首页 > 文献资料
-
传染性非典型肺炎患者肺炎支原体抗体检测意义
目的探讨由SARS(severe acute respiratory syndrome)病毒引起的传染性非典型性肺炎(infectious atypicalpneumonia,IAP)患者合并肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)感染情况,以及治疗前后肺炎支原体抗体变化,为治疗和防范非典型肺炎提供指导意义.方法受SARS病毒感染的99例患者发病后,运用肺炎支原体抗体凝集实验,检测其肺炎支原体抗体和滴度;AP患者经口服四环素、达菲、拜复乐,结合静脉注射生脉、鱼腥草、吉粒芬等综合性治疗后,观察比较了81例治疗后,其肺炎支原体抗体结果,及治疗前后滴度变化.结果传染性非典型性肺炎患者部分出现MP合并感染,占所检测患者47.5%,滴度高低与病情有一定相关性;经治疗后,MP抗体阳性率为23.5%,抗体滴度出现下降,两者与治疗前差异有显著性(P＜0.01).结论非典型性肺炎患者肺炎支原体抗体检测,可以反映其合并感染情况,其滴度变化可以监测患病后病情的发展变化及治疗效果观察,为临床诊断预后等提供辅助指导意义.
-
SARS冠状病毒Mc区克隆及序列分析
目的:构建SARS冠状病毒(SARS-CoV)GD322株M基因膜内区(Mc区)重组表达质粒,并对目的序列进行序列分析.方法:根据GenBank中公布的SARS-CoV Tor2株M基因序列,设计一对引物,采用RT-PCR法从SARS-CoV GD322株基因组中扩增Mc区,克隆至pET-32a(+)载体中,转化大肠杆菌BL21后测序,利用Clustal X分析所测序列翻译的氨基酸与81株SARS-CoV Mc区翻译的氨基酸序列的差异.结果:测序结果表明该区与Tor2株对应核苷酸序列同源性为100%.与已收集的81株SARS-CoV Mc区所译氨基酸(Mc蛋白)相比,与77株(占95.1%)Mc蛋白完全同源,与4株(占4.9%)仅有一个氨基酸改变.结论:本试验成功构建SARS-CoV Mc区重组表达质粒;SARS-CoV各毒株间Mc蛋白氨基酸序列差异极小,提示利用任一毒株Mc蛋白制备单抗和疫苗具有普遍意义.
-
SARS冠状病毒核衣壳蛋白在酿酒酵母中的表达和纯化
目的:构建重组表达质粒pYES6-N,诱导SARS冠状病毒核衣壳蛋白(nucleocapsid protein)在酿酒酵母中的表达和纯化.方法:逆转录获得SARS冠状病毒DNA片段,PCR获得核衣壳蛋白基因互相重叠的两部分片段,酶切连接成全长,在E.coli JM109中构建重组表达克隆pYES6-N,在酿酒酵母中诱导表达并纯化.结果:重组克隆pyes6-N经酶切、测序鉴定确定,插入片段大小、方向、碱基匹配与预期一致,获得一个完整的核衣壳蛋白基因,表达产物纯化后,电泳鉴定,相对分子质量近45 000.结论:成功克隆SARS冠状病毒核衣壳蛋白基因全长,并在酿酒酵母中诱导表达成功,有助于抗SARS分子疫苗的研究.
-
广西部分野生动物SARS病毒朔原的初步研究
目的:研究SARS病毒可能的动物来源及其与缩主的关系,为SARS的预防与控制策略提供科学依据.方法:用新型冠状病毒核酸扩增(Real-time PCR)荧光法检测人工饲养野生动物99只咽拭、肛拭和组织标本的SARS病毒基因,用ELISA法检测野外捕获的野生动物117只血样标本SARS冠状病毒总抗体.结果:人工饲养动物SARS病毒基因全部阴性,自然来源的野生动物SARS冠状病毒总抗体阳性率5.12%,鸟纲阳性率22%,爬行纲阳性率20%.结论:SARS病毒并非来源于人工饲养的野生动物,而是来源于自然界野生动物,其中蛇、鹰、蛤蚧、鳖为可能.老鼠可能是SARS病毒的原始宿主,通过蛇、鹰、蛤蚧、鳖对鼠猎食而感染、携带并富集,然后经宰杀而传染人类.禁止捕猎贩运和宰杀野生动物和控制鼠类媒介是防范SARS的发生和控制扑灭SARS疫情的首要措施.
-
抗SARS药物的研究现状与展望
由于SARS是一种全新的传染病,突然爆发,目前尚无特效药,因此,临床主要采取对症治疗的方法.中医药在SARS临床防治过程中作用显著.现着重介绍SARS的临床药物治疗和防治SARS药物研究的现状和方法并展望其研究的前景.
-
SARS病毒基因组研究显示SARS病毒无重大变异
严重的急性呼吸综合征(SARS)病毒基因组的首份研究报告显示,传播于不同国家之间的病毒没有发现明显的变异.
-
SARS 冠状病毒主蛋白酶结构的研究进展
急性呼吸道综合征冠状病毒(SARS-CoV)是SARS的病原体,其基因为单股正链RNA,通过比较发现,SARS-CoV 主蛋白酶(MPRO)与其他冠状病毒如人冠状病毒株229E (HCoV229E)及一种在猪体内引发传染性胃肠炎的病毒(TGEV)MPRO结构具有高度同源性,SARS-CoV MPRO由于在病毒复制中的重要性,使它成为抗病毒药物设计的重要靶点.本文针对SARS-CoV MPRO结构作一,以期研制或筛选出以针对SARS-CoV MPRO的特效药物.
-
SARS冠状病毒S蛋白研究进展
SARS冠状病毒是引起传染性非典型肺炎的病原体,它具有4种结构蛋白,其中S蛋白含有主要的中和抗原表位,并有受体结合和膜融合活性,与SARS冠状病毒的组织嗜性、细胞融合性和病毒毒力密切相关,是制备保护性疫苗的重要靶位.
-
SARS病毒M蛋白真核表达载体的构建与表达
目的 构建SARS病毒M蛋白片段真核表达载体,并检测其在Vero细胞中的表达.方法 在PCR引物下游引入Flag序列,以PCR从质粒pGEX-6P-1-SARS-M中扩增M蛋白编码基因片段,将酶切后的PCR产物克隆至pcDNA3.1(+)中,构建并鉴定重组质粒pcDNA3.1(+)-SARS-M.重组质粒经Superfect转染Vero细胞,Western blot检测基因表达情况.结果 重组质粒经酶切鉴定和基因测序显示构建正确;Western blot检测表明重组M蛋白片段在Vero细胞中获得正确表达.结论 成功构建SARS病毒M蛋白片段真核表达载体,并在Vero细胞中获得正确表达,为进一步研究M蛋白的功能奠定了基础.
-
SARS实验室诊断的进展
SARS的病原体是一种新型的冠状病毒,称为SARS冠状病毒.SARS冠状病毒是属于巢状病毒Nidovirales目、冠状病毒科、冠状病毒属.它是单股正链RNA病毒,全基因组长29751个碱基,平均GC含量为41%;其5′端有帽状结构,3′端有polyA结构;若按每个开放读框(open reading frame,ORF)编码蛋白产物大于40个氨基酸来计算,共有14个ORFs;经同源性比较分析,其中有5个ORFs可以在基因库中检索到冠状病毒的同源性基因,它们分别是编码复制酶(Rep)、刺突蛋白(S)、包膜蛋白(E)、膜糖蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)的基因.
-
质粒表达型siRNA对SARS-CoV复制与感染干扰的初步研究
目的构建针对SARS-CoV的特异性siRNA质粒,利用RNA干扰技术抑制该病毒复制与感染.方法根据SARS-CoV的全长基因序列,以4个不同的部位为靶点,分别设计、合成含有19 nt干扰序列的一段寡核苷酸,将两两互补的寡核苷酸经退火后所形成的序列克隆到pSilencer 3.1-H1载体中,构建表达siRNA的质粒.采用脂质体法将质粒转染Vero E6细胞,经潮霉素抗性筛选后,再对稳定表达的细胞进行细胞病变、病毒空斑形成和MTT实验,以观察干扰效应.结果对所构建的质粒分别测序,确定其含有siRNA的序列与预期的特异性干扰序列一致.用不同浓度的SARS-CoV感染转染质粒后的细胞,与阴性对照相比,其细胞病变减轻、活细胞显著增加,病毒空斑明显减少.结论利用RNA干扰能有效的抑制SARS-CoV在细胞中的复制,并对细胞有保护作用,为预防、治疗SARS提供了新的思路和方法.
-
SARS病毒S蛋白的B细胞表位预测
目的预测SARS病毒S蛋白的B细胞表位.方法基于SARS 蛋白基因组序列,采用Kyte-Doolittle的亲水性方案,Emini方案和Jameson-Wolf抗原指数方案,辅以对S蛋白的二级结构中的柔性区域的分析,预测SARS病毒S蛋白的B细胞表位.结果推测有可能的B细胞表位位于S蛋白N端第91～98区段、第1 121～1 153区段和第185～193区段内或它们的附近.其它,如S蛋白N端第1 050～1 059、752～765、41～50、666～674、264～287、340～348、408～416区段和第424～439区段内或附近也可能存在B细胞表位.结论用多参数预测SARS病毒S蛋白的B细胞表位,为分子免疫学的深入研究提供线索.
-
SARS-CoV S2蛋白基因的克隆及其在Vero E6细胞中的表达
目的克隆人SARS病毒S2蛋白分子的编码序列,并在VeroE6细胞上获得表达.方法从人SARS病毒cDNA文库中用PCR技术克隆编码SARS病毒S2蛋白的片段.将它插入质粒载体PVAXl中构建重组S2-pVAXl真核表达载体,并对插入片段序列进行测序.采用脂质体法转染VeroE6细胞,用Western blotting检测SARS-CoV S2蛋白的表达情况.结果用PCR方法扩增出一个1 845bp的基因片段,并插入pVAXl载体中,成功构建出重组S2表达载体,经测序证实克隆的S2片段阅读框正确完整.将其转染的Vero E6细胞经Western Blotting检测获得一条特异性目的蛋白条带.结论成功克隆基因并获得表达S2分子的Vero E6细胞系.
-
SARS病毒的病原学检测
当发生严重急性呼吸综合征(SARS)流行时,病原的确定非常重要.但对于确定新发现传染病的病原应符合经Rivers修订的郭霍病毒性疾病的必要条件(Koche's postu-lates).有6个必要条件:①能从患病宿主中分离到该病病原体;②宿主细胞能培养该病病毒;③该病原体能通过细菌滤器;④该病毒能引起原宿主和相关宿主相同的疾病;⑤从相关宿主可重新分离得到该病原体;⑥该病毒的特异性免疫反应可检测到.经世界上几个研究组验证,现已确定SARS病毒符合这些必要条件.SARS病毒为新的冠状病毒(SARS coronavirus,SARS-CoV).
-
应用噬菌体随机肽库技术筛选SARS-CoV S蛋白模拟表位
目的筛选SARS病毒(Severe acute respiratory syndrome associated coronavirus,SARS-CoV)结构蛋白D(Spike)特异性的模拟表位,为抗SARS疫苗研究提供基础.方法以抗SARS病毒D蛋白的单克隆抗体为固相筛选分子,对人工合成的噬菌体随机12肽库进行5轮"吸附-洗脱-扩增"的筛选,随机挑选30个克隆,经噬菌体酶联免疫吸附(ELISA)法和交叉反应实验鉴定阳性克隆,再进行DNA序列分析和竞争抑制结合实验,以确定SARS病毒D蛋白的模拟表位.结果经噬菌体富集后,从随机挑选的30个克隆中得到了29个编码8种12肽的阳性克隆,8条肽与D蛋白的320～350氨基酸序列有较高同源性,确定Y/F、W、E和K氨基酸残基为模拟表位的骨架结构.结论用噬菌体12肽库成功筛选到了SARS病毒D蛋白的模拟表位,为基于D蛋白的肽疫苗研制提供了基础.
-
SARS-CoV S1蛋白基因克隆及其在Vero E6细胞中的表达
目的克隆表达SARS-CoV S1蛋白,构建SARS基因疫苗.方法从SARS病毒的cDNA中以PCR方法扩增编码人SARS-CoV S1蛋白的编码序列,将该序列克隆入真核表达载体pVAX1,构建重组表达载体.采用脂质体法转染Vero E6细胞,用Western blot检测S1蛋白的表达.结果 PCR方法扩增出2 000 bp左右的基因片段,插入pVAX1构建重组表达载体后,经序列测定证实扩增的片段为SARS-CoV Tor 2株S1蛋白编码序列.将重组子转染Vero E6细胞,收集细胞总蛋白,Western检测获得特异蛋白带.结论成功克隆并表达了SARS-CoV S1蛋白,为其作为SARS基因疫苗研究打下基础.
-
SARS病毒基因组所编码的E蛋白的二级结构和B细胞表位预测
目的预测SARS病毒E蛋白的B细胞表位和二级结构.方法以SARS病毒基因组序列为基础,采用Gar-nier-Robson方法、Chou-Fasman方法和Karplus-Schultz方法预测E蛋白质的二级结构;用Kyte-Doolittle方案预测蛋白质的亲水性;用Emini方案预测蛋白质的表面可能性;用Jmeson-Wolf方案预测氨基酸的抗原性指数.综合评判,预测SARS病毒E蛋白的B细胞表位.结果在SARS病毒E蛋白N-端的第1～6、13～19、39～43、47～64区段和第73～76区段有β-折叠中心;第6～12区段和第67～69区段可能形成转角或无规则卷曲,是柔性区域.E蛋白N端第2～13区段和第61～74区段为B细胞优势表位区域.结论用多参数预测SARS病毒E蛋白的二级结构和B细胞表位,为实验方法探索SARS冠状病毒E蛋白的B细胞表位提供理论依据.
-
SARS病毒S2基因的克隆、表达、纯化及其免疫学特性研究
目的: 在大肠杆菌中表达SARS病毒S2与硫氧还原蛋白(Trx)的融合蛋白, 并对其进行血清学鉴定.方法: 克隆编码SARS病毒S2蛋白的基因, 并在原核表达系统中表达了6×His-S2硫氧还原融合蛋白.用Western blot分析纯化Trx-S2融合蛋白, 分别与6份SARS流行前的正常人血清和6份SARS患者恢复期血清的反应性.结果: Western blot分析表明, 6份SARS患者的恢复期血清均能识别Trx-S2融合蛋白, 且在Mr为76×103附近出现特异性的结合带; 而6份SARS流行前的正常人血清则不与Trx-S2融合蛋白起反应.结论: 本研究获得了纯化的SARS病毒Trx-S2融合蛋白, 它可与SARS患者的恢复期血清产生特异性结合反应, 为研究SARS病毒感染宿主细胞的过程和制备针对SARS病毒的重组疫苗提供了条件.
关键词： SARS病毒 Trx-S2融合蛋白 表达 纯化 -
SARS病毒Spike蛋白具有中和活性的抗原表位预测和初步鉴定
目的:预测并合成SARS病毒Spike蛋白中具有中和活性的抗原表位,鉴定其在免疫检测和疫苗设计中的作用.方法:使用二级结构以及基因组对比预测方法,预测Spike蛋白中具有较高抗原活性的肽段序列并人工合成.用直接ELISA法检测在SARS确诊阳性患者血清和健康人血清之间相应抗体的检出差别,确定预测肽段是否为SARS的抗原肽段.结果:预测并人工合成了具有抗原活性的GEVFNATKFPSVYAW多肽,在ELISA检测中,可检测出SARS阳性血清中的针对性抗体,阳性符合率为71.4%,在健康人血清中不能检测出对应的抗体,阴性符合率为92%.结论:预测并合成了具有SARS病毒Spike蛋白的中和表位抗原,其特异性高于全病毒抗原,为SARS的诊断及疫苗的设计奠定了基础.
-
SARS病毒N蛋白的表达与DNA疫苗的构建
目的: 在大肠杆菌中表达SARS冠状病毒核衣壳N蛋白, 并构建其DNA疫苗.方法: 构建含N基因的原核表达载体pQEN, 并在大肠杆菌M15中表达N蛋白.采用Ni2+亲和层析法纯化目的蛋白.将N基因克隆入真核表达载体pSecTagB中, 构建真核重组质粒pSecN.以其免疫小鼠制备抗血清, 并用ELISA法检测其与大肠杆菌中表达的重组N蛋白及天然全病毒N蛋白的反应性.结果: 重组N蛋白能与DNA疫苗免疫的小鼠血清以及SARS患者血清发生特异性反应; SARS-CoV病毒颗粒也可与DNA疫苗免疫的小鼠血清发生特异性反应.结论: 重组N蛋白保留了病毒的一些特异性抗原表位, 可作为用ELISA法检测SARS-CoV的抗原.构建的DNA 疫苗可在小鼠体内产生高效价的抗SARS病毒N蛋白的特异性抗体, 从而为该疫苗的开发奠定了基础.
