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小鼠缺血再灌注损伤后海马齿状回Wnt1、Wnt3a的表达变化
目的 探讨Wnt/β-catenin相关因子在缺血再灌注小鼠海马中的表达变化.方法 将80只1月龄健康雄性昆明小鼠随机分为正常组、假手术组、缺血再灌注1、3、7、14、21、28 d组,通过夹闭小鼠双侧颈总动脉0.5h再通的方法建立小鼠脑缺血再灌注损伤模型,采用腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核甘(BrdU)检测海马齿状回区神经干细胞(NSCs)增殖规律及通过原位杂交法和免疫组织化学染色方法检测Wnt/β-catenin信号通路重要信号分子Wnt1 、Wnt3a的表达变化.结果 BrdU检测显示正常组和假手术组小鼠海马齿状回区可见少量BrdU阳性细胞,缺血再灌注后3 d BrdU阳性细胞开始增高(P＜0.01),缺血再灌注后7d达高峰(P＜0.01),随着灌注时间的延长呈下降趋势,缺血再灌注后28 d,BrdU阳性细胞数降至正常水平(P＞0.05).原位杂交法结果显示正常组、假手术组海马齿状回颗粒细胞下层均无明显Wnt1、Wnt3a阳性表达.缺血再灌注各组均可见Wnt1、Wnt3a阳性细胞,再灌注后1d表达开始增加,14 d达高峰,28 d减少至正常水平.与正常组和假手术组比较,缺血再灌注各组Wnt1、Wnt3a阳性细胞数明显增多(P＜0.05).结论 小鼠脑缺血再灌注损伤可激发内源性NSCs的增殖.当Wnt/β-catenin途径被激活时,Wnt1、Wnt3a在海马齿状回颗粒细胞下层的表达,为进一步研究Wnt信号通路在脑缺血再灌注损伤中的作用及其机制奠定了基础.
关键词： 脑缺血再灌注 海马 5-溴脱氧尿嘧啶核甘(BrdU) WNT1 Wnt3a -
电针对口腔正畸牙痛患者血清Wnt3a、Wnt5a及护骨素的影响
目的 探讨电针对口腔正畸术后牙痛患者血清Wnt3a、Wnt5a及护骨素(OPG)水平R影响.方法 收集该院口腔科收治的口腔正畸牙痛患者80例,根据治疗方法不同分为对照组和实验组各40例,分别给予相应的针刺治疗,治疗结束后,对所有患者的Wnt3a、Wnt5a及OPG阳性细胞计数进行检测.结果 治疗后,与对照组相比,实验组患者的Wnt3a、Wnt5a、OPG阳性细胞计数较低(P＜0.05).实验组患者的成功率、咀嚼功能以及满意度较高(P＜0.05).结论 电针能够显著减少Wnt3a、Wnt5a、OPG阳性细胞计数,疗效显著预后良好,对临床有指导意义.
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Wnt5a抑制Wnt3a促黑素细胞黑素生成的作用探究
目的:研究Wnt5a对Wnt3a处理过的melan-a细胞分泌黑色素的影响.方法:体外培养黑色素细胞(melan-a细胞),分另进行GFP、Wnt3a、Wnt3a+Wnt5a处理,比较细胞的突起,酪氨酸酶的活性以及黑素合成相关基因(TYR、TRP2、MITF)的表达情况.结果:Wnt3a促进黑色素细胞突起的生长和TYR、TRP2、MITF的表达,而Wnt5a逆转了Wnt3a对黑色素细胞的作用.结论:Wnt5a抑制Wnt3a促黑素细胞黑素生成的作用,表明在melan-a黑素细胞中Wnt5a可有效抑制Wnt经典通路.
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Wnt3a在毛囊及黑素细胞谱系中的表达
目的:探讨毛囊周期中,Wnt3a在毛囊及黑素细胞中的表达变化.方法:以DCT-LacZ转基因小鼠为动物模型,通过X-gal染色技术观察黑素细胞谱系在小鼠皮肤中的分布情况;采用X-gal染色结合免疫组化方法检测Wnt3a在毛囊及黑素细胞谱系中的表达情况;采用RT-PCR方法对小鼠皮肤全层Wnt3a和TYR的mRNA表达进行半定量分析.结果:在生长期毛囊中,Wnt3a蛋白在表皮、毛囊外根鞘Bulge区、内根鞘以及毛球部均有表达,在黑素干细胞与黑素细胞也观察到Wnt3a;在退化期,Wnt3a的表达逐渐减弱,仅在外根鞘有较弱的表达,但黑素干细胞中没有观察到Wnt3a;在静止期,几乎检测不到Wnt3a的表达;TYRmRNA与Wnt3a mRNA在毛囊周期中的表达模式一致,在生长期强,退化期减弱,静止期弱.结论:Wnt3a可能对黑素细胞谱系分化起到促进作用.
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淫羊藿苷对大鼠正畸牙齿压力区牙周组织RANKL和Wnt3a表达的影响
目的:观察不同剂量的淫羊藿苷对大鼠正畸牙齿移动时压力区牙周组织中RANKL和Wnt3a表达的影响.方法:将24只健康雄性SD大鼠随机分为4组,根据淫羊藿苷灌胃的剂量分为生理盐水组(对照组)、1 mg/kg淫羊藿苷组、3 mg/kg淫羊藿苷组、5mg/kg淫羊藿苷组(实验组),使用50 g力近中移动左侧上颌第一磨牙.通过免疫组化方法检测压力区牙周组织中RANKL和Wnt3a蛋白的表达.结果:生理盐水组上颌第一磨牙压力区牙根和牙槽骨表面粗糙,牙周膜间隙变窄,可见骨吸收陷窝和破骨细胞,不同剂量淫羊藿苷组牙周膜间隙趋于恢复正常,骨吸收陷窝出现明显减少.RANKL和Wnt3a在生理盐水组和淫羊藿苷组的压力区牙周组织中都有表达.与生理盐水组比较,不同剂量淫羊藿苷组压力区牙周组织中RANKL的表达均显著降低,Wnt3a的表达均明显增加,且RANKL的表达随淫羊藿苷剂量的增加而逐渐减少(P＜0.05),Wnt3a的表达随淫羊藿苷剂量的增加明显增加(P＜0.05).结论:不同剂量淫羊藿苷能减少正畸时牙齿移动过程中压力区牙周组织中RANKL的表达,增加Wnt3a的表达,且作用与其剂量具有一定的相关性.
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β-catenin基因在人骨肉瘤MG63细胞系的表达变化
目的:观察分析β-catenin基因在人骨肉瘤MG63细胞系的表达变化.方法:培养MG63细胞株,用不同浓度的Wnt3a蛋白或相同浓度、不同时间段的Wnt3a蛋白刺激液MG63细胞生长,用FQ-PCR在mRNA水平检测β-catenin在MG63细胞系的表达变化.培养MG63细胞株,用相同浓度的Wnt3a蛋白刺激,比较刺激组与空白对照组的细胞数目的差别.结果:在细胞生长的第0,1天两组的MG63细胞数量对比没有统计学差异(P＞0.05);而在第2,3,4天对照组细胞增殖速度较刺激组缓缓,经比较(t=4.109,3.892,5.215,均P＜0.05).β-catenin基因表达不会因为Wnt3a的浓度增加而增加.100 ng/mL的Wnt3a蛋白刺激β-catenin基因表达高,其他几个浓度的β-catenin基因表达对比没有统计学差异(P＞0.05).在100 ng/mL的Wnt3a蛋白刺激下,β-catenin基因表达会随时间延长而增加,6h时β-catenin基因表达高(P＜0.05),随后β-catenin基因表达则没有统计学差异(P＞0.005).结论:Wnt蛋白对MG63细胞有正向增加增殖作用.激活Wnt/β-catenin信号通路能促进MG63的细胞增殖.
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氟对大鼠成骨细胞Wnt3a、β-链蛋白mRNA和蛋白表达的影响
目的 观察氟中毒大鼠成骨细胞Wnt3a、β-链蛋白(catenin)mRNA和蛋白表达,探讨氟骨症发生与Wnt通路的关系.方法 健康SD大鼠36只,体质量100～120 g,按体质量将大鼠随机分为3组,每组12只.对照组大鼠饮用自来水(含氟量＜1 mg/L),低氟组、高氟组大鼠分别饮用含5、50 mg/L氟化钠的自来水.大鼠饲养8个月,建立慢性氟中毒模型.饲养期间检查大鼠氟斑牙发生情况,股动脉放血处死大鼠前收集大鼠24 h尿样,处死后取股骨组织.采用氟离子选择电极法测定尿氟和骨氟含量；固相夹心酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清骨碱性磷酸酶(BALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP-5b)含量；光镜下观察骨组织的形态学变化,测量骨皮质厚度、骨小梁宽度及密度变化；原位杂交技术和免疫组化方法检测成骨细胞Wnt3a、β-catenin mRNA和蛋白表达.结果 大鼠氟斑牙检出率低氟组为66.7％(8/12),高氟组为91.7％(11/12),对照组为0.0％(0/12),组间比较差异有统计学意义(χ2=21.6,P＜0.05).尿氟和骨氟组间比较差异有统计学意义(F=36.57、467.02,P均＜0.05),其中低氟组[(2.06±0.64)mg/L、(632.33±123.21) mg/kg]和高氟组[(7.69±1.96)mg/L、(1088.75±156.16)mg/kg]高于对照组[(1.26±0.17)mg/L、(305.58±91.26)mg/kg,P均＜0.05],高氟组高于低氟组(P均＜ 0.05).血清BALP和TRACP-5b组间比较差异有统计学意义(F=89.57、7.68,P均＜0.05).其中低氟组[(31.47±5.30)U/L]和高氟组[(54.61±2.27)U/L].血清BALP明显高于对照组[(16.24±1.57)U/L,P均＜0.05],高氟组高于低氟组(P＜0.05)；血清TRACP-5b,低氟组[(3.45±1.85)U/L)明显高于对照组[(1.26±0.23)U/L]和高氟组[(2.74±1.8)]U/L,P均＜0.05].光镜下,高氟组和低氟组大鼠股骨骨皮质较对照组增厚,骨小梁增宽、排列紧密.原位杂交和免疫组化显示,近骨小梁表面的成骨细胞细胞质和细胞核呈棕黄色阳性着色.图像分析显示,Wnt3a、β-catenin mRNA和蛋白表达组间比较差异有统计学意义(F值分别为12.47、5.96,10.07、53.82,P均＜0.05).其中低氟组(132.87±5.72、132.57±9.56,137.50±4.32、140.85±3.54)和高氟组(135.60±6.64、137.87±9.16,142.65±11.84、152.52±4.64)均高于对照组(119.86±5.04、120.58±7.84,124.01±2.63、126.75±4.65,P均＜0.05)；除β-catenin蛋白表达高氟组明显高于低氟组(P＜0.05)外,其他两组间比较差异无统计学意义(P均＞0.05).相关分析显示,Wnt3amRNA与β-catenin mRNA表达、Wnt3a蛋白与β-catenin蛋白表达,二者之间都具有相关性(r值分别为0.731、0.658,P均＜0.05).结论 过量氟引起的大鼠骨组织的病变可能与Wnt3a、β-catenin mRNA和蛋白在成骨细胞的表达增高有关.慢性氟中毒时,氟通过刺激Wnt经典信号通路中Wnt3a、β-catenin的过表达,使成骨作用增强,从而引起骨骼的病变而发生氟骨症.
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Wnt3 a在人骨性关节炎软骨中的表达及相关性研究
目的： Wnt3a参与Wnt经典通路信号的传递，而Wnt通路又参与关节软骨及软骨细胞的发生。本实验目的是检测Wnt3a 在骨性关节炎（ OA）中的表达及发病风险的相关性。方法40例人类关节软骨标本，10例正常关节软骨标本（取自外伤、肿瘤截肢术患者），30例膝OA关节软骨标本（取自膝OA患者）．将取下的软骨标本分为四组：正常关节软骨组、轻度软骨退变组、中度软骨退变组、重度软骨退变组。根据Mankin关节软骨病理评分标准分别打分，按评分结果分组：正常关节软骨标本5份（ A组），OA软骨轻度退变标本6份（ B组），OA软骨中度退变标本13份（C组），OA 软骨重度退变标本16份（D组）。对四组切片行Wnt3a相关染色，根据免疫反应积分IRS打分法进行评分，采用SPSS17．0软件对数据进行统计学分析。统计分析Wnt3a在正常组与非正常组的差异性、表达程度及软骨退变程度的相关性。结果 Wnt3a在三组人膝骨性关节炎软骨呈现一致的高表达，其表达的平均值分别为：3．33±0．516（ B组，轻度），4．85±1．68（ C组，中度），9．44±2．31（ D组，重度）。正常组（ A组，表达均值和标准差0．0±0．0）与中度、重度退组两两比较，轻度组与中度、重度组，中度与重度组比较显示一致的显著性差异。Wnt3a表达值与其相应的Mankin 病理评分呈显著正相关（B组皮尔森相关系数＝0．74， P＝0．047；C组皮尔森相关系数＝0．81，P＝0．00036；D组皮尔森相关系数＝0．94，P＝2．75 e-08），即关节软骨中Wnt3a的表达与原发性膝骨关节炎（OA）发生与发展程度呈显著的正相关。结论①在膝骨性关节炎软骨中Wnt3a表达升高；②Wnt3a表达与骨性关节炎关节软骨退变程度呈正相关，可作为OA病程进展的监测指标。
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Wnt/β-catenin信号通路在白芍总苷干预大鼠心肌肥厚中的作用
目的 观察Wnt/β连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路在白芍总苷干预大鼠心肌肥厚中的作用.方法 皮下注射异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)制备大鼠心肌肥厚模型,随机分为正常对照组、心肌肥厚组,低、中、高剂量白芍总苷组[50、100、200 mg/(kg·d)].8周后动脉插管,观察各组动物心脏功能的变化,Masson染色观察心肌结构变化,测量心肌肥厚指标(心脏质量指数、心肌细胞横截面积、心肌间质胶原容积分数及血管周围胶原面积),Westem blot检测心肌组织Wnt3a、磷酸化GSK-3β (p-GSK-3β)和β-catenin的表达水平.结果 与心肌肥厚组相比,白芍总苷呈剂量依赖性降低心脏质量指数、心肌细胞横截面积、心肌间质胶原容积分数及血管周围胶原面积,减少心肌Wnt3a、p-GSK-3β和β-catenin蛋白表达.结论 白芍总苷能改善心肌肥厚,且其作用与Wnt/β-catenin信号通路相关.
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白芍总苷对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞凋亡的影响
目的:观察白芍总苷对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法:制备大鼠心肌细胞缺血再灌注模型,随机分为假手术组、缺血再灌注模型组及低、中、高剂量白芍总苷组,比较各组心肌细胞存活率;检测乳酸脱氢酶(LDH)释放;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹法检测心肌组织Wnt3a、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)和β-catenin的表达水平.结果:与缺血再灌注模型组相比,白芍总苷不同浓度各组心肌细胞Wnt3a、p-GSK-3β、β-catenin蛋白表达、LDH释放及细胞凋亡率均显著降低,且白芍总苷呈浓度依赖性效应.结论:白芍总苷对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞凋亡具有保护性抑制作用,其机制可能与白芍总苷能抑制Wnt3a表达,从而影响Wnt/β-catenin信号通路密切相关.
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行为学训练对大鼠内源性神经干细胞增殖及Wnt3a蛋白表达的影响
目的:检测Wnt3a在血管性痴呆海马组织神经干细胞中的表达及穿梭箱训练的干预作用,探讨影响神经干细胞增殖分化的分子调控机制.方法:采用大脑中动脉栓塞(MCAO)制作大鼠血管性痴呆模型,用免疫组织化学检测海马神经干细胞BrdU、Wnt3a的表达及穿梭箱训练的干预作用.结果:随着脑缺血再灌注第3天缺血海马神经元BrdU阳性细胞明显增多,第7天达高峰,且高于假手术组大鼠.Wnt3a反应产物在脑缺血再灌注第3天较正常组增多,持续高水平表达到第7～14天,随缺血再灌注时间的进一步延长逐渐减少,高于假手术组大鼠.穿梭箱训练后BrdU、Wnt3a的表达明显增加,明显高于模型组及假手术组.结论:穿梭箱训练促进神经干细胞增殖及缺血脑组织Wnt3a的表达,提示穿梭箱训练促进神经干细胞增殖作用可能由Wnt3a信号介导.
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人结直肠癌LoVo/HCT116细胞来源外泌体促肿瘤迁移能力及Wnt3a/Wnt5a蛋白鉴定
目的 鉴定人结直肠癌LoVo/HCT116细胞上清外泌体中Wnt3a和Wnt5a蛋白的表达情况,探讨外泌体对人结直肠癌迁移的调节作用.方法 培养人结直肠癌LoVo/HCT116细胞,提取上述两种细胞的上清液抽提外泌体,运用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析仪(NTA)、蛋白印迹法(Western blot)对外泌体进行鉴定.结果 透射电镜下观察到外泌体具有膜结构,NTA检测提示粒径大小主要分布在94 nm左右,可检测到外泌体膜标志蛋白HSP70、CD63、CD9以及Wnt3a、Wnt5a表达.人结直肠癌LoVo/HCT116细胞外泌体能被人结直肠癌细胞摄取,并对人结直肠癌细胞迁移有促进作用.结论 人结直肠癌LoVo/HCT116细胞能抽提得到外泌体,外泌体表达膜标志蛋白HSP70、CD63、CD9以及Wnt3a、Wnt5a蛋白.外泌体能被结直肠癌细胞吸收,而吸收了外泌体的人结直肠癌细胞其迁移能力增强.
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Wnt/β-catenin 信号通路在高压氧治疗大鼠神经病理性痛中的作用
目的：观察高压氧后处理对大鼠神经病理性痛的治疗作用,探讨 Wnt/β-catenin 信号通路在其中的作用。方法成年雄性 SD 大鼠30只,采用随机数字表法,将其分为三组：假手术组(S组)、坐骨神经慢性缩窄手术组(CCI 组)和高压氧治疗组(HBO 组),每组10只。HBO 组于术后第1天开始高压氧治疗,连续7 d,1次/天。S 组和 CCI 组单纯放入氧舱100 min 而不接受治疗。于术前1 d、术后1、3、5、7 d 测定机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL)。术后7 d 取材,应用 Western blot 法测定各组大鼠脊髓 Wnt3a、β-catenin 分子表达,应用免疫组化法测定各组大鼠脊髓Wnt3a 蛋白的表达。结果术后1、3、5、7 d CCI、HBO 组 MWT 明显低于,TWL 明显短于 S 组(P <0.05)。术后1、3、5、7 d HBO 组 MWT 明显高于,TWL 明显长于 CCI 组(P <0.05)。术后7 d CCI组大鼠脊髓 Wnt3a、β-catenin 蛋白表达明显高于 S 组和 HBO 组(P <0.05)。术后7 d CCI 组大鼠脊髓背角 Wnt3a、β-catenin 蛋白表达明显高于 S 组和 HBO 组(P <0.05)。应用免疫组化法检测 Wnt3a蛋白的表达情况,与 Western blot 所检测蛋白表达情况相同。结论高压氧后处理能减轻大鼠神经病理性痛,其作用机制可能通过抑制脊髓 Wnt/β-catenin 信号通路来实现。
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Wnt通路关键信号分子Wnt3a在肝细胞性肝癌组织中的表达及临床病理学特征
目的：分析肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)组织中Wnt3a的表达及其临床病理学特征。方法：以自身配对法收集手术后切除的80例人HCC及癌旁组织，经病理学诊断均为HCC。制备组织芯片，采用抗人Wnt3a特异性抗体的免疫组织化学法，分析HCC组织中Wnt3a的表达与细胞内分布情况，结合患者的随访数据评估Wnt3a 表达的临床病理学特征。结果：Wnt3a 表达主要定位于胞浆和胞膜上，在 HCC 组中 Wnt3a 的阳性表达率为96.25%，显著高于自身对照癌旁组的46.25%(χ2=48.818，P<0.001)；HCC组Wnt3a过表达(3~6分)占71.25%，而癌旁组仅为13.75%；Wnt3a 高表达与HCC分化程度、伴有肝硬化、HBV 感染、TNM 分期和患者5年生存率显著相关(P<0.01)；COX 分析和Kaplan-Meier 生存曲线分析显示Wnt3a 过表达为HCC预后差的独立预测因素。结论：Wnt3a 过表达与HCC发生、发展密切相关，可能是HCC诊断和预后的特异标志物。
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Ad-Wnt3a-GFP的原核重组与真核包装
目的 对Ad-Wnt3a-GFP穿梭重组体与骨架载体进行原核重组和真核包装.方法 将Ad-Wnt3a-GFP穿梭重组体与骨架载体以电穿孔法共转染至原核包装细胞BJ5183；再将原核重组体用脂质体转入真核包装细胞293H进行包装.结果 ①电泳鉴定得到原核重组体；②得到完整的具感染能力的病毒颗粒；③病毒颗粒能表达标签蛋白.结论 获得了具有感染能力的病毒颗粒.
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miR-27a-3p通过Wnt3a/β-catenin信号通路抑制肺成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ 型胶原合成
目的 探讨microRNA-27a-3p(miR-27a-3p)对肺成纤维细胞I型胶原(ColⅠ)和III型胶原(ColⅢ)合成的影响及分子机制.方法 培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,转染miR-27a-3p模拟物/抑制物,实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-27a-3p水平;qPCR和Western blot测定ColⅠ、ColⅢ、Wnt3a表达;Western blot分析细胞核内 β-catenin水平.生物信息学预测miR-27a-3p与Wnt3a 3′-非翻译区(3′-UTR)靶向结合情况,并用双荧光素酶报告基因检测miR-27a-3p模拟物对Wnt3a 3′-UTR野生型和突变型荧光素酶活性的影响.给予Wnt3a/β-catenin信号通路抑制剂Dkk1预处理MRC-5细胞6 h,再用miR-27a-3p抑制物转染细胞48 h,qPCR和Western blot检测ColⅠ、ColⅢ表达.结果 miR-27a-3p模拟物明显增加miR-27a-3p水平,降低ColⅠ、ColⅢ、Wnt3a和 β-catenin表达,其抑制物的作用则相反,与对照组比较,差异均有显著性(P<0.01).Wnt3a 3′-UTR存在1个miR-27a-3p的结合位点,miR-27a-3p过表达减少野生型Wnt3a 3′-UTR荧光素酶活性(P<0.01),但对其突变型荧光素酶活性无影响(P>0.05).Dkk1预处理几乎完全逆转miR-27a-3p抑制物对ColⅠ、ColⅢ合成的诱导作用(P<0.05).结论 miR-27a-3p抑制肺成纤维细胞ColⅠ、ColⅢ生物合成,其机制与拮抗Wnt3a/β-catenin信号通路有关.
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CHIR99021和Wnt3a在小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化中的作用
目的 观察Wnt/β-catenin信号通路激活剂CHIR99021和Wnt3a在小鼠胚胎干细胞(mESCs)向心肌细胞分化中的作用.方法 采用悬浮一步培养法形成拟胚体(EBs),在EBs形成后第2天至第5天分别加入CHIR99021、Wnt3a,命名为CHIR99021组及Wnt3a组,将自动分化的EBs作为对照组.用免疫荧光法检测心肌特异性蛋白肌球蛋白重链(α-MHC)、肌钙蛋白T(cTNT)及膜联蛋白43(CX43)的表达.用qRT-PCR检测中胚层标志基因Brachyury、心肌前体细胞标志基因Nkx2.5、心肌细胞特异性标志基因α-MHC、cTnT和Cx43 mRNA的表达.用Western blot法检测 α-MHC、cTNT和CX43蛋白表达.结果 免疫荧光法提示各组mESCs能够向心肌细胞分化.在CHIR99021和Wnt3a诱导分化过程中,Brachyury在分化第7天达高峰;Nkx2.5、α-MHC、cTnT和Cx43的mRNA表达量随着分化时间的延长而逐渐增加,第15天增加为明显,且CHIR99021组和Wnt3a组高于对照组;CHIR99021组优于Wnt3a组(P<0.05,P<0.01).Western blot检测结果显示CHIR99021组和Wnt3a组α-MHC、cTNT和CX43蛋白表达量明显高于对照组,CHIR99021组高于Wnt3a组.结论 CHIR99021和Wnt3a在分化早期阶段通过活化Wnt/β-catenin信号通路可促进mESCs心肌细胞分化,且CHIR99021促心肌分化作用优于Wnt3a.
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Wnt3 a和TCF4在人卵巢癌中的表达及临床意义
目的：探讨Wnt信号通路中关键蛋白Wnt3a和TCF4在卵巢癌中的表达水平以及临床意义。方法 ELISA法检测10例卵巢癌患者手术前后和10例健康对照者血浆Wnt3a浓度,Western blot、qRT-PCR法检测卵巢癌患者与卵巢良性病变者的卵巢组织Wnt3a、TCF4水平。采用Western blot法检测卵巢癌细胞株 SKOV3与 HO8910中 TCF4的表达,采用dnTCF4质粒转染技术获得TCF4表达下降的 SK-OV3/dnTCF4细胞,使用细胞划痕实验比较卵巢癌细胞转移能力。结果卵巢癌患者血浆Wnt3a水平高于健康对照者(P<0．05),且术后血浆Wnt3a水平低于术前(P<0．05)；卵巢癌组织中 Wnt3a、TCF4水平高于卵巢良性病变者( P <0．05)；SKOV3的TCF4表达量高于HO8910且转移潜能也明显高于后者( P<0．05)；将SKOV3的TCF4敲低,其转移能力明显减弱( P<0．05)。结论 Wnt信号通路参与卵巢癌的发生发展,Wnt3a和TCF4有可能成为监测卵巢癌进展的临床指标之一。
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Wnt3a基因沉默对内皮祖细胞增殖的影响
目的 探讨wnt3a基因沉默对内皮祖细胞( EPCs)增殖的影响. 方法 体外分离、培养及鉴定EPCs. 将沉默型pEGFP-shRNA-wnt3a重组质粒转染EPCs; Western blot法分析wnt3a 在 EPCs 中的表达变化;MTT 分析 wnt3a 沉默对EPCs增殖的影响. 结果 鉴定培养的细胞为EPCs;Western blot法结果提示pEGFP-shRNA-wnt3a转染EPCs后明显抑制了 wnt3a 蛋白的表达. MTT 提示沉默型 pEGFP-shRNA-wnt3a转染组吸光度值明显低于空白对照组. 结论 成功分离、培养出EPCs,wnt3a有效沉默明显抑制EPCs的增殖,为进一步的实验提供了基础.
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Wnt3a影响大鼠海马神经干细胞增殖的体外研究
目的:探讨Wnt3a对胚胎大鼠海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)体外增殖的影响.方法:采用机械分离、无血清传代培养法,从胎鼠海马中获得NSCs,使用免疫荧光法对NSCs及其分化情况进行鉴定.将NSCs与5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)共孵育,观察Wnt3a对NSCs体外增殖情况的影响.结果:海马源胚胎NSCs具有增殖能力,可以传代培养,可分化为神经元和星形胶质细胞.与Brdu共孵育后,添加Wnt3a的实验组Brdu阳性率高于对照组(P<0.01).结论:使用机械分离、无血清培养的方法获得的NSCs具有增殖和多向分化能力,Wnt3a可以促进大鼠海马NSCs的体外增殖.
