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夏佛塔苷对高脂饮食诱导小鼠非酒精性脂肪肝的保护作用
目的:探讨夏佛塔苷对高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝的(NAFLD)保护作用.方法:72只雄性C 57B L/6小鼠分成6组:正常对照组,模型组,熊去氧胆酸组(60mg/kg),夏佛塔苷低、中、高剂量组(20、40、80mg/kg),灌胃给药8周,除正常对照组外均采用高脂饲料饲养建立NAFLD模型.检测血清和肝组织相关生化指标;观察肝脏组织形态;运用qRT-PCR检测肝组织中Nrf2、HO-1 mRNA的表达.结果:与模型组比较,夏佛塔苷高剂量能够显著降低肝组织MDA含量而升高SOD的含量(P＜0.01),提高肝组织中Nrf2、HO-1 mRNA的表达(P＜0.01,P＜0.05),显著减轻肝脏脂肪变性和炎细胞浸润.结论:夏佛塔苷对高脂饮食诱导的NAFLD有保护作用,可能通过Nrf2/HO-1途径降低组织活性氧的水平,进而减轻脂肪性导致肝损伤.
关键词： 夏佛塔苷 非酒精性脂肪性肝病 核转录因子E2相关因子 血红素加氧酶 氧化应激 -
HPLC法测定石淋通片中夏佛塔苷的含量
目的：建立测定石淋通片中夏佛塔苷含量的HPLC法。方法：采用Diamonsil C18（4.6 mm ×250 mm，5μm）色谱柱，流动相为乙腈-1％乙酸溶液（13∶87），流量1.0 mL· min－1，检测波长272 nm，柱温30℃。结果：夏佛塔苷进样量在0.4614～1.230μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（ r＝0.9997）；平均加样回收率为98.49％，其RSD为0.45％。结论：该方法简便、准确，重复性好，可用于石淋通片质量控制。
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夏佛塔苷的电喷雾电离裂解规律解析
目的 研究夏佛塔苷的质谱多级裂解过程,探讨质谱技术在黄酮碳酐中的应用规律.方法 应用电喷雾电离(ESI)结合串联质谱(MSn)技术,对黄酮碳酐化合物夏佛塔苷在ESI-MS/MS质谱中的裂解规律进行研究.结果 夏佛塔苷在负离子模式下,其准分子离子m/z563多级质谱图中主要出现[M-H-120]、[M-H-90]、[M-H-120-90]、[M-H-120-60]-和[M-H-120-90-CO]-等离子碎片-.结论 夏佛塔苷在ESI-MS/MS质谱中的裂解行为符合黄酮碳酐的裂解规律,有利于利用质谱技术对各种黄酮碳苷类化合物所含糖基种类进行分析和研究.
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基于HPLC-Q-TOF-MS和HPLC-DAD的广金钱草主要活性成分分析
目的 通过高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱法(HPLC-Q-TOF-MS)鉴定广金钱草中主要活性成分,通过高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)法同时测定广金钱草中7种黄酮类成分(夏佛塔苷、异夏佛塔苷、维采宁-2、异荭草苷、异牡荆苷、木犀草素、芹菜素)的量.方法 采用Phenomenex Kinetex C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇(A)-0.2％甲酸水(B)为流动相梯度洗脱进行色谱分离,体积流量为1.0 mL/min,柱温40℃;Q-TOF-MS在电喷雾负离子模式下采集数据,分流比为1∶1;采用HPLC-DAD法定量,检测波长为272 nm.结果 采用HPLC-Q-TOF-MS法鉴定了广金钱草中的41种主要活性成分,其中包括37个黄酮类成分,4个酚酸类成分.成功建立了同时测定广金钱草中7种黄酮类成分的HPLC-DAD法,各成分的线性关系良好(r＞0.999 0),精密度、重复性和稳定性良好,回收率在96.7％～102.4％(n=6),RSD均小于4.94％.结论 通过HPLC-Q-TOF-MS联用技术,为阐明广金钱草药效物质基础提供参考;建立的HPLC-DAD法同时测定广金钱草中7种黄酮类成分的定量分析方法简便、快捷、准确,为综合评价广金钱草的质量提供参考.
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狭基线纹香茶菜水溶性成分及其抗肿瘤活性研究
目的 研究狭基线纹香茶菜Isodon lophanthoides var.gerardianus的水溶性成分及其抗肿瘤活性.方法 采用大孔吸附树脂D-101、ODS、Sephdex LH-20等色谱技术和重结晶进行分离纯化,通过ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR等现代波谱技术进行结构鉴定;以HepG2为供试细胞株,采用MTT法对化合物进行体外抗肿瘤活性研究.结果 从狭基线纹香茶菜水提液中分离得到12个水溶性化合物,分别鉴定为新西兰牡荆苷Ⅱ (1)、新西兰牡荆苷Ⅲ (2)、异夏佛塔苷(3)、夏佛塔苷(4)、牡荆苷(5)、芹菜素-6,8-二-Gα-L-吡喃阿拉伯糖苷(6)、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷(7)、芹菜素-6-C-β-L-吡喃阿拉伯糖-8-C-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(8)、芹菜素-6-C-β-D-木糖-8-C-α-L-阿拉伯糖苷(9)、咖啡酸(10)、迷迭香酸(11)、芦丁(12).结论 化合物1～9为首次从香茶菜属植物中分离得到;其中化合物1、6、11对HepG2细胞有较好的抑制作用.
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星点设计-效应面法优选广金钱草提取工艺
目的 优选广金钱草中夏佛塔苷和异牡荆苷的提取工艺.方法 以乙醇体积分数、提取时间和加液量为自变量,以夏佛塔苷和异牡荆苷含有量的总评“归一值”为因变量,采用星点设计-效应面法优选广金钱草提取工艺.结果 佳提取工艺为12倍量65％乙醇提取2次,每次1.2h.结论 建立的数学模型预测精确度高.
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RP-HPLC法同时测定广金钱草中夏佛塔苷和异夏佛塔苷
目的 用RP-HPLC分离广金钱草中的夏佛塔苷和异夏佛塔苷,并对其进行定量测定.方法 色谱柱为依利特C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-0.025 mol/L磷酸溶液(三乙胺调pH至3.02)(15∶85);柱温30℃;体积流量0.9 mL/min;检测波长270 nm.结果 广金钱草中夏佛塔苷的线性方程为Y=2×106X-153 980,进样量在0.158 ～0.898 μg范围内线性关系良好(r=0.999 7),回收率为100.0％,RSD为0.7％;异夏佛塔苷的线性方程为Y=3×106X-86 359,进样量在0.076 ～0.436 μg范围内线性关系良好(r=0.999 6),回收率为99.9％,RSD为0.6％.结论 增加异夏佛塔苷的色谱检测有利广金钱草及其制剂的质量控制.
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高效液相色谱法测定石淋通颗粒中夏佛塔苷的含量
目的：建立了高效液相色谱法测定石淋通颗粒中夏佛塔苷含量的测定方法。方法采用DiamonsilTM C18色谱柱（5μm，4.6×250μg），甲醇-0.10％磷酸溶液（32∶68）为流动相，流速：1.0mL· min 1，检测波长272nm，柱温：35℃。结果夏佛塔苷进样量在0.006μg～1.044μg范围内与峰面积呈良好线性（r＝0.9999），平均回收率为99.53％，RSD＝1.05％（n＝6）。结论该方法操作简便、准确、重复性好，可用于石淋通颗粒的质量控制。
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HPLC波长切换法测定复方石淋通片中绿原酸和夏佛塔苷的含量
目的 建立同时测定复方石淋通片中绿原酸和夏佛塔苷的方法.方法 采用高效液相色谱方法,色谱柱为Agilent Zorbax C18,流动相为乙腈和0.1％磷酸溶液梯度洗脱;流速1.0mL·min-1;检测波长0～25min为327nm,25～50min为272nm;柱温30℃.结果 绿原酸进样量在0.016～1.009μg(r=0.9999)范围内线性关系良好,平均加样回收率为99.1％,RSD=1.4％(n=6).夏佛塔苷进样量在0.016～1.048μg(r=0.9999)范围内线性关系良好,平均加样回收率为101.3％,RSD=1.2％(n=6).结论 所采用的方法准确、可靠,专属性及重复性良好,适用于复方石淋通片的质量控制.
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反相高效液相色谱法测定不同产地忧遁草中夏佛塔苷的含量
目的 建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定忧遁草中夏佛塔苷含量,比较两个产地的忧遁草中夏佛塔苷的含量.方法 采用Diamonsil C18(2)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A相为0.1％乙酸水溶液,B相为甲醇,等度洗脱:0～60 min 24％B,流量1 ml/min,柱温30℃,检测波长272 nm.结果 夏佛塔苷在5.88～15.68μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(R2=1);平均加样回收率为95.49％,RSD为1.61％.结论 该方法简单,准确,重复性好,国产忧遁草中夏佛塔苷的含量明显地高于印度尼西亚忧遁草.
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气候及地理环境对不同采收期广金钱草质量的影响
目的探讨气候、地理环境及采收期对广金钱草药材中夏佛塔苷的含量的影响,为广金钱草的规范化种植提供参考。方法采用高效液相色谱法测定广金钱草药材中夏佛塔苷的含量,色谱柱为ODS-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)。流动相为甲醇-水(3268),流速为0.5 mL·min-1,柱温35℃,检测波长272 nm。结果气候类型、降水量、年平均温度、年平均日照时间、地理环境等对广金钱草中夏佛塔苷含量有明显的影响。结论亚热带季风气候,温度在25~32℃,日照时间约10 h,平均降雨量约1942 mm适宜广金钱草生长,广西栽培种中总含量高,海南样品中含量低。7月份采收的样品含量较其他月份高。
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HPLC法测定金沙牛化石片中夏佛塔苷含量
目的：建立高效液相色谱法测定金沙牛化石片中夏佛塔苷的含量。方法：采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（150 mm ×4．6 mm，5μm），以0．2％磷酸-乙腈为流动相进行梯度洗脱，流速为1．0 ml· min－1，检测波长为272nm，柱温为25℃。结果：夏佛塔苷在4．58～183．15μg· ml－1浓度范围内与峰面积呈良好线性关系（r＝1．0000），平均加样回收率为99．65％（n＝6），RSD为1．09％。结论：该方法简单、准确，具有良好的重复性和稳定性，可用于金沙牛化石片中夏佛塔苷的含量测定。
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纤花线纹香茶菜中3种水溶性黄酮类成分含量动态变化研究
目的：：建立同时测定纤花线纹香茶菜中新西兰牡荆苷2、异夏佛塔苷、夏佛塔苷含量的方法,并分析其含量动态变化。方法：采用Phenomenex luna C18(250 mm ×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.5%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速为0.8 ml·min-1,检测波长为330 nm,柱温为室温(25℃),进样量：10μl。结果：新西兰牡荆苷2、异夏佛塔苷、夏佛塔苷线性范围分别为0.130~3.110μg(r=0.9998)、0.180~4.540μg(r=0.9999)、0.08~1.97μg(r=0.9999)；平均回收率分别为96.8%、99.2%、97.1%,RSD分别为1.9%、1.6%、1.6%(n=6)。上述3种水溶性黄酮成分从幼苗期开始显著累积,异夏佛塔苷和夏佛塔苷在3月和8月达到高值；新西兰牡荆苷2的含量在1~4月趋于稳定,5月后开始逐渐累积,8月达高值,之后开始呈逐渐下降的趋势。结论：以水溶性黄酮成分含量为指标,纤花线纹香茶菜的佳采收期为3月和8月,且以8月份采收的药材质量佳。
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HPLC法同时测定神农茶颗粒中的夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去氧地胆草内酯和4,5-二咖啡酰奎宁酸
目的：：建立同时测定神农茶颗粒中夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去氧地胆草内酯、4,5-二咖啡酰奎宁酸4个成分的高效液相色谱测定方法。方法：采用Hypersil C18色谱柱(200 mm ×4.6 mm,5μm)；以乙腈-0.025 mol·L-1磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量：1.3 ml·min-1,检测波长：270 nm(夏佛塔苷和异夏佛塔苷)、208 nm(去氧地胆草内酯)、327 nm(4,5-二咖啡酰奎宁酸),柱温为室温。结果：夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去氧地胆草内酯和4,5-二咖啡酰奎宁酸分别在5.850~117.000,4.650~93.000,4.160~83.200,5.470~109.400μg · ml-1范围内线性良好, r 值均大于0.999,平均加样回收率分别为97.70%、96.87%、97.53%、99.29%,RSD分别为1.40%、1.13%、1.69%、1.01%(n=6)。结论：该方法简便,结果准确,可用于神农茶颗粒的含量测定。
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HPLC法测定尿石通丸中夏佛塔苷和橙皮苷的含量
目的:建立HPLC法分离和测定尿石通丸中夏佛塔苷和橙皮苷的含量.方法:以Agilent Zobrax SB C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,流动相为乙腈-甲醇-0.4％甲酸溶液,梯度洗脱,检测波长为272 nm,流速为1.0 ml·mim-1,进样量:10μl.结果:夏佛塔苷在0.000 6～0.277 2 mg·ml-1范围内线性关系良好(r=1.000 0);橙皮苷在0.002 1 ～0.8568 mg·m1-1范围内线性关系良好(r=1.000 0).夏佛塔苷平均回收率为101.83％,RSD=0.27％,橙皮苷平均回收率为98.35％,RSD=0.41％(n=6).结论:本方法可用于测定尿石通丸中夏佛塔苷和橙皮苷的含量.
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高效液相色谱法测定复方金石片中夏佛塔苷的含量
目的:建立测定复方金石片中夏佛塔苷含量的方法.方法:采用高效液相色谱法,使用Inertsil ODS-2 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05％磷酸二氢钾溶液,采用梯度程序洗脱,柱温为35℃,流动相速度为1.0 mL·min-1,检测波长为272 nm.结果:复方金石片中夏佛塔苷在0.006～0.110 mg·mL-1浓度范围内有良好线性关系(r=0.9999),9批复方金石片的平均加样回收率为99.0％,RSD％为1.50％.经10批复方金石片检测其中夏佛塔苷平均含量为0.88 mg·g-1.结论:本方法可用于控制复方金石片的质量控制.
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不同来源和部位的广金钱草中化学成分研究
目的:研究不同市场、不同产地、不同部位的广金钱草中3种化学成分含量,为广金钱草临床应用提供科学依据.方法:采用HPLC法,对不同药材市场、不同产地广金钱草地上部分、茎及叶中夏佛塔苷、异夏佛塔苷和异牡荆苷的含量进行测定.色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.2％甲酸溶液(32∶ 68),流速为1.0 mL/min,检测波长为272 nm.结果:叶中夏佛塔苷、异夏佛塔苷和异牡荆苷的含量均高于地上部分和茎;毫州、安国、玉林、樟树、禹州5个市场地上部分及五通、中庸、宛田3个产地样品叶中夏佛塔苷含量多数均≥0.13％;异夏佛塔苷存在于地上部分、茎、叶中,异牡荆苷仅存在于叶中;玉林市场药效成分含量要优于其他市场,五通产地的药材质量要优于中庸、宛田产地.结论:广金钱草药材质量评价时,建议增加异夏佛塔苷这一指标;贮存药材时,建议减少贮存时间、保持药材完整性;叶是广金钱草3种化学成分的主要富集部位.
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夏佛塔苷对高脂饮食诱导C57BL/6小鼠胆固醇结石形成的抑制作用
目的考察夏佛塔苷对高脂饮食诱导C57BL/6小鼠胆囊胆固醇结石形成的影响。方法将72只雄性C57BL/6小鼠随机分成正常对照组，模型组，熊去氧胆酸组，夏佛塔苷低、中、高剂量组（20，40，80 mg·kg-1），每组12只，灌胃给药8周。除正常对照组外，其余各组均采用高脂饲料喂养8周建立胆囊胆固醇结石模型。每隔7 d记录小鼠体质量和平均进食量；肉眼观察和显微镜观察结石形成情况；检测血清中总胆固醇（TC），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C），低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），总胆汁酸（TBA），甘油三酯（TG）的水平；检测胆汁中TC， TBA，磷脂（PL）水平并分析胆固醇饱和指数（CSI）的变化；观察肝脏病理组织形态学变化。结果与模型组比较，夏佛塔苷高剂量组能较显著降低成石率（33.3%），升高血清中的HDL-C水平（P＜0.05），降低TG水平（P＜0.05）。显著降低胆囊胆汁中TC、 PL的含量，升高 TBA 的含量，进而降低 CSI（均P＜0.01）。明显的减轻肝脏脂肪变性。结论夏佛塔苷能够抑制高胆固醇饲料诱导C57BL/6小鼠胆囊胆固醇结石形成，其可能与降低胆囊胆汁CSI水平和升高血液中HDL-C水平，改善肝脏脂质代谢异常导致损伤相关。
关键词： 夏佛塔苷 胆固醇结石 抑制作用 胆固醇饱和指数(CSI) -
广金钱草总黄酮提取物的质量检测方法
目的 建立广金钱草总黄酮提取物的质量检测方法.方法 采用高效液相色谱法测定广金钱草总黄酮提取物中夏佛塔苷的含量,色谱柱为ZORBAX Extend C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.025 mol/L磷酸溶液,柱温为30℃,流速为1 ml/min,检测波长为272 nm.采用紫外分光光度法测定广金钱草总黄酮提取物中总黄酮的含量,以50％甲醇溶液为空白,检测波长为272 nm.结果 高效液相色谱法中夏佛塔苷的线性方程为Y=672.53361X+11.36000,进样量在0.34～2.04μg范围内线性关系良好(r=0.99999),回收率为101.5％,相对标准偏差(RSD)为1.93％.紫外分光光度法中夏佛塔苷的线性方程为Y=0.0299X-0.00927,浓度在10.02～35.07μg/ml范围内线性关系良好(r=0.9999),回收率为101.4％,RSD为0.86％.结论 所建立的广金钱草总黄酮提取物的质量检测方法简便、准确、可靠,可用于广金钱草总黄酮提取物的质量控制.
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RP-HPLC法同时测定消炎利胆片中咖啡酸、异夏佛塔苷、夏佛塔苷的含量
目的：建立同时测定消炎利胆片中咖啡酸、异夏佛塔苷、夏佛塔苷含量的方法。方法：采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Phenomenex C18，流动相为甲醇-0.1％磷酸水溶液（梯度洗脱），流速为0.8 ml/min，检测波长为334 nm，柱温为25℃，进样量为10μl。结果：咖啡酸、异夏佛塔苷、夏佛塔苷的检测进样量线性范围分别为0.10～2.81、0.20～5.63、0.10～2.63μg（r＝0.9999、0.9999、0.9999）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜3％；加样回收率分别为96.3％～100.4％（RSD＝1.59％，n＝9）、97.3％～101.2％（RSD＝1.28％，n＝9）、96.6％～100.6％（RSD＝1.39％，n＝9）。结论：该方法简单灵敏、准确可靠、重复性好，可用于同时测定消炎利胆片中咖啡酸、异夏佛塔苷、夏佛塔苷的含量。
