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化瘀祛痰方药及其拆方含药血清对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞炎症因子表达的影响
目的:观察化瘀祛痰方药及其拆方对脂多糖( lipopolysaccharide,LPS)诱导人脐静脉内皮细胞EA.hy926炎症因子表达的影响.方法:SD大鼠随机分为空白对照组、全方组、补气组、化瘀组、祛痰组,生理盐水和相应中药予以ig,第9天腹主动脉采血,分离血清.体外培养EA.hy926细胞,随机分为①正常对照组、② LPS刺激组、③全方组、④补气组、⑤化瘀组、⑥祛痰组、⑦空白血清对照组.其中②组加人终浓度为10 mg·L-1 LPS,③～⑦组用相应含药血清(浓度为10%)预处理24 h后加人终浓度为10 mg·L -1 LPS,各组细胞培养24 h后进行各项指标测定.RT-PCR法检测核因子-KB (NF-KB)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA表达;ELISA法检测TN F-α蛋白的表达;免疫荧光细胞化学法检测NF-KB蛋白的表达.结果:经LPS刺激后NF-KB和TNF-α的表达与正常组比较均明显升高(P<0.01).全方组NF-KB和TNF-α的表达与刺激组相比明显受抑制(P<0.01);拆方各组中,化疲组NF-KB和TNF-α的表达显著减少.补气、祛痰、空白血清对照组NF-KB和TNF-α的表达显著高于全方组;而化瘀组NF-KB和TNF-α的表达与全方组相比较无统计学差异.结论:化瘀祛痰方药及化瘀拆方可显著抑制内皮细胞炎症因子NF-KB和TNF-α的表达,这可能是其抗动脉粥样硬化的作用机制之一.
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化瘀祛痰方对AS家兔肝脏线粒体呼吸链酶复合物的影响
目的:探究化瘀祛痰方对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)家兔肝脏线粒体呼吸链酶复合物的影响,并探讨其相关的作用机制.方法:健康SPF级雄性新西兰白兔90只,随机分为正常组、模型组、化瘀祛痰方高、中、低剂量组(4,8,16 g·kg-1),辛伐他汀组(1.4 mg·kg-1),每组15只.正常组给予基础饲料喂养,其他组采用高脂饲料喂养,建立动脉粥样硬化模型,造模8周后,化瘀祛痰方高、中、低剂量组与辛伐他汀组给予相应药物溶液,正常组和模型组给予等量生理盐水,4周后,全自动生物化学分析仪检测血清甘油三酯(triglyceride,TC),胆固醇(cholesterol,TC),高密度脂蛋白(high-densitylipoprotein cholesterol,HDL-C),低密度脂蛋白(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的含量;苏木素-伊红(HE)和油红O染色观察肝组织形态学改变;分光光度计法检测家兔肝脏线粒体呼吸链酶复合物活性;Blue-Native-Page技术检测线粒体呼吸链酶复合物含量.结果:与正常组比较,模型组家兔血清中TC,TG,LDL-C显著升高,HDL-C显著降低;与模型组比较,化瘀祛痰方高、中、低剂量组与辛伐他汀组家兔血清中TC,TG,LDL-C显著降低,HDL-C显著升高(P ＜0.05,P＜0.01),其中化瘀祛痰方中以高剂量效果为显著.HE及油红0染色结果显示模型组较正常组比较家兔肝组织肿胀明显、脂肪空泡清晰可见,胞浆内脂滴蓄积明显;与模型组比较,化瘀祛痰高、中、低剂量组及辛伐他丁组脂肪空泡明显减少或消失,肝组织形态恢复或部分恢复正常,其中化瘀祛痰方中以高剂量效果为显著.与正常组比较,模型组肝脏线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ活性及含量显著降低(P＜0.01);与模型组比较,化瘀祛痰方高剂量组与辛伐他汀组肝脏线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ活性和含量明显升高(P ＜0.05,P＜0.01).结论:化瘀祛痰方可能是通过影响线粒体呼吸链酶复合物的活性及含量减少脂质沉积,防治动脉粥样硬化.
关键词： 化瘀祛痰方 动脉粥样硬化 线粒体呼吸链酶复合物 脂质沉积 -
化瘀祛痰方对油酸和棕桐酸诱导HepG2细胞脂质损伤及自噬的影响
目的:观察化瘀祛痰方含药血清对油酸和棕榈酸诱导HepG2细胞脂质损伤及自噬水平的影响,探讨化瘀祛痰方防治脂代谢紊乱的可能机制.方法:以不同终浓度(摩尔比为2:1)的油酸和棕榈酸混合物孵育诱导HepG2细胞24h,采用CCK-8、油红O染色以及细胞内TG含量测定等方法筛选并建立佳HepG2细胞脂质损伤模型;以大鼠空白血清作为空白对照、辛伐他汀含药血清作为阳性对照,采用油红O染色、Western Blot、细胞内TG含量测定法检测化瘀祛痰方含药血清对HepG2细胞脂肪损伤及自噬相关指标的影响.结果:选取终浓度为1mmol/L的油酸和棕榈酸作为佳作用浓度.与模型组比较,化瘀祛痰方含药血清能明显使HepG2细胞内脂滴变小、数量减少并使细胞内TG含量显著减低(P＜0.05),同时显著上调HepG2细胞自噬相关蛋白Atg3和Beclin1表达(P＜0.05).结论:化瘀祛痰方药含药血清可以减轻油酸和棕榈酸诱导的HepG2细胞内的脂质损伤,其机制可能与其影响自噬相关蛋白Atg3和Beclin1的表达有关.
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化瘀祛痰方对高脂血症大鼠肝脏自噬小体形成信号通路相关基因的影响
目的 探讨化瘀祛痰方治疗高脂血症的可能作用机制.方法 30只SD大鼠随机分为空白对照组、高脂血症组、化瘀祛痰组,每组10只.采用高脂饲料喂饲法制备高脂血症模型后,化瘀祛痰组予化瘀祛痰方煎剂10ml/(kg·d),空白对照组、高脂血症组给予等体积的磷酸盐缓冲生理盐水灌胃.30天后检测大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,HE及油红O染色观察肝脏形态变化及肝脏脂质沉积,PCR array筛选大鼠肝脏自噬小体形成信号通路的相关差异基因,Realtime PCR检测泛素样结合通路Atg12-Atg5通路和LC3-PE通路上的相关基因mRNA的表达水平.结果 高脂血症组大鼠肝细胞脂质沉积,胞浆内见脂肪空泡;化瘀祛痰组大鼠肝脏脂滴减少.与空白对照组比较,高脂血症组血清TC、LDL-C水平显著升高、HDL-C水平显著降低(P＜0.01);与高脂血症组比较,化瘀祛痰组血清TC、LDL-C、HDL-C水平均显著改善(P＜0.05或P＜0.01).PCR array结果显示,在参与自噬小体形成的基因中三组比较发生差异性改变的基因有10个.与空白对照组比较,高脂血症组Atg16l1、Atg3、Atg4c、Atg5基因mRNA表达水平均显著下降(P＜0.05或P＜0.01);与高脂血症组比较,化瘀祛痰组Atg16l1、Atg3、Atg4c基因mRNA表达水平均显著上升(P＜0.05). 结论 化瘀祛痰方可能通过调节高脂血症大鼠肝脏自噬小体形成信号通路相关基因Atg16l1、Atg3、Atg4c、Atg5 mRNA的表达,从而改善高脂血症大鼠肝脏脂质损伤.
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化瘀祛痰方调控线粒体自噬相关蛋白减少动脉粥样硬化家兔肝脏脂质沉积的研究
目的 观察化瘀祛痰方对动脉粥样硬化(AS)家兔肝脏线粒体自噬相关蛋白的影响,探讨线粒体自噬对肝脏脂质沉积的调控作用.方法 SPF级健康雄性新西兰纯种家兔60只,随机分为正常组、模型组、化瘀祛痰组、辛伐他汀组,正常组喂饲基础饲料,模型组、化瘀祛痰组、辛伐他汀组喂饲高脂饲料造模.造模8周后,化瘀祛痰组、辛伐他汀组给予相应药物,正常组及模型组给予相应体积生理盐水.4周后,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,HE染色观察肝脏组织的形态变化,油红O染色观察脂滴蓄积,Western blotting 检测肝脏组织线粒体自噬相关蛋白 FUNDC1、P62及 LC3的相对表达量.结果 与正常组相比,模型组家兔血清TC、TG、LDL-C含量显著上升(P<0.01),HDL-C含量显著降低(P<0.05);与模型组相比,化瘀祛痰组及辛伐他汀组血清TC、TG、LDL-C含量显著下降(P<0.05),HDL-C含量显著上升(P<0.05).HE染色结果,模型组家兔肝脏组织肿胀明显,脂肪空泡形成;化瘀祛痰组及辛伐他汀组脂肪空泡显著减少或消失,肝组织形态恢复或部分恢复正常.油红O染色结果,模型组肝细胞肿大变圆,胞浆疏松,胞浆内脂滴蓄积明显;化瘀祛痰组及辛伐他汀组脂肪变性程度降低,脂质空泡数量减少.Western blotting结果,与正常组相比,模型组家兔肝组织中线粒体自噬相关蛋白LC3、FUNDC1相对表达量显著升高(P<0.05),P62相对表达量显著降低(P<0.05),而化瘀祛痰组及辛伐他汀组与模型组相比线粒体自噬相关蛋白LC3、FUNDC1相对表达量显著降低(P<0.05),P62相对表达量显著升高(P<0.05).结论 化瘀祛痰方可调控线粒体自噬相关蛋白,减少AS家兔肝组织脂质沉积,减缓动脉粥样硬化的形成和发展.
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化瘀祛痰方调控AMPK介导自噬对高脂血症大鼠肝脏脂质损伤的影响
目的 探讨化瘀祛痰方药调控AMPK介导自噬对高脂血症大鼠肝脏脂质损伤的影响.方法 32只SD大鼠随机分为空白组、高脂组、中药组、西药组,每组8只.模型大鼠采用高脂饲料喂饲8周后.给予处理因素治疗4周.全自动生化分析仪检测大鼠血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,Western blot技术检测各组大鼠LC3A/B、p-mTOR、mTOR、p-AMPK、AMPK的表达水平.结果 高脂组大鼠血清TC、LDL-C、HDL-C水平显著性升高(P＜0.01);中药组和西药组均较模型组大鼠血清中TC、LDL-C、HDL-C水平显著降低(P＜0.05或P＜0.01).与空白组相比,高脂组LC3A/B、p-AMPK蛋白表达水平明显降低(P＜0.05或P＜0.01),p-mTOR蛋白表达水平明显增高(P＜0.01);与高脂组相比,中药组LC3A/B、p-AMPK蛋白表达水平明显增高(P＜0.05),p-mTOR蛋白表达水平明显降低(P＜0.01).结论 化瘀祛痰方可通过调控AMPK介导自噬相关基因使高脂血症大鼠肝脏自噬增强,改善高脂血症大鼠肝脏脂质损伤.
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化瘀祛痰方对动脉粥样硬化家兔肝脏细胞线粒体自噬相关基因表达的影响
目的:通过观察化瘀祛痰方调控线粒体自噬相关基因表达对动脉粥样硬化家兔肝脏脂质沉积的影响, 从线粒体自噬的角度揭示化瘀祛痰方干预动脉粥样硬化的分子生物学机制.方法:普通级健康雄性新西兰纯种白兔60只, 随机分为正常对照组15只, 造模组45只, 正常组喂饲普通饲料, 造模组喂饲高脂饲料, 自由摄食, 饮水不限.8周后, 将造模组45只家兔随机分为模型组、化瘀祛痰组、辛伐他汀组, 化瘀祛痰组、辛伐他汀组给予相应正常组及模型组给予等量生理盐水.四周后, 腹主动脉取血, 分离血清, 全自动生物化学分析仪检测血清中TC, TG, LDL-C及HDL-C的含量, HE染色比较各组兔肝组织结构和形态变化, Western-bolt检测各组兔肝组织自噬相关蛋白Clp X, PHB1及Sir T3的表达.结果:与正常组相比, 模型组血清中TC, TG, LDL-C水平明显升高、HDL-C水平明显降低;与模型组相比, 化瘀祛痰组及辛伐他汀组血清中TC, TG, LDL-C水平明显降低、HDL-C水平明显升高.HE染色显示正常组家兔肝细胞索排列正常, 肝细胞形态正常, 核圆、大、居中, 胞浆内无脂滴蓄积, 小叶内无炎症细胞浸润;模型组家兔肝脏脂肪变性明显, 肝细胞肿大变圆, 胞浆疏松, 内含大的脂肪滴, 部分细胞可见细胞核挤向胞膜, 细胞浆内可见大小不等的圆形脂肪空泡和炎性细胞;化瘀祛痰组及辛伐他汀组家兔肝脂肪变性的程度降低, 脂质空泡的数量减少, 肝细胞体形态较为正常.与正常组相比, 模型组家兔肝组织中细胞自噬及线粒体自噬相关蛋白Clp X, PHB1及Sir T3表达降低, 化瘀祛痰组及辛伐他汀组的家兔肝组织中细胞自噬及线粒体自噬相关蛋白Clp X, PHB1及Sir T3的表达明显升高.结论:化瘀祛痰方可能通过调控线粒体自噬相关基因改善动脉粥样硬化家兔肝脏脂质沉积.
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化瘀祛痰方对高脂血症患者血浆一氧化氮、前列环素的影响
目的:观察化瘀祛痰方对高脂血症患者血清一氧化氮(NO)、前列环素(PGI2)的影响.方法:90例痰瘀型高脂血症患者随机分为3组,氟伐他汀组30例给予氟伐他汀口服,化瘀祛痰方高、低剂量组各30例,分别给予高、低剂量的化瘀祛痰方口服,在治疗前以及治疗4周后分别采血测定各组NO、PGI2的含量并进行统计分析.结果:3组治疗前、后的NO及PGI2水平比较均有显著性差异(P＜0.01,P＜0.05)；化瘀祛痰方高剂量组与氟伐他汀组治疗后的NO及PGI2水平比较无统计学意义(P＞0.05),而两组与化瘀祛痰方低剂量组相比均有显著性差异(P＜0.05).结论:化瘀祛痰方能升高高脂血症患者血清NO及PGI2的水平,且与剂量呈正相关,可预治动脉粥样硬化及延缓心脑血管疾病的发生.
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化瘀祛痰方对高脂血症大鼠肝脏PI3K/Akt信号通路影响研究
目的:探讨化瘀祛痰方对高脂血症大鼠肝脏PI3K/Akt信号通路的影响.方法:将50只SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,每组10只.采用高脂饲料喂养进行高脂血症模型复制后,中药低、中、高剂量组分别给予含有生药量为0.45、0.9、1.8 g/mL的化瘀祛痰方药煎剂进行治疗,正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃.4周后HE染色观察各组大鼠肝脏形态变化;全自动生化分析仪检测各组大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C含量变化;WB法检测各组大鼠肝脏PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平.结果:与正常组相比,模型组大鼠肝脏脂肪变性明显,TC、LDL-C水平显著升高(P＜0.05),HDL-C水平降低(P＜0.05),TG水平未发生显著改变(P＞0.05);PI3K、p-Akt蛋白表达水平上调(P＜0.05);与模型组相比,中药低、中、高剂量组大鼠肝脏脂肪变性呈不同程度减低,TC、LDL-C水平显著降低(P＜0.05),HDL-C水平升高(P＜0.05),TG水平未发生显著改变(P＞0.05);PI3K、p-Akt蛋白表达水平呈不同程度下调(P＜0.05).结论:化瘀祛痰方可以通过调节PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达,从而改善高脂血症大鼠肝脏脂质损伤.
关键词： 高脂血症 化瘀祛痰方 PI3K/Akt信号通路 -
化瘀祛痰方对不稳定型心绞痛患者超敏C-反应蛋白及E-选择素的影响
目的：观察化瘀祛痰方治疗不稳定型心绞痛的临床疗效以及对患者血清超敏C-反应蛋白及E-选择素的影响。方法：将64例不稳定型心绞痛患者随机分成两组，对照组30例予常规治疗，治疗组34例在常规治疗基础上予化瘀祛痰方。连续治疗4周后观察两组患者的临床疗效以及超敏C-反应蛋白及E-选择素的变化。结果：治疗组的心绞痛、心电图疗效均优于对照组（P＜0.05）；治疗组治疗后血清超敏C-反应蛋白及E-选择素明显下降，与治疗前比较，差异有统计学意义（P＜0.01）；两组治疗后比较，治疗组超敏C-反应蛋白及E-选择素均低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：化瘀祛痰方治疗不稳定型心绞痛有良好的临床疗效，可降低血清hs-CRP及E-选择素水平，抑制动脉炎症反应。
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化瘀祛痰方通过调控HIF-1α/VEGF/VEGFR-2通路影响动脉粥样硬化家兔主动脉脂质斑块
目的 研究化瘀祛痰方调控HIF-1α/VEGF/VEGFR-2通路对动脉粥样硬化家兔主动脉脂质斑块的影响,探讨化瘀祛痰方对动脉粥样硬化脂质斑块的作用机制.方法 将60只新西兰家兔随机分为对照组15只,实验组45只.实验组45只家兔通过免疫性内皮损伤合并高脂饲料喂养的方法制备动脉粥样硬化模型,对照组喂饲普通饲料.8周后,将实验组家兔随机分为模型组、化瘀祛痰方组及辛伐他汀组.各组给予相应药物干预,对照组、模型组给予同体积生理盐水,每天1次,连续4周后取材.全自动生化分析仪检测各组血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)含量;HE和油红0染色观察家兔主动脉病理形态学改变,测量内膜、中膜厚度;免疫组化法测定CD31平均光密度值;ELISA检测血清缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)含量;Western blot法检测主动脉HIF-1α、VEGF、VEGFR-2蛋白表达.结果 模型组血清TG、TC、LDLC水平较对照显著升高(P＜0.01),HDLC水平显著降低(P＜0.01),而化瘀祛痰方组和辛伐他汀组血清TG、TC、LDLC含量较模型组降低(P＜0.05或P＜0.01),HDLC含量均升高(P＜0.05或P＜0.01).病理染色可见模型组主动脉内膜细胞增生,有大量泡沫细胞和脂质沉积,经化瘀祛痰方和辛伐他汀治疗后均可见明显改善.模型组内膜、中膜厚度较对照组显著增厚(P＜0.01),而化瘀祛痰方组和辛伐他汀组较模型组显著减小(P＜0.01).模型组主动脉CD31平均光密度值较对照组显著升高(P＜0.01),而化瘀祛痰方组和辛伐他汀组较模型组显著降低(P＜0.01).模型组血清HIF-1α和VEGF含量较对照组显著升高(P＜0.01),而化瘀祛痰方组和辛伐他汀组较模型组均降低(P＜0.05或P＜0.01).模型组主动脉HIF-1α、VEGF、VEGFR-2蛋白表达较对照组显著升高(P＜0.01),经化瘀祛痰方和辛伐他汀治疗后,两组主动脉HIF-1α、VEGF、VEGFR-2蛋白表达水平较模型组均有显著降低(P＜0.01).结论 化瘀祛痰方稳定动脉粥样硬化脂质斑块,其机制可能与调控HIF-1α/VEGF/VEGFR-2通路抑制血管新生有关.
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化瘀祛痰方通过调节ApoE-/-小鼠胆固醇代谢相关基因表达抗动脉粥样硬化
目的 观察化瘀祛痰方对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠粥样斑块以及胆固醇代谢相关基因的影响,探讨化瘀祛痰方抗动脉粥样硬化(As)作用及可能的机制.方法 10只C57BL/6/J小鼠作为空白对照组,30只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰组[20 g/(kg·d)]和辛伐他汀组[0.005 g/(kg·d)].全自动生化分析仪检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC),HE染色观察主动脉结构及动脉粥样硬化程度,油红0染色观察主动脉脂质沉积,RT-PCR和Western blot检测肝脏低密度脂蛋白受体(LDLR)、卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)及主动脉CD36 mRNA和蛋白表达水平,流式细胞术检测腹腔巨噬细胞CD36蛋白表达.结果 与空白对照组相比,模型组小鼠血清TC、TG、LDLC水平显著升高;HDLC水平显著降低,主动脉管腔中形成较大粥样斑块,管壁形成大量脂质沉积,肝脏LDLR、LCAT基因表达显著下调,主动脉、巨噬细胞CD36基因表达显著上调.通过药物干预,与模型组相比,化瘀祛痰组和辛伐他汀组小鼠TC、TG、LDLC水平显著下降,HDLC显著升高,主动脉管腔中粥样斑块面积和管壁脂质沉积量明显减少,肝脏LDLR、LCAT基因表达显著上调,主动脉、巨噬细胞CD36基因表达显著下调.结论 化瘀祛痰方可抑制ApoE-/-小鼠主动脉斑块形成,其机制可能与调控血脂及胆固醇代谢相关基因LDLR、LCAT及CD36的表达有关.
关键词： 化瘀祛痰方 动脉粥样硬化 载脂蛋白E基因敲除小鼠 低密度脂蛋白受体 胆固醇 -
化瘀祛痰方通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路减轻油酸和棕榈酸引起的HepG2细胞脂质沉积
目的 研究化瘀祛痰方对油酸和棕榈酸诱导HepG2细胞脂质沉积的影响及其作用机制.方法 体外培养HepG2细胞,随机分为5组:正常对照组、模型组[培养液中加入终浓度为1 mmol/L的油酸和棕榈酸混合物(摩尔比为2∶1)]、20 μmol/LLY294002处理组、化瘀祛痰方处理组、化瘀祛痰方联合20 μmol/L LY294002处理组.采用油红O染色和细胞内甘油三酯(TG)含量测定法检测各组HepG2细胞脂质沉积情况;采用免疫荧光细胞化学染色法观察各组微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达;采用Western blot法检测各组磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、LC3B、胆固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)的水平.结果 与正常对照组相比,模型组细胞内脂滴形成增多、TG含量显著升高,SREBP-1c蛋白水平显著升高;模型组、化瘀祛痰方组、化瘀祛痰方联合LY294002组LC3B呈不同程度的阳性表达.与模型组相比,LY294002组、化瘀祛痰方组、化瘀祛痰方联合LY294002组p-AKT、p-mTOR蛋白水平显著降低;化瘀祛痰方组、化瘀祛痰方联合LY294002组的细胞内脂滴形成减少、TG含量显著减低,SREBP-1c蛋白水平显著降低、LC3B蛋白水平显著升高.结论 化瘀祛痰方抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路上调细胞自噬水平,减轻油酸和棕榈酸诱导的HepG2细胞脂质沉积.
