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FTY720的作用特点及机制的研究进展
FTY720是一种来源于冬虫夏草的新型免疫抑制剂,其化学结构和作用机制均不同于常规免疫抑制剂,如环孢素(CsA)、他克莫司(FK506)、雷帕霉素(Rapa).FTY720可直接作用于淋巴细胞,具有较强的免疫抑制作用,并与常规免疫抑制剂具有协同作用.动物实验尚未发现明显的毒副作用.因此,在器官移植及自身免疫性疾病的治疗中有着广泛的应用前景.
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1磷酸鞘氨醇及其G蛋白偶联受体的免疫调节功能研究进展
1磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)是一种具有重要生物学活性的溶血磷脂,它作为第一信使与各种免疫细胞膜上相应的G蛋白偶联受体相互作用发挥不同的免疫调节功能.S1P可抑制T细胞的增殖,并抑制活化的CD4+T细胞分泌IFN-γ和IL-4.S1P对T细胞、B细胞、树突状细胞和NK细胞都具有趋化性,其主要效应是通过其受体S1P1介导调节淋巴细胞再循环和组织分布.S1P对调节性T细胞趋化性弱,是调节性T细胞发挥佳活性所必需的.新型免疫抑制剂FTY720进入人体后快速磷酸化,形成具有生物学活性的FTY720-P,与S1P相似,是其受体S1P1、S1P3、S1P4和S1P5的真正激动剂,可影响成熟T细胞、B细胞、树突状细胞及调节性T细胞的组织分布与功能活性,具有低毒高效可逆的免疫抑制效应,能够预防异体移植物排斥及治疗自身免疫病.本文就S1P的合成、代谢及其G蛋白偶联受体在免疫细胞的表达、对各种免疫细胞的影响、以S1P GPCRs为靶点的药物及其临床意义进行综述.
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PP2A激活剂对HL-60细胞增殖的影响及急性髓系白血病患者体内PP2A活性变化的研究
本研究探讨蛋白磷酸酯酶2A(protein phosphotase 2A,PP2A)激活剂或抑制剂对体外HL-60细胞增殖的影响及急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者体内单个核细胞中PP2A的活性变化.单独使用PP2A激活荆FRY720或FTY720联合冈田酸(OA)处理HL-60细胞24小时,应用CCK8试剂盒检测细胞的增殖状况;同时选取20例初发或复发的AML患者,使用PP2A免疫沉淀磷酸酶活性检测试剂盒检测AML患者及正常对照组外周血单个核细胞中PP2A活性,使用SPSS 16.0软件对数据进行分析.结果显示:FTY720组细胞增殖受到明显抑制,与对照组相比差异有显著性(p＜0.05);FTY720+OA组细胞增殖受到轻微抑制,与对照组相比差异无显著性(p＞0.05),与FTY720组相比差异有显著性(p＜0.05).AML患者单个核细胞PP2A的活性(453.67±102.52pmol磷酸盐)与正常人(673.29±96.32 pmol磷酸盐)比较明显降低,两组之间差异有显著性(p＜0.01).结论:PP2A的激活或抑制能影响HL-60细胞的增殖;AML患者单个核细胞中PP2A的活性有所降低.PP2A蛋白与AML的发生、发展密切相关,对AML的诊断及治疗可能有参考价值.
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ROS在FTY720诱导U266细胞死亡中的作用机制研究
本研究探讨活性氧(ROS)在FTY720诱导多发性骨髓瘤U266细胞株凋亡及自噬中的作用.不同浓度FTY720处理U266细胞24 h后,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,应用Western blot检测LC3B的表达.结果显示:应用FTY720可引起U266细胞发生凋亡及自噬,自噬的发生可促进细胞死亡.自噬抑制剂Bafilomycin A1可降低FTY720导致的细胞生存率下降.应用ROS抑制剂NAC或Tiron后,FTY720引起的细胞凋亡减轻,联合应用NAC或Tiron和FTY720后LC3B-Ⅱ表达较单用FTY720明显下降.结论:FTY720可诱导U266细胞发生凋亡及自噬,ROS是FTY720引起的多发性骨髓瘤细胞凋亡及自噬的共同调节剂.
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FTY720诱导多发性骨髓瘤细胞株U266凋亡的机制研究
目的:探讨FTY720对多发性骨髓瘤U266细胞凋亡的影响及相关作用机制.方法:FTY720 2.5、5、10及20 μmol/L处理U266细胞24h后,流式细胞术Annexin-V-FITC/PI染色检测细胞凋亡.应用FTY720 20μmol/L分别处理U266细胞0、6、16及24h,检测细胞凋亡率.二甲基亚砜(DMSO)及FTY720 20 μmol/L分别处理U266细胞24h,DAPI染色5min,将细胞滴于载玻片上,在荧光显微镜下观察细胞核形态.FTY720 5 μmol/L单用或/和泛Caspase抑制剂Z-VAD-fmk 12.5、25、50 μmol/L合用处理U266细胞,CCK-8方法检测细胞生存率.FTY720 0、2.5、5、10及20 μmol/L处理U266细胞24h后,使用Western bolt方法检测Cleaved Caspase-3的表达.FTY720 0、5、10及20 μmol/L处理U266细胞24 h后,应用Western blot检测MCL-1、survivin、BCL-2、BJD、BAX、BAK和P-ERK的表达.结果:FTY720明显增加U266细胞凋亡,呈浓度及时间依赖性(r=0.98,r=0.97,P＜0.05),在荧光显微镜下可观察到,FTY720处理的细胞的细胞核出现核固缩及碎裂,发生凋亡的改变,而在DMSO组未观察到此现象.Z-VAD-fmk可逆转FTY720引起的细胞凋亡,呈浓度依赖性(r =0.97,P＜0.05).FTY720可引起U266细胞MCL-1、Survivin、BCL-2表达下降,同时引起BID裂解,而对BAX,BAK,P-ERK的表达没有影响.结论:FTY720可引起U266细胞凋亡,该凋亡为Caspase-3依赖性死亡.FTY720诱导产生的凋亡是通过下调抗凋亡蛋白MCL-1、survivin、BCL-2及激活促凋亡蛋白BID实现的.
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不同剂量FTY720对大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3表达及细胞凋亡的影响
目的 比较不同剂量FTY720 对大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3 的表达及神经细胞凋亡的影响.方法 雌性SD 大鼠200 只,随机分为5 组,每组40 只.A 组大鼠不打击脊髓,缝合切口后立即以0.3 ml 生理盐水灌胃.B、C、D、E 组大鼠制作Allen'sT9脊髓损伤模型.B组造模后立即以0.3 ml 生理盐水灌胃,C、D、E 组分别以FTY720 按1 mg/kg、3 mg/kg、5 mg/kg 生理盐水稀释至0.3 ml 灌胃.分别于术后6 h、12 h、24 h、48 h 和72 h 取损伤段脊髓超薄切片,行SP 免疫组化染色观察Caspase-3 表达及TUNEL 染色观察细胞凋亡情况,并计算相应时间点免疫组化学染色阳性细胞比值.结果 A组各时间点几乎见不到Caspase-3 和细胞凋亡阳性表达.B、C、D、E 组均在伤后6 h 开始出现凋亡细胞表达,伤后24 h 达高峰,伤后48 h 开始减弱,伤后72 h 进一步减少.伤后各时间点细胞凋亡表达均为B 组>C 组>D 组=E 组(P>0.05)>A 组(P<0.05).Caspase-3 表达与细胞凋亡同步.相关性检验显示B、C、D组中,FTY720 的剂量与Caspase-3 表达、细胞凋亡表达呈负相关(P<0.05).D组和E 组中,FTY720 剂量与上述指标不相关(P>0.05).结论 FTY720 可以显著减少大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3 的表达及神经细胞凋亡.FTY720 的剂量与其减轻Caspase-3 表达和细胞凋亡效果之间存在一定量效关系.3 mg/kg 是FTY720 治疗大鼠急性脊髓损伤的适剂量.
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FTY720改善颅脑损伤大鼠神经功能的机制研究
目的：探讨FTY720对颅脑损伤大鼠神经功能的影响及其相关机制研究。方法60只大鼠分成假手术组、模型组和治疗组，每组20只，采用改进的Feeney自由落体损伤装置建立大鼠颅脑损伤模型。治疗组大鼠按1 mg/kg 剂量予FTY720腹腔注射，假手术组及模型组大鼠予以腹腔注射1 ml生理盐水。术后24 h，每组各取10只大鼠断头处死，分离海马组织，采用Western-blotting检测核因子κB表达水平，采用免疫组织化学染色法检测大鼠小胶质细胞OX-42表达水平。同时采用前肢放置试验评分、平衡实验评分及改良神经功能缺损程度评分进行神经功能评估。结果三组大鼠海马组织核因子κB蛋白表达水平（F=95.962，P＜0.001）及小胶质细胞（F=108.853，P＜0.001）比较，差异均有统计学意义。且模型组核因子κB蛋白及小胶质细胞OX-42表达水平较假手术组及治疗组明显增加（P均＜0.05）。同时，模型组大鼠术后7、14、21、28 d前肢放置试验评分[（7.0±0.7）分vs.（6.3±0.5）分，（5.9±0.7）分vs.（5.0±0.8）分，（4.9±1.0）分vs.（3.8±0.8）分，（3.7±1.1）分vs.（2.3±0.7）分；t=2.689、2.586、2.741、3.525，P=0.015、0.019、0.013、0.002]、平衡实验评分[（4.3±0.7）分vs.（3.6±0.7）分，（3.5±1.1）分vs.（2.6±0.7）分，（2.9±0.9）分vs.（1.9±0.7）分，（2.5±0.7）分vs.（1.8±0.6）分；t=2.278、2.212、2.762、2.333，P=0.035、0.040、0.013、0.031]及改良神经功能缺损程度评分[（10.1±1.0）分vs.（8.7±1.6）分，（8.8±0.8）分vs.（7.5±1.5）分，（7.3±1.0）分vs.（5.6±1.3）分，（5.7±1.3）分vs.（4.1±1.4）分；t=2.385、2.414、3.400、2.726，P=0.028、0.027、0.003、0.014]均明显高于治疗组。结论 FTY720可显著改善颅脑损伤大鼠神经功能，其作用机制可能与FTY720的中枢炎症抑制作用有关。
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FTY720对CVB3病毒诱导的病毒性心肌炎模型的治疗作用研究
目的 本文旨在研究FTY720对CVB3诱导的病毒性心肌炎细胞和动物模型的治疗作用.方法 利用CVB3病毒、乳鼠心肌细胞及小鼠建立病毒性心肌炎细胞和动物模型.通过观察心肌细胞病变情况、动物死亡率及心脏脏器系数、心肌组织HE染色及动物模型外周血清中LDH、CK-MB水平对FTY720的疗效进行评价.通过FTY720抑制病毒增殖实验及心肌细胞凋亡实验研究FTY720抗病毒性心肌炎的作用机制.结果 FTY720能够显著的抑制由CVB3引起的细胞病变(P＜0.05),显著的降低小鼠外周血中心肌酶LDH和CK-MB的水平及小鼠心脏脏器系数(P＜0.05),而对小鼠死亡率影响不大(P＞0.05).FTY720能够显著的抑制CVB3的增殖和心肌细胞的凋亡(P＜0.05或P＜0.01).结论 FTY720对CVB3诱导的病毒性心肌炎细胞和动物模型均具有一定的保护作用,其作用机制与抑制病毒增殖及心肌细胞凋亡有关.
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1-磷酸鞘氨醇与支气管哮喘
1-磷酸鞘氨醇是一类生物活性鞘脂类代谢物,不仅可以作为第一信使与G蛋白耦联受体结合,也可以作为第二信使参与调节细胞的发育、增殖、重塑、生存和活化细胞等生物效应.近些年的研究证实,1-磷酸鞘氨醇及其信号通路对于支气管哮喘的发生、发展起到了非常重要的作用.这将或许为支气管哮喘的治疗提供一个新途径,本文主要就1-磷酸鞘氨醇与支气管哮喘的关系作一综述.
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FTY720在器官移植中的研究进展
FTY720在器官移植临床上已经显示了良好的疗效和安全性,研究表明其主要作用机制是抑制外周淋巴器官中淋巴细胞的外流,并能加强内皮细胞的粘附连接.
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FTY720对胆管癌细胞系QBC939增殖及侵袭的影响
目的：探讨FTY720对体外培养QBC939细胞系增殖及侵袭的影响。方法：体外培养QBC939细胞系，将其分为对照组、FTY720不同浓度给药组。通过MTT法、流式细胞仪检测周期和凋亡、细胞侵袭等实验观察FTY720对QBC939细胞系增殖及侵袭的影响。结果：当FTY720浓度为2400 ng/ml时，体外培养的QBC939细胞系的增殖受到明显抑制，抑制率为65．4％（ P＜0．05）；流式细胞仪检测提示QBC939细胞系被阻滞于G1期，并促进其发生凋亡；侵袭实验显示FTY720可以明显抑制QBC939细胞系的侵袭，当FTY720浓度为2400 ng/ml时，侵袭抑制率可达80％。结论：FTY720可抑制体外培养QBC939细胞系的增殖，诱导该肿瘤细胞凋亡，并且抑制其侵袭。
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FTY720对大鼠急性脊髓损伤后神经功能恢复的影响及相关机制
目的:观察FTY720对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)后神经功能的影响,并探讨其相关机制.方法:168只雌性SD大鼠,随机分成A、B、C三组,每组56只,A组(假手术组)大鼠麻醉后仅切除T9椎板,不打击脊髓,缝合后立即以0.3ml生理盐水灌胃.B、C组采用Allen's法制作T9脊髓损伤模型,B组(对照组)以0.3ml生理盐水灌胃,C组(治疗组)以FTY720按3mg/kg生理盐水稀释至0.3ml灌胃.每组取8只大鼠分别于术后1d、3d、7d、14d、21d行斜板试验及BBB评分.分别于术后6h、12h、24h、48h、72h、7d、21d处死大鼠,每个时间点每组8只,取损伤段(A组取相应部位)脊髓行超薄切片,HE染色观察各组脊髓坏死情况、炎细胞浸润情况、胶质瘢痕形成情况及脊髓空洞大小,并计数各组术后12h淋巴细胞数、术后12h与72h炎性细胞、术后7d胶质瘢痕区细胞,计算伤后21d脊髓空洞面积与脊髓面积比值；取术后6h、12h、24h、72h的切片行SP免疫组化染色观察caspase-3表达及Tunel染色观察细胞凋亡情况,计算相应时间点免疫组化染色阳性细胞比值和凋亡指数.所有数据以SPSS 13.0进行统计学分析.结果:B、C两组各时间点斜板实验及BBB评分均较A组同时间点差(P＜0.05),在术后1d时B、C组之间无显著性差异(P＞0.05),术后3d、7d、14d、21d时C组优于B组(P＜0.05).HE染色结果显示A组各时间点脊髓形态正常;B、C组脊髓术后6h可见脊髓内出血、血肿形成,术后12h～48h脊髓进行性水肿、损伤中心区出现液化坏死,伴有炎细胞浸润,以中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞为主,至术后72h,损伤中心区形成无组织结构空洞,空洞周围有大量炎细胞浸润,以小胶质细胞/单核细胞为主；术后12h及72h,B组炎细胞浸润程度明显重于C组(P＜0.05),术后12h C组淋巴细胞浸润程度相对B组明显减少(P＜0.05),术后7d,脊髓水肿减轻,空洞周围形成胶质瘢痕,胶质瘢痕细胞计数B组明显大于C组(P＜0.05),术后21d脊髓空洞形成,脊髓空洞比值B组明显大于C组(P＜0.05).SP免疫组化染色和Tunel染色结果显示A组各时间点几乎见不到caspase-3和细胞凋亡表达阳性细胞,B、C组脊髓损术后6h即可见凋亡细胞,到术后24h达高峰,而后随术后时间延长而逐渐减弱,但是仍然保持在较高水平；caspase-3表达与细胞凋亡同步,各时间点C组caspase-3表达阳性细胞比值和细胞凋亡指数均显著低于B组(P＜0.05).结论:FTY720 可以显著改善大鼠ASCI后神下功能,其可能是通过抑制脊髓损伤后的炎症反应,减少caspase-3的表达及神经细胞凋亡,从而减轻脊髓继发性损伤.
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FTY720对小鼠外周血淋巴细胞及T细胞亚群的影响
目的观察FTY720对近交系小鼠淋巴细胞及T细胞亚群变化的影响以指导临床用药. 方法选用雄性C57/bl近交系小鼠.FTY720 3 mg*kg-1*d-1,连续口服14 d.在各所选时间点计算淋巴细胞百分比,流式细胞术分析T细胞亚群变化. 结果服用FTY720后,小鼠外周血淋巴细胞迅速下降,并于4 h降至低值,之后保持稳定.停用FTY720后小鼠外周血淋巴细胞仍在低水平徘徊2周,第3周开始出现明显回升,停药后第6周恢复至服药前水平.T细胞在服用FTY720后的变化与淋巴细胞相似.CD-8 T细胞对FTY720相对较敏感. 结论 FTY720对外周血淋巴细胞的作用起效迅速,安全稳定,特异性强,可逆.对T细胞及其亚群的作用基本符合以上特点,CD-8T细胞对FTY720相对较敏感.
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FTY720联合雷帕霉素抗胰腺癌细胞增殖作用的体外研究
目的 探讨FTY720和雷帕霉素联合用药体外抗胰腺癌细胞增殖的相互作用.方法 采用Panc-1和AsPc-1胰腺癌细胞株作为体外研究模型.以不含FTY720或雷帕霉素培养液处理的细胞株为对照组,FTY720单独用药的浓度范围为1～15 μmol/L;雷帕霉素单独用药的浓度范围为0.002～200 μmol/L,联合用药方案采用两组浓度的雷帕霉素联合7组不同浓度的FTY720;或者采用两组浓度的FTY720联合5组不同浓度的雷帕霉素.采用MTT法评估药物对细胞增殖的抑制率,采用双变量相关性分析法统计药物剂量与细胞增殖抑制率之间的相关性.结果 单独用药作用下,FTY720或雷帕霉素用药剂量与胰腺癌细胞增殖的抑制率呈现剂量依赖性(FTY720+AsPc-1:r=0.887,P=0.000;雷帕霉素+AsPc-1:r=0.822,P=0.000 ;FTY720+Panc-1:r=0.796,P=0.000;雷帕霉素+Panc-1:r=0.786,P=0.000).当10μmol/L FTY720和0.002 μmol/L雷帕霉素联用时,对AsPc-1细胞增殖的抑制率达50%(P=0.000),对Panc-1细胞增殖的抑制率达40%(P=0.000),两药联用具有协同作用.结论 FTY720及雷帕霉素在体外均能呈剂量依赖性地抑制胰腺癌细胞增殖,联合用药后能协同抑制胰腺癌细胞的增殖.
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FTY720对大鼠肝癌肝移植后肝癌复发的抑制作用
肝移植后肝癌复发严重影响受者预后,而移植后免疫抑制剂的使用会增加肝癌复发的风险.鞘氨醇磷酸酯(sphingosine-1-phosphate, S1P)是鞘氨醇在体内被磷酸化后的产物,是一种有力的信号脂类分子,它可以引起多种细胞的生物学反应.S1P受体家族有S1P1, S1P2, S1P3, S1P4和S1P5等亚型,其中S1P1, S1P2, S1P3广泛表达于全身各部分,而S1P4主要表达于淋巴组织和血小板,S1P5主要表达于中枢神经系统.现有证据尚未发现肝癌细胞表达S1P受体.FTY720是新开发的免疫抑制剂,是一种S1P受体拮抗剂.
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新型免疫抑制剂FTY720对肾间质纤维化大鼠管周毛细血管病变的预防作用
肾小管周围毛细血管(PTC)减少及缺氧可以作为独立因素参与肾小管间质损伤及纤维化的进程,肾小管上皮细胞组成分泌血管内皮生长因子(VEGF)是维持PTC 正常结构与功能的重要因素之一式[1] .FRY720是新合成的免疫抑制剂,由冬虫夏草抽提物中具有免疫抑制作用的成分ISP-1(多球壳菌素)化学修饰而成 [2],可以延缓肾间质纤维化进程 [3],而其延缓肾间质纤维化作用是否与PTC有关尚不清楚,为此通过动物实验观察FTY720对肾间质纤维化中微血管病变的作用.
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FTY720对人类肝癌细胞HepG-2侵袭能力的影响
目的 研究FTY720对人类肝癌细胞HepG-2侵袭能力的影响.方法 培养人类肝癌细胞HepG-2,将其分为对照组、FTY720不同浓度(0.05、0.10、0.15 g/ml)给药组.通过细胞侵袭实验观察FTY720对HepG-2细胞侵袭能力的影响;RT-PCR检测细胞基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)mRNA水平表达的变化;ELISA法检测细胞MMP-2、MMP-9的蛋白表达变化.结果 与空白组[(110±3)个]相比,随着FTY720给药浓度的升高,各组癌细胞的侵袭能力呈浓度依赖性下降:0.05 g/ml FRY720处理组的细胞数量为(74±4)个,而0.10、0.15 g/ml药物处理组的细胞数量则为(42±3)、(25±5)个,差异有统计学意义(P<0.01).FTY720不同浓度组肝癌细胞MMP-2、MMP-9 mRNA表达较空白组明显下降(P<0.05),且随着fTY720浓度的升高,MMP-2、MMP-9表达逐渐下降(P<0.05).FTY720不同浓度组肝癌细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达量较空白组明显下降(P<0.05),且在一定范围内与FTY720浓度成反比.结论 FTY720对肝癌细胞HepG-2侵袭能力具有抑制作用,并随FTY720浓度的升高侵袭能力逐渐下降,其机制之一可能是降低了肝癌细胞MMP-2、MMP-9的蛋白质及基因表达.
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FTY720通过抑制脑组织IL-23表达减轻脑缺血再灌注损伤
目的 观察大鼠局灶性脑缺血再灌注(I/R)模型脑组织白细胞介素-23(IL-23)水平变化,观察1-磷酸鞘氨醇(S1P) 受体激动剂芬戈莫德(fingolimod,FTY720)对IL-23表达及脑I/R损伤的影响,探讨IL-23和FTY720在脑I/R损伤中的作用.方法 将雄性Wistar大鼠随机分成假手术组和I/R组,后者再分为I/R 3 h、6 h、12 h、24 h、24 h+安慰剂和24 h+FTY720六个亚组.应用"线栓法"制作大鼠右侧大脑中动脉闭塞模型,2 h后拔出线栓进行再灌注,并分别于再灌注3、6、12、24 h处死大鼠.I/R 24 h+安慰剂组和I/R 24 h+FTY720组大鼠分别于再灌注前10 min经尾静脉按体质量1 mg/kg注入安慰剂和FTY720.利用免疫组化方法观察大鼠脑组织IL-23表达水平变化,以2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定大鼠相对脑梗死体积和TUNEL阳性细胞计数,并比较I/R 24 h +安慰剂组和I/R 24 h+FTY720组大鼠神经功能评分.结果 假手术组大鼠脑组织无IL-23表达,I/R 3 h、6 h、12 h和24 h组大鼠梗死灶周围区皮质IL-23阳性细胞数依次为5.16±0.68、5.54±1.06、23.72±3.11和97.20±10.26,I/R 各时间组间差异有统计学意义(P<0.05).I/R 24 h+安慰剂组大鼠神经功能评分、相对梗死体积、凋亡细胞数、IL-23阳性细胞数分别为2.37±0.27、(14.7±3.40)%、19.00±2.10、101.75±12.04,I/R 24 h+FTY720组分别为1.31±0.21、(5.50±2.62)%、9.05±1.25、54.96±7.82,二组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 IL-23在脑I/R过程中表达水平上调,加重I/R损伤.FTY720可能通过抑制IL-23的表达发挥脑保护作用.
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FTY720对急性脊髓损伤大鼠神经功能及血脊髓屏障的影响
目的 观察新型免疫抑制剂FTY720对急性脊髓损伤后大鼠神经功能和血脊髓屏障的影响.方法 成年SD大鼠144只,随机分为4组(n=36).正常对照组(NG):不做任何处理;假手术组(SO):单纯咬除椎板暴露脊髓,不予损伤处理;损伤对照组(HS):脊髓右半侧横切损伤后腹腔注射生理盐水;FTY720治疗组(FTY720):脊髓右半侧横切损伤后30min给予腹腔注射FTY720[1mg/(kg·d)],连续7d.术后不同时间点行行为学检测,包括BBB运动功能评分和水平网格检测;行神经电生理运动诱发电位(MEP)N1波和感觉诱发电位(SEP) P1波潜伏期检测;对脊髓组织行苏木精-伊红(HE)染色及Evans Blue(EB)血脊髓屏障渗透性检测.分析FTY720治疗效果.结果 半横切损伤后,HS组和FTY720组大鼠损伤侧脊髓神经功能下降,至28d时仍未恢复至NG组和SO组水平.行为学检测和神经电生理检测结果显示,FTY720组大鼠运动功能恢复速度比HS组更快;损伤7、14、28d时,两组大鼠BBB评分和SEP P1波潜伏期检测差异有统计学意义(P＜0.05);损伤14、28d时,两组大鼠水平网格检测和MEP N1波潜伏期检测差异有统计学意义(p＜0.05).组织学检测结果显示,各时间点NG组和SO组大鼠脊髓结构均完整;损伤14d时,FTY720组脊髓损伤处慢性炎症细胞浸润,胶质化反应程度小于HS组;损伤28d时,FTY720组损伤处空洞残存面积小于HS组,再生纤维排列较HS组有序.血脊髓屏障渗透性检测结果发现,损伤后7d内,HS组和FTY720组大鼠血脊髓屏障EB渗出量较NG组和SO组明显增加;各时间点FTY720组EB渗出面积均小于HS组(P＜0.05),其中损伤3d时差异为明显.结论 FTY720能显著降低脊髓损伤急性期血脊髓屏障渗透性,有效促进急性期后神经功能的恢复,为损伤组织提供一定的神经保护作用.
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S1P1受体激动剂FTY720的免疫抑制作用
FTY720 (2-amino-2-[2-(4-octylphenyl) ethyl]-l,3-propanediol hydrochloride,图1)是日本京都大学的藤多哲朗教授等从寄生蝉幼虫的子囊菌(Isaria sinclairii)培养液中提取的抗生素成分.ISP-1 (myriocin/thermozymocidin)是经化学结构修饰后得到的合成药物[1],在细胞内被鞘氨醇激酶2 (sphingosine kinase 2,Sphk2)磷酸化为具有生物活性的FTY720-P.FTY720与现有的免疫抑制剂结构完全不同,并显示特有的作用机制.它通过激动S1P受体而使外周血中淋巴细胞“回巢”,从而起到降低外周血淋巴细胞的作用,表现出免疫抑制.特别是对器官移植等的免疫排斥反应起到抑制作用尤为引人注目[2].
