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离子色谱法测定苍耳子中毒性成分羧基苍术苷和苍术苷含量
目的:建立反相离子对色谱测定苍耳子中2种苍术苷毒性成分的新方法,解决现有分析方法时间长、专属性不强的问题.方法:采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5.0 μm),流动相乙腈-0.15％磷酸二氢钠溶液(含0.12％四丁基氢氧化铵,磷酸调pH至3.5)(39∶61),流速1.0 mL· min-,柱温30℃,紫外检测波长203 nm.结果:在此色谱条件下,羟基苍术苷、苍术苷两种毒性成分20 min内即得到了良好分离,保留时间分别为11.8,17.8 min;实际进样量分别在0.15～3.7 μg(r =0.9999)和0.10～2.5 μg(r=1.000)呈良好线性关系;平均回收率分别为101.4％ (RSD 1.7％),101.6％(RSD 1.2％).结论:该方法快速、准确、专属性强、耐用性好,更适合用于苍耳子药材及制剂的安全性检测.
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HPLC测定苍耳子中羧基苍术苷和苍术苷的含量
目的:用HPLC同时测定苍耳子中羧基苍术苷和苍术苷的含量.方法:采用HPLC,色谱柱为Agilent ZORBAXSB-phenyl色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.01mol·L-1磷酸二氢钠溶液(pH 6)梯度洗脱,流速1.0 mL·min -1,检测波长203 nm,柱温35℃.结果:羧基苍术苷的进样量在0.0972～ 1.944 μg线性关系良好,平均回收率为100.3％,RSD 0.67％(n=6)；苍术苷的进样量在0.1030 ～2.060 μg线性关系良好,平均回收率为102.5％,RSD 1.4％ (n=6).结论:该方法简便、可行,重现性好,为苍耳子的质量控制提供参考.
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苍耳子清炒改砂炒炮制工艺研究
目的 通过比较苍耳子Xanthii Fructus不同炮制品活性成分及毒性成分的质量分数,对苍耳子炮制工艺进行改进.方法 采用《中国药典》2015年版方法测定生品、清炒和砂炒苍耳子中活性成分新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸以及毒性成分羧基苍术苷和苍术苷的质量分数;建立了苍耳子样品的指纹图谱,并对其用中国药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(版本:2004A)、SPSS 19.0软件、SIMCAI 13.0软件进行相似度分析、聚类分析和偏小二乘法-判别分析(PLS-DA).结果 苍耳子清炒改进为控温砂炒后的炮制工艺活性成分的质量分数高且毒性成分的质量分数低;19个样品的相似度均大于0.98;聚类分析表明样品可大致聚成4类;PLS-DA分析表明不同样品间可以区分开.结论 建立的苍耳子质量分析方法重现性好,苍耳子炮制工艺由清炒法改进为砂炒法可行,实验为苍耳子炮制工艺改进提供了科学依据.
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苍术苷的致突变AMES试验研究
目的:应用Ames试验检测系统检测苍术苷的致突变活性.方法:采用组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门杆菌TA97,TA98,Tal00,Tal02标准测试菌株,在有和无代谢活化剂下对受试药品0.8 ～250 μg·皿-1共5个浓度组进行测试.结果:无S9活化系统条件下,各菌株回复突变菌落数未见明显增多.有S9活化系统条件下,4～250 μg·皿-1测试浓度范围内,苍术苷对TA98测试菌株诱发产生的回变菌落数与空白对照组相比均达到两倍以上.结论:苍术苷4 ～ 250 μg·皿-1测试浓度范围内,对TA98有间接致突变活性.
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RP-HPLC法测定苍耳子中苍术苷
目的 建立苍耳子中苍术苷的测定方法.方法 采用HPLC法,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-phenyl (4.6 mm×250 rm,5μm)柱,流动相为乙腈-0.01mol/L NaH2P04溶液(20:80),体积流量1.0 mL/min,检测波长203 nm,柱温35℃.结果 苍术苷的进样量在0.112 9～2.258 μg内线性关系良好；平均回收率为99.5％,RSD为1.1％(n=6).结论 该方法简便、可行,重复性好,可以为苍耳子的质量控制提供参考.
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苍耳子炒制对羧基苍术苷和苍术苷的影响
目的 研究炒制对苍耳子中有毒成分羧基苍术苷与苍术苷的影响.方法 采用HPLC法,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-phenyl (4.6 mm ×250 mm,5 μm)柱,流动相为乙腈-0.01mol/L NaH2PO4溶液(pH=6)梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长203 nm,柱温35℃.结果 苍耳子炒制后羧基苍术苷含有量显著降低,苍术苷含有量先升高后降低.结论 苍耳子炒制后能较大程度地降低毒性,故应炒制后人药.
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Ro-54864对缺血/再灌注心肌功能和线粒体的保护作用
目的 利用Langendorff离体灌注模型探讨Ro-54864对缺血/再灌注心肌功能和线粒体的保护作用.方法 大鼠心脏上架平衡20min后,随机分为5组.假手术组:持续灌注115min;对照组:续灌10min,缺血25min,复灌60min;Ro(Ro-54864)组:缺血前灌注含0.1μmol/L Ro-54864的K-H液10 min;苍术苷(atractyloside,ATR)组:缺血前灌注含20 μmol/L苍术苷的K-H液10 min;ATR+Ro组:缺血前灌注含20 μmol/L苍术苷和0.1 μmol/L Ro-54864的K-H液10 min.分别在平衡20min、缺血前、复灌15 min、60 min记录左室力学指标.在复灌注末,用氯化三苯基四氮唑染色法(TTC)测定心肌梗死面积百分比;分离浆膜下线粒体,电镜下观察线粒体的形态和结构,并进行评分.结果 再灌注15 min后,Ro组的冠脉流量(CF)和血流动力学指标(LVDP,dp/dtmax,dp/dtmin)明显高于对照组和其它处理组,而ATR组的各指标低于对照组(P＜0.05).与对照组(41%±3%)比较,再灌注末期Ro组(28%±3%)心肌梗死面积明显减少(P＜0.05),而ATR组(51%±2%)的梗死面积明显增大(P＜0.05).Ro组(1.51±0.24)心肌线粒体损伤比对照组(2.21±0.27)明显减轻(P＜0.05),而ATR组(3.23±0.36)线粒体损伤较对照组严重(P＜0.05).ATR+Ro组的各项指标与对照组比较无统计学差异.结论 外周苯二氯(卓)受体(peripheral benzodi azepine receptor,PBR)激动剂Ro-54864能够明显减少缺血心肌的梗死面积,保护线粒体,增加冠脉流量,促进缺血心肌功能恢复.线粒体通透性转换孔开放剂苍术苷减弱Ro-54864的心肌保护作用.
关键词： 外周苯二氮(卓)受体 Ro-54864 苍术苷 线粒体通透性转换 -
苍术苷对七氟醚后处理诱导脑保护作用的影响
目的:观察苍术苷对七氟醚后处理诱导脑保护作用的影响. 方法:清洁级雄性SD大鼠50只,随机分为5组:对照组、七氟醚后处理组、七氟醚+苍术苷组、七氟醚+溶剂组和苍术苷组.每组10只大鼠.采用大脑中动脉线栓法阻闭(MCAO)120 min后再灌注72 h,制备局灶性脑缺血模型.再灌注即刻的前20 min和后10 min吸入七氟醚.七氟醚后处理前给予苍术苷侧脑室注射.再灌注后的24、48和72 h行神经行为学评分,并于后一次评分后测定脑梗死容积比. 结果:缺血-再灌注72 h后,与对照组脑梗死容积比(0.55±0.07)相比,七氟醚后处理组(0.32±0.05)明显降低(P=0.000);七氟醚+苍术苷组(0.57±0.06,P=0.418)和苍术苷组(0.56±0.05,P=0.605)均无统计学差异,七氟醚+苍术苷组和苍术苷组分别与七氟醚后处理组相比,差异有显著性统计学意义(P=0.000);七氟醚+溶剂组(0.35±0.06,P=0.218)与七氟醚后处理组相比差异无显著性意义.各时间点神经功能评分,七氟醚后处理组和七氟醚+溶剂组明显优于对照组(P<0.05).七氟醚+苍术苷组和苍术苷组明显低于七氟醚后处理组(P<0.05). 结论:苍术苷消除了七氟醚后处理的脑保护作用.
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HPLC-ELSD法测定苍耳子及其制剂中羧基苍术苷和苍术苷含量
目的:建立苍耳子及其制剂(辛芩片和辛芩颗粒)中毒性成分羧基苍术苷和苍术苷的高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)定量测定方法. 方法:采用Kromasil 100-5C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-10 mmol/L乙酸铵溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~30 min,12%A→20%A;30~31 min,20%A→12%A;31~35 min,12%A),柱温35℃,体积流量1.0 mL/min,蒸发光散射检测器检测(漂移管温度95℃,N2载气流速1.6 L/min). 结果:羧基苍术苷在0.681~4.086μg线性关系良好,线性回归方程为Y=1.4973X+3.9461(r=0.9996),平均回收率96.4%(n=6,RSD=1.2%);苍术苷在0.731~4.383μg线性关系良好,线性回归方程为Y=1.4619X+4.0630(r=0.9991),平均回收率97.7%(n=6,RSD=0.9%). 结论:HPLC-ELSD法定量测定羧基苍术苷和苍术苷方法简便,重复性良好,可用于苍耳子及其制剂的质量控制.
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苍耳子中苍术苷的含量测定
目的:测定苍耳子中苍术苷的含量.方法:通过对不同产地苍耳子药材进行收集,分别对其种仁、种壳、刺、果壳进行分离处理,并测定其苍术苷含量.结果:苍耳子分离出的种仁、种壳、刺、果壳中,苍术苷标准曲线0.505 ～ 505ng/mL,具有较好内线性关系(r=0.9996);精密度实验、重复性实验与稳定性实验结果均满足要求;加样1.5倍、1倍和0.5倍回收率分别为(92.52±1.00)％、(94.03±1.34)％、(97.62±1.96)％.结论:通过对不同产地不同部位苍耳子中苍术苷含量的测定,我们发现炮制品苍耳子种仁中苍术苷含量较高,应加强了对苍耳子种仁的炮制,以减产少毒性.
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苍耳子不同部位中羧基苍术苷和苍术苷的含量测定
目的 比较苍耳子不同部位毒性成分的含量,对苍耳子炒制后去刺工艺的合理性进行探究.方法 采用高效液相色谱法,对苍耳子不同部位中主要毒性成分苍术苷和羧基苍术苷的含量进行比较研究.结果 10批不同产地去刺苍耳子中羧基苍术苷的含量均比苍耳子中羧基苍术苷的含量高,表明苍耳子去刺并不能达到降毒的目的.结论 该方法简便、高效,实验结果准确可靠,为苍耳子中化学成分与毒性作用的相关性以及药材炮制工艺的进一步研究提供了依据.
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砂炒苍耳子降低毒性的佳工艺研究
目的 探讨砂炒苍耳子降低毒性的佳工艺.方法 采用单因素实验和正交实验,考察砂炒苍耳子的温度、时间、药砂比3个因素对苍耳子中毒性成分含量的影响.结果 砂炒苍耳子降低毒性的佳工艺是温度140 ℃,药砂比1∶15(g·g-1),时间12 min.结论 该工艺经济,重复性好,可作为砂炒苍耳子降低毒性的佳工艺.
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不同炮制温度对炒苍耳子中主要活性成分及毒性成分含量的影响
目的:研究不同炒制温度对苍耳子中活性成分绿原酸与1,5-二咖啡酰喹宁酸及有毒成分羧基苍术苷与苍术苷的影响.方法:采用不同温度(140℃、160℃、180℃、200℃、220℃、240℃、260℃、280℃、300℃、320℃、340℃)炒制苍耳子,通过HPLC法测定不同苍耳子样品中绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸及羧基苍术苷、苍术苷的含量.结果:绿原酸、1,5-二咖啡酰喹宁酸及羧基苍术苷随炒制温度的升高,含量逐渐降低;苍术苷在140℃～ 260℃随温度升高而升高,260℃后随温度升高而降低.结论:苍耳子炒制后能降低毒性成分含量,从而降低毒性,故应炒制后入药,但应严格控制温度,否则会导致药效降低.
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苍术苷抑制氧化磷酸化的作用机制研究
目的：探讨苍术苷（ATR）抑制氧化磷酸化电子传递链可能的作用靶点。方法将制备好的线粒体悬液分为对照组、N -乙酰- L -半胱氨酸（NAC）组、鱼藤酮（ROT）组、NAC 和 ROT 联合组，每组再分为4小组，分别用0，20，40，100μmol·L-1的 ATR 处理。测定各组线粒体呼吸链中4种蛋白质复合体和 ATP 酶的活性。结果 ATR 能够抑制复合体Ⅰ、Ⅳ和2种 ATP 酶的活性，且其抑制作用和剂量相关。结论 ATR 可能影响呼吸链电子传递的始端复合体Ⅰ、末端状态复合体Ⅳ和 ATP 酶活性，终抑制 ATP 的形成。
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线粒体通透性转换孔在内吗啡肽-1后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用
目的 探讨线粒体通透性转换孔(MPTP)的开放对内吗啡肽-1后处理减轻心肌缺血再灌注损伤的作用.方法 将45只雄性SD大鼠随机分为5组(n=9/组):假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、内吗啡肽-1后处理组(EM50组)、线粒体通透性转换孔开放剂苍术苷后处理组(Atr组)和内吗啡肽-1+苍术苷后处理组(EM50+Atr组).建立大鼠在体心肌缺血再灌注模型,通过经颈动脉插管至左心室实时监测血流动力学,记录各组大鼠的血流动力学指标,再灌结束后采集大鼠血浆,检测乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α,氧化应激指标超氧化物歧化酶和丙二醛,细胞色素C等生化指标,大鼠心肌组织HE染色,采用Evans blue和TTC双染色法检测心肌梗死面积,Western blot检测心肌组织中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3的表达.结果 与S组比较,IR组心率和血压降低(P<0.05);与IR组比较,EM50组心率和血压有所增高(P<0.05);血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α、丙二醛、细胞色素C含量或活性下降(P<0.05),氧化应激指标超氧化物歧化酶活性增加(P<0.05);心肌梗死面积减少(P<0.05);Bax和cleaved caspase-3蛋白表达量降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达量升高(P<0.05);与EM50组比较,EM50+Atr组心率和血压降低(P<0.05);血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α、丙二醛、细胞色素C含量或活性增加(P<0.05),超氧化物歧化酶活性降低(P<0.05);心肌梗死面积增加(P<0.05);Bax和cleaved caspase-3蛋白表达量升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达量降低(P<0.05).结论 内吗啡肽-1后处理可能通过抑制MPTP的开放,减少线粒体中Cyt-C的释放,下调凋亡相关蛋白cleaved caspase-3的表达,减少心肌细胞凋亡,减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,发挥心肌保护作用.
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苍耳子及苍术苷对大鼠原代肝细胞的毒性作用研究
目的:研究苍耳子水提物及苍术苷对大鼠原代肝细胞的毒性效应,探讨其可能的毒性机制.方法:制备大鼠原代肝细胞,观察苍耳子水提物及苍术苷在不同时间点对肝细胞形态的影响,并测定不同时问点培养液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、白蛋白(ALB)及尿素氮(BUN)的含量.结果:药物作用24h后,各给药组肝细胞均出现不同程度的形态改变及死亡,并随时间的增加细胞死亡数量亦增加,48h时,苍术苷和水提物低浓度组仍可见少量活细胞,而水提物高浓度组肝细胞几乎已全部死亡.ALT和LDH在给药2h或24h出现升高,含量呈时间依赖性增加,ALB和BUN在给药2h出现降低,在所试时间内一直处于较低水平.结论:苍耳子水提物0.18、0.018 g原生药/ml及苍术苷44 μg/ml对大鼠原代肝细胞有明显的毒性.
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苍耳子炮制前后羧基苍术苷和苍术苷的含量比较
目的:考察苍耳子炮制前后羧基苍术苷和苍术苷的含量变化.方法:采用清炒法对3个不同来源的苍耳子药材进行炮制,通过HPLC法测定苍耳子炮制前后的羧基苍术苷和苍术苷的含量.结果:3批苍耳子炮制前后羧基苍术苷的含量降低,而苍术苷的含量升高.结论:该方法简便、快速准确.研究结果为炒苍耳子的质量标准制定及炮制机理的阐明提供科学依据.
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SPE-HPLC法检测苍耳子复方制剂中苍术苷的含量
目的:建立苍耳子复方制剂中毒性成分苍术苷的含量测定方法.方法:应用正、反相硅胶柱层析分离方法自制苍术苷对照品;复方样品经大孔树脂柱和固相萃取小柱前处理,再应用离子对色谱测定苍术苷的含量.采用Agilent Eclipse XDB-C18(250 mmn×4.6 mm,5.0μm)色谱柱,以乙腈-0.15％磷酸二氢钠溶液(含0.12％四丁基氢氧化铵,磷酸调pH至3.5)(39:61)为流动相,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,紫外检测波长203 nm.结果:苍术苷对照品经HPLC归一化法分析纯度大于98.0％;苍术苷进样量在0.10～2.59 μg范围内线性关系良好(r=1.000),平均回收率为95.7％(RSD=1.2％,n=6).测定不同产地、不同剂型样品5批,苍术苷含量分别为226.3、464.6、386.1、66.0、1 044.7 μg·g-1.结论:所建立的方法经方法学验证,可用于苍耳子复方制剂中毒性成分苍术苷的质量控制.
