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奥帕曲拉对内皮素-1诱导的心脏成纤维细胞增殖的影响
目的:探讨奥帕曲拉(omapatrilat,OMA)对内皮素-1(ET-1)诱导的心脏成纤维细胞(CFs)增殖的干预作用及可能机制.方法:经差速贴壁法培养的新生大鼠CFs,随机分为7组:对照组,ET-1组,OMA组,ET-1+OMA 10-9 mol/L组,ET-1+OMA 10-8 mol/L,ET-1+OMA 10-7 mol/L组,ET-1+OMA 10-6 mol/L组.采用四氮唑盐(MTT)比色法测定CFs教目,流式细胞分析仪(FCM)检测CFs细胞周期,液体闪烁计数仪测定CFs3H-脯氨酸掺入率,硝酸还原酶法测定细胞培养上清液中NO含量.结果:与对照组相比,10-7 mol/L ET-1能显著增加CFs的吸光度A490值及[3H]-Pro掺入率,降低CFs生成NO的量(均P＜0.01),10-9-10-6 mol/LOMA呈浓度依赖性的降低ET-1诱导的A490值和[3H]-Pro掺入率升高(均P＜0.01),促进CFs NO的生成(均P＜0.05);细胞周期分析表明ET-1能显著提高S期细胞百分率(P＜0.01),10-7 mol/L OMA抑制ET-1诱导S期细胞百分率上升(P＜0.01).结论:OMA对ET-1诱导的CFs增殖及胶原合成有抑制作用,该作用可能和NO生成有关.
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AcSDKP对PDGF诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的调节作用
目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酰(AcSDKP)对血小板源性生长因子(PDGF)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的调节作用.方法:建立新生大鼠心脏成纤维细胞系;采用四甲基偶氮唑(MTT)法和3H-TdR掺入法检测心脏成纤维细胞的增殖;采用3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原的合成.结果:PDGF在1～20 ng/ml浓度范围内对心脏成纤维细胞增殖和胶原合成均有促进作用.且随着PDGF浓度的增加,其促细胞增殖和胶原合成作用增强,并在10ng/ml浓度时PDGF的促增殖和胶原合成效应强.在10-10/10-8mol/L浓度范围内,AcSDKP对PDGF介导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成均有抑制作用,并且在10-9mol/L时,AcSDKP抑制心脏成纤维细胞增殖和胶原合成作用强.结论:AcSDKP对PDGF介导的心脏成纤维增殖和胶原合成均有明显抑制作用,这可能与其抗心脏纤维化的作用相关.
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缓激肽B1受体在卡托普利抑制心脏成纤维细胞增殖中的作用
目的:探讨缓激肽(BK)B1受体在ACEI类药物卡托普利(captopril)抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖中的作用及其可能机制.方法:经差速贴壁法培养新生大鼠CFs,随机给予AngⅡ、captopril、B2受体阻断剂icatibant和B1受体阻断剂des-Arg10,Leu9-kallidin进行干预.采用四氮唑盐(MTT)比色法测细胞数目,流式细胞仪技术(FCM)检测细胞周期,硝酸还原酶法和放射免疫分析技术分别测定培养CFs细胞上清液中NO含量和细胞内cGMP水平.结果:与空白对照组比较,AngⅡ10-7mol/L孵育细胞48 h后可显著升高CFs S期细胞百分率和MTT比色法测定的CFs吸光度(A490 nm)值(P＜0.01);Captopri1 10-5 mol/L可明显降低AngⅡ刺激的CFs S期细胞百分率和A490 nm值升高(均P＜0.05),显著促进CFs NO和cGMP生成,该作用可被icatibant(10-6 mol/L)部分阻断,同时阻断B1和B2受体可进一步减弱captopril的作用.结论:Captopril抑制AngⅡ诱导的CFs增殖作用部分是由BK经其B2受体介导的;同时阻断BKB1和B2受体可进一步减弱captopril抗CFs增殖效应,B1受体在B2受体阻断情况下可能起部分代偿作用,抑制CFs生长,该作用与NO、cGMP生成有关.
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血管钠肽抑制低氧刺激心脏成纤维细胞增殖的机制研究
目的:研究血管钠肽(VNP)抑制低氧刺激的心脏成纤维细胞增殖的机制.方法:分离、培养乳鼠心脏成纤维细胞,随机分为四组:对照组、低氧组、低氧+VNP组和低氧+8-Bromo-cGMP组.以MTT法观察各组细胞的生长情况,分别采用放射免疫和免疫组化的方法研究了VNP对细胞内cGMP水平和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.结果:低氧24h可以使培养的乳鼠心脏成纤维细胞MTT A490 nm值显著升高(P<0.05 vs对照组),VNP(10-7mol/L)和8-Bromo-cGMP(10-3mol/L)均可以显著降低低氧刺激的心脏成纤维细胞MTT A490 nm值(P<0.05 vs低氧组);对照组和低氧组细胞内cGMP水平无显著差异,而VNP(10-7mol/L)能升高细胞内cGMP水平(P<0.05 vs对照组、低氧组);低氧组PCNA的表达显著强于对照组(P<0.05 vs对照组),VNP(10-7mol/L)可以使低氧刺激的心脏成纤维细胞PCNA表达减弱(P<0.05 vs 低氧组).结论:VNP抑制低氧刺激的心脏成纤维细胞增殖与升高细胞内cGMP水平、减弱PCNA的表达有关.
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低氧促进大鼠心脏成纤维细胞DNA合成及Ⅰ、Ⅲ胶原mRNA表达
目的:研究低氧(2%氧)对成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞DNA合成及Ⅰ、Ⅲ型胶原前a肽链表达的影响.方法:分离培养成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞,采用液体闪烁计数方法检测心脏成纤维细胞的DNA合成速率,采用原位杂交技术检测Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA的表达.结果:成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞在低氧第6h、12 h时3H-TdR掺入量较常氧组显著增加,分别增加34%(P＜0.05)和36%(P＜0.01);低氧第4 h、8 h、12 h Ⅰ型胶原前α肽链mRNA表达显著高于常氧培养的细胞;低氧第2 h,Ⅲ型胶原前α肽链mRNA表达显著高于常氧培养的细胞.结论:低氧能够直接促进体外培养的成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞DNA合成和Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链表达,提示低氧对心脏成纤维细胞生长和胶原表达的直接调节可能是低氧性心肌纤维化的重要机制.
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卡维地洛对高血压大鼠心脏成纤维细胞胶原合成及NO含量的影响
目的 探讨卡维地洛对自发性高血压大鼠(SHR)心脏成纤维细胞(CFs)胶原合成及NO含量的影响及其作用机制.方法 以SHR和Wistar大鼠为研究对象,采用消化法培养CFs,用硝酸还原酶法检测不同浓度(0、0.01、0.10、1.00、10.00 μmol/L)卡维地洛干预下CFs培养液中的一氧化氮(NO)含量,用3H-脯氨酸掺入法观察CFs的胶原合成情况.结果 (1)在基础状态下培养72 h,SHR空白对照组的NO含量明显低于Wistar大鼠空白对照组(P<0.01);SHR空白对照组的3H-脯氨酸掺入率明显高于Wistar大鼠空白对照组(P<0.01).(2)卡维地洛以浓度依赖的方式促进CFs的NO含量增加.(3)卡维地洛以浓度依赖的方式抑制CFs告3H-脯氨酸掺入率.(4)在不同浓度卡维地洛干预下,SHR CFs的3H.脯氨酸掺入率随NO含量的增高而减低,二者呈显著负相关(r=-0.943,P<0.01).结论 卡维地洛能促进CFs的NO合成,直接抑制CFs的胶原合成,进一步逆转高血压大鼠的左室重构.
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黄芪对尾加压素Ⅱ诱导的心脏成纤维细胞胶原合成及分泌转化生长因子-β1的影响
目的 观察黄芪注射液对尾加压素Ⅱ(UⅡ)诱导的心脏成纤维细胞合成胶原及分泌转化生长因子(TGF-β1)的影响.方法 体外培养乳鼠心脏成纤维细胞,分成3组:对照组、UⅡ组、UⅡ+黄芪组.作用一定时间后,Real-time RT-PCR法测定各组细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1基因表达情况,3H-脯氨酸掺入测定胶原合成情况,双抗体夹心ELISA法测定培养上清TGF-β1分泌情况.结果 UⅡ可以促进乳鼠心脏成纤维细胞胶原合成,刺激TGF-β1的分泌,黄芪注射液可明显抑制UⅡ的上述作用.结论 黄芪可以通过抑制UⅡ诱导的心脏成纤维细胞胶原合成及TGF-β1分泌,延缓心肌纤维化及心脏重构的进展.
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抗纤维化短肽对血清诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成与Ⅰ、Ⅲ型胶原表达抑制作用的实验研究
①目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对不同浓度血清(FBS)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的调节作用.②方法 选用新生大鼠心脏成纤维细胞;采用3H-TdR掺入法检测心脏成纤维细胞的增殖;采用3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原的合成,采用westernblot法检测心脏成纤维细胞Ⅰ型与Ⅲ型胶原的表达.③结果 在0.4%、2%和10%几种血清浓度的条件下,随着血清农度的增加,反映心脏成纤维细胞增殖3H-TdR掺入量和胶原合成的3H-脯氨酸掺入量增加.表明一定浓度的血清能诱导心脏成纤维细胞增殖和胶原合成.与0.4%血清的基础培养条件相比较,10%高浓度血清能刺激心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达.在10-10～10-8mol/L浓度范围内.AcSDKP对10%诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成有抑制作用.并且在10-9mol/L时,AcSDKP对心脏成纤维细胞增殖、胶原合成抑制作用强.同时10-9mol/L的AcSDKP对心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达也有明显的抑制作用.④结论 AcSDKP对血清介导的心脏成纤维细胞增殖、胶原合成以及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达有明显抑制作用.
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血小板源性生长因子诱导大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的信号转导途径研究
①目的 探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)途径在血小板源性生长因子(PDGF)刺激大鼠心脏成纤维细胞胶原合成中的作用.②方法 分离培养新生大鼠心脏成纤维细胞.免疫细胞化学法、Western blot法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的变化.③结果 与对照组相比,在PDGF刺激下,大鼠心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达增加,PD98059 25μmol/L预孵育1小时能够抑制PDGF的刺激作用.④结论 PDGF能够通过ERK1/2途径调节大鼠心脏成纤维细胞的胶原合成.
关键词： 血小板源性生长因子 细胞外信号调节激酶1/2 心脏成纤维细胞 -
N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对血清诱导的心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9活性表达的调节作用
①目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对不同浓度血清(FBS)诱导的大鼠心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9酶活性表达的调节作用.②方法 选用新生大鼠心脏成纤维细胞;采用明胶酶谱法检测心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9酶活性的表达.③结果 在0.4%、2%和10%几种血清浓度的条件下,随着血清浓度的增加,MMP-2、MMP-9酶活性表达增强.AcSDKP能够进一步增加由10%血清诱导的心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9酶活性的表达.④结论 AcSDKP上调了由血清介导的心成纤维细胞MMP-2,MMP-9酶活性表达,这可能与AcSDKP抗心脏纤维化的作用相关.
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急性心肌梗死早期患者血清中可溶型ST2和白细胞介素-10水平变化及二者的相关性研究
急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）严重威胁着人类生命，目前对其研究越来越深入。 ST2（suppression of tumorigenicity 2）是白细胞介素-1（interleukin-1，IL-1）受体家族成员之一［1］。 ST2基因编码的蛋白有2种异构体：一种为可溶性形式的ST2（sST2）；另一种为膜结合受体形式的ST2，称为ST2受体（ST2L）。 ST2L蛋白由1个胞外结构域、1个跨膜结构域和1个Toll/IL-1受体3部分组成，与其特异性配体IL-33结合，参与构成IL-33受体复合物。sST2缺乏跨膜和胞内结构域，除了9个氨基酸外，它与胞外的ST2完全相同，被称为IL-33的诱骗受体［2］。 ST2可由心脏成纤维细胞和心肌细胞表达，是生物机械应力诱导产生的一种心肌蛋白［3］。
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缬沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的调节作用
目的:探讨缬沙坦对血管紧张素Ⅱ(angiontensinⅡ,AngⅡ)诱导的大鼠心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖的调节作用,并探讨其新的作用机制.方法:建立新生大鼠心脏成纤维细胞系;用不同浓度的缬沙坦(10-5、10-6、10-7 mol/L)对AngⅡ诱导CFs增殖干预,应用四氮唑盐试验(MTT)和3H-TdR掺入法检测其对心脏成纤维细胞的增值作用.结果:在一定范围内,缬沙坦以浓度依赖性方式抑制AngⅡ诱导CFs的增殖(P＜0.01).结论:缬沙坦能降低AngⅡ诱导的大鼠CFs的增值作用,是抗心肌纤维化发生的有效药物.
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不同缺氧时间点对小鼠心脏成纤维细胞旁分泌TGF-β1和BMP-2的影响
目的:探讨不同缺氧时间点对小鼠心脏成纤维细胞旁分泌TGF-β1、BMP-2蛋白和mRNA的影响.方法:将体外分离培养的第2代小鼠心脏成纤维细胞,分别缺氧0、12、24、48 h.ELISA法和RT-PCR法检测不同时间点心脏成纤维细胞旁分泌TGF-β1、BMP-2的蛋白和mRNA水平.结果:相较于缺氧0h,缺氧12 h后TGF-β1的蛋白和mR-NA表达呈上调趋势,但24 h、48 h后逐步下调;而BMP-2在缺氧12 h、24 h后,蛋白和mRNA表达均逐步上调,48 h后mRNA水平下调.与缺氧24 h相比,缺氧48 h后TGF-β1和BMP-2的蛋白以及mRNA表达均下调.结论:不同缺氧时间诱导的心脏成纤维细胞旁分泌TGF-β1和BMP-2的变化,可能参与了心肌纤维化的病理过程.
关键词： 缺氧 心脏成纤维细胞 TGFβ1/BMP-2 旁分泌 -
诱导心脏肌成纤维细胞向心肌样细胞转分化的miRNA
背景：微小 RNA(miRNA)是一类非编码小分子 RNA，miRNA参与调控基因表达，在促进前体细胞增殖与分化中发挥了重要的作用。miRNA是否可促进前体细胞向心肌细胞的分化则鲜见报道。
目的：验证转入特定miRNA(miRNA-1、miRNA-499)诱导新生小鼠心脏肌成纤维细胞转分化为心肌样细胞的可行性。
方法：体外培养新生小鼠心脏成纤维细胞，常氧培养传代至P2；37℃低氧(体积分数3%O2)培养48 h；免疫荧光染色检测心脏成纤维细胞特异性标记物波形蛋白的表达，免疫荧光染色、流式细胞技术检测心脏成纤维细胞向心脏肌成纤维细胞表型转化的标记物α-平滑肌激动蛋白的表达。实验分为4组：miRNA-1转染组、miRNA-499转染组、miRNA-1/miRNA-499共转染组及空白对照组，采用 miRNA 芯片检测心脏肌成纤维细胞与心肌细胞中微小RNA的表达差异；real-time qPCR方法验证芯片检测结果。
结果与结论：心脏肌成纤维细胞中过表达 miR-1、miR-499后，心脏发育不同阶段特异性因子发生不同程度的表达变化，与空白对照组相比，其余3组 GATA4、Tbx5、Mef-2c、α-MHC表达明显增高，Mesp1、Isl1表达均无显著变化。结果表明，特定miRNAs可诱导心脏肌成纤维细胞表达心肌细胞特异性性标志物，具备诱导心脏肌成纤维细胞向心肌细胞直接转分化的潜力。 -
广枣总黄酮对体外培养大鼠心脏成纤维细胞周期影响
目的:研究广枣总黄酮(total flavones of fructus chorspondiatis,TFFC)对血管紧张素Ⅱ(angiontensin,AngⅡ)诱导大鼠心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)细胞周期的影响,并进一步探讨其与一氧化氮(nitric oxide,NO)-一氧化氮合酶(nitricoxide synthase,NOS)系统的关系.方法:建立新生大鼠心脏成纤维细胞系;采用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分析技术检测细胞周期;采用化学比色法测定CFs培养上清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平;采用硝酸还原酶法测细胞培养液中NO水平;化学比色法测细胞上清液中NOS水平.结果:25、50、100 mg/L的TFFC作用72 h后,CFs的G0/G1期细胞百分率较AngⅡ组显著增高(P＜0.01,P＜0.05),S期细胞百分率,G2/M期细胞百分率和增殖指数(proliferation index,PI)则显著低于对照组(P＜0.01,P＜0.05),且随着作用浓度的增加,TFFC对细胞周期的影响逐渐增强.100 mg/L的TFFC干预72 h后,CFs培养上清NO浓度为(23.23±0.70)μmol/L,与AngⅡ组(20.20±0.83)μmol/L相比,差异非常显著(P＜0.01);培养上清NOS活性为(20.43±0.53) U/L,和AngⅡ组(20.90±0.85) U/L相比,亦有非常显著性差异(P＜0.01).NO浓度和NOS活性呈显著正相关(r=0.964,P＜0.01).结论:TFFC能够抑制AngⅡ诱导大鼠CFs的细胞周期增殖,其效应可能与上调NO-NOS系统活性有关.
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低氧预处理对心脏成纤维细胞血红素氧化酶1基因表达的影响
目的:探讨离体培养的心脏成纤维细胞低氧预处理后血红素氧化酶1(HO-1)mRNA的表达及其经时变化.方法:选用新生wistar大鼠心脏进行成纤维细胞培养,给予低氧预处理(HPC)及低氧/复氧处理(H/R).测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)浓度.自处理后心脏成纤维细胞提取总RNA并进行逆转录扩增合成cDNA.应用即时定量PCR对HO-1mRNA进行定量分析.结果:HPC后HPC组LDH浓度未见显著升高;经过H/R后,H/R组LDH浓度显著高于HPC组(P＜0.01).HPC后HO-1mRNA表达迅速增加,30 min时达到高峰,此后逐渐下降,24 h基本恢复到基线水平.结论:新生大鼠心脏成纤维细胞低氧预处理可减少低氧/复氧对细胞的损伤,低氧预处理后HO-1mRNA被显著诱导,并在12 h内维持较高水平,24 h后基本恢复至基线水平.
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p38丝裂素活化蛋白激酶信号传导通路对低氧预处理后心脏成纤维细胞血红素氧化酶-1基因表达的影响
目的:探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号传导对低氧预处理(HPC)的细胞保护作用以及HPC后血红素氧化酶-1(HO-1)mRNA表达的影响.方法:选用新生Wistar大鼠心脏选行成纤维细胞培养,给予HPC及低氧/复氧处理(HR).药物处理组在HPC和HR处理过程中向培养液中加入SB203580.测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)浓度和细胞HO-1mRNA表达量.结果:低氧/复氧后,HPC/SB组LDH浓度显著高于HPC/NSB组(P＜0.05).HR组低氧/复氧后各亚组LDH浓度均显著升高(P＜0.01,P＜0.01);低氧/复氧处理前HPC组中NSB亚组于低氧预处理后HO-1 mRNA表达显著上升(P＜0.001),低氧/复氧处理后其表达有所下降;SB亚组其表达也显著上升(P＜0.01).HR组中各亚组于低氧/复氧处理后HO-1 mRNA表达也显著上升(P＜0.01).结论:对培养的心脏成纤维细胞给予低氧预处理能够减轻其后低氧/复氧对细胞的损伤,低氧预处理较低氧/复氧处理更能够显著诱导心脏成纤维细胞HO-1 mRNA的表达.
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补阳还五汤对缺氧预适应心脏成纤维细胞促心脏干细胞迁移的影响
目的 观察补阳还五汤对缺氧预适应心脏成纤维细胞促心脏干细胞迁移的影响,探讨该药对心肌梗死的作用及可能机制.方法 复制小鼠心脏成纤维细胞缺氧预适应24 h模型,将实验分为对照组、模型组、补阳还五汤组,利用Transwell小室进行心脏干细胞迁移实验.显微镜下观察并计数迁移至小室膜下层的心脏干细胞数;RT-PCR法检测各组心脏成纤维细胞干细胞因子(SCF)、基质细胞衍生因子(SDF)-1 mRNA的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞培养液中迁移相关因子SCF、SDF-1的蛋白分泌量.结果 对照组、模型组、补阳还五汤组心脏干细胞迁移数呈递增趋势,对照组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),补阳还五汤组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);SCF、SDF-1 mRNA表达在对照组、模型组、补阳还五汤组之间存在下调后上调的变化趋势,模型组与对照组比较差异有统计学意义(均P<0.05),补阳还五汤与模型组比较差异有统计学意义(均P<0.05);三组SCF、SDF-1蛋白分泌变化趋势与RT-PCR结果一致,模型组与对照组比较SCF差异有统计学意义(P<0.05),SDF-1差异无统计学意义(P>0.05),补阳还五汤组与模型组比较差异有统计学意义(均P<0.05).结论 补阳还五汤可促进缺氧预适应心脏成纤维细胞诱导的心脏干细胞迁移,其机制可能与上调心脏成纤维细胞迁移相关因子SCF、SDF-1的表达有关.
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骨髓间充质干细胞条件培养液对心脏成纤维细胞的影响
目的 探讨体外2%氧条件下培养骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)培养液对成年大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成情况的影响.方法 分离Wistar大鼠下肢骨获取MSCs进行培养,收集培养3、6、9、24 h培养液,用其刺激成年Wistar大鼠的心肌成纤维细胞30 h,采用MTT法和3H-脯氨酸掺入法检测心肌成纤维细胞的增殖及胶原合成情况.结果 经3、6、9 h的MSCs条件培养液刺激后的心肌成纤维细胞3H-脯氨酸掺人量与无血清对照组比较显著增加,分别增加23%(P＜0.01)、44%(P＜0.01)和31%(P＜0.01),而24 h组与无血清对照组比较差异无显著性;MSCs条件培养液刺激后的心肌成纤维细胞MTT结果与对照组比较差异无显著性.结论 MSCs低氧条件培养液可以促进心肌成纤维细胞胶原合成,改善心功能.
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血管紧张素-(1-7)对血管紧张素Ⅱ在大鼠心脏成纤维细胞中信号转导的影响及其机制
目的 探讨血管紧张素-( 1-7)[ Angiotensin-( 1-7),Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)在大鼠心脏成纤维细胞(Cardiac fibroblasts,CFs)中信号转导的影响及其机制.方法 原代分离培养并鉴定新生SD大鼠的CFs,将细胞分为8组:空白对照组、AngⅡ组、Ang-( 1-7)组、AngⅡ+Ang-( 1-7)组、AngⅡ+Ang-(1-7)+A-779组、AngⅡ+Ang-(1-7)+ PAO组、Ang-(1-7)+ PAO组和AngⅡ+PAO组,Western blot法检测细胞外信号调节激酶1/2(Extracellular signal regulated kinase 1/2,ERK1/2)和磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)的表达；免疫沉淀捕捉分析法检测蛋白酪氨酸磷酸酶-1(Src-homology domain 2 containing protein tyrosine phosphatase-1,SHP-1)的酶活性；实时荧光定量PCR检测转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-31)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ,ColⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白( CollagenⅢ,ColⅢ)基因mRNA的转录水平.结果 AngⅡ可增加细胞内p-ERK1/2的表达水平和p-ERK/ERK值(磷酸化的p-ERK1/2与总的ERK1/2的比值),Ang-(1-7)通过与Mas受体结合可拮抗AngⅡ引起的上述效应；Ang-( 1-7)通过与Mas受体结合而激活胞内SHP-1的活性,并可拮抗AngⅡ所致的SHP-1活性降低；抑制SHP-1的活性后,Ang-( 1-7)拈抗AngⅡ诱导的p-ERK1/2表达水平和p-ERK/ERK值增高的效应被抑制.Ang-( 1-7)对TGF-β1、Col Ⅰ和ColⅢ基因mRNA的转录水平无显著影响,但可抑制AngⅡ所诱导的上述基因mRNA转录水平的增加.结论 Ang-( 1-7)通过与Mas受体结合而激活SHP-1,该效应与Ang-(1-7)拮抗AngⅡ诱导的p-ERK1/2的表达水平和p-ERK/ERK值增高密切相关；Ang-( 1-7)可抑制AngⅡ所诱导的TGF-β1、Col Ⅰ和ColⅢ基因表达上调,这些现象可能体现了一种Ang-(1-7)拮抗AngⅡ所致的不良效应的保护性机制.
