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基于抗体芯片技术的黄芪多糖及板蓝根多糖免疫调节机制研究
目的:研究黄芪多糖和板蓝根多糖对内毒素(LPS)诱导的人单核/巨噬细胞(THP-1)中多种炎症因子表达的影响.方法:采用体外培养的THP-1,100ng/mL LPS作为刺激因子,使用人炎症因子抗体芯片检测黄芪多糖和板蓝根多糖处理后人THP-1中多种炎症因子表达的变化情况.结果:黄芪多糖可显著抑制LPS诱导THP-1分泌白介素-1β(IL-1 β)和白介素-6(IL-6)的活性(P＜0.01),同时促进金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)蛋白表达(P＜0.01);板蓝根多糖可显著抑制LPS诱导THP-1分泌IL-1 β的活性(P＜0.01),对LPS诱导THP-1分泌IL-6的活性也有一定的抑制作用(P＜0.05),同时,对TIMP-2蛋白表达也有一定的促进作用(P＜0.05).结论:黄芪多糖和板蓝根多糖对内毒素诱导的人THP-1多种炎症因子表达有调节作用,从而达到免疫调节作用.
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板蓝根多糖对大鼠自体肝移植后一氧化氮和内皮素-1的影响
目的：探讨板蓝根多糖（RIPS）预处理对大鼠自体肝移植后一氧化氮（NO）和内皮素-1（ET-1）的影响。方法实验大鼠随机分正常对照组（NC）、自体肝移植组（AT）和RIPS组，分别于自体肝移植术后1、6、12、24 h检测血清NO、内皮素1（ET-1）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）及天门冬氨酸氨基转移酶（AST），并进行肝组织形态学观察。结果在术后1、6、12、24 h RIPS组血清ET-1水平显著低于AT组，血清NO水平显著高于AT组，差异有统计学意义（P＜0．05）；RIPS组各时相点血清ALT和AST水平显著低于AT组，差异有统计学意义（P＜0．05）。光镜下肝细胞形态学观察显示，与AT组相比，RIPS组的肝淤血水肿和肝细胞变性坏死明显减轻。结论 RIPS对移植肝具有保护作用可能与提高NO水平、降低ET-1水平相关。
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板蓝根多糖的系统分离纯化与组成分析
目的 建立板蓝根多糖的系统分离纯化方法,并对分离得到的均一多糖进行组成测定.方法 以抗病毒活性较好的80％醇沉板蓝根粗多糖为研究对象,对其进行DEAE-Sepharose Fast Flow柱色谱、Sephacryl-200葡聚糖凝胶柱色谱以及高效凝胶色谱系统分离纯化.分别采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)和邻苯二甲醛(OPA)衍生化HPLC法对分离得到的板蓝根均一多糖进行单糖组成和氨基酸组成测定.结果 利用系统分离纯化策略,从80％醇沉板蓝根粗多糖中分离得到2种均一板蓝根多糖(IRPS1A和IRPS1B)和2种均一板蓝根糖蛋白(IRPS2A和IRPS3A).其中,IRPS1A与IRPS1B的单糖组成均为甘露糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖;IRPS2A的单糖组成为半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖;IRPS3A的单糖组成为甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖.糖蛋白IRPS2A与IRPS3A均含有天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、苏氨酸、精氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸,共14种氨基酸残基.同时,IRPS2A还含有酪氨酸残基.结论 该系统分离纯化的策略可应用于板蓝根均一多糖(糖蛋白)的获取,为板蓝根多糖的结构分析及药理活性研究奠定基础.
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板蓝根多糖对猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫猪T细胞亚群的影响
目的:研究板蓝根多糖对猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫猪T细胞亚群及抗体的影响.方法:以板蓝根多糖作为免疫增强剂联合猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫仔猪,通过流式细胞仪检测猪外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞百分数,并用ELISA法检测猪血清中抗猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒抗体水平.结果:板蓝根多糖能显著提高仔猪的CD3+、CD8+淋巴细胞的百分数和特异性抗体滴度.结论:板蓝根多糖能显著增强猪对常规灭活病毒疫苗的免疫应答能力.
关键词： 板蓝根多糖 免疫增强剂 仔猪 猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗 T细胞亚群 -
板蓝根多糖对内毒素诱导人单核/巨噬细胞炎症因子表达的影响
目的 研究板蓝根多糖(IIP)对内毒素诱导的人单核/巨噬细胞中多种炎症因子表达的影响.方法 采用体外培养的人单核/巨噬细胞分为空白对照组(Control组)、内毒素(LPS)组、板蓝根多糖+LPS组(IIP+LPS组),以100ng/ml内毒素作为刺激因子,分别加以相应的干预.应用人炎症因子抗体芯片检测各组人单核/巨噬细胞中IL-1β、IL-6、IL-8和金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)等炎症因子表达的变化情况.结果 与Control组比较,LPS组中IL-1β、IL-6、IL-8的表达增强,而IIP+LPS组中IL-1β、IL-8、TIMP-2的表达增强.与LPS组比较,IIP+LPS组的IL-1β、IL-6的表达降低,TIMP-2蛋白升高,差异有统计学意义(P<0.01).结论 板蓝根多糖对内毒素诱导的人单核/巨噬细胞多种炎症因子表达有调节作用.
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板蓝根多糖对NF-кB活性的作用
观察板蓝根多糖对核因子-кB(nuclearfactor Kappa B,NF-кB)核结合活性的影响.以内毒素(LPS)刺激J744.a.1小鼠的巨噬细胞株,可诱生出较高的NF-кB与DNA结合活性,分别采用LPS预刺激、LPS后刺激和LPS与板蓝根多糖同时刺激等3种方法对其处理,分离核蛋白,进行NF-кB与DNA结合活性测定,结果用光密度扫描定量分析.板蓝根多糖在3种情况下均可降低LPS刺激所致的NF-кB与DNA的结合活性升高.
关键词： 板蓝根多糖 核因子(NF-кB) -
板蓝根多糖减轻自体肝移植大鼠缺血再灌注损伤的研究
目的:探讨板蓝根多糖对自体肝移植大鼠缺血再灌注损伤的作用.方法:将72只SD大鼠随机分为3组:自体肝移植模型组、板蓝根多糖+自体肝移植模型组、假手术组.分别于术后1、12、24、48 h采血检测血清转氨酶及TNF-α的水平,并使用透射电镜观察肝细胞及其线粒体的形态学改变.结果:板蓝根多糖+自体肝移植模型组血清转氨酶及TNF-α水平显著低于自体肝移植模型组,差异有统计学意义(P<0.05).透射电镜示:自体肝移植模型组肝细胞线粒体肿胀明显,膜结构模糊不清、部分破碎,线粒体嵴疏松溶解,有空泡形成;板蓝根多糖+自体肝移植模型组线粒体结构改变不明显,肝细胞结构形态基本正常.结论:板蓝根多糖具有减轻移植肝缺血再灌注损伤的作用.
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板蓝根多糖的提取和纯化工艺研究
目的 研究板蓝根水溶性多糖的提取纯化工艺条件.方法 通过正交实验,考察液料比、提取时间、提取温度、醇沉时间、醇液比对多糖得率的影响.结果 液料比是影响提取工艺的主要因素,佳工艺条件为:液料比30:1,提取温度90℃,提取时间6 h.三氯乙酸法脱蛋白,葡聚糖凝胶柱层析纯化分离.结论 板蓝根多糖得率25.63%,多糖含量76.42%.纯化后的板蓝根多糖为分子大小均一的单一组分多糖,不含核酸和蛋白质.
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微波辅助提取-柱前衍生高效液相色谱法分析板蓝根多糖的单糖组成
目的 建立了一种微波辅助提取柱前衍生高效液相色谱法测定板蓝根多糖的单糖组成.方法 采用了微波辅助提取,PMP柱前衍生单糖,Dikma -C18色谱柱,流动相为乙腈-磷酸盐缓冲液,检测波长为250 nm.结果L-鼠李糖,D-葡萄糖和D-半乳糖在0.156 ～62.5 μg/ml浓度范围内线性关系良好(r＞0.9995),板蓝根多糖主要由D-葡萄糖、L-鼠李糖和D-半乳糖组成.结论该方法简便、快速、准确,适用于分析测定板蓝根多糖的单糖组成.
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板蓝根多糖在结核小鼠模型中的免疫干预研究
目的 研究板蓝根多糖(IIP)在结核小鼠模型中对Th细胞的免疫干预效果.方法 选取健康SPF小鼠50只,分为三组,对照组10只,其他40只经尾静脉注射标准菌株H37RV混悬液建立结核小鼠模型,其中模型组10只,干预组30只.干预组小鼠造模成功后分别予IIP 100、200、300 mg/(kg·d)腹腔注射,观察三组小鼠的临床表现,造模成功时及成功后20、30 d后各抽取1次外周血检测干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、IL-12水平.结果 干预组小鼠症状较模型组小鼠缓解,外周血检测IFN-γ、IL-4、IL-12水平先升高后降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 IIP可通过对Th细胞的干预对结核感染起到积极作用.
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板蓝根多糖抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的实验研究
目的 研究板蓝根多糖抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的作用.方法 用MTT法和小鼠阴道HSV-Ⅱ感染模型分别进行体外和体内抗HSV-Ⅱ实验.结果 MTT法测得的板蓝根多糖LC50为3.97 mg· mL-1,EC50为0.05 mg· mL-1,治疗指数TI为79.4.与无环鸟苷相比,抑制HSV-Ⅱ的作用无显著差异；小鼠阴道HSV-Ⅱ感染模型研究表明:板蓝根多糖治疗组(1、0.5 mg·d-1)均明显降低小鼠的发病率、死亡率,延长其平均存活天数.小鼠外周血CD4+、CD8+细胞略有升高,但CD4+/CD8+比值维持在正常水平.结论 板蓝根多糖具有良好的抗HSV-Ⅱ感染的作用,可能通过调节机体免疫功能提高小鼠抗HSV-Ⅱ感染的能力.
关键词： 板蓝根多糖 单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ) 抗病毒作用 -
板蓝根多糖对小鼠抗流感病毒感染的作用
目的 研究板蓝根多糖对小鼠抗流感病毒感染能力的影响.方法 将板蓝根多糖溶液腹腔注入流感病毒感染的模型小鼠,观察小鼠的生存时间,计算肺指数,测定小鼠血清中抗病毒IgG的变化及脾细胞IFN-γ的水平.结果 注射板蓝根多糖的小鼠存活时间延长、存活率提高.与病毒对照组比较,肺指数明显降低,血清中抗体IgG的水平升高,脾脏细胞IFN-γ的水平上升.结论 板蓝根多糖能促进小鼠非特异性免疫、增强体液的免疫功能,并参与了调节细胞的免疫功能,从而提高了小鼠抵抗流感病毒感染的能力.
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板蓝根多糖在C57小鼠抗结核感染中的作用
目的:探讨板蓝根多糖对结核感染小鼠的作用及其机制.方法:提取板蓝根多糖配制成悬液后尾静脉注射感染毒性结核分岐杆菌H37RvC57小鼠,按照50 mg/kg的量对板蓝根多糖治疗组小鼠腹腔注射板蓝根多糖溶液,连续注射1周,对照组注射等量的生理盐水.观察比较各组小鼠的生存率,脾脏、肺脏的病理变化及抗酸染色分析菌落数,用酶联免疫吸附法测定小鼠脾脏细胞释放的细胞因子,流式细胞术检测脾脏CD4、CD8阳性T细胞比例.结果:经板蓝根多糖治疗的结核感染小鼠,生存率较对照组明显提高,脾脏及肺脏的病理变化减轻,肺脏菌落数较对照组明显降低,脾脏细胞分泌的细胞因子IFN-γ水平提高,白细胞介素-4(IL-4)变化无统计学意义,CD8 T细胞比例升高.结论:板蓝根多糖能够通过刺激Th1型细胞因子的产生进而增强C57小鼠的细胞免疫应答来抗结核分岐杆菌的感染.
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板蓝根多糖对环磷酰胺造模大鼠的双向免疫调节作用
目的 研究板蓝根多糖(IRPS)对机体不同免疫状态的调节作用.方法 36只颈静脉插管大鼠,随机分为6组:免疫正常(NS)组、免疫亢进(IH)组、免疫抑制(IS)组、IRPS组、IH+IRPS组、IS+IRPS组,每组6只;各组大鼠均ip鸡卵清蛋白进行免疫,应用环磷酰胺(Cy)注射制备大鼠IH和IS模型,ig 60 mg/kg IRPS,每天给药1次,连续给药3d;免疫后第6和12天,每组大鼠处死3只,测定T、B淋巴细胞增殖情况和NK细胞活性,试剂盒法检测各组血清OVA抗体水平;免疫后第1～10、12天,颈静脉采血,分离血清,液相芯片技术检测γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4 (IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10 (IL-10)以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.结果 IRPS对于不同免疫状态大鼠的B淋巴细胞增殖、NK细胞活性均具有双向调节作用;对Th1型细胞因子IFN-γ、TNF-a和Th2型细胞因子IL-4、IL-6、IL-10具有双向调节作用;对免疫功能正常大鼠具有免疫增强作用.结论 IRPS能够抑制IH组大鼠的亢进趋势,提升IS组大鼠的免疫功能,对Cy造模大鼠具有双向免疫调节作用.
