾间质纤维化的进程.
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莪术油注射液的不良反应
莪术油注射液系姜科植物温莪术干燥地下根茎的挥发油制剂,是莪术油、葡萄糖和适宜的助溶剂配制而成的灭菌水溶液,目前此制剂已收入<中国药典>[1].莪术油中含莪术醇,有良好的抗病毒作用,对呼吸道合胞病毒有直接杀灭作用,对流感病毒A1型和A3型有直接灭活作用[2],对侵入细胞的病毒有一定的抑制作用.广泛适用于病毒引起的上呼吸道感染、感冒、肝炎、肺炎、疱疹性咽炎等治疗,随着该药物应用的日益普遍,与其有关的不良反应报道也不断增加.
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81例莪术油不良反应分析
莪术油主要含莪术醇、莪术二酮、β-榄香烯等20余种有效成分,因而同时兼有抗病毒、消炎、抗菌、抗肿瘤等多重药理作用,临床用于病毒引起的感冒、上呼吸道感染、小儿病毒性肺炎;消化道溃疡,甲型病毒性肝炎,小儿病毒性肠炎及病毒性心肌炎、脑炎;宫颈糜烂,宫颈炎、肿瘤等病变.本文通过对81例莪术油不良反应报告进行分析,旨在探索其不良反应的一般规律,谨供临床参考.
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莪术醇对HNE1鼻咽癌细胞荷瘤鼠的抑瘤作用
目的 考察研究莪术醇对HNE1鼻咽癌细胞荷瘤鼠的抑瘤作用.方法 体外通过细胞划痕试验,考查莪术醇不同浓度(12.5 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL)对HNE1鼻咽癌细胞迁移能力的影响,计算细胞迁移率(细胞迁移率(％)=(0h划痕距离-12 h//24 h/48 h划痕距离)/0h划痕距离×100％);体内采用HNE1鼻咽癌细胞接种裸鼠待长出实体瘤,将实体瘤移植裸鼠皮下建立HNE1鼻咽癌荷瘤鼠模型,用莪术醇分别给实验组裸鼠灌胃0.79 mg/10 g,对照组给灭菌蒸馏水,阳性组给予去氧氟尿苷,每日1次,连续30 d.每周测量体质量和肿瘤大小2次,第30天给药后处死小鼠,解剖称肿瘤质量,体积计算公式V =a ×b ×c ×π/6,计算抑瘤率,评价莪术醇对HNE1鼻咽癌荷瘤鼠的抑制作用.结果 与对照组比较,体外试验证明莪术醇100 μμg/mL对HNE1鼻咽癌细胞迁移性有统计学意义(P＜0.05),体内试验证明莪术醇组对HNE1鼻咽癌细胞荷瘤鼠肿瘤的抑制作用明显,抑瘤率为34.04％,肿瘤质量与对照组比较有统计学意义(P＜0.05),与对照组和去氧氟尿苷组比较,肝脏和脾脏系数均有统计学意义(P＜0.05),且与去氧氟尿苷组比较,肝脏系数有统计学意义(P＜0.05).结论 通过实验得出莪术醇能降低HNE1鼻咽癌细胞迁移能力并对荷瘤鼠肿瘤具有抑制作用,为莪术醇对肿瘤的抑制作用研究提供了实验基础.
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莪术醇与基质金属蛋白酶2及肿瘤的侵袭和转移的研究进展
侵袭和转移是恶性肿瘤的主要生物学行为,也是恶性肿瘤患者致死的主要原因,故也成为当今世界肿瘤分子生物学的研究热点之一.基质金属蛋白酶2(MMP-2)在许多恶性肿瘤中均有过度表达,MMP-2的过度表达及其活性调节的研究,有助于对肿瘤患者及早发现和治疗.现就莪术醇、MMP-2与一些恶性肿瘤的关系的研究进行综述.
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市售莪术挥发油提取率的比较及其莪术醇含量测定
目的 测定莪术中挥发油的提取率及莪术醇的含量.方法 本文以水蒸汽蒸馏法对5批市售莪术中所含的挥发油提取率进行了比较,并采用紫外分光光度法在波长510 nm处对其主要活性成分莪术醇进行了含量测定.结果 平均提油率0.5612%,莪术醇的含量分别为2.58%、2.56%、2.05%、1.93%、1.01%,与国家低标准比较具有统计学意义.结论 5批市售莪术挥发油的提取率均低于药典规定标准;且每批挥发油的莪术醇含量差异很大,均低于国家药典规定的低标准.
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莪术醇抗肿瘤研究进展
莪术醇是近年来发现的新的抗肿瘤中药单体之一,特别是莪术醇药物的有效性和低毒性,使其在肿瘤治疗中的研究越来越受到人们的重视.莪术醇的抗肿瘤机制尚未完全明确,可能与诱导细胞凋亡、细胞分化,影响细胞膜电位、肿瘤细胞核代谢以及抑制血管生成等作用有关.
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莪术醇对人胃癌细胞凋亡、MMP2、NO影响的初步探讨
目的 初步探讨莪术醇(Curcumol)对人胃腺癌细胞(SGC-7901细胞)凋亡、基质金属蛋白酶(MMP2)、一氧化氮(NO)的影响.方法 将莪术醇溶于无水乙醇中,初始浓度为9 mg/mL,设实验1、2、3、4、5组,莪术醇的浓度分别是7.5、15、30、60、120 μg/mL,并以含1%无水乙醇的培养液为对照组.采用台盼蓝(Trypan blue)、噻唑蓝(MTT)法检测SGC-7901细胞的活性及莪术醇对SGC-7901细胞抑制增殖的影响;用流式细胞仪(FACSCalibur)检测莪术醇对SGC-7901细胞的凋亡率;用蛋白质印迹法检测莪术醇作用于SGC-7901细胞后,其MMP2的表达情况;NO试剂盒检测莪术醇作用SGC-7901细胞后的细胞培养液上清的NO含量.结果 30 μg/mL的莪术醇在药物浓度与抑制肿瘤生长方面效果较佳,与对照组比较,其抑制肿瘤细胞增殖差异有统计学意义(P < 0.05);莪术醇实验组能促进细胞凋亡,与对照组比较差异有统计学意义(P < 0.05);莪术醇实验组作用细胞后,其MMP2蛋白表达明显下降,与对照组比较差异有统计学意义(P < 0.05);实验研究表明,随着莪术醇实验组浓度的增加,其细胞培养液上清中的NO含量逐渐降低,与对照组比较差异有统计学意义(P < 0.05).结论 30 μg/mL的莪术醇浓度是佳药效组,它能显著抑制SGC-7901细胞的增殖,明显促进肿瘤的细胞凋亡,显著抑制MMP2的表达,降低细胞培养液上清中的NO含量,从而发挥系列抗肿瘤作用.本研究从细胞分子水平探讨莪术醇治疗胃癌可能存在的部分机制,为临床应用莪术醇及其衍生物或结构类似物治疗胃癌提供理论与试验依据.
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莪术醇的医药研究进展
莪术醇是传统中药莪术和现代中药莪术油的重要有效成分,具有抗肿瘤、抗生殖、抗炎等多种药理活性,具备很高的医药研究价值.本文对莪术醇的药理学、药动学、毒理学、药效学等医药研究方面进行了综述.
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毛郁金的化学成分研究
目的 研究毛郁金Curacuma aromatica根茎的化学成分.方法 采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20、制备液相等多种手段进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构.结果 从毛郁金95％乙醇提取物中分离得到17个化合物,分别鉴定为莪术二酮(1)、β-谷甾醇(2)、豆甾醇(3)、三十烷酸(4)、桂莪术内酯(5)、莪术烯醇(6)、原莪术烯醇(7)、eudesmane-3,6-dione (8)、羽扇豆醇(9)、姜黄素(10)、去甲氧基姜黄素(11)、aerugidiol (12)、蓬莪二醇(13)、voleneol (14)、尿嘧啶(15)、莪术醇(16)、莪术双环烯酮(17).结论 化合物4、5、8、9、14和15均为首次从该植物中分离得到.
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HPLC法测定不同主产地莪术饮片中莪术二酮、莪术醇、吉马酮和β-榄香烯
目的 采用HPLC法同时测定不同产地莪术饮片中莪术二酮、莪术醇、吉马酮和β-榄香烯的量,为临床合理用药提供科学依据.方法 固定相为依利特Hypersil ODS柱(250 mm×4.6 mm,5μm)；乙腈-水为流动相,梯度洗脱;体积流量1 mL/min;柱温25℃;检测波长214 nm;进样量10 μL.结果 在上述色谱条件下测得莪术二酮、莪术醇、吉马酮、β-榄香烯分别在8～264、7～214、2～52、8～253 μg/mL时与色谱峰面积线性关系良好,平均回收率分别为98.3％、98.0％、98.2％、97.3％,RSD分别为2.9％、1.5％、2.0％、2.7％.结论 该方法准确、灵敏,可作为不同产地莪术饮片的质量控制方法；测定结果表明,不同主产地莪术饮片中4种成分的量差异较大,临床应用时应注意区分.
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莪术不同炮制品挥发油中4种倍半萜类成分的比较
目的 比较莪术不同炮制品提取的挥发油中莪术二酮、莪术醇、吉马酮和β-榄香烯的量.方法 采用HPLC法测定4种倍半萜类成分的量,Elite Hypersil ODS色谱柱(250mm×4.6 mm,5 μm)；乙腈-水为流动相,梯度洗脱；体积流量l mL/min;柱温30℃;VWD检测器；检测波长214 nm;进样量为10 μL.结果 在上述色谱条件下,4种成分均得到很好的分离,各成分的质量浓度与峰面积之间线性关系良好,平均回收率和RSD均符合定量测定的要求.莪术药材中β-榄香烯的量较高,经炮制后其量显著下降,莪术二酮、吉马酮、莪术醇在炮制过程中其量均有所下降,其中以醋煮品各成分量下降为明显.结论 所建立的HPLC法准确、灵敏,可作为莪术不同炮制品挥发油质量控制的方法；不同产地莪术饮片炮制品挥发油中这4种成分的量存在明显差异,经炮制后其量均显著下降.
