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葛根芩连汤药效组分抑菌生物效价测定
目的:对葛根芩连汤药效组分抑菌的生物效价进行测定.方法:采用体外抑菌实验,观察葛根芩连汤及其药效组分对相关细菌的抑制作用,通过MIC和MBC值的测定及相应抑菌圈直径的测定,计算生物效价.结果:抑菌实验表明,葛根芩连汤及其药效组分对金黄色葡萄球菌、乙型链球菌、大肠埃希菌、痢疾杆菌等多种菌敏感,且药效组分抑菌效果明显优于复方水煎液,终测得每19药效组分相当于4.5倍葛根芩连汤(219g)；每30mg药效组分相当于910U庆大霉素.结论:葛根芩连汤及其药效组分有较强的抗菌作用.
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致泻效价检测用于大黄品质评价的方法研究
目的:建立大黄致泻效价测定的模型和方法,为探索建立基于生物效价检测的大黄品质评价方法提供技术支持.方法:以大黄泻下活性的量效关系、数据变异程度以及实验的可操作性为考察指标,筛选并确定了大黄致泻效价测定模型的观测指标(10 h内排便量)、动物品系(ICR小鼠)、性别(雄性)、便秘模型造模剂用量(复方地芬诺酯50 mg·kg-1)等实验条件.根据确立的模型和方法结合化学含量测定评价了不同大黄样品的品质.结果:不同大黄样品的致泻效价总体趋势与总蒽醌(R2=0.653 7)、结合蒽醌(R2=0.553 6)的含量有关,但均未呈现良好的线性关系.大黄蒽醌的含量测定结合致泻效价的测定更能充分表征不同大黄样品的品质差异.结论:致泻效价检测方法可用于大黄的品质评价和质量控制.
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生物效价测定法用于活血化瘀中药三棱品质评价的研究
目的:建立三棱抗凝效价的检测方法,以对不同产地三棱药材的活血化瘀效应进行评价;并通过三棱抗凝效价与阿魏酸、总黄酮含量之间的相关性分析,探究三校抗凝活性的物质基础.方法:采用活化部分凝血活酶时间(APTT)测定不同产地三棱药材的抗凝血时间,运用“量反应平行线法”(3,3)法计算三棱抗凝效价;运用Pearson相关分析法计算三棱抗凝效价与化学成分之间的相关度.结果:三棱对照药材量效之间具有良好的线性关系(Y=172.76X-193.39,R2=0.995 5),该方法的精密度(RSD 4.7％)、重复性(RSD 2.3％)、中间精密度(RSD 5.4％)较好,测得不同产地三棱药材抗凝效价为52.33～238.58 U·g-1,并全部通过可靠性检验;相关性分析结果表明三棱抗凝效价与2种化学成分含量之间无显著性相关.结论:本实验所建立的生物效价检测方法可以作为三棱品质评价的方法之一.
关键词： 三棱 活血化瘀 活化部分凝血活酶时间 生物效价 品质评价 -
中药生物效价检测用对照品的选择与标化
为寻求解决中药质量控制问题的新突破,根据现行中药质量控制管理模式的现状和问题、中药与生物制剂和化学合成药生产质量控制管理模式的差异性和合理性、以及道地药材在中药生产质量控制上的历史作用和现实意义,肖小河等提出:应借鉴生物制品生产质量管理模式,建立基于道地优级药材和生物检测的中药质量控制模式和方法,以期从常规、化学和生物多重角度共同把关中药质量,创新和完善中药质量控制方法体系[1].
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基于化学表征和生物效价检测的大黄配方颗粒质量评价研究
该文尝试将多指标成分同时定量分析和生物效价分析方法联合使用的模式应用于中药配方颗粒的质量评价,并以大黄配方颗粒为模式药进行了示范性研究.采用超高效液相色谱法同时测定大黄配方颗粒中芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷等10个蒽醌类化学成分的含量;在复方地芬诺酯片致小鼠便秘模型上,测定不同批次大黄配方颗粒致泻生物效价;在体外抗大鼠血小板聚集模型基础上,测定不同批次大黄配方颗粒的活血生物效价;采用SPSS统计软件对测定的10个蒽醌类化学成分与致泻、活血生物效价之间的相关性进行统计学分析.多指标化学含量测定结果显示10个批次间大黄配方颗粒的化学表征差异较大,与此同时,致泻、活血生物效价均存在一定的差异性;相关性分析结果显示大黄配方颗粒的致泻生物效价强弱和其含有的结合型蒽醌糖苷类成分的含量有显著相关性(P<0.01),活血生物效价的强弱和其含有的游离型蒽醌成分的含量有显著相关性(P<0.01).综上,采用多组分化学表征和生物效价检测联用的模式可以客观量化、更全面的反映不同批次大黄配方颗粒的整体质量差异.
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基于神经氨酸酶活性检测的板蓝根品质的生物评价
采用流感病毒神经氨酸酶(NA)体外活性荧光检测法测定板蓝根的NA抑制生物活性.并建立板蓝根抗病毒生物效价检测方法.研究表明板蓝根具有抑制NA的活性,IC50=(0.90±O.20)mg·mL-1(相当于生药),其量效曲线形状与阳性对照药磷酸奥司他韦相似,提示二者对NA的抑制可能具有相同的作用方式.采用"质反应平行线,法设计和优化的板蓝根抗病毒生物效价检测方法,重复性较好(RSD=5.78%),实际样品检测结果均能通过可靠检验(偏离直线P>0.05、偏离平行P>0.05).研究结果表明,所建立的生物效价检测方法可以作为板蓝根品质生物评价的方法之一.
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泻下类中药质量的生物控制方法及基本问题探讨
本文以建立泻下中药质量的生物控制方法为实例,针对中药质量易受多种因素影响,样本总体波动范围大的特点,比较了不同生物检定数学模型的适用性,建议中药质量生物控制方法首选准确度相对较高的量反应平行线法,若供试品不能通过可靠性检验,可按质反应平行线法检测.对准确性要求不太高时,也可首选质反应平行线法,操作相对更简单.根据生物检定对参照物质和待测样品同质性的要求,建议采用对照药材提取物作为中药质量生物控制的标准物质,并采用化学参照物进行效价赋值,为效价传递及法定标准物质的建立提供参考.实际检测不同品种大黄药材及其复方制剂的致泻效价,取得较好结果,表明本文建立的生物检定方法及参照物质可用于泻下类中药的质量控制.
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基于活血生物效价和化学指纹图谱的大黄品质评价研究
探索利用活血生物效价检测方法和化学指纹图谱方法评价大黄的品质.采用血小板聚集仪测定不同大黄药材体外抗血小板聚集率,根据简化概率单位法计算生物效价;采用超高效液相色谱仪建立不同大黄药材的指纹图谱;利用SPSS 22.0软件的双变量(bivariate)分析方法进行谱效相关分析,后用化学单体进行了验证.活血效价测定结果显示掌叶大黄的活血效价普遍高于唐古特大黄和药用大黄;酒大黄的活血效价高于生大黄,大黄炭活血效价显著降低.指纹图谱中23个共有色谱峰,指认了其中10个成分.谱效相关分析得到3个相关性较好的化学成分,包括大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和大黄酸,活血效价验证结果表明三者均具有较强的抑制血小板聚集的作用.本文建立的基于测定血小板聚集率模型的大黄活血生物效价检测方法对于大黄药材,尤其是酒大黄炮制过程中的质量评控具有一定的参考价值,同时初步证明大黄中活血化瘀药效物质为大黄酸等蒽醌类衍生物.
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不同商品等级枸杞子的抗氧化活性比较及其生物效价检测
目的:针对枸杞子的抗氧化作用,尝试建立基于清除有机自由基1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)的枸杞子质量控制方法.方法:通过正交试验,优选构杞子样品提取方法;通过单因素考察确定构杞子与DPPH溶液的佳反应条件.结果:固液比1∶10,50%乙醇超声提取20 min时自由基清除率高;DPPH浓度0.05 mg·mL-1,样品浓度100 mg·mL-1,室温反应90 min为适反应条件.不同商品等级的枸杞子自由基清除率不同.结论:文中建立的抗氧化生物效价检测法,以构杞子对DPPH系统自由基清除率为评价指标,可以客观反映枸杞子抗氧化活性的差异,适用于构杞子药材质量控制,对其他具有抗氧化作用中药的质量控制以及高通量活性筛选也具有一定的参考价值.
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解析重组糖蛋白激素的生物效价与质量控制
本文围绕重组糖蛋白激素的生物效价定义与来源,从糖基化修饰与生物活性之间重要关系为切入点,阐释建立糖基化分析方法和判断指标(如Z值)对于该类产品质量控制的重要性和可行性,对糖基化的一致性、糖谱(Z值)、蛋白含量等理化指标与生物效价的密切关系进行回顾解析,为今后此类生物类似药的研发评价提出意见和建议.
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第1批重组人促卵泡素生物测定用国家标准品的制备与标定
目的:制备并标定第1批重组人促卵泡素(recombinant human follicle-stimulating hormone,Follitropin,rhFSH)国家标准品(生物测定用).方法:以WHO第2批重组人促卵泡素国际标准品08/282作为标准,采用《中华人民共和国药典》2015年版四部1216卵泡刺激素生物测定法,联合4个实验室参加协作标定.蛋白含量及纯度测定采用SE-HPLC法,解离亚基与聚合体测定采用SDS-PAGE电泳法,RP-HPLC法测定氧化α亚基等主要理化指标,参照国家食品药品监督管理总局颁发的生物制品标准YBS00172015进行;采用N端测序、肽图等方法对标准品制备用原液进行了结构确认,并对待标品进行稳定性考察.结果:重组人促卵泡素待标品经协作标定,终定值其生物效价为每瓶174 IU;每瓶重组人促卵泡素含量11.5 μg,纯度96.46％,测定聚合体、解离亚基、氧化α亚基等相关物质理化指标,均符合规定;稳定性考察合格,N端测序和肽图结果均符合理论要求.结论:本批待标品确认为重组人促卵泡素,可作为第1批重组人促卵泡素(rhF-SH)国家标准品,以供重组人促卵泡素及相关制剂的生物效价测定用,本批标准品生物效价为每瓶174 IU.
关键词： 重组人促卵泡素(rhFSH) 国家标准品 体内生物测定 生物效价 -
缩宫素生物效价测定实验的几点体会
<中国药典>2005年版二部附录[1]中规定缩宫素生物测定法的可信限率FL(%)不得大于10%,对于生物测定来讲这样的要求是比较严格的,FL值的大小与实验安排、技术操作和动物质量等有着密
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用二剂量法测定鲑鱼降钙素生物效价的研究
本文采用二剂量法测定鲑鱼降钙素的生物效价,测定了三批鲑鱼降钙素原料,结果生物效价均符合规定,并且平均可信限率均在50%以下.结果提示,用二剂量法测定鲑鱼降钙素生物效价是可行的,并且较三剂量法有明显的优点.
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基于高内涵分析的山药增强巨噬细胞吞噬活性及质量评价研究
目的 比较铁棍山药与非铁棍山药促进巨噬细胞吞噬活性的差异.方法 采用CCK-8法,考察不同山药在不同浓度下的细胞毒性;在无毒剂量的基础上,建立高内涵结合荧光标记技术检测RAW264.7细胞吞噬GFP-E.coli细菌的体外生物模型,计算不同山药在不同浓度下的细胞吞噬率;采用“质反应平行线法”将测定的细胞吞噬率转化为生物效价,更好地检测铁棍山药与其他山药生物效价的区别.结果 在0.695 ～ 5.56 mg(生药)·mL-1内,11个批次的山药样品都不存在细胞毒性;高内涵分析细胞吞噬强度结果显示,在此浓度范围内,各种山药都能促进细胞吞噬率的增高;高内涵图像能够清晰地显示出RAW264.7细胞吞噬绿色荧光蛋白标记细菌的情况.生物效价结果显示,不同批次山药的免疫生物效价介于39.56～100 U·mg-之间,以铁棍山药的生物效价为高,且平均效价值明显高于非铁棍山药(P＜0.05).结论 体外实验表明,铁棍山药及非铁棍山药都能不同程度地促进RAW264.7巨噬细胞的吞噬活性;且铁棍山药的生物效价明显高于非铁棍山药,这与普遍认为的“铁棍山药质量佳”也相符.
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第九批绒促性素国家标准品的建立
制备、标定第九批绒促性素(Human Chorionic Gondotrophin, HCG)国家标准品.以第四批绒促性素国际标准品(NIBSC Code:75/589)为标准,全国有 4 个实验室参加,用幼龄小鼠子宫增重法进行协作标定.采用 4 个实验室共18个标定结果,经合并计算,测得本批待标品每支含生物效价为60个国际单位.本批待标品可以作为绒促性素第九批国家标准品使用,其批号为150513-200409.2007年6月份正式分发使用.
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肝素的标准化
肝素于19世纪30年代作为抗血栓药用于临床[1].因为它的不均一性和化学结构的不确定性,自1942年建立供效价测定用第1次肝素国际标准品[2],至今已更替了4次.为建立第5次国际肝素标准品,1998年,WHO生物标准化中心英国国家检定所(NIBSC)组织了对近50年来肝素样品(其中包括历次国际肝素标准品和主要国家的现行标准品及广泛来源的商业产品)的协作研究[3].参与研究的实验室采用本国药典中肝素的生物测定法,有些实验室还采用了欧洲药典中肝素通则项下推荐的低分子肝素特异活性测定法[4]测定样品的生物效价,用凝胶渗透层析和高分辨核磁共振图谱分析法, 测定样品的组成和分子量及分子量分布.通过实验研究,从中选出2个样品作为第5次肝素国际标准品的候选品;还发现我国提供的肝素国家标准品(批号:509-9010)的特异活性仅相当于70年代初期的第3次国际肝素标准品;与目前市场上肝素原料和近建立的国际及欧洲肝素标准品的高分辨核磁共振(NMR)图谱有一定的差距;多分散性指数PD值(PD＝Mn/Mw即分子数平均分子量/重量平均分子量)也高.
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影响药品质量的因素与合理用药
目前,我国药品的质量评价与合理用药所面临的一个难题就是仿制药品众多,同一种药物有许多厂家生产,其生物效价、临床疗效和不良反应不尽相同,如何选用和比较同种药品的质量和临床疗效是当前所必须面对、亟待解决的问题,也是药学工作者推进合理用药、减少药源性损害发生的一项重要工作.
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川芎药材、饮片及其中成药抗血小板聚集活性的生物检定方法学研究
目的 建立以抗血小板聚集活性为指标的生物检定法,评价川芎药材、饮片及含川芎中成药的质量.方法 川芎加水回流定量提取,以提取物为供试品体外测定抗血小板聚集活性.家兔心脏取血,制备富血小板血浆(PRP),用腺苷-5'-二磷酸钠盐诱导血小板聚集,以血小板抑制率为抗血小板聚集活性指标,用阿魏酸钠标定川芎提取物的抗血小板聚集活性.根据量反应平行线法(2.2)法计算川芎提取物的抗血小板聚集活性;结合川芎水提物的提取率,计算川芎样品抗血小板聚集活性.并测定了8份川芎药材、饮片及中成药样品的抗血小板聚集活性,验证方法的可行性.结果 阿魏酸钠和川芎提取物均具有显著抗血小板聚集活性(P＜0.01),并且可靠性检验结果成立.阿魏酸钠在给药质量浓度15～60 mg/mL内与其血小板聚集抑制率呈良好的线性关系(r=0.993 4,n=4).供试品重复测定抗血小板聚集活性的RSD值为3.43％(n=6),可信限率为23.90％ (n=6).不同川芎样品抗血小板聚集活性不同,4份川芎药材抗血小板聚集活性的生物效价分别为3.183、2.068、1.957和1.931 U/g,川芎饮片及川芎酒炙饮片抗血小板聚集活性的生物效价分别为1.304、1.021 U/g,速效救心丸和乐脉颗粒抗血小板聚集活性的生物效价分别为0.506、0.919 U/g.结论 建立的方法可准确测定川芎药材、饮片及含川芎中成药的抗血小板聚集活性,可用来评价川芎产品的质量.
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基于谱效关系的灯盏细辛体外抗血小板聚集活性成分研究
目的 通过生物活性检测结合化学指纹图谱分析,探索灯盏细辛抗血小板聚集的活性成分.方法 采用UPLC-UV分析技术建立不同批次灯盏细辛药材化学指纹图谱,对不同批次灯盏细辛进行抗血小板聚集活性效价检测,基于谱效关系推测可能的活性物质,并对5个高相关性成分进行体外抗血小板聚集作用的验证,根据5种单体化合物在灯盏细辛中的含量差异,计算5个单体化合物的相对活性贡献度.结果 通过化学指纹图谱与抗血小板聚集生物效价的谱效相关分析,筛选并鉴定出与生物活性相关系数大于0.5的5个色谱峰,分别鉴定为绿原酸、咖啡酸、野黄芩苷、异绿原酸A、异绿原酸C.进一步体外实验表明5个化合物在相同质量浓度下均有不同程度的抗血小板聚集作用(抑制率16.5％～85.5％),相对活性强度顺序:野黄芩苷＞异绿原酸C＞咖啡酸＞异绿原酸A＞绿原酸;而5种成分从相对活性贡献度来看,异绿原酸C与野黄芩苷的活性贡献度大于另外3种成分.结论 建立了灯盏细辛体外抗血小板聚集生物效价的检测方法;且野黄芩苷和异绿原酸C是灯盏细辛体外抗血小板聚集的主要活性成分.
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基于止咳效价评价半夏及其炮制品品质的方法研究
目的 建立半夏及其炮制品清半夏、姜半夏、法半夏和京半夏止咳效价测定的模型与方法,为初步探索生物效价测定法用于评价半夏及其炮制品的质量提供科学依据.方法 基于小鼠浓氨水引咳模型,采用量反应平行线(22)法建立半夏及其炮制品止咳效价的测定方法,测定其效价值,并结合总有机酸定量测定结果,分析总有机酸的量与生物效价二者的相关性.结果 半夏炮制后,止咳效价值均升高;京半夏的止咳效价值大,为2 105.59 U/g;其后依次为法半夏、清半夏、姜半夏;半夏止咳效价值小,为京半夏的1/3.结合总有机酸定量分析,半夏及其炮制品的止咳效价与总有机酸的量相关,其R2为0.692 0～0.917 8,表现为总有机酸的量增加,止咳效价值增大,二者呈显著的正相关.结论 该方法重复性、精密度良好,适用于半夏及其炮制品止咳效价的测定,可作为评价其质量的方法,为完善其质量标准,构建中药质控新模式提供了科学依据.
