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β-catenin、Wnt3a和Lgr5在不同宫颈病变组织中的表达及其意义
目的:检测β-catenin、Wnt3a和Lgr5在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变(包括CINⅠ、CINⅡ~Ⅲ)、宫颈癌(CC)中的表达情况,研究其在宫颈病变发生发展中的意义及可能机制.方法:采用免疫组织化学法(SP)检测正常宫颈、CIN及CC标本中β-catenin、Wnt3a和Lgr5的表达,并行相关性分析.结果:β-catenin、Wnt3a、Lgr5的阳性表达在正常宫颈组织组、CINⅠ组、CINⅡ~Ⅲ组、CC组4组中比较差异有统计学意义(P<0.05).宫颈癌中β-catenin和Wnt3a的表达呈正相关(P<0.05);β-cate-nin和Lgr5的表达也呈正相关(P<0.05);而宫颈癌中Lgr5和Wnt3a的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论:β-catenin、Wnt3a和Lgr5的异常表达可能影响宫颈癌的发生发展.
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加味附子理中汤治疗脾胃虚寒型慢性萎缩性胃炎临床研究
目的:观察加味附子理中汤治疗脾胃虚寒型慢性萎缩性胃炎的疗效及作用机制.方法:100例脾胃虚寒型慢性萎缩性胃炎患者被随机分为对照组和治疗组各50例.对照组服用替普瑞酮胶囊作为基础治疗,治疗组在此基础上使用加味附子理中汤,疗程4个月.治疗后对所有患者进行胃黏膜定标活检、临床主要症状评分.对胃黏膜病理标本肠上皮化生(IM)运用直观模拟法进行评分,免疫组织化学法检测标本中Wnt3A表达,并分别比较两组临床及病理疗效、胃黏膜IM和Wnt3A表达不同.结果:治疗4个月后,治疗组临床症状改善有效率86.96%,对照组72.73%,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).治疗组病理改善有效率89.13%,对照组63.64%(P<0.05).治疗后对照组胃黏膜IM较治疗前改善(P=0.033),而Wnt3A表达差异无统计学意义(P=0.519).治疗后治疗组胃黏膜IM较治疗前显著改善(P=0.000),Wnt3A表达也显著低于治疗前(P=0.003).治疗后治疗组胃黏膜IM、Wnt3A表达低于对照组(P<0.05).结论:加味附子理中汤辅助治疗脾胃虚寒型慢性萎缩性胃炎可明显改善临床症状及提高病理疗效,一定程度上逆转IM的机制可能与下调病变胃黏膜中Wnt3A表达相关.
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Wnt3a对骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响
[目的]探讨Wnt3a基因对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成软骨分化的影响.[方法]分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),携带Wnt3a及阴性对照基因(Mock)的慢病毒感染骨髓间充质干细胞,构建过表达Wnt3a骨髓间充质干细胞;采用甲苯胺蓝染色及QPCR观察Wnt3a对骨髓间充质干细胞成软骨分化能力的影响;使用MTT法观察Wnt3a对骨髓间充质干细胞增殖能力的影响.[结果]在0～72h内,实验组MTT法检测吸光值明显大于对照组(P＜0.05);BMSCs体外成软骨诱导后,实验组细胞团明显小于对照组,且甲苯胺蓝染色较浅;实验组与对照组比较,成软骨指标Col2A1、Aggrecan和SOX9的mRNA表达降低(P＜0.05).[结论]Wnt3a可促进骨髓间充质干细胞增殖,但抑制了骨髓间充质干细胞的成软骨分化.
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离体培养时Wnt3a对椭圆囊毛细胞再生的影响
目的 在小鼠椭圆囊体外培养模型上,通过Wnt3a激活经典WNT信号,与DMSO共同作用,研究其对椭圆囊毛细胞再生的影响.方法 40只小鼠随机分成8组.实验第一部分:小鼠椭圆囊经4 mmol/L新霉素处理后,在不同浓度(0、25、100、200 ng/mL) Wnt3a的培养液中继续培养ld,培养结束后对β-catenin,毛细胞纤毛及细胞核进行免疫荧光染色.实验第二部分:小鼠椭圆囊经4 mmol/L新霉素处理后,在含25 ng/mL Wnt3a的培养液中培养6d,分别在空白对照组,50 μmol/L DAPT、0.1％ DMSO、50 μmol/L DAPT +25 ng/mL Wnt3a培养液中继续培养7d,共培养14d.在所有培养过程中均加入10 μmoVL Brdu.培养结束后Brdu,Myocin7a及细胞核进行免疫荧光染色.结果 实验第一部分:在25 ng/mL Wnt3a组中可见β-catenin在支持细胞胞浆中有阳性表达,β-catenin阳性细胞数与其他各组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).实验第二部分:DMSO组中可见Myosin7a染色阳性细胞,对照组、Wnt3a+ DAPT组及DATP组中可见大量Brdu阳性细胞而未见Myosin7a染色阳性细胞,DMSO组中Myosin7a阳性细胞数与其他3组相比较,组间差异具有显著性(P＜0.01).结论 顺序联合应用Wnt3a和DMSO可通过激活经典WNT信号途径,促使椭圆囊内细胞向毛细胞样细胞转分化.
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Wnt3a在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中对神经发生的作用
目的：探讨Wnt3a在大鼠蛛网膜下腔出血（SAH）后早期脑损伤中对神经发生的作用及其机制。方法将健康雄性SD大鼠70只按随机数字表法分为假手术组、SAH组、Wnt3aⅠ组、Wnt3aⅡ组、Wnt3aⅢ组、Wnt3aⅣ组和DKK-1组。蛛网膜下腔出血的模型通过枕大池自体血注入法建立。应用免疫荧光技术观察各组大鼠海马的神经发生情况，应用蛋白印迹法检测各组大鼠海马中Wnt通路信号分子散乱蛋白-1（Dvl-1）和β-连环蛋白（β-catenin）的表达情况。结果随着Wnt3a剂量升高，各组中BrdU阳性细胞百分率呈上升趋势（P＜0．05），各组中Dvl-1与β-catenin的蛋白表达量也呈逐渐升高趋势（P＜0．05）；给予经典Wnt通路抑制剂DKK-1后，Dvl-1、β-catenin蛋白表达量与阳性细胞百分率均明显下降（P＜0．05）。结论在蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤中，Wnt3a可能通过经典Wnt信号通路促进神经发生，对中枢神经系统的修复与保护发挥积极作用。
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Wnt3a对结肠癌SW480细胞增殖的影响及作用机制
目的 探讨Wnt3a对结肠癌SW480细胞增殖的调控效应及其作用机制.方法 将培养好的结肠癌细胞SW480随机分为对照组和Wnt3a组,对照组仅给予DMEM培养基处理,Wnt3a组给予100 ng/mL Wnt3a培养.用MTT法检测细胞增殖情况,计算相对活细胞百分比;用平板克隆形成实验检测细胞克隆形成率(PE);用流式细胞术检测细胞周期分布;用Western blotting法检测细胞内醛脱氢酶1B1(ALDH1 B1)蛋白表达,RT-PCR技术检测ALDH1 B1 mRNA表达.结果 Wnt3a诱导24、48、72 h,Wnda组相对活细胞百分比高于对照组(P均＜0.05).Wnt3a诱导7d,Wnt3a组PE高于对照组(P＜0.05).Wnt3a诱导24h,Wnt3a组G1期细胞百分比低于对照组,G2期细胞百分比高于对照组(P均＜0.05).Wnt3a诱导48 h,Wnt3a组ALDH1B1蛋白、mRNA相对表达量高于对照组(P均＜0.05).结论 Wnt3a可能通过诱导ALDH1B1高表达促进结肠癌SW480细胞增殖.
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培哚普利对卵巢去势大鼠骨质疏松的作用及其机制
目的 探讨培哚普利改善卵巢去势大鼠骨质疏松的作用及其机理.方法 50只SD大鼠分为正常对照组、假手术组、卵巢去势组、培哚普利组、雌激素组各10只,假手术组大鼠切除双侧卵巢周边脂肪组织,卵巢去势组、培哚普利组和雌激素组大鼠摘除双侧卵巢,正常对照组大鼠不做处理.卵巢摘除后第5周,培哚普利组大鼠给予培哚普利4 mg/kg灌胃,雌激素组大鼠给予戊酸雌二醇胺1.2 mg/kg灌胃,正常对照组、假手术组和卵巢去势组大鼠给予相同体积蒸馏水灌胃,均1次/d,持续12周.12周后取各组大鼠左侧股骨采用双能X线骨密度测定仪测量骨密度,取右侧股骨采用实时荧光定量PCR法检测骨组织Wnt3a、LRP5、β-catenin mRNA表达水平.结果 雌激素组左侧股骨骨密度值(0.263±0.002)高于培哚普利组(0.131±0.023)、卵巢去势组(0.053±0.002)、假手术组(0.165±0.003)和正常对照组(0.133±0.002)(P＜0.01),正常对照组、假手术组、培哚普利组高于卵巢去势组(P＜0.05);雌激素组右侧股骨组织Wnt3a、LRP5、β-catenin mRNA表达水平(4.6±0.3、1.0±0.1、0.258±0.004)明显高于卵巢去势组(1.0±0.2、0.3±0.1、0.057±0.002)和培哚普利组(3.1±0.7、0.4±0.2、0.165±0.003),培哚普利组高于卵巢去势组(P＜0.05).结论 培哚普利可增加卵巢去势大鼠骨密度,其机制可能是通过上调Wnt3 a/LRP5/β-catenin而促进前成骨细胞增殖和分化,从而促进骨形成.
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Wnt3a重组真核载体的构建及其在晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞的表达
目的 构建Wnt3a真核表达载体并检测其在SRA01/04细胞中的瞬时表达情况.方法 采用cDNA文库设计的含有Wnt3a cDNA全长序列模板的菌种,PCR法获得Wnt3a片段,与pcDNA3连接,进行酶切鉴定及测序.重组质粒瞬时转染人晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞,检测Wnt3a蛋白表达情况.结果 Wnt3a-pcDNA3表达载体基因测序与Genebank报告基因序列一致,Wnt3a-pcDNA3瞬时转染至SRA01/04细胞,Wnt.3a蛋白表达明显增强;正常人晶状体上皮细胞系SRA01/04中,仅有少量Wnt3a表达.结论 成功构建Wnt3a-pcDNA3真核表达,获得Wnt3a/SRA01/04细胞系,为研究后囊膜混浊的病理机制和防治提供实验基础.
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输注Wnt3a基因修饰的骨髓间充质干细胞减轻小鼠急性移植物抗宿主病
目的 探讨联合输注经Wnt3a基因修饰的MSC减轻小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的作用及其可能机制.方法 以C57BL/6小鼠为供鼠,以Balb/c小鼠为受鼠,建立小鼠allo BMT模型.采用随机数字表法将受鼠分为4组:(1)移植对照组(A组):经受鼠尾静脉仅输注供鼠骨髓细胞5×106个；(2) aGVHD组(B组):经受鼠尾静脉输注供鼠脾细胞5×106个及骨髓细胞5×106个；(3)aGVHD+空载体组(C组):经受鼠尾静脉输注供鼠脾细胞5×106个、骨髓细胞5×106个及转染了空载体pAd-GFP的MSC 1×106个；(4)实验组(D组):经受鼠尾静脉输注供鼠脾细胞5×106个、骨髓细胞5×106个及经Wnt3a基因修饰的MSC1×106个.移植后监测各组受鼠的一般表现和存活情况,观察aGVHD的发生情况,检测受鼠脾脏中供者来源的T淋巴细胞数量变化及白细胞介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)水平.结果 A组受鼠的存活时间均超过60d；B、C、D组受鼠的存活时间分别为(19.1±6.19)d、(32.6±19.6)d和(47.2±15.6)d,D组受鼠的存活时间较B组和C组明显延长(P＜0.05).移植后,B、C、D组受鼠的aGVHD评分分别为(8.0±0.41)分、(6.7±0.29)分和(4.0±1.0)分,D组受鼠的aGVHD评分较B组和C组明显降低(P＜0.05),且病理分级明显减轻.移植后3和5d时D组受鼠脾脏中供者T淋巴细胞的数量和增殖速度均较B组和C组明显降低(P＜0.05),并且移植后7、14、21、28 d时D组受鼠血清IL-2和IFN-γ水平均较B组和C组明显减少(P＜0.05).术后60d时,长期存活受鼠的骨髓细胞中H-2Kb细胞的嵌合率均在95％～100％.结论 联合输注经Wnt3a基因修饰的MSC可更有效的减轻小鼠allo-BMT后的aGVHD,这可能与Wnt3a的过表达激活了MSC的Wnt/β-catenin信号通路,从而抑制供者T淋巴细胞的早期激活和扩增及抑制IL-2和IFN-γ的表达有关.
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Wnt3a联合骨形态发生蛋白2对骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响
目的 观察经典Wnt/β-catenin以及骨形态发生蛋白(BMP)信号通路对大鼠骨髓来源的间充质干细胞(BMSCs)体外增殖以及向成骨方向分化的影响.方法 应用密度梯度离心联合贴壁筛选法分离培养骨髓间充质干细胞并分4组:对照组、Wnt组、BMP组、Wnt3a和BMP-2联合组,在不同时间点用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖活性,碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定、Yon Kossa染色观察细胞向成骨分化和基质矿化程度.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测成骨特异性标志物表达.结果 培养第7天,CCK-8测吸光度值联合组为0.845,Wnt组为0.738,明显高于对照组0.409(P＜0.05).培养第6天和第12天,ALP活性吸光度值联合组为63.8和144.3,BMP-2组为40.8和104.1,均明显高于对照组7.3和18.9(P ＜0.05).培养14 d后,联合组骨钙素mRNA表达量高于对照组,而Runx2及Osterix表达量与其他组比较增高不显著.培养3周后,Yon Kossa染色显示联合组钙结节数量及大小均高于对照组.结论 Wnt3a因子和骨形态发生蛋白-2联合诱导能有效地促进骨髓间充质干细胞增殖及向成骨方向分化.
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Wnt3a调控大鼠骨髓间充质干细胞向胆碱能神经元分化的实验研究
目的 探讨经典Wnt/β-catenin通路对大鼠MSCs在体外分化为神经元和胆碱能神经元的调节作用.方法 取SD大鼠股骨和胫骨的骨髓,利用差速贴壁法分离、扩增及纯化MSCs,绘制生长曲线;应用免疫荧光和Western-Blot的方法检测Wnt3a处理后p-catenin蛋白的分布变化;取第4代MSCs分为3组;A组为空白对照组,用空白DMEM培养基培养细胞;B组为诱导分化对照组,用含100 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast grown factor,bFGF)、5 umol/L维甲酸(retinoic acid,RA)的DMEM诱导培养基培养细胞;C组为Wnt3a诱导分化组,在上述诱导培养基中加入50 ng/mL Wnt3a培养细胞;用形态学观察和Western-Blot的方法比较各组对MSCs向神经元及胆碱能神经元分化的影响;应用形态学观察和Western-Blot的方法比较各组对MSCs向神经元及胆碱能神经元分化的影响.结果 利用差速贴壁法细胞传至P3代时形态趋于一致,呈均匀分布生长.P3代细胞的生长曲线显示,接种后的第1、2d细胞处于潜伏期;第3、4d细胞进入对数生长期;第5d进入平台期.P4代细胞高度表达CD29和CD44(阳性率分别为99.9％和73.2％).Wnt3a处理组细胞的p-catenin在细胞核的分布较对照组细胞显著增多(P＜0.01).诱导分化细胞组中A组细胞可检测到少量神经元的标记物,但未检测到胆碱能神经元的标志物,B组和C组细胞均可检测到神经元和胆碱能神经元的标志物,B组和C组分化为神经元的比例较A组显著增高(P＜0.01);C组分化为胆碱能神经元的比例较B组显著增高(P＜0.01).结论 Wnt3a能够促进MSCs内的β-catenin的核转移激活经典Wnt信号通路,促进体外培养的MSCs向胆碱能神经元分化.
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静态张应力作用下人牙周膜成纤维细胞β-catenin和Wnt3a蛋白的表达
目的:研究人牙周膜成纤维细胞在不同大小机械张应力作用下Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin和Wnt3a蛋白的表达变化.方法:运用酶解组织块法体外培养人牙周膜成纤维细胞,将细胞按加力时间的不同(2 h、4h、6 h)分为3组,每组再按形变率不同将其分为8％、12％和16％3个亚组,并取加力时间0h、形变率0％作为对照组.用western blot技术检测细胞在不同时间点和不同形变率作用下Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin和Wnt3a蛋白的表达变化.结果:Western blot结果显示,人牙周膜成纤维细胞在机械力加载后β-catenin和Wnt3a蛋白表达显著减少(P＜0.05).在加力时间相同的组内(2h、4h、6 h),β-catenin和Wnt3a蛋白表达随着形变率的增大而逐渐减少(P＜0.05).结论:β-catenin和Wnt3a参与了静态张应力作用下牙周膜成纤维细胞的代谢,机械力对牙周膜成纤维细胞中Wnt/β-catenin信号通路有抑制作用.
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Wnt3a 联合 BM P7对 BM SC 成骨分化的初步研究
目的：探讨Wnt蛋白（Wnt3a）联合骨形态发生蛋白（BMP7）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）成骨分化的作用。方法：选择SD大鼠12只，进行骨髓间充质干细胞的分离、纯化、培养，并采用不同的方法进行骨髓间充质干细胞的体外诱导分化，按干预的不同分为4组：Wnt3a组、BM P‐7组、联合诱导组以及对照组，对比不同方法对成骨分化的诱导作用差异。结果：联合诱导组的 IA 值为（121627±261），显著低于Wnt3a组、BMP‐7组、对照组的（147173±348）、（146557±361）、（182659±409），并且其有大量橘红色矿化结节形成，较其他三组更多，组间差异比较均具有统计学意义（P＜0．05）。结论：Wnt3a联合BMP7诱导BMSC成骨分化的效果显著优于单独采用Wnt3a或BM P7进行诱导，值得在临床上推广使用。
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糖尿病大鼠钙化血管中Msx2和Wnt3a的表达
目的 研究糖尿病对血管钙化的影响及Msx2和wnt3a基因在钙化血管中的表达变化.方法 将48只雄性wistar大鼠随机分为四组:维生素D3和尼古丁诱导的单纯血管钙化组(n=12)、链脲佐菌素诱导的单纯糖尿病组(n=12)、链脲佐菌素联合维生素D3和尼古丁诱导的糖尿病合并血管钙化组(n=12)和正常雄性Wistar大鼠为正常对照组(n=12).测定大鼠血糖、血清胰岛素、总胆固醇和甘油三酯水平,以血管von Kossa染色、血管钙含量和碱性磷酸酶活性作为判断血管钙化程度的指标,测定大鼠血管中Msx2和wnt3a mRNA 的表达.结果 与正常对照组相比,单纯血管钙化组大鼠血管中Msx2和wnt3a mRNA 相对表达量有所升高(P<0.05),但血管钙含量和碱性磷酸酶活性无明显变化.与正常对照组及单纯血管钙化组相比,糖尿病合并血管钙化组大鼠的血管中,可见沿中膜弹力层内广泛分布的钙盐沉积,大鼠血管中钙含量和碱性磷酸酶活性以及血管内Msx2和wnt3amRNA 相对表达量明显增高(P<0.05).结论 糖尿病可以明显加速血管钙化的发生和发展.在糖尿病大鼠钙化血管中,骨形成过程中的转录因子Msx2和Wnt3a表达增高,提示血管钙化是一个类似于骨形成的过程,Msx2和Wnt3a 参与血管钙化病变的发生.
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创伤性颅脑伤后小鼠皮层和海马Wnt3a和β-Catenin的表达变化
目的 探讨创伤性脑损伤后小鼠皮层和海马Wnt3a和β-Catenin的表达及其意义.方法 在小鼠创伤性脑损伤模型基础上,采用免疫印迹法和免疫组织化学法检测创伤性脑损伤后Wnt3a和β-Catenin的蛋白变化.结果 Wnt3a和β-Catenin在对照组的脑组织中表达较低.创伤性脑损伤后lh,皮层和海马区 β-Catenin和Wnt3a的含量开始增加.与对照组相比,伤后6h和第7天,β-Catenin和Wnt3a蛋白表达显著增加(P＜0.05).免疫荧光染色结果显示,脑损伤24 h后,β-Catenin和Wnt3a在小鼠皮层和海马表达量均增加.结论 小鼠创伤性脑损伤后早期和恢复期,Wnt3a和β-Catenin 的蛋白水平在皮层和海马显著增高,这提示Wnt3a和β-Catenin可能在创伤性脑损伤的病理生理机制中发挥着重要的作用.
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六味地黄汤对快速衰老小鼠认知功能及Wnt3a、GSK-3β表达的影响
目的 研究六味地黄汤对D-半乳糖(D-gal)致快速衰老小鼠认知功能及Wnt3a、GSK-3β表达的影响.方法 以500 mg/(kg·d)的D-半乳糖颈部皮下注射复制快速衰老小鼠模型,将动物随机分为正常组,模型组,六味地黄(简称六味)高、中、低剂量组,VitE组,给予相应干预,历时8周.观察小鼠的体质量变化,采用Morris水迷宫实验评价小鼠的认知功能,免疫组化法、RT-qPCR法检测Wnt3a、GSK-3β的表达.结果 六味地黄汤对快速衰老小鼠体质量及水迷宫实验的影响:模型组与正常组比较,差异具有显著统计学意义(P＜0.01);各用药组与模型组比较,差异具有显著统计学意义(P＜0.01);六味高剂量组与其他用药组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05);六味地黄汤对快速衰老小鼠认知功能及Wnt3a、GSK-3β表达的影响:模型组与正常组比较,差异具有显著统计学意义(P＜0.01),各用药组与模型组比较,差异具有显著统计学意义(P＜0.01),六味高剂量组与其他用药组比较,差异具有显著统计学意义(P＜0.01).结论 六味地黄汤可以有效改善D-半乳糖致快速衰老小鼠的学习记忆障碍;增加衰老小鼠Wnt3a的表达,激活Wnt信号通路,下调GSK-3p的表达可能是六味地黄汤延缓衰老健脑益智的作用机制.
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胃炎Ⅰ号对胃癌前病变大鼠Wnt信号通路Wnt1,Wnt3a,Cyclin D1表达的影响
目的 探讨健脾化瘀解毒复方胃炎Ⅰ号对胃癌前病变(GPL)的疗效及其分子学机制.方法 将SD大鼠随机分为空白对照组,模型组,维酶素组(0.2 g·kg-1),胃炎Ⅰ号组(7.5 g·kg-1).采用N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)水溶液自由饮用、饥饱失常、耗气泻下法复制GPL大鼠模型.观察胃炎Ⅰ号连续治疗10周后对GPL大鼠Wnt信号通路Wnt1、Wnt3a、细胞周期蛋白D1(Cyclin-D1)表达的影响.结果 模型组大鼠胃黏膜上皮的Wnt1、Wnt3a、Cyclin D1表达评分均较空白对照组显著增加(P＜ 0.05,P＜0.01);胃炎Ⅰ号能显著拮抗模型组出现的上述变化(P＜0.01).结论 胃炎Ⅰ号能下调Wnt信号通路Wnt1,Wnt3a,Cyclin D1的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路的异常激活,能在一定程度上阻断和逆转胃黏膜恶性转变.
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护骨素和Wnt3a、Wnt5a在口腔正畸骨改建中的表达
目的:研究大鼠磨牙移动过程中护骨素和wnt3a、wnt5a在牙周组织中的表达及其意义.方法:采用成年Wistar大鼠,制备大鼠磨牙向近中移动的正畸牙移动模型,于牙齿移动1,3,5,7,10,14 d分别取材,采用免疫组织化学方法检测压力侧牙周组织中护骨素及wnt3a、wnt5a的蛋白表达水平.结果:护骨素在大鼠磨牙压力侧随着加力时间的增加表达逐渐增强.第7天为峰值;wnt3a、wnt5a在六个不同时间点均呈阳性表达,但与加力时间无相关关系.结论:在正畸力作用下,护骨素和Wnt3a、wnt5a的表达可能是导致成年正畸特点的分子机制之一,有可能为正畸治疗提供新的研究方向.
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大鼠口腔正畸骨压力侧Wnt3a和Wnt4的表达
目的:通过检测大鼠口腔压力侧Wnt3a和Wnt4是否表达,初步探讨其与口腔正畸骨改建的关系.方法:共采用20只成年雄性Wistar大鼠,分别在正畸加力4个时间点:第1,3,7,14天取材,用于HE染色和免疫组织化学检测.结果:免疫组化中,Wnt3a在4个时间点均有阳性细胞表达,Wnt4未检测到.结论:在大鼠口腔正畸骨改建中Wnt3a表达与口腔正畸相关.
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Wnt3a协同BMP9调控间充质干细胞成骨分化及机制研究
目的:探讨经典Wnt信号通路与骨形态发生蛋白9(Bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)成骨的相互影响及分子机制.方法:以小鼠骨髓来源MSCs C3H10T1/2为目的细胞,用Wnt3a上调经典Wnt信号通路,联合BMP9作用于细胞,通过碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性测定、钙盐沉积实验、real time PCR、免疫细胞化学染色等方法观测BMP9与经典Wnt信号通路联合后对MSCs成骨分化的影响.结果:Wnt3a明显促进了BMP9诱导的ALP活性的增加[F=264.962,P=0.000；t(BMP9+Wnt3a)-BMP9=7.19,P=0.000；t(BMP9+Wnt3a)-Wnt3a=16.36,P=0.000],同时也明显增加了成骨标志物骨钙蛋白(Osteocalcin,OC) [F=3920.102,P=0.000；t(BMP9+Wnt3a)-BMP9=39.10,P=0.000；t(BMP9+Wnt3a)-Wnt3a=62.56,P=0.000]和骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)[F=1935.824,P=0.000; t(BMP9+Wnt3a)-BMP9=40.88,P=0.000；t(BMP9+Wnt3a)-Wnt3a=56.42,P=0.000]的表达以及Runx2的mRNA的表达[F=3635.980,P=0.000；t(BMP9+Wnt3a)-BMP9=79.37,P=0.000；t(BMP9+Wnt3a)-Wnt3a=86.96,P=0.000],并且还促进了钙盐沉积.结论:Wnt3a与BMP9相互协同诱导MSCs的骨向分化,其中成骨转录因子Runx2可能作为二者的交汇点起了重要作用.
