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药用植物的多倍体育种
阐述了药用植物多倍体的特征,系统地介绍了药用植物多倍体育种的方法,包括多倍体育种材料的选择方法,常用的多倍体诱导方法,多倍体材料的鉴定方法,指出了药用植物多倍体育种存在的一些问题,分析了药用植物多倍体材料的利用价值.
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川黄柏多倍体诱导研究
目的:改良川黄柏现有品种,丰富遗传育种资源.方法:采用秋水仙素对川黄柏茎段愈伤组织、种子和腋芽进行多倍体诱变处理.结果:将茎段愈伤组织接种在含有0.2%秋水仙素的培养基上,通过培养形成的多倍体植株诱导率为12.45%,经植物形态组织学和染色体数检测,诱导后的植物材料具有明显的多倍体特征.结论:用秋水仙素对川黄柏不同部位进行多倍体诱导,是一种行之有效的生物技术方法.
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丹参、黄花鼠尾和雪山鼠尾染色体数目的研究
目的:研究我国7个省的药用植物丹参及云南省的黄花鼠尾和雪山鼠尾的体细胞染色体数目.方法:取根尖用冰水混合物处理,卡诺氏固定液固定,1 mol·L-1盐酸解离,改良苯酚品红染色后,制片观察.结果:丹参体细胞染色体数目为2n=2x=16;黄花鼠尾为2n=2x=16;雪山鼠尾为2n=4x=32,染色体基数x=8.同时还发现山东省和四川省的丹参体细胞内存在四倍体细胞型.结论:丹参、黄花鼠尾及雪山鼠尾的染色体基数为8,染色体数目分别为16,16和32.染色体属于微小型及小型染色体,很难用于核型分析.
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芦荟的快速繁殖与多倍体诱导
目的:改良现有的芦荟栽培品种,丰富遗传育种资源.方法:在无菌条件下,将丛生芽浸入0.02 %,0.05 %,0.2 % ,0.5 %, 1.0 %秋水仙碱水溶液中浸泡24 h,然后转入MS+2 ～2 mg*L-16-BA+0.2 m g*L-1NAA中培养.结果:培养40～60 d后各处理丛生芽的叶片逐渐变肥大.通过根尖细胞染色体检测,变异芽为四倍体或嵌合体.结论:[ HT5”SS 〗以浓度为0.5%的秋水仙碱溶液处理丛生芽24 h效果好.得到的变异芽90%为纯合的四倍体.其染色体数量由14(2n=2x=14)变为28(2n=4x=28).
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杭白芷的多倍体诱导与培育
白芷为伞形科植物,其根具有祛风、燥湿、消肿、止痛功效,是常用中药.为了提高药材产量,改善品质,笔者从1996年开始对杭白芷Angelica dahurica (Fisch. ex Hoffm.)Benth. et Hook. f. var. formosana (Boiss) Shan et Yuan进行了人工诱导多倍体的实验研究[1,2],诱导效果虽然明显,但多倍体试管小苗诱导生根难度较大.因此作者改用对花序进行诱变的方法,获得了成功.
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药用植物多倍体诱导研究进展
在查阅国内外相关文献的基础上,概述了药用植物多倍体在应用方面的优势及鉴定方法,总结了染色体人工诱导加倍的常用方法,并提出了药用植物多倍体研究中亟需解决的问题.
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秋水仙素诱导黄芩多倍体的研究
黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)为唇形科植物,以根入药.根含黄芩素、黄芩甙、双黄芩素、汉黄芩甙、可加黄芩素、黄芩黄酮Ⅰ和Ⅱ等多种有效成分[1].有清热燥湿,泻火解毒,止血,安胎的功效.多用于湿温、暑热痞满,泻痢,黄疸,肺热咳嗽,高热烦渴,血热吐衄,痈肿疮毒,胎动不安等症[2].
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无创性产前基因检测的临床应用
近年来，通过高通量测序技术检测孕妇外周血中游离胎儿DNA（cfDNA）筛查胎儿染色体多倍体异常的无创性产前检测（noninvasive prenatal testing, NIPT）技术正越来越多地用于临床，其具有安全性、高效性及准确率高的特点，正在给产前诊断技术带来革命性的变化。NIPT技术可以3种途径介入产前检查：替代血清学筛查；替代有创产前产前诊断；作为血清学筛查与有创诊断的中间步骤。临床期待NIPT技术能够替代现行的孕妇血清学筛查与羊水胎儿脱落细胞染色体分析等有创产前诊断技术，国内外学者对此均陆续开展了相关的研究。本文将对NIPT技术及其相关的临床应用作一讲座。
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多倍体肿瘤细胞的建立及其生物学特性的研究
目的:建立多倍体肿瘤细胞,研究其增殖、分裂和药物敏感性.方法:将鼠纤维肉瘤细胞株Meth-A经270nmol/L秋水仙碱、800nmol/LK-252a、100nmol/LStaurospo-line和100nmol/L紫杉醇处理60h后继续培养,台盼蓝染色计数细胞,经碘化丙啶染色后流式细胞仪检测细胞DNA含量;并测定肿瘤细胞对3种化疗药物的半数抑制浓度(IC50).结果:建成了可稳定生长47d的多倍体细胞,DNA含量为4倍体.此细胞呈指数增殖,但比2倍体Meth-A细胞株生长缓慢.柔红霉素对2倍体和4倍体细胞的IC50分别为(0.022±0.002)和(0.023±0.003)μg/mL,顺铂的IC50分别为(0.108±0.035)和(0.173±0.086) μg /mL,两者差异无统计学意义,t值分别为0.85和1.23,P均>0.05;但紫杉醇的IG50分别是(39.812±0.116)和(21.385±0.660)μg/mL,4倍体细胞明显低于2倍体细胞,t=6.16,P<0.01.Gimsa染色显示,多倍体细胞体积大,多核.结论:4倍体细胞可连续地增殖和分裂,对抗肿瘤药物仍然敏感,此细胞可以用于研究多倍体化后的生物学行为.
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放射作业人员的外周血淋巴细胞多倍体的观察
目的 探讨放射作业人员的外周血淋巴细胞多倍体情况.方法 对610名放射作业人员取外周血淋巴细胞培养,至72 h收获细胞,常规制片,镜下计数,每人计100个分裂相.发现多倍体等异常均予以记录.结果 发现127个多倍体,占受检分裂相的0.21％(127/61 000),占受检人数的20.8％(127/610).结论 X线可导致外周血淋巴细胞多倍体频率增加.
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决明多倍体的诱导与鉴定
决明子为豆科植物决明Cassia obtusifolial L.或小决明C.tora L.的干燥成熟种子,为我国常用中药.性微寒,味甘、苦、咸.归肝、肾、大肠经.具有清肝明目、润肠通便的功效.常用于治疗目赤肿痛、头痛眩晕、目暗不明、大便秘结等不适症状.现代药理研究证明决明子具有明目、降血压、降血脂、保肝、泻下等药理作用[1].
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秋水仙素诱导茴香多倍体的研究
目的 探讨不同秋水仙素浓度和不同处理时间诱导茼香多倍体的效果.方法 采用种子浸泡法以不同秋水仙素浓度、不同处理时间诱导下的种子的萌发率和诱变率、胚根诱变体的外部形态、染色体数量、内部组织构造以及精油量和成分进行了比较.结果 诱导液质量浓度为0.13%.处理时间为24 h时的诱导效果好;诱导后的突变体胚根与对照相比,表现粗大、染色体数目明显增加、胚根的内部细胞数量明显增多、4种主要精油成分中除莳萝芹菜脑略低于对照外,柠檬酸、反式-茴香脑和莰烯3种成分均硅著提高.结论 秋水仙素诱导的突变体可以较大幅度地提高茴香主要精油成分的量,为茴香高精油量多倍体新品种的培育提供了依据.
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药用植物多倍体的诱导及生物学意义
药用植物足指含有能防治疾病的特殊化学成分(生物活性化合物),具有一定医疗用途的植物.而药用植物多倍体诱导是一种人为使植物加倍形成多倍体以获得良性状的方法.药用植物加倍后.会出现植株巨大化、抗性增加和约用活性成分增加等优良性状,但也伴随着生长缓慢、优良性状在有性繁殖中逐渐丢失等小利因素,而造成这些现象的原因是约用植物加倍所形成的杂种优势、基因重复以及加倍后的二倍化过程.从药用植物多倍化诱导办法人手,着重讨论药用植物加倍后的性状变化及其原因,并结合一些新的诱导方式对未来的药用植物多倍化研究进行了展望.
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HPV 16型E6蛋白诱导PHK多倍体的形成与消除细胞纺锤体检查点无关水
目的:人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus,HPV 16)与包括宫颈癌在内的多种肿瘤的发生明确相关.诱导宿主基因组不稳定性可能是HPV 16致瘤的重要机制之一.本研究对HPV 16型E6蛋白诱导人原代角质形成细胞(primary human keratinocytes,PHK)形成多倍体以及对PHK有丝分裂纺锤体检查点的影响进行初步的探索.方法:取正常人包皮组织,分离表皮,常规方法培养PHK.脂质体介导法将pBabe一16 E6质粒转染逆转录病毒包装细胞PA317,挑选G418抗性克隆,检测病毒滴度,将表达HPV 16型E6蛋白的高滴度逆转录病毒感染PHK.通过逆转录PCR法和免疫印迹法证实HPV 16 E6成功感染PHK.PHK经Nocodazole处理后,利用流式细胞仪分析多倍体形成,于不同时间点收集细胞、固定,进行抗磷酸化组蛋白染色,利用流式细胞仪分析细胞有丝分裂指数差异.结果:HPV 16型E6成功感染PHK,并呈功能性表达.HPV 16型E6可诱导PHK形成多倍体,表达E6蛋白的PHK和对照细胞以相似的动力学进入和退出有丝分裂.结论:HPV 16型E6对PHK有丝分裂过程中的纺锤体检查点无直接影响,鉴于有丝分裂后期检查点在细胞有丝分裂过程中较持久和严格的作用,本研究结果提示,对有丝分裂后期检查点的作用可能是HPV 16型E6蛋白诱导宿主细胞多倍体形成的重要机制.为进一步探讨HPV相关肿瘤的分子发生机制.奠定了一定基础.
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党参多倍体育种研究相关问题探析
党参原产山西上党地区,有资料报道,现陕西、宁夏、甘肃、青海、河南、湖北、湖南、四川、贵州、云南、西藏等省均有种植,以山西、陕西、甘肃等省为主产地,并出现同属桔梗科植物党参、素花党参、川党参、管花党参、球花党参、灰毛党参等系列品种.党参性平,味甘、微酸,归脾、肺经[1],具有补中益气、增强人体免疫和耐疲劳以及降血压、抗溃疡之功效,系中药方剂和汤剂常用中药材之一.
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四倍体鸡蛋参的诱导与鉴定
目的:利用秋水仙素处理和组织培养技术诱导鸡蛋参多倍体,丰富现有遗传资源.方法:通过不同浓度(0.01％～0.2％)的秋水仙素和不同的诱导时间(6～60h)处理已得到的鸡蛋参无菌苗.结果:诱导株经流式细胞术检测,获得秋鸡蛋参四倍体、嵌合体和八倍体.结论:0.2％秋水仙素处理36h,四倍体诱导率在33.3％,诱导效果佳.
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多倍体与八倍体半夏中草酸钙晶体含量的测定
目的:测定多倍体(十六倍体)半夏和八倍体半夏原球茎以及块茎中草酸钙晶体的含量.方法:采用高效液相色谱法,以0.5％磷酸水溶液为流动相,以草酸为对照品,测定多倍体半夏和八倍体半夏中草酸钙晶体的含量.结果:多倍体半夏原球茎和块茎中草酸钙晶体的含量分别为(2.799±0.017)％和(1.375±0.037)％,八倍体半夏原球茎和块茎中草酸钙晶体含量分为为(1.136 ±0.028)％和(1.924±0.05)％.结论:半夏原球茎和块茎中均含有较高含量的草酸钙晶体,与八倍体半夏相比,多倍体半夏块茎中的草酸钙晶体明显比八倍体半夏低.
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新生隐球菌耐药机制的研究进展
新生隐球菌是引起中枢神经系统感染常见的真菌,隐球菌性脑膜炎发病率近年来呈上升趋势.尽管抗真菌药物的应用使之得到一定控制,但至少有约1/3的患者经历抗真菌药物治疗失败,致残率和病死率日益增加.由于长期使用抗真菌药物,新生隐球菌耐药成为目前临床治疗失败的主要原因.因此,对隐球菌耐药机制的研究具有重要的临床意义.该文综述近年来新生隐球菌耐药机制的研究进展,旨在为研发新型抗真菌药物提供理论指导及为个体化治疗提供依据.
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Aurora-A激酶在人类卵巢癌细胞株中的表达研究
[目的]了解Aurora-A基因在卵巢癌细胞中的表达情况,寻找显示卵巢癌恶性程度的肿瘤标记物.[方法]采用半定量RT-PCR、Western blot检测卵巢上皮浆液性囊腺癌细胞(HO-8910)与其高转移亚株(HO-8910PM)细胞株Aurora-A 在mRNA和蛋白表达情况;借助流式细胞仪观察两种卵巢癌细胞DNA含量,并分析Aurora-A表达的相关性.[结果]两种细胞株HO-8910、HO-8910PM半定量RT-PCR结果发现,Aurora-A/β-actin比值分别为:0.95与0.98(P＜0.05);Western blot结果显示Aurora-A/β-actin比值分别为: 1.24与1.58(P＜0.01).细胞DNA含量的检测结果,细胞含有四倍体 (4N)的细胞比例分别为21.63%和30.15%,其多倍体(＞4N)细胞的比例分别为2.20%与7.16%(P＜0.01).[结论]在两种卵巢癌细胞中,Aurora-A 基因mRNA与蛋白高表达;两种细胞株Aurora-A基因表达的高低与其细胞DNA含量有相关性,尤其与异倍体的形成有关;Aurora-A基因表达卵巢癌细胞的恶性程度有关.
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mTOR/4E-BP1参与诺考达唑诱导的Dami细胞多倍体化调控
目的:多倍性是物种形成的重要机制,决定一些重要器官细胞产生的数量和功能,而且与某些病理过程(如恶性肿瘤)的发生有密切关系.我们通过建立相对同步化的多倍体细胞模型,已经证实mTOR/S6K1参与多倍体细胞周期的调控.本课题主要研究mTOR下游的另一个重要信号分子4E-BP1是否也参与细胞的倍体化调控.方法:诺考达唑诱导Dami细胞建立相对同步化的多倍体细胞模型,Western-blot分析多倍体细胞模型中mTOR/4E-BP1通路信号分子表达和磷酸化修饰位点的变化,流式细胞仪双荧光分析4E-BP1不同结构域磷酸化位点修饰与细胞周期各时相的关系.结果:诺考达唑诱导的Dami细胞可作为相对同步化的多倍体细胞周期模型,在二倍体和多倍体细胞周期中,mTOR表达增加及第2448位丝氨酸位点磷酸化发生在G1期进入S期,4E-BP1的第37,46位苏氨酸和第65位丝氨酸位点磷酸化发生在G2/M期.结论:mTOR/4E-BP1通路参与多倍体细胞周期的调控.
