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金雀异黄素抑制SGC7901细胞增殖、迁移和粘附的研究
目的 探讨金雀异黄素(Gen)对人胃腺癌SGC7901细胞增殖、迁移以及与血管内皮细胞粘附的影响.方法 利用细胞计数和MTT方法 检测Gen对SGC7901细胞增殖的影响;利用细胞划痕实验检测Gen对SGC7901细胞迁移的影响;在单层脐静脉内皮细胞上加入SGC7901细胞,检测Gen对SGC7901细胞与血管内皮细胞粘附的影响;利用免疫荧光实验观察Gen对SGC7901细胞中E-cadherin、β-catenin和肌动蛋白(actin)的分布的影响;利用Western blotting检测Gen对SGC7901细胞中FAK、p-FAK、E-cadherin、β-catenin蛋白表达的影响.结果 Gen可以抑制SGC7901细胞的增殖、迁移和粘附,影响SGC7901细胞中E-cadherin、β-catenin和actin的分布,下调p-FAK和E-cadherin的表达.结论 Gen抑制SGC7901细胞的增殖、迁移和与血管内皮细胞粘附,可能是通过诱导细胞中E-cadherin、β-catenin和actin的重排、下调p-FAK和E-cadherin的表达等实现的.
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ppGalNAcT2反义RNA对胃癌细胞SGC7901生物学特性的影响
目的:研究人胃癌细胞SCd27901中多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(PP-GalNAc-T2)基因表达与肿瘤转移相关基因MMP2,TGF-β1表达的相关性,以及对细胞增殖和形态生物学特性的影响.方法:用两个已构建好的反义表达载体转染胃癌细胞SGC7901,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭胃癌细胞SGC7901 ppGalNAc-T2基因表达的亚细胞克隆.通过共聚焦显微镜,RT-PCR检测反义封闭PP-GalNAc-T2基因RNA表达后,胃癌细胞SGC7901中TGF-β1,MMP2表达水平,细胞增殖以及形态的变化.结果:反义封闭PP-GalNAc-T2基因表达后,胃癌细胞SGC7901PP-GalNAc-T2的表达水平明显降低,细胞的形态发生改变,分裂增殖减慢.结果还显示,反义封闭PP-GalNAc-T2基因表达可使TGF-β1,MMP2基因在mRNA表达水平均增加,提示pp-GalNAc-T2基因表达可能对胃癌细胞SGC7901浸润转移产生影响.结论:PP-GalNAc-T2可能在肿瘤的增殖、浸润和转移中发挥作用.
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SKI-Ⅱ促胃癌SGC7901细胞凋亡的实验研究
目的:研究鞘氨醇激酶(sphingosine kinase,SphK)抑制剂SKI-Ⅱ对人胃癌SGC7901细胞凋亡的影响,并探讨其具体作用机制.方法:常规培养人胃癌SGC7901细胞,SKI-Ⅱ单用或联合顺铂(DDP)干预,流式细胞术检测细胞凋亡率;电镜下观察用药后细胞超微结构的改变;免疫细胞化学、Western blot检测药物作用后细胞中Sphk1、NF-κB、Bcl-2、Bax的表达.Pearson相关分析检测Sphk1与NF-κB、NF-κB与Bcl-2表达的相关性.结果:SKI-Ⅱ单用或联合DDP干预48 h后,SKI-Ⅱ 5μmol/L组、SKI-Ⅱ 10 μmol/L组、DDP 2.5mg/L组、DDP 2.5 mg/L+SKI-Ⅱ 5 μmol/L组和DDP 2.5 mg/L+SKI-Ⅱ10μmol/L组细胞凋亡率分别为(40.39±1.06)%、(45.58±0.75)%、(47.27±1.13)%、(53.64±1.11)%和(66.98±2.32)%.与阴性对照组比,差异均有统计学意义(P＜0.05);电镜下观察到SGC7901细胞胞浆内出现凋亡小体;SGC7901细胞中Bax阳性表达率增加,Sphk1、NF-κB、Bcl-2阳性表达率减少.Sphk1与NF-κB、NF-κB和Bcl-2的表达呈正相关.结论:SKI-Ⅱ可以通过抑制细胞中Sphk1的表达从而下调NF-κB的表达,并升高Bax/Bcl-2的比例诱导人胃癌SGC7901细胞的凋亡.
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rhIL-24基因抑制胃癌生长及作用机制的实验研究
目的探讨rhIL-24蛋白体外对胃癌生长的影响及作用机制.方法用已构建成功的真核表达载体pcDNA3.0-IL24质粒转染中国仓鼠卵巢细胞CHO细胞,使其上清稳定表达rhIL-24,同时用已构建成功的原核表达载体PET21a(+)IL-24-BL-21,抽提BL-21菌中表达的rhIL-24,行SDS-PAGE电泳和Western-Blotting鉴定rhIL-24的表达,MTT法检测rhIL-24对SGC7901胃癌细胞生长的影响;Hoechst染色、流式细胞术检测CHO细胞和BL-21菌表达的rhIL-24诱导胃癌细胞凋亡;鸡胚绒毛尿囊膜试验观察rhIL-24对血管形成的影响.结果 rhIL-24对胃癌细胞的生长有明显的抑制作用;rhIL-24可诱导SGC7901胃癌细胞凋亡;rhIL-24具有抑制血管形成的作用.结论 rhIL-24蛋白有多重抗肿瘤能力,其可能的作用机制是明显抑制胃癌细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制血管生成.
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CIK细胞联合顺铂对胃癌SGC-7901/DDP细胞的体外杀伤作用
目的 探讨细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞联合顺铂(DDP)对胃癌耐顺铂细胞株SGC7901/DDP及亲代敏感细胞株SGC-7901的体外杀伤作用.方法 体外培养SGC-7901/DDP及SGC-7901细胞,分为对照(A)组、DDP作用(B)组、CIK细胞作用(C)组和CIK细胞联合DDP(D)组.MTT法、RT-PCR法和Western blot法分别检测肿瘤细胞增殖、mdr-1基因mRNA表达和P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达.结果 与SGC-7901细胞相比,DDP对SGC-7901/DDP细胞的杀伤率明显降低(P＜0.05),耐药指数为1.73.在SGC-7901/DDP细胞中,C、D组杀伤作用明显高于A组,且与SGC-7901细胞比较差异有统计学意义(P＜0.05).与B、C组相比,D组对SGC-7901/DDP细胞的体外杀伤活性明显升高,逆转倍数为1.41.C、D组SGC-7901/DDP细胞中mdr-1基因mRNA、P-gp蛋白表达均明显低于A组(P＜0.05).结论 CIK细胞与DDP的联合应用使SGC-7901/DDP细胞的生长受到明显抑制,其可能与CIK细胞下调mdr-1基因mRNA、P-gp蛋白表达及增加SGC-7901/DDP细胞对DDP的敏感性有关.
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沙培林诱导SGC7901胃癌细胞凋亡及机制的研究
目的:观察沙培林在体外诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的作用,并探讨其分子机制. 方法:分别以不同浓度(0、0.001、0.01、0.1和0.5 KE/ml)的沙培林干预SGC7901细胞6、12、24和48h后,用噻唑蓝(MTT)比色法检测SGC7901细胞的生长情况;用膜连蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)加碘化丙啶(PI)双染法观察沙培林作用后SGC7901细胞的凋亡情况;用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测沙培林干预后细胞survivin、caspase-3 的mRNA表达变化情况. 结果:沙培林处理后,胃癌SGC7901细胞生长受到抑制,抑制率在一定范围内呈剂量、时间相关性.沙培林作用48h后,流式细胞仪检测SGC7901细胞凋亡显示:随着沙培林浓度的提高,细胞的凋亡率也增加.半定量RT-PCR检测发现:沙培林可以使SGC7901细胞survivin mRNA表达减少,caspase-3 mRNA表达上升(P<0.05). 结论:沙培林在体外可抑制SGC7901细胞增殖,并诱导其发生凋亡,提示该药有治疗胃癌的潜在价值.沙培林诱导SGC7901细胞发生凋亡的生物学效应可能与survivin mRNA表达下调,caspase-3 mRNA表达上升有关.
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survivin反义寡核苷酸诱导SGC7901细胞凋亡及增强紫杉醇敏感性
目的 研究转染生存素(survivin)反义寡核苷酸(Asodn)抗肿瘤作用以及是否增强紫杉醇敏感性.方法 实验分为:空白对照组(Control组)、脂质体组(Lip组)、正义寡核苷酸组(Sodn组)及反义寡核苷酸组(Asodn组).人工合成Asodn,经脂质体转染SGC7901细胞,MTT检测细胞增值抑制率,Western blot检测survivin蛋白表达,Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞凋亡形态学改变及流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 ① 荧光显微镜下Control组、Lip组及Sodn组细胞核呈均匀蓝色、圆形或椭圆形,而Asodn组细胞核染色增强,核质浓缩,核碎裂;② Asodn 组细胞增殖抑制率增高,并呈时间-剂量依赖性;survivin 蛋白表达减低;凋亡率增高.与Control组、Lip组及Sodn组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);③ Asodn联合紫杉醇组其抑制率 (78.1±0.8)%明显高于单纯 Asodn组(54.9±1.6)%和紫杉醇组 (56.7±0.7)% (P<0.05).结论 转染Asodn 能明显抑制SGC7901细胞增殖、诱导凋亡并增强紫杉醇抗肿瘤作用.
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二烯丙基二硫抑制人胃癌SGC7901细胞侵袭及相关机制
目的 探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胃癌SGC7901细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制.方法 划痕愈合和侵袭实验检测DADS对SGC7901细胞迁移与侵袭能力的影响;RT-PCR、Western blot检测DADS作用SGC7901细胞后MMP-9和TIMP-3表达.结果 划痕实验结果显示,15 mg* L-1 DADS处理SGC7901细胞12 h、24 h后,较未处理组划痕距离明显增加(P<0.05),表明DADS可抑制SGC7901细胞迁移.Transwell实验结果显示,15 mg*L-1 DADS处理SGC7901细胞12 h与24 h后,穿膜细胞数分别为(31.9±0.46)、(23.5±0.52)个,较未处理组的(51.6±0.68)、(41.3±0.72)个明显减少(P<0.05),表明DADS可抑制SGC7901细胞侵袭能力.RT-PCR结果显示,15 mg* L-1 DADS处理SGC7901细胞12 h与24 h后,MMP-9 mRNA表达明显下调(P<0.05),而TIMP-3 mRNA表达明显上调(P<0.05).Western blot结果显示,15 mg*L-1 DADS处理SGC7901细胞12 h、24 h、48 h后,MMP-9蛋白表达明显降低(P<0.05),而TIMP-3蛋白表达明显增加(P<0.05).结论 DADS可抑制人胃癌SGC7901细胞迁移与侵袭能力,其机制可能与下调MMP-9和上调TIMP-3有关.
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土槿皮乙酸诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡及机制
目的 研究土槿皮乙酸(pseudolaric acid B,PAB)诱导人胃癌SGC7901细胞株凋亡及其分子机制.方法 MTT法检测细胞增殖的抑制作用,电镜观察细胞的形态学变化,AnnexinV/PI双染法检测细胞早期凋亡率,罗丹明染色流式细胞仪检测线粒体膜电位,Western blot检测PAB对caspase-3、caspase-9剪切片断,bcl-2、bax蛋白表达,及对MAPKs通路相关蛋白,包括p-ERK、ERK、p-JNK、JNK、p-p38、p38表达的影响.结果 PAB对人胃癌SGC7901细胞株生长具有明显的抑制作用,并呈时间和浓度依赖性.电镜结果 显示0.5 μmol·L-1 PAB作用24 h后,核染色体聚集、边集,72 h凋亡小体形成.用0.5 μmol·L-1 PAB处理SGC7901细胞12、24、48、72 h,AnnexinV/PI双染检测细胞的早期凋亡,其早期凋亡率分别为10.06%、15.98%,23.12%,29.06% ,而对照组的早期凋亡率仅为0.9%(P<0.05) .罗丹明染色检测线粒体膜电位,0.5 μmol·L-1浓度的PAB作用于SGC7901细胞12 h后,线粒体膜电位开始下降并随时间延长而逐渐增加,12、24、48、72 h线粒体膜电位下降分别为26.36%、33.26%、41.28%、52.13%(P<0.05或0.01).0.5 μmol·L-1浓度的PAB作用于SGC7901细胞24 h后,Western blot法检测发现caspase-3、 caspase-9 2种蛋白均出现断裂片断,并随着时间的增加断裂更明显.进一步研究发现,PAB处理SGC7901细胞后,bax蛋白表达升高,bcl-2蛋白表达下降,同时JNK、p38的磷酸化水平明显升高,ERK表达水平下降.结论 PAB具有明显的细胞毒作用,能诱导SGC7901细胞凋亡,JNK和p38途径激活后通过对bax 和bcl-2表达的调控,导致线粒体膜电位的下降,进而激活caspase终导致细胞死亡,可能是其诱导胃癌细胞凋亡的分子机制之一.
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抑制PI3K/PKB信号通路提高胃癌细胞化疗敏感性的研究
目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)抑制剂LY294002提高胃癌耐药细胞SGC7901/VCR和亲代细胞SGC7901对化疗药物敏感性的作用及其机制.方法 MTT法分别检测胃癌细胞SGC7901和SGC7901/VCR对化疗药长春新碱(VCR)的敏感性;RT-PCR法和免疫细胞化学法检测LY294002处理前后多药耐药蛋白1(multidrug resistance protein-1,MDR1)和X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitoRof apoptosis,XIAP)基因和蛋白水平;Western blot法检测LY294002处理前后细胞PKB总蛋白水平和磷酸化水平;并用流式细胞仪检测细胞的凋亡率.结果 2×10-5 mol·L-1 LY294002能明显增加SGC7901和SGC7901/VCR细胞对VCR的敏感性(P<0.01),其IC50分别由(0.20±0.03)和(8.09±0.60) mg·L-1降至(0.05±0.006)和(1.70±0.20)mg·L-1;降低细胞MDR1和XIAP的基因和蛋白水平;降低磷酸化PKB水平,而对其总蛋白水平无影响;LY294002联合VCR用药后细胞凋亡率明显高于单独VCR处理(P<0.01).结论 LY294002通过降低耐药基因MDR1和抗凋亡基因XIAP的表达,提高耐药和非耐药胃癌细胞对化疗药物的敏感性,此过程与抑制PI3K/PKB通路密切相关.
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β-榄香烯对人胃癌细胞SGC7901的抑制作用及部分机制
目的：研究β-榄香烯对胃癌细胞SGC7901的增殖、凋亡、迁移及赖氨酰氧化酶( LOX)的影响。方法体外培养人胃癌SGC7901细胞, MTS法及流式细胞术检测不同浓度β-榄香烯对SGC7901细胞增殖与凋亡的影响,划痕实验、Tr-answell小室迁移实验检测β-榄香烯对细胞迁移的影响,酶标仪法检测β-榄香烯对LOX酶活性的影响,Western blot法检测 LOX 蛋白表达的变化。结果β-榄香烯(50~800μmol/L)对SGC7901细胞的抑制作用呈时间依赖和浓度依赖性。β-榄香烯(100、200、400、800μmol/L)处理 SGC7901细胞24 h后,凋亡率分别为8．1%、8．2%、18．7%、41．9%,与对照组(4．9%)比较,凋亡率明显升高( P<0．05)。划痕实验、Transwell 实验结果显示β-榄香烯对 SGC7901细胞的迁移有明显抑制作用( P<0．05)。β-榄香烯浓度依赖性地降低SGC7901细胞LOX酶活性(P<0．05)。 Western blot结果显示β-榄香烯可下调SGC7901细胞LOX的蛋白表达。结论β-榄香烯对胃癌细胞 SGC7901有明显抑制增殖、迁移及促进凋亡作用,抑制LOX酶活性和蛋白表达可能是其发挥作用的机制之一。
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SKI-Ⅱ抑制Sphkl的表达对胃癌细胞株SGC7901细胞周期的影响
目的 研究SKI-Ⅱ对胃癌SGC7901细胞周期的阻滞作用,并探讨其相关分子机制.方法 常规培养胃癌SGC7901细胞,SKI-Ⅱ单用或联合顺铂干预,流式细胞术检测细胞周期;免疫细胞化学、Western-blot检测药物作用后细胞中Sphkl、P27的表达.结果 SKI-Ⅱ单用或联合顺铂干预48 h后,各用药组细胞周期停滞在G0/G1期比例增多,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);联合用药组比SKI-Ⅱ单用组作用明显(P＜0.05);SGC7901细胞中P27阳性表达率增加,Sphkl阳性表达率减少,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).Pearson相关分析显示:SGC7901细胞中Sphkl与P27的表达呈负相关.结论 SKI-Ⅱ通过抑制Sphkl的表达进而上调P27的表达诱导肿瘤细胞周期阻滞,抑制肿瘤细胞增殖.
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AQP5基因重组慢病毒载体的构建与鉴定
目的 构建人水通道蛋白5(AQP5)基因慢病毒载体.方法 体外扩增出AQP5基因全长cDNA,将慢病毒载体pWPTS-GFP与扩增出的AQP5用Mlu I和Sal I进行双酶切,将AQP5全长序列克隆人pWPTS-GFP,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,对长出的克隆用菌落PCR鉴定,再对阳性克隆进行测序和比对分析.重组病毒质粒与另外两种辅助包装原件载体质粒通过CaCl2共转染293T细胞(人胚肾细胞),培养48 h后收集细胞培养上清液,将病毒浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度,并检测慢病毒载体在工具细胞SGC7901细胞(胃癌细胞)的转染效率.Western blot检测SGC7901细胞中AQP5蛋白.结果 测序结果和Westem blot检测均证明AQP5重组慢病毒载体构建正确,并能在细胞中正确表达.与辅助质粒共转包装细胞获得慢病毒颗粒,并成功感染SGC7901细胞.包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为1×108 TU/ml.结论 成功构建了稳定表达AQP5基因的重组慢病毒载体.
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二甲双胍对IL-6诱导的胃癌SGC7901细胞上皮间质转化的影响
目的:探讨二甲双胍对IL-6诱导的胃癌SGC7901细胞上皮间质转化(EMT)的影响.方法:采用IL-6培养SGC7901,构建EMT模型,倒置显微镜下观察细胞形态学变化.将SGC7901细胞分为对照组、IL-6(50 μg/L)培养组、二甲双胍(50 mmol/L)培养组和二甲双胍+IL-6培养组;培养48 h,MTT法检测各组细胞相对存活率,流式细胞术检测各组细胞周期的变化,细胞划痕修复实验检测细胞增殖及迁移的变化,RT-PCR及Western blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Twist1 mRNA和蛋白表达的变化.结果:IL-6能诱导SGC7901细胞由上皮细胞样形态向间质细胞样形态转化,多数细胞表现为似成纤维状,部分细胞呈梭形、纺锤体形.二甲双胍干预能抑制胃癌细胞的增殖(F=137.445,P＜0.001)、细胞的周期分布及细胞的迁移和侵袭能力.二甲双胍干预后SGC7901细胞中E-cadherin mRNA和蛋白表达水平明显升高(F=34.678、53.190;P＜0.001),而N-cadherin、Vimentin、Twist1mRNA和蛋白表达水平降低(F=27.856、3.667、7.180及4.940、7.721、76.193;P均＜0.05).结论:二甲双胍能明显抑制胃癌细胞的增殖、侵袭及EMT过程.
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SGC7901和SGC7901/ADR细胞中S100A6蛋白及mRNA的表达
目的：探讨S100A6与胃癌多药耐药的关系。方法：常规培养人胃癌细胞SGC7901及其耐药细胞株SGC7901/ADR,在SGC7901/ADR细胞培养基中加入阿霉素（0.375mg/L）维持耐药。取对数生长期的SGC7901和SGC7901/ADR细胞,分别采用免疫细胞化学方法、Westernblot方法和RT-PCR检测S100A6蛋白及mRNA的表达情况。结果：免疫细胞化学染色结果显示S100A6在SGC7901细胞中的阳性染色强度高于SGC7901/ADR细胞;Westernblot结果显示SGC7901细胞中S100A6蛋白的相对表达量（4.356±0.759）高于SGC7901/ADR细胞的（2.243±0.089）（t=4.788,P=0.039）;RT-PCR结果显示SGC7901细胞中S100A6mRNA的相对表达量（0.659±0.017）与SGC7901/ADR的（0.582±0.060）相比,差异无统计学意义（t=2.125,P=0.150）。结论：S100A6蛋白在SGC7901和SGC7901/ADR细胞中的差异性表达可能与细胞多药耐药有关;这种差异表达是翻译后事件。
关键词： S100A6 多药耐药 SGC7901细胞 SGC7901/ADR细胞 胃癌 -
甘草次酸对人胃癌SGC7901细胞增殖的影响及机制
目的 探讨甘草次酸(GA)对人胃癌SGC7901细胞增殖的影响及其可能机制.方法 常规培养人胃癌SGC7901细胞,分为实验组1～7组和阴性对照组,实验组l～7组为培养SGC7901细胞加入GA的二甲基亚砜(DM-SO)溶液,使GA的终浓度分别为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、150.00、200.00 μmol·L-1,阴性对照组加入和终浓度GA相同体积的DMSO.GA作用48 h,采用四甲基偶唑蓝(MTT)法检测GA对人胃癌SGC7901细胞的增殖作用,用流式细胞仪检测碘化丙啶单染细胞的DNA含量.结果 MTT法测定结果显示,终浓度为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、150.00、200.00 μmol·L-1的GA对人胃癌SGC7901细胞抑制率分别为(8.27±1.80)％、(13.74±3.16)％、(25.85±4.35)％、(46.03±5.88)％、(97.78 ±1.10)％、(99.56±0.21)％、(98.86±0.35)％;GA终浓度低于100.00 μmol·L-1时,人胃癌SGC7901细胞抑制率随GA浓度的增加而逐渐增加,呈明显的剂量依赖关系(P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,终浓度为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、150.00、200.00 μmol·L-的GA作用人胃癌SGC7901细胞48 h后,DNA处于亚二倍体、二倍体、四倍体、介于二倍体和四倍体之间的细胞数量差异有统计学意义(P＜0.001);浓度低于150.00 μmol·L-1时,亚二倍体的细胞数量逐渐增加,且呈浓度依赖性(P＜0.05);浓度高于150.00 μmol·L-后,亚二倍体的细胞数量逐渐减少;浓度低于100.00 μmol·L-1时,二倍体的细胞数量逐渐增加,介于二倍体与四倍体之间、四倍体的细胞数量则逐渐减少;当浓度超过100.00μmol·L-1时,二倍体的细胞数量逐渐减少,四倍体的细胞数量逐渐增加,介于二倍体与四倍体之间的细胞数量变化不大.结论 GA对人胃癌SGC7901细胞的生长有抑制作用,其抑制过程可能有细胞凋亡的参与,也有周期的改变.
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苦参碱对胃腺癌细胞SGC7901黏附和移动的影响
目的:探讨不同浓度苦参碱对SGC7901细胞黏附和移动能力的影响.方法:5,50,100,250和500 mg/L苦参碱作用SGC7901细胞24 h后,黏附实验检测细胞黏附率,划痕损伤实验(Wound healing assay)检测迁移速度,在Transwell培养体系中,观察苦参碱对SGC7901细胞的抑制作用,PKA试剂盒检测PKA活性.结果:5,50,100,250和500 mg/L苦参碱处理24 h后, SGC7901细胞黏附率分别为78.56%,44.28%,42.48%,39.75%和31.54%,总体呈下降趋势,50 mg/L组与5 mg/L和500 mg/L组比较差异有显著性(P＜ 0.01);与100 mg/L和250 mg/L组比较差异无显著性(P＞0.05).50 mg/L苦参碱作用24 h后SGC7901细胞迁移速度显著降低(P＜ 0.01), Transwell培养体系中,苦参碱组上层迁移到下层的细胞明显少于不加苦参碱组(P＜ 0.01),且PKA活性明显降低(P＜ 0.01).结论:苦参碱能抑制SGC7901细胞黏附和运动.
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miR-136通过抑制PPP2R2A表达调控胃癌细胞SGC7901凋亡
目的:检测miR-136对胃癌细胞SGC7901增殖和凋亡的影响及其机制.方法:分别利用MTT实验和Annexin V-PI实验检测转染miR-136 inhibitor的胃癌细胞SGC7901增殖和凋亡.利用western blot和双荧光素酶报告基因技术检测miR-136的靶基因.结果:抑制miR-136表达可以明显抑制SGC7901细胞增殖和诱导其凋亡.miR-136能够与PPP2R2A mRNA 3'-UTR区结合.结论:抑制miR-136表达能够促进PPP2R2A蛋白表达,进而引起胃癌细胞凋亡.
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RASSFlA基因对胃癌SGC7901细胞NF-κB活性的影响
目的 探讨RASSF1A基因对人胃癌SCC7901细胞NF-KB活性的影响.方法 电泳迁移实验分析RASSF1A基因转染前后SGC7901细胞NF-kB活性的变化.蛋白印迹和免疫细胞化学检测RASSF1A基因转染前后SGC7901细胞P65蛋白的表达.结果 与未转染组和转染空白载体组比较,转染RASSF1A基因组SCC7901细胞的NF-kB活性明显降低,P65蛋白的表达明显减少.结论 RASSF1A基因可能通过抑制P65的表达、降低NF-kB活性抑制从而抑制胃癌SGC7901细胞生长.
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二烯丙基二硫对人胃癌SGC7901细胞增殖及周期的影响
目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)对人胃癌SGC7901细胞增殖及周期分布的影响.方法 体外培养SGC7901细胞,采用MTT比色实验、细胞计数法和流式细胞术分析DADS对SGC7901细胞增殖的抑制作用与对细胞周期分布的影响.结果 MTT法显示,不同浓度DADS (50、100、150、200、250 μmol/L)处理SGC7901细胞96 h后,生长抑制率分别为21.07%、49.96%、59.73%、67.64%、70.49%,DADS抑制作用随浓度增加逐渐增强(P<0.05).细胞计数法表明:常规培养的SGC7901细胞群体倍增时间分别为24.35 h,当DADS浓度由50 μmol/L增加到200 μmol/L时,其细胞群体倍增时间由27.28 h增加到71.98 h (P<0.05).流式细胞仪分析发现,50、100和200 μmol/L DADS呈浓度依赖性将SGC7901细胞阻滞在G2/M期.结论 DADS具有抑制人胃癌SGC7901细胞增殖的作用,且其抑制增殖作用与G2/M期阻滞有关.
