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NGF对哮喘豚鼠下呼吸道及内脏感觉传入部位TNF-αmRNA表达的上调作用
目的探讨神经生长因子(NGF)在哮喘发病中的作用及其神经免疫调节机制.方法应用原位杂交方法结合显微图像分析,研究实验性哮喘豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位肿瘤坏死因子-αmRNA(TNF-αmRNA)表达的变化以及NGF抗体对其的影响.结果生理盐水组与单纯致敏组TNF-α mRNA的表达没有显著差异(P＞0.05);与这两个对照组相比,哮喘豚鼠TNF-α mRNA的表达在气道上皮、肺内炎性细胞、C7～T5段脊神经节及脊髓后角内均明显上调(P＜0.01);在哮喘+NGF抗体组,上述部位内TNF-α mRNA的表达明显低于哮喘组(P＜0.01).结论 NGF诱发TNF-α的表达可能是NGF参与哮喘发病的机制之一,NGF抗体抑制哮喘时下呼吸道和内脏感觉传入部位TNF-α mRNA的表达可能是治疗哮喘的新途径.
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阻断神经生长因子信号部分抑制雌二醇对恒河猴视网膜血管内皮细胞的作用
目的研究神经生长因子(NGF)信号系统在雌激素调控视网膜血管内皮细胞中的作用.方法选用恒河猴视网膜-脉络膜血管内皮细胞系RF/6A,RT-PCR检测雌激素受体(estrogen receptor,ER)、NGF及其受体在视网膜血管内皮细胞中的表达.分别观察雌二醇(estradiol,E2)、NGF及VEGF、EGF、BDNF等对血管内皮细胞活力(MTT法)的作用.用流式细胞术-细胞周期法检测E2、NCF及E2与K252a共同处理组的凋亡率.NGF抗体和选择性TrkA拮抗剂K252a研究对上述作用的阻断效应.同样的分组进行细胞划痕修复实验.96孔板AngioMatrix胶上观察E2及NGF对RF/6A内皮细胞管腔形成能力的影响. 结果RF/6A在细胞外基质胶上可形成管腔样结构.RT-PCR检测到ER-α、NGF及NGF受体TrkA的mRNA.1nmol/L～100nmol/L E2可以剂量依赖性的增强细胞活力及单层细胞的划痕修复能力,其增强作用可部分被NGF抗体及100nmol/L的K252a选择性阻断.凋亡率检测显示各组凋亡率相近.E2可促进RF/6A形成管腔,但不能被NGF抗体、TrkA阻断.结论除VEGF外,E2还可通过NGF信号系统对视网膜血管内皮细胞活力、划痕修复起促进作用.但结果提示,阻断NGF信号系统不影响E2促RF/6A形成管腔的作用.
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神经生长因子诱导神经干细胞定向迁移
目的探讨体外培养环境中神经生长因子(NGF)诱导神经干细胞定向迁移的特性. 方法运用半固体培养法结合单细胞克隆技术动态观察神经干细胞迁移情况,采用免疫细胞化学技术鉴定迁移细胞的类别. 结果在具有NGF浓度梯度的培养体系中,克隆细胞迁向高浓度NGF区域.在NGF源附近,这种定向迁移更加明显.迁移细胞随时间的延长表达神经元特异性抗原.在含均匀浓度NGF的培养基中细胞从球团向四周短距离的扩散,无方向性.所有迁出细胞随时间的延长进一步分化成熟,干细胞比率下降. 结论 NGF有诱导神经干细胞定向迁移的作用.
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CGRP和NGF对全脑缺血再灌注大鼠脑组织Erk mRNA表达的调节作用
目的检测大鼠脑缺血再灌注后细胞外信号调节蛋白激酶信使RNA(Erk mRNA)的表达,探讨降钙素基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对脑组织的保护作用. 方法采用颈动脉负压分流法制作大鼠脑缺血再灌注模型,采用原位杂交及显微图像分析方法检测海马及皮质内Erk的表达.结果大鼠缺血再灌注海马及皮质内Erk mRNA较正常组增多(P＜0.05),而注射CGRP或NGF后Erk mRNA明显高于缺血再灌注组(P＜0.01),两者联合应用效果更加显著(P＜0.05).结论CGRP及NGF可能参与缺血神经元Erk mRNA的调节,两者对缺血神经元有协同修复作用.
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孕鼠被动吸烟对子代学习记忆功能及海马神经生长因子含量的影响
目的探讨孕鼠被动吸烟对子代学习记忆功能的影响及其机制.方法采用反映学习记忆功能的水迷宫法测试大鼠神经行为的改变,IRMA法测定大鼠海马神经生长因子的含量变化. 结果孕期被动吸烟使仔鼠学习记忆能力下降,海马神经生长因子含量明显降低.结论孕期被动吸烟降低仔鼠学习记忆功能与海马神经生长因子代谢的失调有关.
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CGRP及NGF对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马cAMP反应元件结合蛋白磷酸化的影响
目的 讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP) 神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响.方法 用线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Western blotting和图像分析方法检测大鼠手术侧海马CA1区CREB和p-CREB表达. 结果缺血再灌注组海马CA1区CREB表达较假手术组减少,p-CREB表达高于假手术组(P<0.05);CGRP组和NGF组CA1区的CREB和p-CREB表达均高于缺血再灌注组(P<0.05);CGRP与NGF联合应用时CREB和p-CREB表达分别高于CGRP组和NGF组(P<0.05). 结论 CGRP及NGF上调局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB和p-CREB的表达,CGRP与NGF联合应用则作用更强,CGRP及NGF对缺血神经元的保护作用可能是通过上调神经元内CREB和p-CREB来实现的,CGRP与NGF对缺血神经元的保护有协同作用.
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中药神经再生素作用于背根神经节细胞过程中基因的表达变化
目的探讨中药神经再生素(NRF)作用的分子生物学机制. 方法采用半定量PCR方法,观察和比较NRF组、NGF组和空白对照组中生长相关蛋白43(GAP-43)、低分子量神经丝蛋白(NF-L)、翻译延伸因子2A3-2(EF-Ts,RRAJ5161)和锌指样蛋白DDP2(F196315)基因水平的表达变化.结果在NRF作用于离体培养的DRG细胞过程中,GAP-43、NF-L、2A3-2和DDP2基因表达在不同时间呈不同程度的上调.结论NRF促神经生长的作用与NGF相似,可作用于蛋白翻译水平,促进神经细胞的生长;作用于细胞骨架蛋白水平,维持神经细胞的形态和神经细胞正常生理活动;作用于神经细胞特异的蛋白水平,具有维持细胞生存及促进神经细胞突起生长的作用;还可以作用于反式因子调控水平,影响相关基因的表达,促进神经元存活和神经突起延伸.
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卵泡刺激素对体外孵育大鼠下颌下腺分泌NGF和EGF的影响
目的 通过确定卵泡刺激素(FSH)与神经生长因子(NGF)或表皮生长因子(EGF)在大鼠下颌下腺的共定位关系,研究FSH在体外对大鼠下颌下腺组织分泌NGF和EGF的影响. 方法 采用邻片免疫组织化学共定化方法 ;体外孵育大鼠下颌下腺组织并给予不同浓度FSH,应用酶联免疫分析方法 检测上清液中NGF和EGF的含量. 结果 大鼠下颌下腺浆液性腺上皮细胞、颗粒曲管及大于颗粒曲管的导管上皮细胞均呈FSH、NGF及EGF免疫反应阳性,FSH与NGF或EGF有共存性;当FSH浓度大于10-5～10-6时,NGF或EGF分泌量随FSH浓度的递减而降低;当FSH浓度小于10-5～10-6时,NGF或EGF分泌量随FSH浓度的递减而升高. 结论 FSH在体外对NGF或EGF分泌具有相同的双向调节作用,FSH可能对下颌下腺内分泌具有调节功能.
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实验性铅中毒对大鼠海马神经生长因子基因表达的影响
目的观察实验性铅中毒对大鼠海马神经生长因子(NGF)基因表达的影响,探讨铅致学习记忆损害的分子毒理学机制.方法逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和原位杂交法.结果正常大鼠海马组织可表达NGF mRNA,铅染毒后海马NGF mRNA含量显著下降.海马组织中神经生长因子mRNA表达量与铅染毒时间呈负相关.结论铅可使海马组织神经生长因子基因表达下降.
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神经生长因子对穹窿海马伞切割后海马自体神经干细胞增殖和向神经元分化的影响
目的 探讨切割穹窿海马伞及脑室给予神经生长因子(NGF)后,对大鼠海马自体神经干细胞增殖和分化为神经元的影响.方法 12只SD大鼠,随机分成给药组和对照组,每组6只,切割右侧穹窿海马伞,两组切割后即时及第2d、4d向侧脑室分别注射NGF和人工脑脊液, 并在术后第3～7d每日腹腔注射2次BrdU.于术后28d灌注取脑、冷冻切片,行BrdU/NF-200免疫荧光双标检测.结果 海马齿状回内BrdU阳性细胞数,给药组和对照组切割侧明显多于正常侧,给药组切割侧和正常侧分别多于对照组切割侧和正常侧;海马齿状回内的BrdU/NF-200双标神经元数,给药组切割侧多,给药组正常侧和对照组切割侧较少,而对照组正常侧则无.结论 切割穹窿海马伞后,可致大鼠海马齿状回自体神经干细胞增殖加快并向神经元分化,脑室施加 NGF可促进其增殖和分化.
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降钙素基因相关肽和神经生长因子对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达的影响
目的探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达的影响.方法原位杂交和免疫组织化学结合显微图像分析方法.结果假手术组大鼠纹皮质c-jun mRNA表达弱;缺血组较假手术组c-jun mRNA表达显著强(P＜0.01);CGRP组和NGF组c-jun mRNA表达弱于缺血组(P＜0.05);CGRP和NGF合用组c-jun mRNA表达明显弱于缺血组(P＜0.01),分别弱于CGRP组和NGF组(P＜0.05).假手术组大鼠纹皮质未见c-Jun蛋白表达;缺血组较假手术组c-Jun蛋白表达明显强(P＜0.01),缺血后再灌注3 h强,1 d、3 d时弱;CGRP组和NGF组c-Jun蛋白表达较缺血组弱(P＜0.05);CGRP和NGF合用组较缺血组c-Jun蛋白表达明显弱(P＜0.01),分别弱于CGRP组和NGF组(P＜0.05);CGRP和NGF合用组缺血后再灌注3 h时强,1 d、3 d时弱. 结论CGRP和NGF分别抑制全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-junmRNA及蛋白表达,联合应用显著抑制全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达,两者对保护缺血神经元可能有协同作用.
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哮喘豚鼠下呼吸道及内脏传入部位NGF表达的研究
目的探讨哮喘豚鼠下呼吸道和内脏传入系统神经生长因子(NGF)的作用. 方法利用免疫组织化学和原位杂交结合显微图像分析,研究哮喘豚鼠下呼吸道和内脏传入系统NGF免疫反应及mRNA表达的变化. 结果与对照组相比,哮喘豚鼠NGF免疫反应在气道上皮、C7～T5段脊神经节及脊髓背角明显上调(P<0.01),NGF mRNA表达在气道上皮明显增多(P<0.01),而在C7～T5段脊神经节及脊髓背角却未见明显改变. 结论气道上皮、C7～T5段脊神经节及对应节段脊髓背角的NGF可能参与哮喘的发病过程;C7～T5段脊神经节细胞及对应节段脊髓背角神经细胞本身能合成NGF.
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神经生长因子促进海马胆碱能神经再生过程中Lhx8的动态表达
目的探讨神经生长因子（ NGF）促进海马胆碱能神经再生与同源盒基因Lhx8之间的关系。方法SD大鼠72只，在制备切割右侧穹隆海马伞模型和NGF侧脑室注射的基础上，分为对照组、切割组、NGF组、切割联合NGF组；Real-time PCR和Western blotting分别检测各组动物海马中Lhx8蛋白的表达变化；免疫荧光技术检测各组动物海马齿状回颗粒下层中胆碱乙酰转移酶（ ChAT ）/Lhx8双标细胞数。结果切割组和NGF组中Lhx8蛋白的表达量较对照组增高，切割联合NGF组增高更为明显，且Lhx8基因表达也增高；NGF组和切割联合NGF组中海马齿状回颗粒下层（ SGZ）中的ChAT/Lhx8双标细胞数也较对照组和切割组明显增多。结论侧脑室注射NGF促进海马胆碱能神经再生与Lhx8的高表达有关。
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不同年龄双峰驼海马的形态学变化及其神经生长因子的表达
目的 探讨胎驼、青年双峰驼及成年双峰驼海马不同区域内主要神经元形态特征变化及神经生长因子(NGF)的表达情况.方法 应用常规石蜡切片Nissl染色及免疫组织化学方法,对胎驼、青年双峰驼和成年双峰驼海马CA1 ～ CA3区锥体细胞、齿状回(DG)颗粒细胞的形态学变化进行研究,并观察了NGF的表达变化情况.结果 Nissl染色结果显示,从胎驼到青年双峰驼再到成年双峰驼,海马各区锥体细胞和颗粒细胞的体积增大、密度降低、细胞的核体比减小.NGF免疫组织化学结果表明,成年双峰驼海马锥体细胞中NGF的表达量显著高于胎驼和青年双峰驼(P＜O.01),颗粒细胞中NGF的表达量逐渐增加.结论 从胎驼到成年双峰驼,海马中的主要神经元不断成熟,从体积小且少有突起和分支的神经元发育成为体积较大、具有明显形态和功能的神经元.NGF在成年双峰驼海马神经元中表达量高,表明NGF可调节已分化的神经元,使其形态和功能发生改变以促进成年双峰驼与海马相关的学习记忆功能的逐步完善.
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神经生长因子在食管鳞癌细胞中的表达及分泌
目的 探讨神经生长因子(NGF)与食管鳞癌细胞分化的相关性.方法 采用有限稀释法分选出圆形和梭形单细胞克隆,采用无血清悬浮培养获得细胞球细胞,贴壁的Eca109细胞分别在含血清和不含血清培养基中培养48h;分别采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术和免疫印迹法,检测NGF在食管鳞癌细胞中mRNA水平和蛋白水平的表达;免疫荧光技术检测NGF在食管鳞癌细胞中的表达定位;免疫组织化学法检测食管鳞癌组织中NGF的表达定位;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测NGF在Eca109细胞培养基中的分泌情况.结果 在Eca109细胞中能检测到NGF的mRNA水平和蛋白水平的表达,其中NGF在细胞球细胞中的mRNA水平和蛋白水平的表达量高.食管癌组织中检测到NGF表达于细胞质.Eca109细胞在无血清培养条件下能够分泌NGF,且明显高于含血清培养基中的含量.结论 食管癌细胞系Eca109表达并分泌NGF,并且食管癌组织中表达NGF,NGF可能在维持食管鳞状细胞癌的干细胞特性发挥了重要作用.
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雄激素对大鼠心内神经节神经生长因子表达的影响
目的观察神经生长因子(NGF)在成年雄性大鼠、雌性大鼠、雌性大鼠睾酮处理组、睾丸切除大鼠、睾丸切除后睾酮替代大鼠心房后壁心内神经节的表达及变化. 方法免疫组织化学染色. 结果各组大鼠心内神经节均存在NGF阳性神经元,但睾丸切除组大鼠心内神经节NGF阳性神经元的数量明显减少,表达明显降低. 结论心内神经节细胞内含NGF;雄激素可能影响心内神经节细胞的NGF表达.
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神经生长因子在大鼠心内神经节的表达
目的观察成年和中老年大鼠心内神经节神经生长因子(NGF)阳性神经元的存在及其变化. 方法免疫组织化学法. 结果成年及中老年大鼠心内神经节均存在NGF阳性神经元,但中老年大鼠心内神经节NGF阳性神经元明显减少,表达明显降低. 结论心房后壁心内神经节存在NGF阳性神经元,并随年龄增加表达减少,提示NGF表达的减少可能与心脏功能的退化相关.
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小鼠骨髓基质干细胞体外诱导分化为NF-200和神经胶质酸性纤维蛋白免疫阳性细胞
文献报道,存在于成年动物骨髓中的骨髓基质干细胞能横向分化成身体绝大多数组织的细胞,包括神经元和神经胶质细胞,其中,微环境因素的影响起决定性作用.我们应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),维甲酸(all-trans-retinoic acid,RA),神经生长因子(NGF)等后,观察成年小鼠骨髓基质干细胞在离体被诱导分化成NF-200和神经胶质酸性纤维蛋白(glial acidic fibrillary protein,GFAP)阳性细胞的可能性,为进一步了解成年动物骨髓基质干细胞在体内被诱导分化成有功能的神经元的可能性奠定实验基础.
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异硫氰酸荧光素标记的神经生长因子缓释微球的制备及评价
目的 探讨异硫氰酸荧光素(FITC)标记的神经生长因子缓释微球的制备,并对其进行体内外评价.方法 采用水-油-水的双乳化技术制备FITC标记的神经生长因子缓释微球.利用扫描电镜和荧光显微镜对其形态特征进行观察,并对其体内外释放情况进行研究.结果 制备的FITC标记的神经生长因子缓释微球包封率和载药量分别为(97.9±8.9)%和(4.90±0.56)%.扫描电镜结果显示所制备的微球呈圆形、形态规整、粒径分布较均匀.荧光显微镜结果显示所包载的蛋白类药物在微球内旱随机分布.缓释微球体外持续释放5周后,有73%的蛋白释放出来;荧光示踪显示在体内能够持续释放达5周以上.结论 采用水-油-水的双乳化技术制备的缓释微球可以将生物大分子药物如神经生长因子成功运载到脑内.
关键词： 聚乳酸羟基乙酸复合物 异硫氰酸荧光素 神经生长因子 微球 -
神经生长因子对小鼠红系造血的影响及内在机制研究
本研究探讨神经生长因子(NGF)对红系造血的影响及内在机制.采用流式细胞术、祖细胞集落测定、血细胞计数、实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附分析法(ELISA),对经大腿肌肉注射NGF-定时间后小鼠骨髓细胞的(BMC)增殖周期、BFU-E、CFU-E 集落产率、外周血红细胞相关指标、肾脏EPO水平、骨髓细胞GM-CSF、脾脏EPO受体(EPOR) mRNA的表达及血清中EPO,GM-CSF和 IL-1浓度进行检测,并观察培养体系中加入不同浓度的NGF时BFU-E、CFU-E集落产率的变化及与EPO、IL-3的关系.结果表明:注射NGF(7.5μg/kg)持续7天,骨髓细胞中S+G2/M期细胞比例、CFU-E和BFU-E集落产率、脾EPOR mRNA量显著高于注射生理盐水的对照组.持续13到19天,外周血网织红细胞比例、红细胞数、血红蛋白含量也有升高;在体外CFU-E培养中,无论是否加入EPO,加入的NGF均能剂量依赖性地促进集落的形成,且只加入NGF组的集落产率显著高于只加入EPO组.在BFU-E培养中加入NGF和IL-3时,集落产率显著高于加入EPO和IL-3组.结论:NGF可能通过提高造血细胞对EPO的反应性并可激活造血细胞上与EPO作用后一样的信号通路,进而促进骨髓细胞进入有丝分裂,促进造血干细胞向红系方向分化,促进BFU-E和CFU-E的形成,增加外周血中网织红细胞、红细胞、血红蛋白含量.
