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广金钱草化学诱变植株表型及SRAP遗传差异
目的:选育优良广金钱草品种(系).方法:采用迭氮钠(NaN3),甲基磺酸乙酯(EMS)和秋水仙素佳剂量对广金钱草种子进行诱变处理,初步筛选出13株表型变异的广金钱草植株,对广金钱草变异植株及对照基因组DNA进行相关序列扩增多态性(SRAP)分析.结果:广金钱草在株高、地茎、分枝状况等方面发生大量变异;10对SRAP引物扩增出多态性条带3 285个,平均每对引物扩增出328.5条带,多态性比例平均为96.45％,广金钱草化学诱变植株遗传相似系数范围0.326～0.476,遗传相似系数较低,表明经化学诱变剂处理后广金钱草在基因组水平上存在真实的遗传差异;相似性差异程度大小顺序为V-13＞V-7＞ V-6＞ V-1 1＞V-10＞ V-12＞ V-9＞ V-8＞ V-4＞ V-5＞ V-3＞V-2＞ V-1,表明NaN3在分子水平上对广金钱草的影响比EMS和秋水仙素小;化学诱变处理后广金钱草变异程度高于不同种源地的变异,进一步表明人工诱变育种可以缩短育种年限,提高突变率.结论:该研究揭示了广金钱草化学诱变株表型特异性和遗传多样性,筛选了一些特异资源,为高产优质广金钱草新品种(系)的选育提供重要的科学依据.
关键词： 广金钱草 化学诱变 农艺性状 相关序列扩增多态性分析 -
广金钱草资源调查与药材质量评价
目的:对我国广金钱草资源进行调查,并对不同产地药材质量进行评价,为广金钱草资源的可持续利用、合理开发以及规范化种植提供科学依据.方法:资源调查采用查阅文献、走访调查和现地调查相结合的方法进行,药材质量评价采用高效液相色谱法测定夏佛塔苷含量并进行统计分析.结果:广金钱草野生药用植物资源正逐步减少,部分地区很难找到野生资源.人工栽培广金钱草技术不完善、药材质量参差不齐,影响广金钱草进一步的开发和综合利用.结论:应该加大保护资源的力度,保护广金钱草的生态环境,促进其种群恢复.同时,应该尽快建立GAP基地,完善人工栽培、加工技术,满足市场对广金钱草药材的需求.
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广西金钱草、龙眼肉产销状况及预测
1 广金钱草广金钱草又叫金钱草,为常用中药材,具有清热除湿,利尿通淋的功能,除配方用药外,还大量作为中成药的生产原料,产于广西、广东两省区.广西主要分布于扶绥、崇左、武鸣、南宁等县市,通常年产量为200～220万kg,约占两省区总产量的60%左右,而全国销量为310～320万kg.
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指纹图谱、模式识别结合一测多评法在广金钱草质量评价中的应用研究
采用Phenomenex PS C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-0.2％甲酸水溶液(30∶ 70),体积流量0.8 mL· min-1,柱温30℃,检测波长335 nm,进样量10μL,建立了不同产地广金钱草Desmodium styracifolium的HPLC指纹图谱,确定了10个共有峰,鉴定了其中5个共有峰:维采宁-1、夏佛塔苷、异荭草苷、异夏佛塔苷、异牡荆苷.通过相似度评价、聚类分析、主成分分析和偏小二乘判别分析方法对21批广金钱草药材指纹图谱进行研究,进而建立了一测多评法同时测定广金钱草药材中上述5种黄酮苷成分,为广金钱草的质量控制和品质评价提供参考.
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金钱草和广金钱草的药理作用比较
金钱草LysimachiaeHerba和广金钱草Desmodii Styracifolii Herba都是中医治疗结石病的常用药,两者均具有清热、利尿、排石的功效,但临床应用又各有侧重,治疗肝胆结石、黄疸、淋证、痛风偏重于用前者,对泌尿系结石偏重于用后者.该文基于文献检索,对二者在排石、利胆、利尿、抗炎、抗氧化等多方面的药理作用进行较全面的比较分析,发现二者对肾结石和胆结石都有防治作用,但广金钱草对治疗已形成的肾结石较有优势,而金钱草对已形成的胆固醇结石较有优势;金钱草对治疗肝胆系统的炎症更显优势.
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不同种源地广金钱草药材质量变异与遗传多样性分析
目的:研究不同种源地广金钱草药材质量变异及遗传多样性,为合理利用广金钱草种质资源及优良品种选育奠定基础.方法:采用AFLP分子标记技术,对18个种源地广金钱草进行遗传多样性分析,用NTSYSpc-2.11F软件计算并分析广金钱草种质间的相似度,构建遗传系统进化树；采用HPLC测定药材夏佛塔苷含量,并进行方差分析.结果:通过筛选得到8对AFLP引物组合,共扩增出844个DNA条带,多态性条带为717个,多态性位点平均为84.27％；通过聚类分析,将18个种源地的广金钱草种质分为3大类.种源间广金钱草药材夏佛塔苷含量差异显著,海南三亚种源夏佛塔苷含量显著高于其他种源地药材夏佛塔苷含量.结论:不同种源广金钱草药材质量差异显著,遗传多样性丰富,蕴藏着优质的种质资源,可以进行综合开发及优良品种选育.
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贮藏时间对广金钱草种子质量的影响
以广金钱草种子为材料,研究4℃贮藏条件下不同贮藏时间种子的发芽率、发芽势、千粒重、抗氧化物酶活性及种子浸出液电导率、可溶性糖、可溶性蛋白、淀粉含量的变化,以揭示种子劣变机制.结果表明:①随贮藏时间的延长广金钱草种子发芽率、发芽势、千粒重逐渐降低,种子颜色逐渐加深.②在种子发生劣变的过程中,SOD,POD活性变化趋势类似,均随贮藏时间的延长而降低.SOD活性在贮藏1 095～1 185 d降低幅度大,POD活性在贮藏365～395 d显著降低.③种子浸出液的电导率、可溶性糖含量、淀粉含量随贮藏时间增加而增加,可溶性蛋白含量呈降低趋势.④对各项特征指标进行相关分析发现,广金钱草种子发芽率、发芽势、千粒重与SOD,POD活性呈显著或极显著正相关关系,与种子浸出液电导率、可溶性糖含量、淀粉含量呈极显著负相关关系.研究发现,在广金钱草种子贮藏过程中,种子抗氧化酶活性降低、浸出液电导率上升、可溶性糖和淀粉外渗及可溶性蛋白的降解等均是导致种子发生劣变的主要原因.
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广金钱草分布和品质适宜性区划研究
通过对华南和西南地区(广东、广西、海南和云南)的广金钱草实地调研,结合夏佛塔苷、多糖的含量,运用大信息熵模型和地理信息技术,分别筛选出影响广金钱草分布适宜性和品质适宜性的主导生态因子,再对广金钱草的分布和品质进行适宜性区划.分布区划的结果表明,4月均温、冷季节均温、土壤类型和寒冷指数4个生态因子对广金钱草分布适宜性的影响大.品质区划的结果表明:①多糖含量与4月降水量呈显著性正相关;夏佛塔苷含量与4月均温、冷季节均温呈显著性负相关,与10月、11月降水量,4月、5月日照时长呈极显著负相关,与4月降水量、温度季节性变化标准差呈显著性正相关,与2月、3月降水量呈极显著性正相关.②分别以夏佛塔苷、多糖为品质指标,依据品质区划模型绘制出广金钱草的品质区划图.该研究可为广金钱草生产区划、种植基地选择和定向培育提供科学选址依据.
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HPLC-MS/MS同时测定广金钱草中8种成分在大鼠胆汁中的浓度及其排泄动力学研究
建立同时测定灌胃给予大鼠广金钱草提取物后胆汁中7种黄酮和1种酚酸类化合物浓度的HPLC-MS/MS,并用于胆汁排泄研究.大鼠灌胃给予广金钱草提取物后,分别在0～1,1～2,2～4,4～6,6～8,8～12,12～24 h时间段收集胆汁.色谱柱采用Diamonsil C18 column(4.6 mm×150 mm,5μm),柱温40℃.以甲醇-0.01％乙酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.8 mL·min-1.质谱采用电喷雾离子源(ESI),负离子模式下检测,多反应离子监测(MRM)模式进行定量.结果表明8种成分在测定浓度范围内线性关系良好(r≥0.991 5),日内、日间精密度RSD＜ 15％,准确度RE-15％～15％,稳定性良好.提取回收率＞63.2％,内标归一化的基质因子RSD均未超过15％,符合要求.大鼠胆汁排泄研究结果显示,8种成分在胆汁中的原型排泄率均比较小,并且不同个体之间差别较大.该研究方法灵敏度高,选择性好,样品处理简单,可用于灌胃给予大鼠广金钱草提取物后胆汁中8种成分的排泄动力学研究.
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广金钱草水提取液对肾草酸钙结石模型大鼠氧化应激的影响研究
目的 探讨广金钱草水提取液对肾草酸钙结石模型大鼠氧化应激的影响. 方法 采用乙二醇饮水和氯化铵灌胃法诱导建立大鼠肾草酸钙结石模型,将50只8周龄Wistar健康雄性大鼠按完全随机设计法随机分为5组(n=10):空白组(A组)、模型组(B组)、广金钱草低剂量组(C组)、广金钱草中剂量组(D组)和广金钱草高剂量组(E组),其中A组采用自来水饮水+生理盐水2 ml/d灌胃,B组采用1％乙二醇饮水+2％氯化铵2 ml/d灌胃,C、D、E组在B组基础上分别采用0.6、1.2、2.4 g/ml广金钱草水提取液2 ml/d灌胃28 d.各组大鼠在相同条件下饲养28 d后收集血液及双肾标本,左肾组织做HE染色石蜡切片,光镜观察草酸钙结晶情况;测定血液和右肾匀浆组织中丙二醛、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)含量等了解氧化应激情况. 结果 肾组织草酸钙结晶方面,与A组(0±0)比较,B组(7.1±2.9)结晶评分显著增高(P＜0.01),C组(1.6±1.4)、D组(0.4±0.7)和E组(1.1±1.1)结晶评分较B组显著降低(P＜0.01),其中D组降低显著.氧化应激指标方面,与A组比较,B组大鼠血、肾组织丙二醛浓度显著升高(P＜0.01),使用广金钱草水提取液(C组、D组、E组)干预可减少血、肾组织丙二醛水平(P＜0.01).与A组比较,B组大鼠血、肾组织SOD、GSH-Px、CAT的浓度显著降低(P＜0.01),使用广金钱草水提取液各剂量组(C组、D组、E组)干预可以显著增加肾匀浆SOD水平(P＜0.01),其中D组尚可显著增加血SOD、GSH-Px的水平(P＜0.05),但广金钱草水提取液各剂量组对血CAT及肾匀浆GSH-Px、CAT无显著影响(P＞0.05). 结论 中剂量广金钱草水提取液在肾草酸钙结石模型大鼠中可明显抑制晶体形成,并有一定的抗氧化作用.
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对金甲排石胶囊现行质量标准中鉴别(2)方法的改进
金甲排石胶囊是由三棱(制)、赤芍、没药(炒)、桃仁、莪术、厚朴、白芷、广金钱草等16味药制成的中成药,具有活血化瘀、利尿通淋之功效,临床上用于砂淋、石淋等湿热瘀阻症候者,其质量标准收载于《中成药地方标准上升国家标准内科肾系分册》[1],标准鉴别项下共2项,方法均为TLC法,其中鉴别(1)为鉴别白芷中异欧前胡素,鉴别(2)为鉴别厚朴中厚朴酚、和厚朴酚.在实际检验工作中,笔者发现采用标准项下鉴别(2)的方法进行检验,厚朴酚与和厚朴酚不能分离,在254 nm下检视,仅显一个荧光斑点,重复实验几次,结果均相同.为此,笔者进行了深入的探讨、研究并提出了改进方法,现报告如下.
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探析金钱草与广金钱草的鉴别及合理使用
目的：纠正临床上将金钱草与广金钱草两种饮片混淆的现象。方法以2010版《中国药典》、2008版（新版）《北京市中药饮片炮制规范》和2011版（新版）《北京市中药饮片调剂规程》为依据，参考相关文献资料对金钱草与广金钱草的药材来源、产地、植物形态、采收加工、饮片性状、化学成分、药理作用、功能主治、使用剂量以及处方药味应付等作对比分析。结果两种药材在以上几个方面均存在一定程度的不同。结论由于金钱草与广金钱草存在许多不同之处，建议医生在用药时需仔细斟酌，以利于药材的合理使用。同时，在书写方面要注意按《药典》规定，正确书写，即如果需用报春花科植物过路黄Lysimachiachristinae Hance的干燥全草，应写“金钱草”；如果需用豆科植物广金钱草Desmodium styracifolium（Osb.）Merr.的干燥地上部分，应写“广金钱草”。中药药学人员应熟练掌握这两种药材饮片的特征，调配处方时，按2011版（新版）《北京市中药饮片调剂规程》的处方药味应付规定准确调配。
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广金钱草与金钱草的鉴别
广金钱草与金钱草有混用情况,特别是基层医院.为确保药品质量,保证临床用药安全有效,本文就广金钱草及金钱草的性状特征及薄层色谱的鉴别方法介绍如下.
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对广金钱草不同部位总黄酮的含量分析
目的：用紫外分光光度法对广金钱草中不同部位的总黄酮含量进行测定，以便更好地对广金钱草开发和利用。方法以芦丁为对照品，用三氯化铝为络合剂，HAc-NaAc（pH=5.5）为缓冲液，采用紫外分光光度法测定。结果广金钱草的因环境条件等差异总黄酮量亦不同，野生连钱草的含量无论部位和平均含量都较种植要高，比较测量二者茎、叶、全草的含量分别为种植：10.81、15.85、13.29 mg/g，而野生：15.49、22.89、18.69 mg/g。结论广金钱草总黄酮含量分布表明叶＞全草＞茎。该方法操作性强，有助于对其药材质量控制，更好地对广金钱草的开发和利用。
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广金钱草种子的化学成分和DPPH自由基清除活性研究
目的 对广金钱草Desmodium styracifolium种子的化学成分及其清除DPPH自由基活性进行研究.方法 采用硅胶、聚酰胺、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等色谱方法进行分离纯化,通过NMR、MS等波谱数据进行结构鉴定.比较不同极性提取物总黄酮的量及其对DPPH自由基的清除活性.结果 从广金钱草种子的不同极性萃取部位中分离得到10个化合物,分别鉴定为豆甾醇(1)、邻苯二甲酸二正丁酯(2)、儿茶素(3)、苯甲酸(4)、麦芽酚(5)、3-O-乙酰基-(-)-表儿茶素(6)阿福豆苷(7)、3'-甲氧基-表儿茶素(8)、山柰酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、槲皮素-3-O-p-D-吡喃葡萄糖苷(10).结论 其中化合物4～6、8为首次从山蚂蝗属植物中分离得到,化合物2、3、7、9为首次从广金钱草中分离得到.广金钱草种子的各段萃取物均表现出一定的DPPH自由基清除活性.
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基于HPLC-Q-TOF-MS和HPLC-DAD的广金钱草主要活性成分分析
目的 通过高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱法(HPLC-Q-TOF-MS)鉴定广金钱草中主要活性成分,通过高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)法同时测定广金钱草中7种黄酮类成分(夏佛塔苷、异夏佛塔苷、维采宁-2、异荭草苷、异牡荆苷、木犀草素、芹菜素)的量.方法 采用Phenomenex Kinetex C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇(A)-0.2％甲酸水(B)为流动相梯度洗脱进行色谱分离,体积流量为1.0 mL/min,柱温40℃;Q-TOF-MS在电喷雾负离子模式下采集数据,分流比为1∶1;采用HPLC-DAD法定量,检测波长为272 nm.结果 采用HPLC-Q-TOF-MS法鉴定了广金钱草中的41种主要活性成分,其中包括37个黄酮类成分,4个酚酸类成分.成功建立了同时测定广金钱草中7种黄酮类成分的HPLC-DAD法,各成分的线性关系良好(r＞0.999 0),精密度、重复性和稳定性良好,回收率在96.7％～102.4％(n=6),RSD均小于4.94％.结论 通过HPLC-Q-TOF-MS联用技术,为阐明广金钱草药效物质基础提供参考;建立的HPLC-DAD法同时测定广金钱草中7种黄酮类成分的定量分析方法简便、快捷、准确,为综合评价广金钱草的质量提供参考.
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广金钱草挥发油基于TRP通道的抗炎作用研究
目的 筛选广金钱草挥发油抗炎作用的关键化学成分及靶标蛋白.方法 采用水蒸气蒸馏法提取广金钱草中的挥发油,通过气相色谱-质谱联用法鉴定其化学成分,采用峰面积归一化法测定其化学成分的相对含量.基于中药系统药理学技术平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology,TCMSP)建立小分子配体库,借助Swiss Target Prediction在线进行反向靶标预测,通过KOBAX 3.0筛选抗炎通路,采用分子对接技术(SYBYL2.1)将关键小分子与瞬时受体电位(TRP)通路中的靶标蛋白进行能量匹配,基于Cytoscape 3.5.1构建化学成分-靶标网络模型.结果 从广金钱草挥发油中共检测出48个色谱峰,通过质谱库及文献检索确定33种化合物结构,占挥发油总量的90.1％.关键化学成分17个,共筛选出88个靶标蛋白,TRP通路包括11个潜在靶标.分子对接发现叶绿醇、三十一烷、法尼基丙酮和角鲨烯等为广金钱草挥发油发挥抗炎作用的关键化学成分.TPRV1、PRKCB和PRKCD为抗炎关键靶标蛋白.结论 初步筛选了广金钱草挥发油抗炎的关键靶点及活性成分,为其产品的开发和应用提供理论依据.
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过路黄和广金钱草的HPLC指纹图谱比较研究
目的 比较过路黄Lysimachia christinae和广金钱草Desmodium styracifolium的化学成分异同,为阐明二者药效异同提供参考.方法 采用RP-HPLC建立过路黄和广金钱草的HPLC-UV指纹图谱和HPLC-ELSD指纹图谱,比较二者2种指纹图谱的差异.结果 过路黄的HPLC-UV指纹图谱和其HPLC-ELSD指纹图谱的差异很大,UV检测到的强峰并非ELSD检测到的强峰,广金钱草亦然;过路黄的HPLC-UV指纹图谱有14个共有峰,HPLC-ELSD指纹图谱有5个共有峰;而广金钱草的HPLC-UV指纹图谱有28个共有峰,HPLC-ELSD指纹图谱有18个共有峰;13批过路黄的指纹图谱相似度较13批广金钱草的相似度差;过路黄和广金钱草的HPLC-UV指纹图谱有4个共有峰,二者的HPLC-ELSD指纹图谱有2个共有峰.结论 HPLC-ELSD指纹图谱能更好地反映过路黄和广金钱草中量较高的非挥发性成分组成的全貌;市售过路黄的质量差异大,而市售广金钱草的质量稳定;过路黄和广金钱草可能含有2种量较高的相同成分,作为二者治疗相同病症的物质基础,但该2种药材应该各具偏性,各有独特的治疗功用,应明确区分.
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大孔吸附树脂富集纯化广金钱草总黄酮的工艺研究
目的 对大孔树脂富集纯化广金钱草总黄酮的工艺条件进行初步探索.方法 采用紫外-可见分光光度法,以总黄酮吸附率、解吸率为评价指标,通过考察树脂类型、原料液质量浓度、pH值、上样体积流量、解吸溶剂、水除杂用量、佳上样量、醇洗脱体积流量、洗脱体积及绘制树脂静态吸附平衡曲线、泄露曲线和动态解吸曲线,综合评判确定优工艺.结果 DM-130树脂富集纯化效果较好,其对广金钱草总黄酮的适宜吸附和解吸条件为:吸附原料液质量浓度为8.0 mg/mL,pH值为4.0～6.0,上样体积流量为3 BV/h；解吸先用4 BV的水除杂,再用50％乙醇洗脱,洗脱剂用量为5 BV,体积流量为2.0BV/h.结论 DM-130树脂可用于广金钱草总黄酮的富集纯化,该方法具有操作简单、成本低廉、精制效果突出等特点,具有较高的工业生产应用价值.
关键词： 广金钱草 总黄酮 大孔树脂 富集纯化 紫外-可见分光光度法 -
广金钱草栽培品与野生品的质量比较
比较广金线草栽培品与野生品的质量.用薄层色谱法和紫外分光光度法对其主要质量指标进行定性与定量的研究,结果两者无明显差异.
