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蜡块存档时间对Feulgen染色效果的影响
核酸(nucleic acid)是指细胞内的一种大分子化合物.在组织切片中显示DNA的核酸染色,己广泛应用于淋巴细胞、脾、骨髓以及其他脏器组织.作者试用存档1～20年的胃黏膜活检组织蜡块做Feulgen染色,进行对照比较,从中得出不同时间存档蜡块组织的染色效果不同的结论.
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骨髓活检塑料包埋半薄切片网状纤维染色的应用体会
网状纤维银染色在血液病骨髓活检病理诊断中应用广泛,对某些疾病如骨髓纤维化、骨髓转移癌及浆细胞肿瘤和淋巴瘤的鉴别,或骨髓增生异常综合(MDS)和慢性再生障碍性贫血的鉴别等都有重要意义.我们采用骨髓活检塑料包埋半薄切片对所有骨髓增生性疾病的骨髓活检常规做Gomori法网状纤维染色,近3年共做了5000余例.由于骨髓活检塑料包埋在制片方法和包埋介质上都与石蜡包埋有所不同,故网染方法也有所不同,现将体会报告如下.
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骨髓活检标本固定液的改良
Bouin液是骨髓病理标本的常规固定液,不仅具备固定作用,还能对组织进行脱钙处理,且染色效果理想,核着色鲜明.但是Bouin液的配方有明显的缺点,冰醋酸有强烈的刺激气味,苦味酸属于易爆试剂.因此,我科1年多来一直选用甲酸甲醛液对骨髓活检标本进行固定,效果满意.
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骨髓塑料制片重包埋处理的一点经验
骨髓组织活检常用塑料包埋法制片.塑料块由两种有机化学试剂按一定比例混合凝固而成,如若凝固不好,已包埋的组织就不能像石蜡包埋制片那样,再进行溶解后重包埋处理.
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介绍WHO(2002)骨肿瘤分类
WHO骨肿瘤(2002)分类里有许多新特点,显著的变化是将各种类型肿瘤视为独立病种,并突出遗传学分型在肿瘤分类中的重要性.原分类中骨髓(圆细胞)肿瘤分成ES/PNET和造血组织肿瘤两类,取消原中间化脉管肿瘤,将血管内等瘤归入血管肉瘤.分类中新增了与骨肿瘤相关的先天性和遗传性综合征的内容.
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淋巴瘤侵犯骨髓的病理与临床研究进展
淋巴瘤侵犯骨髓的诊断对于临床分期、治疗方案的选择及判断预后均有重要意义,现就淋巴瘤侵犯骨髓的病理特点、临床病理联系、诊断和鉴别诊断进行介绍.
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Rapidcal.Immuno在骨髓脱钙中的应用
近年来血液病呈高发趋势,骨髓穿刺活检更广泛地应用于临床.骨髓活检标本制片的质量及免疫组化染色的准确表达,对骨髓病理诊断起着极其重要的作用.骨髓组织中含有丰富的钙盐、脂肪及大量造血细胞,成分复杂,软硬程度不一致.在去除不利于制片的钙盐成分的同时,又要保证造血细胞形态的完好及其免疫原性的完整保留.为此,我们选用美国进口的Rapidcal.Immuno脱钙剂对临床骨髓活检标本进行脱钙、制片及做相应的免疫组化染色,结果显示其具有脱钙迅速、组织损害极小并有效保留了细胞免疫原性的特征.
关键词： Rapidcal.Immuno 骨髓 脱钙 -
骨髓活检标本的免疫组化染色
骨髓活检及外周血检查联合,对临床诊断白血病/淋巴瘤起着重要作用.骨髓活检有着不可替代的作用,如:骨髓纤维化与再生障碍性贫血,抽血时是"干抽",无法制作血涂片进行诊断.
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GS环保试剂套液在骨髓穿刺石蜡切片中的应用
我科对骨髓穿刺石蜡切片多采用甲醛固定,经稍脱钙、乙醇脱水及二甲苯透明,骨组织还是较硬(多为二甲苯造成),造血细胞收缩较明显,不易切出薄切片,无法看清胞质及胞核内的颗粒.从2009年10月开始用GS环保型试剂至今,不但骨髓穿刺组织易切出1 μm薄片,大块脱钙骨组织也很好切,细胞无明显收缩,染色鲜艳.
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淋巴浆细胞淋巴瘤的临床病理诊断
在我院血液科举办的血液系统疾病诊疗新进展学习班上,分享了1例淋巴浆细胞淋巴瘤(lymphoplasmacytic lymphoma,LPL)的病例.LFL/华氏巨球蛋白血症(Waldenstr(o)m's macroglobulinemia,WM)缺乏与其他伴有浆细胞分化的成熟小B细胞淋巴瘤相鉴别的特异性形态学、免疫表型、基因及临床特征.就目前的诊断标准而言,WM与IgM型意义未明的单克隆γ病和边缘区淋巴瘤(MZL)在诊断上有一定的重叠,该病的准确诊断有一定的难度.借助本次学习班搭建的交流平台,相关科室参与了该病例的临床病理讨论,参会专家也对LPL的诊疗问题作了精彩点评和指导.目前患者历经8次R-CHOP方案的化疗,贫血恢复正常,双侧颈部、腋窝、腹股沟及腹膜后等处淋巴结均缩至正常,病情稳定,精神状态良好,现将讨论内容整理如下.
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寄生虫感染与血液病嗜酸性粒细胞差异性的探讨
在临床医学及检验相关资料中均有嗜酸性粒细胞增多的描述,但未见不同疾病嗜酸性粒细胞数量与形态差异性的报道.本文收集了骨髓片有核细胞分类中嗜酸性粒细胞＞4%的受检者,探讨寄生虫感染与几种血液病嗜酸性粒细胞在数量及形态上的差异.
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人Muse细胞体外诱导为神经前体细胞的研究
探讨成人骨髓来源的Muse细胞体外诱导为神经前体细胞的技术方法.从健康成人骨髓中分离出骨髓基质细胞(hBMSCs),利用流式细胞分选技术从中筛选出Muse细胞,采取免疫荧光细胞化学染色和qPCR技术鉴定Muse细胞的多能干细胞特性;通过神经诱导培养基体外诱导Muse细胞分化为神经前体细胞(Muse-NPCs),采用免疫荧光细胞化学染色和qPCR技术鉴定其神经干细胞标志物表达情况.从hBMSCs中分选出约0.58％的Muse细胞,Muse细胞表达多能干细胞标志物SSEA-3、Nanog和Oct4,其mRNA表达水平均高于hBMSCs(P＜0.01);诱导后的Muse-NPCs表达神经干细胞标志物Nestin、βⅢ-tubulin,其mRNA表达水平均高于hBMSCs及Muse细胞(P＜0.01).从成人骨髓中成功分离出具有多能干细胞特性的Muse细胞,用体外诱导形成Muse-NPCs,可为今后细胞治疗修复神经损伤提供新的种子细胞.
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成人骨髓基质干细胞体外成骨细胞分化诱导
建立成人骨髓基质干细胞分离、扩增,以及诱导和分化为成骨细胞的体外培养方法,为骨组织工程选择理想的种子细胞来源.抽取健康成人骨髓组织,用Percoll分离液分离出骨髓中的单个核细胞,在含体积分数为10%小牛血清的高糖DMEM培养液中,置于37℃、含体积分数为5%的CO2湿化空气孵箱中培养,通过传代培养扩增骨髓基质干细胞,传三代时改用含地塞米松、β-甘油磷酸和维生素C的条件培养基培养,用倒置显微镜、HE染色观察增殖和分化情况,并测定碱性磷酸酶活性和钙结节形成能力.采用本法在体外培养的成骨细胞生长良好,表现出与典型的成骨细胞相似的形态特征和生物学特性.本研究所建立的成人骨髓基质干细胞分离、扩增,以及诱导和分化为成骨细胞的体外培养方法稳定和实用,可作为骨组织工程种子细胞来源的常规方法之一.
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人骨髓间质干细胞体外扩增和向成骨细胞分化的实验研究
骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cell, MSCs)是一类存在于骨髓中的具有多向分化潜能的干细胞,在体外不仅可分化为间质类细胞,而且可以分化为非间质细胞.本研究探讨人骨髓间质干细胞的体外分离纯化、培养扩增和向成骨细胞诱导分化的条件.利用密度为1.073g/ml的Percoll分离骨髓的单个核细胞,以含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基培养与扩增MSCs,细胞纯度可达95%左右.取第二代和第三代的MSCs,以含有不同浓度的抗坏血酸、β-磷酸甘油、地塞米松的诱导培养基向成骨细胞诱导,诱导后的细胞呈现典型的成骨细胞样改变,免疫组化技术显示其I型胶原染色阳性,ALP染色阳性,表明MSCs在体外具有向成骨细胞分化的潜力.
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高白细胞急性白血病的骨髓和外周血细胞学特点分析
本研究针对高白细胞急性白血病(HAL)预后不良的因素,探讨HLA的骨髓及外周血细胞学特征及临床意义.收集本院自2009年以来门诊及住院急性白血病患者共68例(其中28例为HAL,40例为非高白细胞急性白血病(NHAL)的骨髓涂片及外周血涂片.对骨髓涂片分别进行瑞氏染色、POX染色、PAS染色、NSE和NaF染色；对血涂片进行瑞氏染色.应用光学显微镜观察骨髓涂片以判断增生程度、各系细胞增生情况、形态及有无异常细胞等,结合细胞化学染色结果确定诊断,计数并分类200个有核细胞,计算各种细胞比例、各系细胞百分比总数、粒红比值等.同法观察血涂片,计数并分类100个有核细胞,计算各种有核细胞的百分比.结果数据应用SPSS 12.0软件进行统计,分析两组患者骨髓涂片的增生度、各系细胞比例数的差异,寻找外周血涂片与骨髓涂片在形态学特征方面的联系.结果表明,HAL组和NHAL组骨髓有核细胞增生程度均为明显至极度活跃,但HAL组骨髓增生活跃程度强于NHAL组,差异均有统计学意义(P＜0.05).红系及巨核系在两组均有不同程度受抑,HAL组骨髓中红系受抑程度强于NHAL组.HAL组外周血中血红蛋白含量及血小板数量明显低于NHAL组,差异均有统计学意义(P＜0.05).NHAL组中外周血白细胞分类仍可见白血病细胞,但其比例较HAL组小,差异均有统计学意义(P＜0.05).HAL组外周血白细胞数量与骨髓白血病细胞增生程度存在一定程度的正相关性(r=0.422).结论:无论在骨髓还是外周血,HAL组与NHAL组相比,在增生程度、细胞数量及原始细胞比例方面均有显著性差别,而且HAL组外周血中的白血病细胞比例、白细胞数量及血红蛋白和血小板数量均有特征性改变.因此对比分析HAL实验室检测的特征变化有利于掌握其规律,对于指导临床准确诊断急性白血病和及时选择合适的治疗方案有重要价值.
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高剂量化疗联合自体外周血造血干细胞移植时骨髓及外周血采集物中CD34+细胞黏附分子的表达
本研究的目的是应用免疫荧光直接三色标记和流式细胞术(FCM),观测高剂量化疗(HDC)联合自体外周血造血干细胞移植(APBSCT)时不同阶段的骨髓及外周血CD34+细胞,表达CD54、CD49d和CD62L的情况,探讨不同来源的CD34+细胞表达黏附分子的差异及其临床意义.将动员前、干细胞采集后和移植结束而骨髓重建后的骨髓样本及每次外周血单个核细胞样本,以CD34-PE和CD45-PerCP标记的同时,分别加CD54-FITC、CD49d-FITC、CD62L-FITC直接三色荧光标记,应用FACS测定CD34+细胞及各黏附分子表达情况,并比较不同时段骨髓中各类黏附分子表达的差异,以及外周血造血干细胞采集物与动员前骨髓中各类黏附分子表达的差异.结果表明,动员前、采集后及移植重建后骨髓中CD34+细胞对CD54、CD49d和CD62L表达的变化无统计学差异;造血干细胞第1和第2次采集物之间CD34+细胞对CD54、CD49d和CD62L的表达变化也无统计学差异;而造血干细胞采集物中CD34+、CD49+细胞较之动员前骨髓中CD34+CD49d+细胞明显减少(P=0.001).结论:化疗联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的动员方法,可使骨髓中CD34+细胞的CD49d表达下调,并使之动员而进入外周血.移植重建后骨髓中CD34+细胞的CD49d表达趋于正常,其进一步的临床意义有待更多的病例积累予以阐明.
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大鼠骨髓间充质干细胞对同种异体骨髓移植造血重建的影响
为了探讨大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)对同种异体骨髓移植造血重建的影响,建立大鼠同种异体骨髓移植模型,通过外周血像检测、病理分析和流式细胞术检测综合评价MSC对骨髓移植(bonemarrow transplantation,BMT)的积极作用.结果表明:①共移植后30天,MSC可在致死量照射的受者存活,并被发现受者胸腺、脾脏和骨髓;②MSC可促进BMT后造血重建,促进外周血白细胞、淋巴细胞和血小板的明显恢复;促进骨髓细胞数恢复及B淋巴系、巨核系分化增强;有利骨髓组织学的明显恢复发善.结论:大鼠MSC与骨髓共移植可在受体的造血器官长期存在,MSC可明显促进同种异体骨髓移植后造血重建.
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伴血象异常的脾边缘区淋巴瘤的临床特点
本文探讨伴有血细胞计数异常的脾边缘区淋巴瘤(SMZL)的临床特点.回顾性地分析了19例因血细胞计数异常就诊并被确诊为SMZL患者的资料,其中7例根据脾脏病理确诊,12例不能接受脾切除术者应用脾B细胞淋巴瘤研究组的低诊断标准进行诊断.结果表明,5例(26.3％)患者白细胞≥10.0×109/L、6例(31.6％)＜4.0×109/L;14例(73.7％)血红蛋白＜120 g/L;11例(57.9％)血小板＜100.0×109/L; 14例(73.8％)患者具有血细胞减少,其中一系血细胞减少6例(31.6％),两系血细胞减少4例(21.1％),三系血细胞减少4例(21.1％)；19例均有骨髓累及；10例(52.6％)检出带绒毛的淋巴细胞；淋巴瘤细胞在骨髓内呈现包括窦内浸润的多种分布特点；单克隆免疫球蛋白升高者占56.3％ (9/16)；存在自身免疫现象者占80％(12/15)；4例进行单纯脾切除术,血象均无改善；1例接受脾切除术联合化疗获得部分缓解；11例接受含有利妥昔单抗的治疗,总体反应率100.0％,其中9例(81.8％)获得完全缓解.结论:伴有血细胞计数异常的SMZL以血细胞减少、骨髓高累及率和自身免疫现象为多见,含利妥昔单抗的治疗具有较好的疗效.
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骨髓活检组织印片在贫血诊断中的应用
为了探讨骨髓活检组织印片在贫血诊断中的应用价值,分析了65例贫血患者的骨髓活检组织印片、骨髓活检组织切片和骨髓穿刺涂片的诊断结果.结果显示,骨髓活检组织印片及切片的诊断符合率优于骨髓穿刺涂片,尤其在原发性骨髓纤维化、再生障碍性贫血、骨髓转移癌,其符合率明显高于骨髓穿刺涂片检查(P＜0.01).骨髓活检组织印片及切片两者之间的诊断符合率虽无明显差异,但骨髓活检组织印片观察细胞细微结构较切片好,且操作简单、确诊及时.本研究提示,骨髓活检组织印片检查对贫血的诊断有较重要的价值.
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骨髓内皮细胞分泌的抑制CFU-F生长的因子
为探讨骨髓微环境中内皮细胞调节造血的可能机制,本实验研究了骨髓内皮细胞无血清条件培养液(BMEC-CM)及其不同分子量组分对骨髓成纤维祖细胞(CFU-F)生长的作用.在体外培养条件下,收集人和小鼠纯骨髓内皮细胞无血清条件培养液,应用连续超滤技术从其中制备出分子量＞10 kD,3-10 kD和＜3 kD三种组分,进行骨髓CFU-F集落形成实验,检测这些条件培养液及其超滤组分的作用.结果显示,人和小鼠骨髓内皮细胞无血清条件培养液和分子量＜3 kD超滤组分都抑制CFU-F的生长,但是分子量＞10kD和3-10 kD组分却不产生这种效应.两种条件培养液及其＜3 kD组分不仅减少CFU-F集落形成数,同时也使集落变小,而且,＜3 kD组分与CFU-F集落数之间有明显的负相关浓度依赖性关系.这些结果提示,骨髓内皮细胞至少能分泌一种分子量小于3 kD的对骨髓CFU-F生长有抑制作用的细胞因子.
