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肝癥口服液含药血清抑制肝癌细胞SMMC-7721血管内皮生长因子表达的研究
目的:观察服用肝癌口服液的原发性肝癌病人和正常志愿者含药血清对肝癌细胞SMMC-7721 VEGF mRNA表达的影响.方法:采用血清药理学方法,以正常志愿者和肝癌患者用药前后血清培养人肝癌细胞SMMC-7721细胞,应用RT-PCR技术观察含药血清对肝癌细胞VEGFmRNA表达的影响.结果:正常人服用肝癌口服液前后血清对SMMC-7721细胞的VEGF mRNA表达无影响,VEGF/β-actin灰度值差异无显著性;SMMC-7721细胞在肝癌病人服药后血清中生长,VEGFmRNA的表达显著降低,统计学差异具有显著性.结论:肝癌病人肝癌口服液的含药血清可明显降低肝癌细胞VEGF mRNA的表达,而对健康人群无影响.
关键词： 肝癌口服液 肝癌细胞SMMC-7721 血管内皮生长因子 -
mRNA差异显示法比较独角莲作用肝癌细胞SMMC-7721前后的基因表达
目的:研究独角莲根茎水提取物(AEoTGE)作用肝癌细胞SMMC-7721后引起的细胞基因表达变化.方法:利用mRNA差异显示技术,以人肝癌细胞系SMMC-7721细胞为研究对象,筛选AEoTGE作用后表达改变的基因片段.结果:经测序和鉴定,发现1个基因在加入AEoTGE后表达上升,1个基因表达下降.结论:mRNA差异显示可以用于中草药对细胞的作用机制研究.
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肝癌细胞蛋白质组在DTT诱导内质网应激条件下的表达
目的:研究内质网应激条件下肝癌细胞SMMC-7721蛋白质组的表达,为人类肝细胞癌的诊治提供新的靶点.方法:培养肝癌细胞株SMMC-7721,随机分为两组,即实验组和对照组.实验组加入二硫苏糖醇(DTT,2.5 mmol/L),对照组加入等量的培养基,裂解细胞,提取全细胞蛋白.双向电泳(2-DE)分离,Image Master 2D Platinum软件进行差异表达蛋白质组分析,基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白质.结果:实验组肝癌细胞SMMC-7721的2-DE图谱上共检出蛋白质斑点(844±46)个,对照组共检出蛋白质斑点(1 015±63)个,对照组与实验组自动匹配配对(593±23)对,匹配率约71%左右,绝大多数蛋白集中于pH5.2-6.5,相对分子质量15 000-80 000 Da;获得组间标准化总灰度值(%Vol)相差2倍及以上的蛋白斑点3个,通过MALDI-TOF-MS分析鉴定了3个差异蛋白质点,分别是:fem-1同源蛋白B、细胞周期素A1、增殖诱导蛋白44.结论:鉴定的3个肝癌细胞株SMMC-7721在内质网应激下表达改变的蛋白质,其功能涉及细胞增殖、细胞凋亡以及细胞周期等,具有潜在的作为肝癌诊断、预后标记物或治疗靶点的意义.
关键词： 内质网应激 肝癌细胞SMMC-7721 蛋白质组 二硫苏糖醇 -
叶绿酸联合赛特铂对人SMMC-7721肝癌细胞株影响的初步研究
目的:探讨叶绿酸(CHL)联合赛特铂(JM216)对人SMMC-7721肝癌细胞凋亡及增殖的作用.方法:选用CHL(1×10-5 mol/L)及不同浓度JM216(10、20和40 mg/L),1×10-5 mol/L的CHL分别联合不同浓度JM216作用于SMMC-7721肝癌细胞24、48和72 h后,用MTT比色法观察其对肝癌细胞的生长抑制作用,并观察细胞形态变化；用流式细胞术分析药物作用48 h时肝癌细胞的周期分布和凋亡情况.结果:CHL组、不同浓度JM216组和联合组细胞生长抑制率均高于对照组,联合组1和联合组2以及联合组3的细胞生长抑制率均高于相应浓度的JM216组.CHL组SMMC-7 721细胞周期中G0/G1期比例为(55.94±3.49)％,高于对照组的(50.52±2.56)％,差异有统计学意义,P＜0.05;而JM216组SMMC-7721细胞周期中S期比例为(45.12±1.42)％,高于对照组的(27.60±1.27)％,差异有统计学意义,P＜0.05.CHL组和JM216组细胞凋亡率分别为(13.48±1.63)％和(15.51±2.09)％,均高于对照组的(1.61±0.47)％,差异有统计学意义,P＜0.05;联合组细胞凋亡率为(30.22±3.20)％,高于JM216组和对照组,差异均有统计学意义,P＜0.05.结论:CHL和JM216均可抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长并诱导其凋亡,且联用后作用增强.
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重组腺病毒介导突变型p27基因转移对肝癌细胞SMMC-7721生长的影响
目的 探讨突变型p27基因(p27mt)对肝癌细胞SMMC-7721的细胞增生和凋亡的调节作用.方法 利用重组体腺病毒Ad-p27mt转染培养的人肝癌细胞SMMC-7721,用3H-TdR掺入法检测细胞增生;流式细胞术、DNA片段分析法、TUNEL法检测细胞凋亡.结果 重组体腺病毒Ad-p27mt在MOI≥50时,可达到100%的转导效率.Ad-p27mt转染肝癌细胞后,3H-TdR掺入检测发现细胞增生抑制;流式细胞术检测在G1期前出现亚二倍体凋亡峰;细胞DNA抽提电泳后发现凋亡特征性梯带.Ad-p27mt组及空白对照组TUNEL法检测凋亡指数分别为58.6±4.3及4.5±1.6,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 重组腺病毒介导的p27mt基因转移可抑制肝癌SMMC-7721细胞增生并诱导其凋亡.
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Bach1克隆构建及其对肝癌细胞药物敏感性的影响
目的：构建真核表达载体pBI－EGFP－Bach1，并检测其表达及对血红素氧化物（HO－1）表达的影响。方法将Bach1基因与质粒pBI－EGFP连接构成重组质粒，RT－PCR法检测重组载体及HO－1在SMMC7721细胞中的表达情况，MTT检测细胞活性。结果 NheⅠ和 MluⅠ双酶切以及PCR表明重组质粒pBI－EGFP－Bach1构建成功；RT－PCR显示转染重组Bach1 mRNA表达显著升高，同时 HO－1的表达降低；MTT检测未转染组的IC50为0．15μg／ml，转染组的IC50为0．21μg／ml。结论构建了真核表达载体pBI－EGFP－Bach1，转染后Bach1能够在SMMC－7721细胞中表达并抑制了HO－1；MTT验证重组质粒能提高癌细胞对长春新碱（ VCR）敏感性。
关键词： Bach-1 血红素氧化酶-1 肝癌细胞SMMC-7721 长春新碱 -
斑蝥素酸镁对人肝癌细胞株SMMC-7721转录组的影响
目的 通过RNA-seq分析斑蝥素酸镁对肝癌细胞转录组的影响,为阐明斑蝥素酸镁对肝癌细胞增殖的抑制效应提供分子信息,以期为临床上利用斑蝥素酸镁治疗肝癌提供相关理论基础.方法 体外培养的肝癌细胞株SMMC-7721,用不同浓度(0、0.895、1.790、2.685 μmol/L)的斑蝥素酸镁干预48 h后,利用MTT检测细胞抑制率;采用illumina Hiseq2500测序平台对1.790μmol/L处理组和对照组(0μmol/L)进行RNA-seq分析;根据RNA-seq结果,利用qRT-PCR检测了磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)等基因的表达水平.结果 不同浓度(0.895、1.790、2.685 μmol/L)的斑蝥素酸镁干预48 h后,与对照组(0μmol/L)比较,均能显著抑制SMMC-7721细胞增殖(t=33.48、90.30、151.01,P＜0.01).通过RNA-seq分析,斑蝥素酸镁干预后,共导致150个基因表达发生显著变化,82个基因显著下调(P＜0.01),68个基因显著上调(P＜0.01),这些差异基因涉及Ribosome、Hippo signaling pathway、MAPK signaling pathway、PI3K signaling pathway、mTOR signaling path-way等通路,影响肝癌细胞的增殖、代谢及凋亡;通过qRT-PCR检测,1.790 μmol/L斑蝥素酸镁能够显著降低PI3K、Akt及ERK1/2的转录水平,抑制细胞增殖.结论 通过RNA-seq检测及分析,PI3K、AKT和ERK信号通路的抑制可能在斑蝥素酸镁抑制肝癌细胞增殖中发挥作用.
关键词： 斑蝥素酸镁 肝癌细胞SMMC-7721 转录组 差异表达基因 RNA-seq -
白藜芦醇在人γδT细胞杀伤肝癌细胞中的作用研究
目的 探讨白藜芦醇对人外周血γδT细胞体外增殖及该细胞对肝癌细胞SMMC-7721细胞活性的影响.方法 分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),放入含有IL-2、帕米膦酸的RPMI 1640培养基进行培养并诱导γδT细胞,实验组给予白藜芦醇共同培养,对照组不加药物,在此基础上,两组均加入肝癌细胞SMMC-7721作为靶细胞,继续培养.在培养第10天后,用台盼蓝染色计数细胞,采用流式细胞术检测各组γδT细胞的纯度及其颗粒酶B和CD107a、穿孔素的表达;用CCK-8试剂盒检测γδT细胞对肝癌细胞SMMC-7721的体外杀伤效应.结果 两组γδT细胞纯度均达到70％以上,实验组γδT细胞较对照组纯度显著更高(P＜0.01);且实验组γδT细胞扩增倍数,穿孔素、CD107a和颗粒酶B的表达及对肝癌细胞SMMC-7721的杀伤效应均显著高于对照组(P＜0.01).结论 白藜芦醇能促进γδT细胞增殖,并可能通过上调颗粒酶B和穿孔素的表达增强其对肝癌细胞SMMC-7721的杀伤效应.
关键词： 白藜芦醇 γδT细胞 肝癌细胞SMMC-7721 杀伤效应 -
中药复方H3C-1对肝癌细胞SMMC-7721基因表达的影响
检测中药复方H3C-1对肝癌细胞SMMC-7721细胞生长,及肝癌相关基因表达的影响.利用MTT比色法检测复方H3C-1对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖方面的影响;利用以肝癌cDNA抑制性消减文库构建的肝癌相关基因微阵列.检测复方H3C-1作用肝癌细胞SMMC-7721 36 h后基因的表达变化.结果显示中药复方H3C-1作用肝癌细胞SMMC-7721后36h.观察到有31个基因表达下凋,1个基因上调.中药复方H3C-1对肝癌肿瘤细胞的作用是通过影响多基因的表达改变实现的;该研究为复方H3C-1的抑癌分子机理提供了重要线索.
关键词： 中药复方 肝癌细胞SMMC-7721 MTT比色法 微阵列 基因表达 -
去甲斑蝥素处理肝癌细胞SMMC-7721蛋白质组的双向电泳分析
目的 分析去甲斑蝥素(NCTD)作用于肝癌细胞SMMC-7721前后蛋白质组表达的差异.方法 采用四氮唑蓝还原法(MTT)测定细胞生长抑制率.20μg/ml的NCTD作用于肝癌细胞SMMC-7721 24 h,分别收集处理组与对照组细胞,裂解并提取细胞内总蛋白;双向凝胶电泳(2-DE)分离蛋白质,凝胶银染,ImageMaster 2D Platinum软件分析2-DE图谱,寻找差异表达蛋白点.结果 NCTD能诱导肝癌细胞SMMC-7721的凋亡,具有时间和剂量依赖性,与对照组比较,处理组2-DE图谱中有5个蛋白点表达上调,6个蛋白点表达下调.结论抗癌药NCTD能诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡并引起细胞内蛋白质组表达的改变.
关键词： 去甲斑蝥素 肝癌细胞SMMC-7721 双向凝胶电泳 蛋白质组 -
基于PTEN/PI3K/AKT信号通路花蕊石抗肝癌细胞增殖作用机制研究
目的 探讨花蕊石对人肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制作用及其初步作用机制.方法 采用CCK-8法检测花蕊石含药血清对肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用;AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blotting法检测PTEN/PI3 K/AKT信号通路中第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸蛋白激酶B(p-Akt)相关蛋白的表达水平;RT-PCR检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)及核因子活化B细胞κ轻链增强子(NF-κB)相关基因mRNA的表达水平.结果 花蕊石具有明显的抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用.花蕊石含药血清可明显上调PTEN/PI3 K/AKT信号通路中PTEN蛋白的表达水平,降低PI3K及p-Akt蛋白的表达,同时下调NF-κB mRNA的表达.结论 花蕊石能够抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖,并促进肝癌细胞凋亡,其作用机制可能与激活PTEN表达水平从而抑制PI3K/AKT信号通路及其下游基因NF-κB的异常活化有关.
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白花蛇舌草对肝癌细胞SMMC-7721基因表达的影响
目的:检测白花蛇舌草对肝癌细胞SMMC-7721细胞生长及肝癌相关基因表达的影响.方法:利用MTT比色法检测白花蛇舌草对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖方面的影响;利用以肝癌cDNA抑制性消减文库构建的肝癌相关基因微阵列,检测白花蛇舌草作用肝癌细胞SMMC-7721 36 h后基因的表达变化.结果:白花蛇舌草作用肝癌细胞SMMC-7721后36 h,观察到有1个基因的表达上调,14个基因表达下调.结论:证实白花蛇舌草对肝癌细胞的作用是通过影响多基因的表达改变实现的.本研究发现的差异表达基因为进一步研究白花蛇舌草抗肝癌的分子机制提供了线索,并为中草药筛选提供了一种可能的依据方法.
关键词： 白花蛇舌草 肝癌细胞SMMC-7721 MTT比色法 微阵列 基因表达 -
肝癌患者肝癥口服液含药血清对SMMC-7721肝癌细胞TGFβ受体表达的影响
目的:观察肝癥口服液含药人血清对SMMC-7721肝癌细胞TGFβ1/Smads信号转导通路中TGFβ受体(TGFβR)的影响.方法:以健康志愿者和肝癌患者用药前后血清培养人SMMC-7721肝癌细胞,应用RT-PCR和Western Blotting技术观察含药血清对肝癌细胞TGFβRⅠ和TGFβRⅡ mRNA和蛋白表达的影响.结果:健康志愿者服用肝癥口服液前后血清对SMMC-7721细胞的TGFβRⅠ和TGFβRⅡ蛋白和mRNA表达无显著影响;肝癌患者肝癥口服液的含药血清可使明显受到抑制的TGFβRⅠ和TGFβRⅡ表达恢复,尤其以TGFβRⅡ表达显著上调.结论:肝癌患者肝癥口服液含药血清可增加肝癌细胞TGFβR的表达,使受到抑制的TGFβ1/Smads信号转导通路功能恢复.
