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异亚丙基莽草酸脂质体的包封率测定方法比较
目的:研究异亚丙基莽草酸脂质体含量和包封率的测定方法,建立一套准确度好、简便可行的质控方案.方法:采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(4.6 mm×100 mm,3.5μm),流动相乙腈-0.05％磷酸溶液(10:90),检测波长220 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,进样量20μL.采用HPLC测定脂质体中异亚丙基莽草酸的含量；比较超滤法、凝胶色谱法和透析法用于包封率的测定.结果:异亚丙基莽草酸脂质体采用4倍量甲醇破乳并高速离心沉淀后,取上清液进行测定,药物专属性良好,线性范围1.004 ～ 150.6 mg· L-1(r =0.999 9),加样回收率(102.01±1.18)％,准确度和精密度良好,异亚丙基莽草酸对照品溶液于6h内稳定；超滤法、葡聚糖凝胶法及透析法测得的包封率分别为(92.96±1.91)％,(91.23±2.23)％,(73.66±7.10)％.结论:所建立的HPLC稳定可靠、准确度良好,可用于异亚丙基莽草酸脂质体的质量控制和体外分析；超滤法测定包封率简便快捷、测定结果与凝胶色谱法相当,可作为本品包封率测定的常规方法；透析法由于测定条件的限制,其测定结果受脂质体溶液稳定性、药物在脂质体中存在状态的影响较大,可能会造成测定结果偏低.
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异亚丙基莽草酸抗炎作用机制研究
目的 观察异亚丙基莽草酸(ISA)对人宫颈癌Hela细胞转录因子STAT1、STAT3、NF-κB表达作用的影响,探讨其抗炎作用机制.方法 用MTT法体外检测ISA不同浓度对Hela细胞生长的抑制作用,采用双荧光素酶报告系统检测不同浓度药物对转录因子STAT1、STAT3、NF-κB表达活性的影响.结果 ISA对人宫颈癌Hela细胞的生长没有明显的抑制作用;ISA处理组NF-κ B-luc荧光素酶活性下降,而GAS-luc、STAT3-luc荧光素酶活性无明显改变.结论 ISA可能通过下调转录因子NF-κ B的活性,抑制炎症因子的表达,对炎症反应起到抑制作用.
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异亚丙基莽草酸血浆蛋白结合率的测定
目的:测定异亚丙基莽草酸的血浆蛋白结合率.方法:采用超滤法结合高效液相色谱法对异亚丙基莽草酸与犬血浆及人血浆的蛋白结合率进行测定.结果:异亚丙基莽草酸与犬血浆在0.3,0.15 g·L-1,0.5 mg·L-1下的血浆蛋白结合率分别为(4.36±0.02)％,(4.12±0.19)％,(2.23±0.59)％.异亚丙基莽草酸在以上3个浓度下与健康人血浆蛋白结合率分别为(11.23±0.01)％,(10.06±0.69)％,(9.72±0.59)％.结论:异亚丙基莽草酸与血浆蛋白的结合较弱.
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异亚丙基莽草酸对H2O2损伤血管内皮细胞的保护作用
目的研究异亚丙基莽草酸(ISA)对血管内皮细胞损伤的保护作用.方法倒置显微镜下观察细胞形态学改变,MTT比色法检测细胞活性,用硝酸还原酶法测定细胞培养液中NO的含量.放射免疫法测定细胞培养液中前列环素代谢物6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)含量,比色法测定培养液及细胞裂解液的乳酸脱氢酶(LDH)活性并计算LDH的释放率.结果 ISA可明显改善H2O2所致的内皮细胞变形、皱缩等损伤表现.1～100 μmol*L-1 ISA可浓度依赖性的减轻H2O2引起的细胞活性降低和LDH释放,并促进H2O2诱导的血管内皮细胞释放NO和前列环素.结论异亚丙基莽草酸对H2O2损伤血管内皮细胞具有保护作用.
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异亚丙基莽草酸抗血栓作用的实验研究
目的研究异亚丙基莽草酸(ISA)对大鼠动静脉环路血栓、大脑中动脉栓塞及血小板聚集的对抗作用及机制.方法用动静脉环路血栓及三氯化铁致大脑中动脉栓塞(MCAT)模型观察药物作用;并研究了ISA体内、外给药对血小板聚集的影响.结果 ISA 25,50,100及200 mg*kg-1 ig均可显著降低大鼠体外血栓重量;ISA 50,100,200 mg*kg-1 ig可明显改善MCAT模型大鼠神经症状;ISA 100及200 mg*kg-1 ig MCAT模型大鼠脑梗塞范围分别下降27.8%和31.6%;另外,ISA体内、外给药对ADP和胶原诱导的血小板聚集有明显的抑制作用.结论 ISA可能通过抗血小板聚集作用抑制血栓的形成.
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异亚丙基莽草酸抗大鼠脑缺血再灌注损伤的炎症机制初探
目的研究异亚丙基莽草酸(ISA)对大脑中动脉缺血再灌注大鼠的影响及初步作用机制.方法栓线法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,缺血3 h,再灌注21 h后以TTC染色法测定脑梗死范围,比色法测定脑组织匀浆中髓过氧化物酶(MPO)活性,ELISA法测定匀浆中IL-1β,IL-8,TNF-α含量.结果 ISA 200,100mg·kg-1可明显减少模型大鼠的脑梗死范围,降低脑组织匀浆MPO活性以及IL-1β,IL-8,TNF-α的水平.结论 ISA对局灶性脑缺血再灌注损伤具有明显的阻抑作用,其作用机制与抗炎症反应有关.
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异亚丙基莽草酸对血管内皮细胞释放前列环素的影响
目的研究异亚丙基莽草酸(ISA)对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)释放前列环素的影响.方法用放射免疫法测定细胞培养液中前列环素代谢物6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)含量;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;硝酸还原酶法测定细胞培养液中NO水平.结果异亚丙基莽草酸可促进正常的和H2O2损伤的HUVEC释放前列环素;ISA对正常的HUVEC增殖活性和NO的释放没有影响.结论异亚丙基莽草酸可促进HUVEC释放前列环素.
关键词： 异亚丙基莽草酸 内皮细胞 6-酮-前列腺素 F1α -
异亚丙基莽草酸对大脑中动脉缺血再灌注大鼠的保护作用
目的研究异亚丙基莽草酸(ISA)对大脑中动脉缺血再灌注大鼠的神经症状评分、脑梗死范围、脑组织含水量及髓过氧化物酶(MPO)活性的影响.方法栓线法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,缺血3 h、再灌注3 h和再灌注21 h进行神经症状评分,再灌注21 h测定脑梗死范围(TTC染色法)、脑组织含水量及MPO的活性.结果 ISA 200、100 mg/kg可明显降低模型大鼠的神经症状评分(P<0.05或0.01)、脑梗死范围、脑组织含水量及MPO活性(P<0.05).结论 ISA对局灶性脑缺血具有一定的保护作用.
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异亚丙基莽草酸对光化学损伤诱导的脑缺血模型大鼠学习记忆能力的影响
目的 研究异亚丙基莽草酸(ISA)对光化学损伤诱导的脑缺血模型大鼠学习记忆能力的影响.方法 采用静脉注射玫瑰红与冷光源照射感觉运动皮层相结合的方法诱导大鼠脑缺血,连续灌胃给予大鼠ISA 30 d后,通过Morris水迷宫对其进行定位航行及空间搜索测试.结果 光化学 损伤诱导的脑缺血模型大鼠出现明显的学习记忆障碍,定位航行实验中其逃避潜伏期明显长于假手术组;在空间搜索实验中,模型组大鼠游泳初始角度显著大于假手术组.ISA连续给药30 d可不同程度地缩短逃避潜伏期,并减小初始角度.结论 以上结果表明,ISA大剂量(100 mg/kg)连续灌胃给药,可提高光化学损伤诱导的脑缺血大鼠对水迷宫学习记忆的获取能力及对平台空间位置记忆的保持能力.
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异亚丙基莽草酸对慢性低灌注大鼠海马CA1区胆碱乙酰转移酶表达水平的影响
目的 探讨慢性低灌注大鼠海马CAl区胆碱乙酰转移酶(CHAT)的蛋白表达以及基因转录水平的改变,并观察异亚丙基莽草酸(ISA)对其影响.方法 实验动物分为假手术组、模型组、喜得镇组、ISA 100 ms/kg组、ISA 50 ms/kg组以及ISA 25 mg/kg组.将大鼠双侧颈总动脉结扎加切断后8周,经心灌注固定,制成大脑石蜡切片后进行免疫组织化学染色,测定海马CAl区ChAT定位以及相对定量表达.抽提大鼠海马CAl区组织总RNA,通过荧光定量实时PCR技术,对ChATmRNA表达水平进行测定.结果 慢性低灌注65 d后,大鼠海马CAl区ChAT免疫反应阳性产物主要分布于锥体细胞的胞浆及轴突.模型组大鼠的ChAT蛋白表达水平以及ChAT mRNA表达水平非常显著低于假手术组(P<0.05).与模型组相比,各给药组的ChAT蛋白表达水平不同程度升高(P<0.05);ISA 100 mg/kg组的ChAT mRNA表达水平增加非常显著(P<0.05),而ISA其余各剂量以及喜得镇对ChAT mRNA表达水平无显著影响(P>0.05).结论 ISA可增加慢性低灌注大鼠海马CAl区ChAT的蛋白以及基因表达水平.
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采用基因芯片技术初步筛选3,4-O-异亚丙基莽草酸治疗血管性痴呆作用靶点
目的:探讨异亚丙基莽草酸(3,4-oxo-isopropylydene-shikimic acid,ISA)对血管性痴呆(Vascular dementia,VD)小鼠基因表达谱的影响及可能的作用靶点.方法:采用单侧颈总动脉结扎方法建立血管性痴呆小鼠模型,运用Morris水迷宫法评价VD模型并检测ISA对VD小鼠认知损伤的作用.通过转录组测序技术分析正常小鼠、模型小鼠与ISA给药小鼠海马中全基因表达谱的变化以及所涉及通路.结果:根据P ＜0.05,| Fold Change|＞2筛选差异基因,假手术组与模型组相比有596个基因差异表达,其中上调基因342个,下调基因254个;ISA给药组与模型组相比有253个基因差异表达,其中上调基因49个,下调基因204个.这些共同差异基因的生物功能主要包括神经突触可塑性、突触传递(谷氨酸功能)过程及化学突触传递过程;信号通路主要包括5-HT信号通路、可卡因成瘾信号通路和谷氨酸信号通路.结论:异亚丙基莽草酸可改善单侧颈总动脉结扎诱导的血管性痴呆小鼠的学习记忆损伤,其机制与调节神经突触可塑性和影响突触传递有关.ISA能通过多条信号通路改善血管性痴呆,为揭示ISA治疗VD的确切靶点提供依据.
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异亚丙基莽草酸对大脑中动脉栓塞大鼠脑组织自由基代谢的影响
目的研究异亚丙基莽草酸(ISA)对大脑中动脉栓塞模型(MCAT)大鼠脑组织自由基代谢的影响.方法采用三氯化铁致大脑中动脉栓塞模型,观察ISA对脑组织总超氧化物歧化酶(T-SOD)、Cu-Zn-SOD、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)活力及丙二醛(MDA)含量的影响.结果 ISA 200,100 mg*kg-1可提高模型大鼠脑组织T-SOD活力;ISA 200,100,50 mg*kg-1均可明显增加模型大鼠脑组织Cu-Zn-SOD和GSH-px活力;ISA 200, 100,50 mg*kg-1对模型大鼠脑组织MDA升高有明显的抑制作用.结论 ISA可能通过减轻脑组织自由基损伤保护脑组织缺血性损伤.
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HPLC分离异亚丙基莽草酸的有关物质
目的:建立异亚丙基莽草酸有关物质分离的HPLC方法.方法:Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6mm ×250nm,5μm),以乙腈-0.05％磷酸水(7:93)为流动相,检测波长220 nm,流速:1.0 mL·min-1,柱温30℃.结果:样品中各成分的分离度及检出灵敏度能满足有关物质限度的测定要求.小检出量为1ng.结论:本法简便、专属、可用于检测莽草酸的有关物质.
