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pH梯度法制备澳洲茄边碱脂质体
目的:研究制备澳洲茄边碱脂质体的佳工艺,并建立起包封率的测定方法.方法:采用pH梯度法制备澳洲茄边碱脂质体,以包封率为指标进行工艺优化,通过SephadexG-50葡聚糖凝胶柱分离脂质体,高效液相色谱法测定澳洲茄边碱的包封率.结果:制备澳洲茄边碱脂质体的佳条件,药物与卵磷脂的质量比为1∶30,胆固醇与卵磷脂质量比为1∶4,脂质体外水相pH值终调至6.5,孵育温度为55℃,此时的包封率可以达到70％以上.结论:用pH梯度法能制备包封率较高的澳洲茄边碱脂质体.
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高效液相色谱法测定龙葵中澳洲茄碱与澳洲茄边碱含量的研究
目的 利用高效液相色谱法以澳洲茄碱与澳洲茄边碱为指标对中药龙葵进行定量分析,建立龙葵的含量测定方法.方法 采取反相高效液相色谱法,利用C18色谱柱,以乙腈-0.5%磷酸溶液为流动相梯度洗脱,在203 nm波长下测定龙葵中澳洲茄碱与澳洲茄边碱的含量.结果 在上述测定条件下,澳洲茄碱在1.002～20.04 μg范围内线性关系良好,澳洲茄边碱在1.023～20.46 μg范围内线性关系良好.测定方法重复性良好,龙葵中澳洲茄碱回收率为99.29%,RSD为1.13%;澳洲茄边碱回收率为98.94%,RSD为1.28%.结论 该方法准确性、灵敏度、重复性高,简便,准确,易操作,可作为龙葵的质量控制方法.
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龙葵药材质量标准
目的:修订和完善龙葵药材的质量标准.方法:依据2010年版《中国药典》附录药品标准研究方法对龙葵药材进行显微、薄层鉴别,对10批龙葵药材的水分、灰分、酸不溶性灰分进行检查,并测定其有效成分含量.结果:确定了龙葵药材的显微特征,并建立了其TLC鉴别方法；水分不得＞10.0％,酸不溶性灰分不得＞3.0％；澳洲茄碱进样量在1.002～20.04μg内呈良好线性关系,澳洲茄边碱进样量在1.023 ～20.46 μg内呈良好线性关系.结论:不同产地所含澳洲茄碱与澳洲茄边碱的总量差异较大,建立的方法能准确反映龙葵的内在质量,可作为龙葵药材质量标准的修订内容.
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龙葵中澳洲茄边碱的提取工艺
目的:研究龙葵药材中澳洲茄边碱的佳提取工艺.方法:以澳洲茄边碱提取率为指标,采用L9(34)正交试验,考察乙醇体积分数、料液比、提取时间及提取次数对提取率的影响,优选出佳的提取工艺.用高效液相法测定澳洲茄边碱的含量.结果:优选出的澳洲茄边碱佳提取工艺为用80%乙醇20倍量回流提取2次、每次4h.结论:提取工艺合理可行,适用于龙葵中澳洲茄边碱的提取.
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反相高效液相色谱法同时分析龙葵中3种甾体生物碱
目的:利用反相高效液相色谱法快速测定龙葵中3种甾体生物碱的含量.方法:采用Agilent Zorbax SB-C1s(4.6mm×150 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-1%磷酸为流动相,流速1.0 mL·min-1,进样量20μL,柱温30℃,205 nm条件下检测,以梯度洗脱方式在30 min内分离了澳洲茄碱、澳洲茄边碱和khasianine 3种生物碱.结果:澳洲茄碱含量测定的线性范围为0.860～10.320μg(r=0.999 7);澳洲茄边碱含量测定的线性范围为0.726～8.710μg(r=0.999 7);khasianine含量测定的线性范围为0.696～8.352μg(r=0.9998).方法的平均回收率分别为100.18%,99.08%,99.88%.结论:方法简便快速、准确度高,可用于龙葵药材的质量评价.
关键词： 反相高效液相色谱法 龙葵 澳洲茄碱 澳洲茄边碱 khasianine -
HPLC-DAD变波长法同时测定博尔宁胶囊中12种指标成分
目的 建立HPLC-DAD波长切换联合梯度洗脱法同时测定博尔宁胶囊中12种指标成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷、澳洲茄碱、澳洲茄边碱、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅰ、特女贞苷、迷迭香酸、大黄酸、大黄酚和大黄素的量.方法 采用HPLC-DAD法,Atlantis T3 C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;乙腈-甲醇-0.1％甲酸水溶液为流动相,体积流量0.8 mL/min,梯度洗脱;变波长扫描;进样量为20 μL.结果 12种指标成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷、澳洲茄碱、澳洲茄边碱、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅰ、特女贞苷、迷迭香酸、大黄酸、大黄酚和大黄素分别在1.97～19.70 μg/mL(r=0.999 2)、1.022～10.220 μg/mL(r=0.999 3)、0.982～9.820 μg/mL(r=0.999 1)、1.1～11.0 μg/mL(r=0.999 6)、1.154～11.540 μg/mL (r=0.999 8)、1.114～11.140μg/mL (r=0.999 5)、1.102～11.020 μg/mL (r=0.999 3)、2.768～27.680μg/mL (r=0.999 3)、3.04～30.40 μg/mL (r=0.999 6)、3.379～33.790 μg/mL (r=0.999 5)、3.286～32.860 μg/mL(r=0.999 4)、3.507～35.070 μg/mL (r=0.999 7)质量浓度与峰面积具有较好的线性关系;精密度、重复性良好,RSD均小于2.0％;平均加样回收率和相应的RSD分别为100.08％、1.27％;98.11％、1.15％;99.68％、1.13％;101.38％、0.87％;101.87％、0.95％;100.53％、0.74％;98.52％、0.83％;99.52％、0.88％;97.84％、1.33％;98.31％、0.71％;99.66％、0.57％;101.73％、1.41％.12批次供试品中12种指标成分质量分数分别为0.085～0.118 mg/g、0.065～0.085 mg/g、0.051～0.075 mg/g、1.822～1.888 mg/g、1.532～1.599 mg/g、1.027～1.148 mg/g、2.420～2.621 mg/g、6.428～6.937 mg/g、0.258～0.289 mg/g、0.122～0.143mg/g、0.159～0.184 mg/g、0.222～0.273 mg/g.结论 建立的HPLC-DAD波长切换联合梯度洗脱法同时测定博尔宁胶囊中的12种成分,方法操作简便、快速、准确,可作为博尔宁胶囊全面可靠的质量控制方法.
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龙葵单体澳洲茄边碱对大肠癌HCT116细胞增殖和凋亡作用
目的:观察龙葵单体澳洲茄边碱对人大肠癌HCT116细胞增殖及凋亡作用.方法:不同浓度澳洲茄边碱作用HCT116细胞.CCK-8法检测细胞增殖,平板法检测克隆形成,Annexin V-APC/PI标记流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒检测Caspase-3活性.结果:澳洲茄边碱可抑制HCT116细胞增殖,呈剂量与时间依赖性.澳洲茄边碱可抑制HCT116细胞克隆形成,呈剂量依赖性.澳洲茄边碱可促HCT116细胞凋亡.澳洲茄边碱同时可增强HCT116细胞Caspase-3活性.结论:澳洲茄边碱可以抑制HCT116细胞增殖和克隆形成,促HCT116细胞凋亡,其机制与活化Caspase-3相关.
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龙葵药材的质量评价研究
目的 建立龙葵药材的质量标准,并对市售龙葵药材进行质量分析与评价.方法 采用薄层色谱法对澳洲茄碱和澳洲茄边碱进行定性鉴别；采用HPLC-ELSD法测定龙葵中上述2种生物碱的含量；采用《中华人民共和国药典》附录中相应测定方法分析考察了水分、总灰分、酸不溶性灰分,浸出物含量.结果 10批药材中澳洲茄碱和澳洲茄边碱含量范围分别为0.005％～0.048％,0.006％～0.053％、水分范围为7.25％～11.2％、总灰分范围为10.1％～15.7％、酸不溶性范围为0.499％～2.08％、浸出物范围为14.1％～23.9％.结论 所建立的龙葵药材中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的薄层鉴别及HPLC-ELSD含量测定方法准确、重现性好,可用于该药材的质量控制.
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澳洲茄边碱对肝癌 HepG2细胞增殖及凋亡的影响
目的：探讨澳洲茄边碱（SM ）对 HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其可能作用机制。方法用不同浓度SM 5、10、15和20μg／ml分别处理 HepG2细胞3、6、12和24 h ，并设不加药的对照组。采用MTT法检测 HepG2细胞增殖，DAPI染色法观察细胞核形态的变化，流式细胞术检测细胞凋亡和周期，Western blot法检测B细胞淋巴瘤‐白血病2（Bcl‐2）、Bcl相关X蛋白（Bax）、半胱天冬氨酸蛋白酶3（Caspase‐3）及Ki67的蛋白表达。结果与对照组相比，SM 呈剂量依赖性地抑制HepG2细胞增殖，促进HepG2细胞凋亡，将细胞周期阻滞于G2／M期，并且上调Bax和Caspase‐3蛋白表达，下调Bcl‐2和Ki67蛋白表达（P＜0．05或P＜0．01）。结论 SM 能有效抑制 HepG2细胞的增殖，促进细胞凋亡的发生；SM上调Bax和Caspase‐3表达，下调Bcl‐2和Ki67表达，细胞周期阻滞于G2／M期可能是其发挥上述作用的机制。
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澳洲茄边碱抑制CNE-1鼻咽癌细胞转移的分子机制
目的 探讨澳洲茄边碱抑制CNE-1细胞转移的分子机制.方法 CCK8活力检测法和transwell实验分别观察澳洲茄边碱对CNE-1细胞增殖、侵袭和迁移的影响;Real-time quantitative PCR和蛋白质印迹法探索澳洲茄边碱对snail、slug、E-cadherin和N-cadherin m RNA及蛋白表达的影响.结果澳洲茄边碱以浓度和时间依赖性抑制CNE-1细胞增殖 (P＜0.05);以浓度依赖性对CNE-1细胞的侵袭和迁移能力进行抑制 (P＜0.05);分别在基因和蛋白质水平上抑制snail、slug、E-cadherin和N-cadherin的表达水平 (P＜0.05).结论 澳洲茄边碱通过在基因和蛋白质水平抑制转录因子snail、slug的表达, 进而影响E-cadherin和N-cadherin的表达, 从而抑制CNE-1细胞的转移.
关键词： 澳洲茄边碱 转移 Snail Slug E-cadherin N-cadherin -
澳洲茄边碱通过逆转TAMs表型抑制CNE-1裸鼠移植瘤增殖的机制
目的:探讨澳洲茄边碱对裸鼠CNE-1鼻咽癌细胞移植瘤增殖以及肿瘤相关巨噬细胞表型的影响.方法:首先建立裸鼠移植瘤模型,随机分为荷瘤对照组、澳洲茄边碱低剂量组、澳洲茄边碱高剂量组,从第5天起,连续给药14天,隔天测量瘤体体积,第20天取材,测量瘤重,眼眶静脉取血收集外周血清;Real-time?quantitative?PCR实验检测瘤体组织中ki-67mRNA表达;ELISA试剂盒检测外周血清中IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、TNF-α细胞因子含量.结果:澳洲茄边碱给药组瘤体体积和瘤重明显小于荷瘤对照组(P<0.05),且呈现浓度依赖性;同时,给药组ki-67mRNA表达明显小于荷瘤对照组(P<0.05);给药组外周血清中IL-4、IL-6、IL-10、IL-13细胞因子表达明显下调(P<0.05),同时IL-12、TNF-α细胞因子表达明显上调(P<0.05).结论:澳洲茄边碱通过抑制IL-4、IL-6、IL-10、IL-13细胞因子表达,促进IL-12、TNF-α细胞因子表达,逆转裸鼠TAMs表型,从而抑制CNE-1细胞增殖.
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澳洲茄边碱对大肠癌RKO细胞增殖和凋亡作用
目的 观察澳洲茄边碱对人大肠癌RKO细胞增殖及凋亡作用.方法 不同浓度澳洲茄边碱作用RKO细胞.CCK-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测细胞增殖,平板法检测克隆形成,Annexin V-APC/PI标记流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒检测Caspase-3活性.结果 澳洲茄边碱可抑制RKO细胞增殖,呈剂量与时间依赖性.澳洲茄边碱可抑制RKO细胞克隆形成,呈剂量依赖性.澳洲茄边碱可促RKO细胞凋亡.澳洲茄边碱同时可增强RKO细胞Caspase-3活性.结论 澳洲茄边碱可以抑制RKO细胞增殖和克隆形成,促RKO细胞凋亡,其机制与活化Caspase-3相关.
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不同产地的龙葵果中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的含量测定比较研究
目的 比较不同采收期、同部位龙葵中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的含量.方法 采用高效液相色谱法测定不同产地龙葵中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的含量.结果 以吉林产的鲜龙葵果含含澳洲茄碱、澳洲茄边碱的量高,安徽,辽宁,河北等地的龙葵干果的含量也较高.结论 不同产地的龙葵果中鲜果与干果里面所含有澳洲茄碱以及澳洲茄边碱的含量存在显著性差异,应注意采时的产地和龙葵果的新鲜程度对龙葵药材质量的影响.
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龙葵不同采收期及不同部位中澳洲茄碱与澳洲茄边碱的含量分析
目的 比较不同采收期、不同部位龙葵中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的含量.方法 采用高效液相色谱法测定不同采收期、不同部位龙葵中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的含量.结果 6～8月采集的样品中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的含量以7月份高.龙葵全草、果实、茎、叶、果柄中,果实含量高.结论 不同采收期、不同部位龙葵中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的含量存在明显差异,应注意采收季节和药用部位对龙葵药材质量的影响.
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澳洲茄边碱对前列腺癌细胞增殖的抑制作用及机制研究
目的：研究澳洲茄边碱(solamargine,SM)对人前列腺癌激素非依赖细胞增殖的影响及可能的作用机制.方法用不同浓度 SM(0、1、2、4、6、8、10μmol/L)处理 DU145和 PC3细胞, MTT法检测 SM 对细胞生长的影响,Western blot 检测 SM 对相关信号通路蛋白 p38 MAPK、ERK1/2 MAPK、MUC1表达的影响.结果6μmol/L SM作用24 h后DU145和PC3细胞活力分别为(52.53±9.05)％、(56.28±2.36)％,并具有时间和剂量依赖；10μmol/L SM作用24 h后细胞活力分别为(27.36±2.72)％、(32.07±2.53)％.流式细胞术分析显示不同浓度 SM(0、4、6、8μmol/L)处理 PC3细胞能引起 PC3细胞阻滞在 G1期,G1期细胞比例分别为(52.61±0.50)％、(52.96±1.49)％、(66.16±2.84)％和(69.03±2.38)％.且能激活 MAPK信号通路减少下游蛋白 MUC1的表达.结论 SM能明显抑制DU145和PC3细胞生长,该作用可能与 MAPK信号通路的激活以及下游 MUC1蛋白表达下调有关.
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龙葵果保鲜技术对澳洲茄碱、澳洲茄边碱含量的影响
目的:研究龙葵果保鲜技术对其抗肿瘤成分澳洲茄碱、澳洲茄边碱含量的影响.方法:采用独特的龙葵果保鲜技术保存龙葵鲜果,并采用高效液相色谱法对龙葵干果和保鲜处理的鲜果中澳洲茄碱、澳洲茄边碱进行含量测定,比较保鲜技术对其抗肿瘤有效成分含量的影响.结果:经保鲜技术处理的龙葵鲜果中澳洲茄碱和澳洲茄边碱的含量要比龙葵干果的含量高80％以上.结论:龙葵果保鲜技术可以明显提高龙葵药材中抗肿瘤有效成分的含量,值得推广使用.
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HPLC法测定龙葵银屑片中澳洲茄碱和澳洲茄边碱的含量
目的:建立测定龙葵银屑片中澳洲茄碱和澳洲茄边碱含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为Intersil ODS-3(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水-50 mmol/L Na2HPO4(32∶59∶3,V/V/V),流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,检测波长为200 nm.结果:澳洲茄碱和澳洲茄边碱的进样量分别在0.18～5.76、0.203～6.496μg范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r分别为0.999 5、0.999 9)；精密度、稳定性、重复性试验的RSD均＜2％；平均加样回收率分别为94.76％和95.17％,RSD分别为1.76％和1.57％(n均为9).结论:该方法简便、准确,可用于龙葵银屑片中澳洲茄碱和澳洲茄边碱的含量测定.
