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温郁金二萜类化合物C对脂多糖诱导的人胃腺癌SGC7901细胞内NF-κB信号通路的影响
目的:研究温郁金二萜类化合物C(RC)对脂多糖诱导的人胃腺癌SGC7901细胞核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)活性影响.方法:以10 mg/L脂多糖(LPS)刺激体外培养的SGC7901细胞建立炎症模型,设正常对照组、LPS刺激组、RC预干预组(RC干预后以LPS刺激).蛋白质印迹法检测IKK、p-p65、p65和p-IκBα蛋白表达,凝胶迁移阻滞实验检测p65与DNA结合活性.结果:与炎症模型组比较,经温郁金二萜类化合物干预后,细胞中的IKK、p-p65、p65和p-IκBα蛋白表达均减少;入核p65蛋白与DNA结合活性减弱.结论:温郁金二萜类化合物通过抑制核因子-κB信号通路起抗炎作用.
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熊果酸抑制胃癌细胞SGC7901增殖和诱导细胞凋亡的机制
背景与目的:研究表明熊果酸(ursolic acid,UA)可抑制多种肿瘤细胞的增殖并诱导凋亡,但目前有关UA作用于胃癌细胞的报道较为少见.环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在多种癌前病变及癌组织中高表达.本研究旨在探讨熊果酸抑制人胃癌细胞SGC7901增殖和诱导凋亡的机制.方法:MTT法检测0、10、20、30、40 μmol/L UA作用不同时间对SGC7901细胞增殖的影响;荧光染料Hoechst 33258染色观察不同浓度UA作用24 h细胞凋亡情况;流式细胞仪检测细胞周期变化及凋亡率;Western blot法检测COX-2蛋白以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达.放射免疫分析法测定COX-2催化产物前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2).结果:20～40 μmol/L UA可抑制SGC7901细胞的增殖,并呈浓度和时间依赖性,作用12、24、36、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(57.50±1.18)μmol/L、(34.28±2.05)μmol/L、(27.54±1.11)μmol/L、(24.83±1.02)μmol/L;20～40μmol/LUA作用24 h后,SGC7901细胞被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率分别为(9.10±2.39)%、(26.30±1.25)%、(35.20±2.26)%;同时COX-2蛋白表达及其催化生成产物PGE2浓度下降,凋亡相关蛋白Bcl-2表达减少,Bax无明显变化.结论:熊果酸对SGC7901细胞具有增殖抑制及诱导凋亡作用,其机制可能与阻滞细胞周期、抑制COX-2表达进而减少PGE2生成以及下调凋亡相关蛋白Bcl-2表达有关.
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SKI-Ⅱ对胃癌SGC7901细胞血管内皮生长因子表达的影响
目的 观察SKI-Ⅱ对胃癌SGC7901细胞内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,并对其机制进行初步研究.方法 常规培养胃癌SGC7901细胞,给予不同浓度SKI-Ⅱ及顺铂(DDP)干预,MTT法测定各组胃癌SGC7901细胞增殖情况,免疫组化和Western blot检测药物对SphK1、VEGF表达的影响.结果 MTT检测显示SGC7901细胞与不同浓度的SKI-Ⅱ共同培养,细胞的生长受到不同程度的抑制,其作用具有剂量依赖性,并随时间的延长逐渐增强,免疫组化及Western blot检测显示SKI-Ⅱ可显著下调肿瘤细胞SphK1和VEGF蛋白的表达,单用DDP对SphK1、VEGF无作用.结论 SKI-Ⅱ可以通过下调VEGF和SphK1蛋白表达而有效抑制胃癌SGC7901细胞增殖.
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夜香树叶正丁醇提取物中流份C6和C7对人胃癌细胞SGC7901增殖和凋亡作用的影响
目的:研究夜香树(CN)叶正丁醇提取物中流份C6、C7对人胃癌细胞SGC7901增殖和凋亡的影响.方法:采用不同比例的氯仿-甲醇(1:9、1:7)对CN叶正丁醇部位梯度洗脱,得到流份C6和C7.将SGC7901细胞分为空白对照组和C6、C7组.分别用0(空白对照)、5、10、20、40、80μg/ml的C6、C7培养SGC7901细胞72 h后采用MTT法检测其对细胞的增殖抑制作用,计算增殖抑制率、半数抑制浓度(IC50);用10μg/ml C6、C7培养SGC7901细胞72 h后,采用集落形成法检测其对细胞的集落形成能力的影响,计算集落形成率;瑞氏-姬姆萨混染法、Hoechst 33258/碘化丙啶(PI)染色法观察细胞形态学变化.结果:MTT结果显示,流份C6、C7对SGC7901细胞增殖有不同程度的抑制作用,抑制率分别为22.1%~80.0%、19.6%~79.7%,IC50分别16.4、18.05μg/ml.与空白对照组比较,C6和C7组细胞的集落形成率降低,差异有统计学意义(P<0.05);给药组细胞凋亡细胞、死细胞更多.结论:CN叶正丁醇提取物中流份C6、C7可显著抑制SGC7901细胞增殖并诱导其凋亡.
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抗CXCR4单克隆抗体12G5对胃癌细胞粘附与侵袭的影响
目的:探讨抗CXCR4单克隆抗体12G5对SGC7901细胞与基质的粘附性与侵袭性的影响.方法:应用MTT法、Transwell Chamber体外侵袭实验技术检测12G5(5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml)对胃癌细胞株SGC7901粘附、侵袭和迁移能力的影响.结果:(1)10μg/ml的12G5即可使胃癌细胞粘附Matrigel的能力明显受抑,与对照组相比(P<0.01).随着时间的延长及单抗浓度的加大,实验组的粘附能力低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).(2)SGC7901细胞对照组和实验组侵袭迁移实验穿膜细胞数分别为:121.7±5.51,54.3±9.07;140.3±6.03,62.0±11.53.实验组的侵袭迁移能力明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).结论:12G5能在一定程度上抑制SGC7901细胞的粘附性及侵袭性.
关键词： SDF-1/CXCR4 单克隆抗体 SGC7901细胞 细胞粘附 细胞侵袭 -
MASPIN真核表达载体的构建及其对胃癌细胞株SGC7901增殖的影响
目的 构建MASPIN真核表达载体,分析MASPIN过表达对胃腺癌细胞株SGC7901的影响.方法 PCR扩增MASPIN基因全长,用载体PCR2.1构建重组质粒,转染至胃癌细胞株SGC7901.RT-PCR、Western blot检测MASPIN基因表达变化,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪(FCM)分析细胞周期,观察过表达MASPIN对SGC7901细胞株的影响.结果 成功构建MASPIN/PCR2.1表达载体并转染至胃癌细胞株SGC7901,转染上调了SGC7901细胞株MASPIN在mRNA、蛋白水平的表达.转染MASPIN的SGC7901细胞增殖率随时间而减慢,第24、48、72小时的细胞增殖率分别为93.07%、81.97%、66.5%,明显低于转染空载体组(95.98%、95.79%、95.59%,P<0.05).与转染空载体组相比,过表达MASPIN的SGC7901细胞株在G0/G1期所占比例明显提高(70.3% vs 55.6%),S期细胞减少(19.8% vs 34.9%,P<0.05).结论 成功构建MASPIN/PCR2.1表达载体,过表达MASPIN 可抑制SGC7901细胞株的增殖.
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抑制P13K/PKB通路逆转胃癌耐药的作用及其机制
目的 观察抑制PI3K/PKB信号通路对胃癌耐药性的逆转作用,并探讨其可能机制. 方法 通过体内外实验方法检测长春新碱(vincristine,VCR)及联合LY294002(PI3K/PKB通路抑制剂)埘SGC7901/VCR细胞的生长抑制作用;采用Western blot及RT-PCR分别检测细胞中PKB、磷酸化PKB的蛋白表达水平及MDR1、Bax、Bcl-2基因表达水平;流式细胞仪检测细胞的凋亡.结果 LY294002能明显增加SGC7901/VCR细胞对VCR的敏感性,促进VCR诱导细胞凋亡,使其耐药指数从40.45降至8.50;LY294002可明显降低耐药细胞中磷酸化PKB的蛋白表达和MDR1、Bcl-2的基因表达水平(P<0.01),促进Bax的基因表达(P<0.01);体内实验显示联合用药组的裸鼠移植瘤大小明显小于VCR组(P<0.01). 结论 抑制PI3K/PKB通路可逆转胃癌耐药,其机制可能与降低耐药基因MDR1的表达以及调控相关凋亡基因Bax和Bel-2的表达有关.
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反义人钙周期素结合蛋白编码基因转染对胃癌细胞多药耐药性的影响
目的研究hCacyBP编码基因在胃癌多药耐药机制中的作用.方法采用Northern杂交, 检测SGC7901细胞及SGC7901/ADR细胞中hCacyBP mRNA表达水平的差异.将hCacyBP cDNA克隆到pcDNA3.1中, 构建反义核酸真核表达载体pcDNA3.1/hCacyBP-, 并转染耐阿霉素人胃癌细胞, 用RT-PCR检测转染细胞中hCacyBP mRNA水平的变化. 用MTT比色法和FCM, 分别检测SGC7901/ADR细胞、pcDNA3.1/hCacyBP-和pcDNA3.1分别转染的SGC7901/ADR细胞, 对ADR的药物敏感性和胞内ADR的蓄积浓度.结果 Northern杂交证实, SGC7901/ADR细胞中hCacyBP mRNA表达的水平显著高于SGC7901细胞.成功地构建了pcDNA3.1/hCacyBP-.以pcDNA3.1/hCacyBP-转染的SGC7901/ADR细胞中hCacyBP mRNA的表达水平, 显著低于空载体转染及未转染的SGC7901/ADR细胞.MTT检测表明, 转染pcDNA3.1/hCacyBP-的细胞, 对ADR的药物敏性较空载体转染及未转染的SGC7901/ADR细胞有所增高, 生存率较后两者为低. FCM显示, 转染pcDNA3.1/hCacyBP-的 SGC7901/ADR细胞、转染pcDNA3.1及未转染的SGC7901/ADR细胞内ADR的蓄积浓度, 分别为6.72、5.62和5.54.结论 hCacyBP碥码基因对胃癌细胞的MDR有一定的影响, CacyBP可能是一种胃癌细胞MDR中的重要分子.
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沉默MTA1表达对胃癌SGC7901细胞增殖和侵袭能力的影响
目的:观察转移相关基因1(MTAl)基因沉默对人胃癌细胞SGC7901增殖和迁移侵袭能力的影响,探讨MTA1基因在胃癌发生发展中的作用.方法:利用脂质体法将靶向MTA1的小分子干扰RNA(siRNA)转染到胃癌细胞株SGC7901中.运用Real time PCR和Western blot技术检测SGC7901细胞内MTA1的mR-NA和蛋白表达水平.CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞迁移和侵袭能力.结果:MTA1 siRNA可有效抑制SGC7901细胞MTA1基因在mRNA和蛋白水平上的表达(P＜0.01).CCK-8实验表明MTA1 siRNA转染后细胞增殖不受影响;Transwell小室实验表明细胞迁移和侵袭能力明显下降.结论:沉默MTA1表达可抑制胃癌细胞株SGC7901迁移和侵袭,而不影响细胞增殖.MTA1在胃癌侵袭转移过程中可能发挥重要作用.
关键词： 转移相关基因1(MTA1) 胃癌 SGC7901细胞 增殖 侵袭 -
四硫化四砷抑制人胃癌SGC7901细胞增殖及其作用机制
目的:探讨四硫化四砷(As4S4)对人胃癌细胞系SGC7901增殖抑制作用及其作用机制.方法:MTT法检测四硫化四砷对体外培养SGC7901细胞的抑制作用,透射电镜观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞周期的变化,RT-PCR法检测bcl-2和bax mRNA的表达,Western blot法检测bcl-2和bax蛋白的表达.结果:四硫化四砷具有体外抑制SGC7901细胞增殖的作用,能诱导细胞凋亡,细胞中bcl-2的表达降低,bax 的表达增强.结论:四硫化四砷具有抑制胃癌细胞系SGC7901细胞生长的作用,其机制可能与诱导细胞凋亡和调节bcl-2与bax表达有关.
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沙培林对胃癌SGC7901细胞体外作用的研究
目的:观察沙培林在体外对人胃癌SGC7901细胞的作用.方法:以不同浓度的沙培林(0、0.001KE/ml、0.01KE/ml、0.1KE/ml和0.5 KE/ml)处理6h、12h、24h和48h后,噻唑蓝(MTT)比色法观察SGC7901细胞的生长情况;0.5 KE/ml沙培林作用于胃癌SGC7901细胞48h后,流式细胞仪检测细胞周期的变化;免疫组化染色观察药物处理前后的p53、p27、PCNA蛋白的表达.结果:沙培林对SGC7901胃癌细胞具有抑制增殖效应,并在一定范围呈现时间和浓度依赖性;沙培林(0.5 KE/ml)作用48h后,周期检测发现SGC7901细胞G0/G1期细胞下降,S期增加(P< 0.01);免疫组化结果显示:沙培林干预可使SGC7901细胞p53蛋白表达下调,p27蛋白表达上调(P< 0.01),PCNA蛋白表达组间无统计学差异(P>0.01).结论:沙培林可改变SGC7901细胞周期分布,抑制细胞增殖;可使细胞p53表达减少,p27表达增加.
