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季德胜蛇药通过调控miR-335抑制肝癌Huh-7细胞增殖作用机制探讨
目的 探讨季德胜蛇药对肝癌Huh-7细胞增殖作用的影响并进一步从miRNA层面探讨其抑制增殖的调控机制.方法 以肝癌Huh-7细胞为模型,制备不同浓度的兔含药血清后培养Huh-7细胞,并同时设置相应浓度的对照组.CCK-8实验检测转染miR-335入Huh-7细胞后对该细胞增殖能力的影响;采用实时定量聚合酶链式反应qRT-PCR检测季德胜蛇药含药血清对Huh-7细胞中miR-335的调控作用;CCK-8实验检测季德胜蛇药含药血清对Huh-7细胞增殖能力的影响;Western-blot检测miR-335潜在靶向Bcl-w表达水平的变化.结果 miR-335过表达后CCK-8实验组与空白对照组及阴性对照组相比,其OD值显著降低(P<0.01).含药血清干预下,与对照组相比,同等浓度的蛇药组miR-335表达水平较高,且在一定浓度范围内含药血清浓度越高,miR-335在Huh-7细胞中的表达也相继增高;此外,CCK-8实验下季德胜蛇药含药血清组都较正常血清组OD值低,且浓度越高,其OD值越低,都有较明显的统计学差异(P<0.01).上调miR-335后,Huh-7细胞Bcl-w蛋白表达水平降低.结论 季德胜蛇药通过调控miR-335能抑制肝癌Huh-7细胞增殖.
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细胞凋亡在结肠腺癌组织中的变化及其相关蛋白的表达
目的:观察结肠腺癌组织细胞凋亡的变化,探讨抑制凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL及Bcl-w在结肠腺癌中的作用.方法:收集14例我院手术切除结肠腺癌标本,肠镜取正常结肠黏膜组织27例,所有标本均经病理明确诊断.用TUNEL法检测其组织细胞凋亡水平,并用免疫组织化学PV法检测蛋白Bcl-2、Bcl-xL及Bcl-w的表达水平.结果:正常结肠黏膜组织的细胞凋亡指数明显高于结肠腺癌,有统计学显著性差异(t=3.35,P=0.002);结肠腺癌中Bcl-xL与Bcl-w的表达均高于正常结肠黏膜组织,有统计学差异(92.86% vs 11.11%;85.71% vs 0%,P<0.01或P<0.05);Bcl-2的表达与正常结肠黏膜组织没有统计学差异(P>0.05).结论:结肠腺癌的组织细胞凋亡明显低于正常结肠组织:结肠腺癌中抑制凋亡蛋白Bcl-xL与Bcl-w的高表达可能发挥了重要的作用.
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Bcl-w基因在胃癌中的表达对化疗预后的影响分析
目的 探讨Bcl-w(B细胞淋巴因子-w)在胃癌中的表达对化疗和预后的影响.方法 通过免疫组化SP法,检测100例人胃癌组织中Bcl-w的表达.结果 ①100例胃癌中Bcl-w表达的阳性率为69.0％.②胃癌组织中Bcl-w的表达与肿瘤的大小、浸润深度、组织分化程度和淋巴结转移正相关(P＜0.01).③Bcl-w表达与胃癌的整体生存时间及5年生存率有统计学意义阴性预后好(P ＜0.01);Bcl-w阳性患者中化疗患者与非化疗患者预后无显著差异；Bcl-w阴性者化疗患者预后优于非化疗患者.结论 ①Bcl-w在抑制胃癌细胞凋亡,促进胃癌侵袭转移中发挥了重要的作用,②Bcl-w在胃癌中的表达与预后负相关,Bcl-w在胃癌中的表达干扰了化疗效果,可作为胃癌预后以及化疗敏感性的评价指标.
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雷公藤红素逆转宫颈癌细胞顺铂耐药性实验研究
目的：研究中药活性成分雷公藤红素逆转耐药宫颈癌细胞株Hela/R对顺铂的耐药性，并探讨其机制。方法采用顺铂梯度暴露法构建顺铂耐药宫颈癌细胞株Hela/R；采用MTT法检测雷公藤红素是否能增强顺铂对Hela/R的杀伤活性；Western blot试验检测常规Hela细胞及Hela/R细胞抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-w及Bcl-xl表达水平；流式细胞术检测雷公藤红素联合顺铂对Hela/R细胞的凋亡诱导效应及对线粒体膜电位的影响。结果1、2、4、8、16、32、64μmol/L顺铂对Hela及Hela/R细胞的细胞活力抑制率分别为：（18.6±1.5）%（Hela），（1.9±1.0）%（Hela/R）；（23.9±2.4）%（Hela），（3.1±1.2）%（Hela/R）；（47.8±3.9）%（Hela），（6.8±1.5）%（Hela/R）；（63.4±5.4）%（Hela），（11.6±1.8）%（Hela/R）；（72.7±5.9）%（Hela），（20.4±2.0）%（Hela/R），（85.7±6.7）%（Hela），（41.2±3.3）%（Hela/R）；（91.8±7.9）%（Hela），（55.8±4.3）%（Hela/R），两组比较，P均约0.05。2μmol/L雷公藤红素对Hela/R细胞的细胞活力抑制率为（6.6±1.1）%；2μmol/L雷公藤红素分别加10、20、40μmol/L顺铂组Hela/R细胞的细胞活力抑制率优于单用10、20、40μmol/L顺铂组[（57.2±3.9）%比（12.4±1.2）%、（71.4±5.1）%比（27.8±1.9）%、（84.8±6.8）%比（45.2±3.1）%，P<0.05]。Hela/R细胞Bcl-w/β-actin表达水平高于Hela细胞[（70.9±4.9）比（22.1±1.3），P<0.05]，Bcl-2/β-actin与Bcl-xl/β-actin表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。与对照组比较，雷公藤红素可明显抑制Hela/R细胞Bcl-w/β-actin的表达[（29.3±2.6）比（68.9±4.5），P<0.05]。雷公藤红素增强顺铂对Hela/R细胞线粒体膜电位的损伤，促进细胞色素C的释放，而诱导Hela/R细胞发生凋亡。结论雷公藤红素体外能提高顺铂对耐药宫颈癌细胞的杀伤活性，其机制可能为通过抑制Bcl-w表达，提高促凋亡蛋白的活性，进而促进耐药宫颈癌细胞发生线粒体途径的凋亡。
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Bcl-w对膀胱肿瘤细胞5637增殖、顺铂敏感性的影响
[目的]探讨过表达的Bcl-w蛋白对膀胱肿瘤细胞5637的增殖能力、顺铂敏感性的影响.[方法]采用质粒pcDNA3.1(+)构建Bcl-w过表达载体,转染5637细胞后用Westernblot验证过表达效果,用CCK-8、平板克隆形成实验、流式细胞仪检测pcDNA3.1-Bcl-w细胞和对照组细胞的增殖和生存曲线、克隆形成能力、细胞周期.[结果]成功构建pcDNA3.1-Bcl-w重组质粒并转染5637细胞.pcDNA3.1-Bcl-w细胞增殖曲线在24、48、72h均高于对照组(0.814±0.022 vs 0.727±0.017,P=0.006; 1.259±0.017vs1.078±0.027,P=0.001; 1.787±0.024 vs1.520±0.021,P＜0.001),差异具有统计学意义;克隆形成能力高于对照组(60.67±6.03 vs48.67±6.11,P＜0.001),差异具有统计学意义;处于GdG1期的比例低于对照组(50.76％vs57.02％,P＜0.001),差异具有统计学意义;在30、50、70、90、110μmol/L各浓度顺铂处理下生存曲线高于对照组[(83.8％±1.7％)vs(93.9％±1.2％),P＜0.001;(59.5％±0.7％)vs(72.5％±1.9％),P=0.028:(50.5％±2.2％)vs(57.2％±1.2％),P=0.007;(37.2％±0.7％)vs(45.7％±1.4％),P＜0.001;(29.1％±0.5％)vs(33.2％±0.6％),P＜0.001],差异具有统计学意义.[结论]高表达的Bcl-w增强了膀胱癌细胞5637的增殖能力,削弱了肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性.
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Bcl-w在肿瘤发生发展中的作用
Bcl-2家族在肿瘤的发生发展中具有重要作用并在很大程度上决定了肿瘤对放化疗的敏感性.研究表明Bcl-w在膀胱癌的发生发展过程中起到重要作用.文章从下游效应和上游调控两个方面对Bcl-w在肿瘤中的研究进展作一综述.
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血清Bcl-w和Bid蛋白在哮喘急性重度发作患儿中的表达及意义
目的：探讨凋亡因子Bcl-w和Bid蛋白在哮喘急性重度发作患儿中的表达及意义。方法50例哮喘患儿分别在哮喘急性重度发作期、缓解期采集静脉血，酶联免疫吸附试验法检测血清Bcl-w和Bid蛋白的水平。结果哮喘组急性期血清Bcl-w和Bid的水平分别为（57.14±2.23）ng/mL和（78.00±2.13）ng/mL，显著高于缓解期（40.48±1.66）ng/mL和（57.42±2.01）ng/mL（均P＜0.01）；两指标呈直线正相关（r=0.32，P＜0.01）。结论哮喘儿童急性期血清Bcl-w和Bid的水平升高，缓解期下降，共同起着保持凋亡动态平衡的作用。
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ABT-737对顺铂耐药的乳腺癌细胞的杀伤作用及机制
目的 研究ABT-737是否能提高顺铂对耐药乳腺癌细胞株MDA-MB-231/R的杀伤活性并探讨其机制.方法 采用顺铂梯度处理法构建顺铂耐药乳腺癌细胞株MDA-MB-231/R;采用MTT法检测ABT-737是否能增强顺铂对MDA-MB-231/R的杀伤活性;Western blot试验检测常规MDA-MB-231细胞及MDA-MB-231/R细胞Bcl-2,Bcl-xl及Bcl-w的表达水平;采用流式细胞术检测ABT-737联合顺铂对MDA-MB-231/R细胞的凋亡诱导效应及对线粒体膜电位的影响.结果 顺铂对MDA-MB-231/R细胞的杀伤活性显著低于MDA-MB-231.联合ABT-737治疗后,顺铂对MDA-MB-231/R细胞的杀伤活性显著提高,与MDA-MB-231细胞相比,MDA-MB-231/R细胞的Bcl-2抗凋亡蛋白家族成员Bcl-w表达水平显著上调,但Bcl-2和Bcl-xl表达水平不受影响.ABT-737显著增强顺铂对MDA-MB-231/R细胞线粒体膜电位的损伤,促进细胞色素C的释放,进而诱导MDA-MB-231/R细胞发生凋亡.结论 ABT-737通过抑制Bcl-w的功能促进顺铂对耐药乳腺癌细胞的凋亡诱导效应.
关键词： ABT-737 MDA-MB-231/R Bcl-w 线粒体凋亡 -
miR-20 b对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制的研究
目的：探讨miR-20b对大肠癌（ CRC）细胞增殖凋亡的影响及机制。方法将miR-20b模拟物转染CRC细胞株HCT-116，qRT-PCR检测转染后miR-20b的表达，分别应用CCK-8实验及流式细胞仪检测转染后细胞增殖和凋亡情况。 qRT-PCR和western blot检测转染后Bcl-w mRNA和蛋白的表达情况。结果转染miR-20b模拟物后，HCT-116细胞中miR-20b表达水平明显上调，HCT-116细胞增殖减弱（P＜0．05），凋亡增强（P＜0．05）。 miR-20b可作用于Bcl-w mRNA的3′-UTR，使海肾荧光素酶活性显著降低。转染后Bcl-w mRNA及蛋白表达水平明显下调，差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论上调HCT-116细胞中miR-20b表达水平，可抑制其靶基因Bcl-w的表达，发挥抑制细胞增殖、增加凋亡的作用。
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Bcl-w在大肠癌中的表达及临床意义
目的 检测Bcl-w在大肠癌中的表达,了解Bcl-w与临床重要病理因子的关系;研究Bcl-w与Bcl-2基因及其P53基因的关系;探讨Bcl-w表达对肿瘤细胞凋亡的影响.方法 免疫组化法检测Bcl-w,Bcl-2及其P53在大肠癌中的表达;Western blot进一步定量检测Bcl-w在大肠癌中的表达;TUNEL检测大肠癌中的细胞凋亡情况.结果 全组52例病人中,39例Bcl-w表达阳性,占75%.随肿瘤浸润深度增加,淋巴转移,肝转移,Bcl-w表达亦增加.3年随访中,Bcl-w表达阳性大肠癌患者均死亡.与Bcl-2相反,Bcl-w在大肠腺瘤中并不表达.Bcl-w与P53成显著正相关,Bcl-w与肿瘤细胞凋亡呈显著负相关.结论 Bcl-w与大肠癌的浸润与转移密切相关.它可能是大肠癌预后相关因素之一.与Bcl-2不同,Bcl-w在肿瘤进展阶段起重要作用.此外,Bcl-w在大肠癌细胞中起到抗凋亡作用,P53基因下调Bcl-w的表达.
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慢性高原病患者骨髓组织中Bcl-w和Bid蛋白的表达研究
目的 研究Bcl-w和Bid蛋白在慢性高原病(CMS)患者骨髓组织中的表达情况,探讨它们在CMS发生、发展过程中的作用.方法 选取18例CMS患者为CMS组,应用免疫组织化学SABC法检测骨髓组织中Bcl-w和Bid蛋白的表达情况.16例单纯陈旧性骨折患者为对照组.结果 CMS组骨髓组织中Bcl-w及Bid蛋白阳性表达率分别为77.78％及11.11％,对照组骨髓组织中Bcl-w及Bid蛋白阳性表达率分别为31.25％及50.00％,CMS组骨髓组织中Bcl-w蛋白阳性表达率明显高于对照组(P＜0.05);而CMS组骨髓组织中Bid蛋白阳性表达率明显低于对照组(P＜0.)5).CMS组Bcl-w、Bid阳性系数分别为(4.15±2.11)及(0.33±).18),对照组Bcl-w、Bid阳性系数分别为(0.87±0.43)及(0.93±0.51),差异有统计学意义(P＜0.05).CMS组Bcl-w蛋白表达阳性系数与血红蛋白浓度呈正相关(r=0.835,P ＜0.05),而Bid蛋白阳性系数与血红蛋白浓度呈负相关(r =-0.659,P＜0.05).结论 CMS患者骨髓组织抗凋亡蛋白Bcl-w表达增高,促凋亡蛋白Bid表达降低,Bcl-w和Bid蛋白表达变化与CMS骨髓红细胞凋亡异常有关.
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乳腺癌中bcl-w的mRNA和蛋白的表达及其临床意义
目的 探讨乳腺癌组织中bcl-w基因mRNA及蛋白表达情况及其临床意义.方法 应用Real-time PCR及Western blotting等分子生物学技术检测抗凋亡基因bcl-w的转录及翻译水平(即mRNA及蛋白表达水平).结果 ①mRNA表达情况:bcl-w的mRNA表达水平在各期乳腺癌组中均高于正常乳腺组(P＜0.05);而乳腺癌TNM临床分期中,Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期均高于Ⅰ期(P＜0.05),而前三者之间差异无显著性(P＞0.05);②蛋白表达情况:bcl-w的蛋白表达水平在各期乳腺癌组中均高于正常乳腺组(P＜0.05);而乳腺癌TNM临床分期中,Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期均高于Ⅰ期(P＜0.05),而前三者之间差异无显著性(P＞0.05).结论 bcl-w在乳腺癌发生及发展恶化过程发挥着重要作用,抑制bcl-w表达水平,可作为乳腺癌的一种潜在治疗方法.
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H2O2诱导PC12细胞凋亡中MicroRNA表达及bcl-w调控机制
[目的]构建体外H2O2诱导PC12细胞模拟神经细胞凋亡模型[1],研究microRNA(miRNA或微小RNA)在凋亡中表达和bcl-W调控机制,从microRNA角度探讨颅脑损伤后(如缺血再灌注损伤、脑挫伤)凋亡的机制.[方法]体外H2O2诱导PC12细胞凋亡模型,用基因芯片技术筛选变化显著的microRNA,并对其实验验证后,根据现有microRNA数据库提供的靶标的预测分析结果,搜寻其相关的靶标,通过检测细胞凋亡、Western blot、实时荧光定量PCR技术来验证相关microRNA的作用靶点.[结果]成功构建了体外模拟体内神经细胞凋亡模型,通过基因芯片技术筛选出6个显著下调microRNA[2],其中mi-422a与bcl-w蛋白表达量呈负相关.[结论]通过miR-422a可以调控bcl-w蛋白的表达,且存在负性相关关系.通过调节mi-422a的表达可调控bcl-W蛋白的表达量,证实bcl-w上的基因位点有mi-422a的作用位点存在.
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基于在位和异位内膜Bcl-w蛋白表达的子宫内膜异位症机制探讨
目的 探讨凋亡抑制基因Bcl-w在子宫内膜异位症的发生发展中的作用.方法 采用免疫组织化学染色法(SP法)检测凋亡抑制基因Bcl-w分别在正常子宫内膜组织、子宫内膜异位症患者的异位内膜组织和在位内膜组织中的表达水平.结果 Bcl-w在子宫内膜的腺上皮细胞和间质细胞中均有表达,以腺上皮细胞浆中表达明显,偶有细胞膜和细胞核表达.异位子宫内膜组和在位子宫内膜组Bcl-w的表达高于正常子宫内膜组,差异有统计学意义(均P＜ 0.01);Bcl-w在异位子宫内膜组的表达高于在位子宫内膜组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 凋亡抑制基因Bcl-w在子宫内膜异位症的发生发展中起着很重要的作用.
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Bcl-w蛋白在原发性胆囊癌中的表达及意义
目的研究Bcl-w蛋白在原发性胆囊癌(primary gallbladder carcinoma, PGBC)中的表达及其意义. 方法以特异性羊抗兔Bcl-w抗体,DAKO EnvisionTM系统(LDP法)免疫组织化学方法检测石蜡包埋的PGBC标本中Bcl-w蛋白的表达. 结果 47例PGBC中Bcl-w阳性28例(60%);15例胆囊腺肌瘤样增生(GBADH) Bcl-w阳性14例(93%);Bcl-w在PGBC中表达低于GBADH(P<0.05);Bcl-w在高分化PGBC中的表达高于中低分化PGBC,其间有显著性差异(P<0.05);PGBC中的Bcl-w表达在肿块体积≤2 cm,男性及>55岁患者分别高于体积>2 cm,女性及<55岁患者,其间有显著性差异(P<0.05, P<0.05, P<0.01),但Bcl-w表达与PGBC的Nevin分期无关. 结论抗凋亡蛋白Bcl-w参与了PGBC发病过程的凋亡调变,其表达水平的不同与PGBC临床病情有关.
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辐射对人鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE-2)凋亡率和相关基因转录水平的影响
目的 探讨辐射诱发的人鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE-2)凋亡率和Bak、Bid、Bcl-w、Bcl-xl转录水平的影响.方法 体外培养CNE-2,应用流式细胞术及RT-PCR方法检测不同辐射剂量(0、2、4、6、8 Gy)下CNE-2凋亡率及凋亡相关基因Bak、Bid、Bcl-w、Bcl-xl的转录水平.结果 CNE-2照射后Bak表达上调,与辐射剂量及晚期凋亡率呈正相关;Bcl-w表达下调,与辐射剂量及晚期凋亡率呈负相关;Bcl-xl表达下调,与辐射剂量及晚期凋亡率无相关性;Bid在不同剂量点转录水平差异均无统计学意义.结论 Bak、Bcl-w、Bcl-xl可能参与了辐射诱发的CNE-2细胞凋亡的调控.
