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子宫颈癌组织中GRP94的表达及意义
目的 探讨子宫颈鳞状细胞癌中GRP94蛋白的表达及其临床意义.方法 采用Western Blot和免疫组化法检测32例子宫颈鳞状细胞癌及30例正常子宫颈组织中GRP94蛋白的表达,分析GRP94表达情况与子宫颈癌之间的关系.结果 GRP94蛋白在子宫颈鳞状细胞癌中表达水平明显高于正常子宫颈组织(P<0.05),并呈现出向核周集中的趋势.结论 GRP94的高表达与子宫颈癌的发生、发展密切相关,有望成为评价肿瘤生物学行为的一个新的指标.
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GRP78、GRP94蛋白和mRNA在人胃癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨GRP78及GRP94蛋白和mRNA在人胃癌组织中的表达及临床意义.方法 收集胃癌手术标本183例,制成组织芯片,用免疫组化法检测GRP78和GRP94的蛋白表达;取30例胃癌新鲜组织用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测GRP78、GRP94 mRNA相对表达.结果 免疫组化法检测结果显示:GRP78、GRP94蛋白的阳性表达率分别为80.1%和73.8%,与癌旁正常胃黏膜比较差异有统计学意义(P<0.05);与肿瘤的大小、浸润、转移、分期有关(P<0.05);与性别、年龄和组织分化无关.半定量RT-PCR结果显示癌组织和癌旁组织中的GRP78、GRP94 mRNA均有表达,胃癌组织的表达明显高于癌旁组织(P<0.05).结论 GRP78、GRP94蛋白在人胃癌中呈高表达并与胃癌的转移和侵袭有关,可作为判断胃癌恶性程度的有用指标.GRP78、GRP94 mRNA的高表达可能与胃癌组织中的转录调控相关.
关键词： 胃肿瘤 GRP78 GRP94 免疫组织化学 逆转录聚合酶链式反应 -
GRP94、EIF2α在原发型闭角性青光眼小梁中的作用研究
目的 通过检测内质网应激的相关因子GRP94、EIF2α在原发性慢性闭角型青光眼(PCACG)患者小梁组织中的表达,研究内质网应激在PCACG小梁组织氧化损伤中的作用,探讨PCACG的发病机制.方法 分别用HE染色法观察实验组及对照组小梁组织镜下显微形态的变化、免疫组化法测定实验组及对照组小梁组织中内质网应激相关因子GRP94、EIF2α的表达水平.结果 HE染色显示,PCACG患者小梁组织排列不规则,小梁网眼窄小,Schlemm管腔变窄且不规则.免疫组化结果显示,对照组的小梁网组织GRP94、EIF2α少量表达,实验组小梁组织中GRP94、EIF2α的表达明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 PCACG患者小梁组织中存在内质网应激,内质网应激EIF2α通道参与了小梁组织的氧化损伤,促进了眼内压的升高.
关键词： GRP94 eIF2α 内质网应激 原发性慢性闭角型青光眼 -
内质网分子伴侣Grp94在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的探讨胃癌组织中Grp94的表达及其与胃癌病理类型、临床分期及分化程度等的关系.方法胃癌切除手术标本30例,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Grp94mRNA相对表达量;免疫组织化学方法检测Grp94蛋白表达情况.结果半定量RT-PCR显示癌组织与癌旁组织中都有Grp94mRNA表达,癌组织为0.52±0.12,癌旁组织为0.14±0.04.前者的表达水平显著高于后者,其表达程度与肿瘤大小成正比,并随着细胞分化的降低而增高,Ⅲ、Ⅳ期病人显著高于Ⅰ、Ⅱ期;与患者性别、年龄、转移无关.免疫组织化学结果为:癌组织大多数表达在～,癌旁组织大多表达在-～,癌组织表达程度显著高于癌旁正常组织.Grp94蛋白表达程度与肿瘤大小、细胞分化、临床分期有关.结论胃癌组织的Grp94表达呈增高趋势;应用Grp抑制剂或应用反义抑制战略可能抑制中晚期胃癌的生长,增加胃癌细胞对化疗药物的敏感性.
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胆囊良恶性病变组织中GRP78和GRP94蛋白表达及临床病理意义
目的 研究胆囊腺癌、癌旁组织、腺瘤性息肉和慢性胆囊炎组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和94(GRP94)蛋白表达水平及其临床病理意义.方法 应用EnVisionTM免疫组化法检测108例胆囊腺癌、46例癌旁组织、15例腺瘤性息肉和35例慢性胆囊炎组织中GRP78和GRP94蛋白的表达；分析两者表达与胆囊腺癌临床病理特征的相关性及患者生存期的关系.结果 胆囊腺癌中GRP78和GRP94蛋白表达明显高于癌旁组织、腺瘤性息肉和慢性胆囊炎(P ＜0.01)；GRP78和/或GRP94蛋白阳性表达的良性病变胆囊上皮呈不同程度非典型增生.高分化腺癌、淋巴结未转移及未侵犯周围组织器官病例GRP78和GRP94蛋白表达明显低于低分化腺癌、淋巴结转移及侵犯周围组织器官病例(P ＜0.05或P＜0.01).Kaplan-Meier单因素生存分析显示GRP78(P=0.009)或GRP94(P=0.022)蛋白阳性表达与生存期减少密切相关,Cox回归多因素因素分析显示GRP78(P =0.014)或GRP94(P =0.020)蛋白阳性表达是胆囊腺癌预后不良的独立评估指标.结论 GRP78和GRP94蛋白表达水平可能是反映胆囊腺癌发生发展、临床生物学行为及预后的重要标记物,检测胆囊腺癌中GRP78和GRP94蛋白表达水平可能对指导临床辅助治疗有重要临床价值.此外,检测胆囊良性病变组织中GRP78和GRP94蛋白表达水平对早期发现胆囊腺癌可能有较重要的临床意义.
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RNAI沉默Grp94基因对人食管癌ECA109细胞迁移及侵袭能力的影响
目的 探讨RNAI沉默Grp94基因表达对人食管癌ECA109细胞迁移及侵袭能力的影响和可能机制.方法 设计、合成靶向Grp94基因的siRNA基因片段,应用脂质体包埋转染食管癌ECA109细胞,采用Real-time PCR和Western blot法分别检测转染后的细胞内Grp94、基质金属蛋白酶MMP2及MMP9的表达,采用Transwell实验检测沉默Grp94基因对细胞迁移及侵袭能力的影响.结果 SiGrp94组中Grp94mRNA和蛋白水平显著下调(P＜0.01),MMP2、MMP9表达明显下调(P＜0.05);SiGrp94组细胞迁移及侵袭能力明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 沉默Grp94基因可明显抑制ECA109细胞的迁移及侵袭能力,Grp94可能通过影响MMP2、MMP9参与其中.
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肝细胞脂肪变性模型中Sec61α的表达及可能作用机制
目的 探讨肝细胞脂肪变性模型中Sec61α的表达及可能机制.方法 用软脂酸与油酸混合物诱导L02肝细胞发生脂肪变性,建立非酒精性脂肪性肝病肝细胞体外模型,按0、2、4、8、12h及16 h收获细胞;随后应用See61抑制剂Eeyarestatin Ⅰ处理肝细胞,分为正常对照组、脂肪变性组、DMSO组及抑制剂组,通过油红O染色、qRT-PCR及Western blot检测Sec61 α、GRP78、GRP94、及Bcl-2的表达变化.结果 软脂酸与油酸混合物成功诱导肝细胞发生脂肪变性.与对照细胞相比,脂肪变肝细胞Sec6lαmRNA相对表达量在脂肪变早期下降(2、4h,P＞0.05),晚期升高(8、12 h,P＜0.05);GRP78在8h开始升高,16 h达峰(P＜0.01).Sec61α与GRP78的蛋白水平与mRNA水平表达在时间梯度上变化一致.Eeyarestatin Ⅰ处理显著减轻肝细胞脂肪变程度;与脂肪变性组相比,抑制剂组肝细胞Sec61α、GRP78明显降低(P＜0.01),GRP94、Bcl-2则显著升高(P＜0.01).结论 Sec61α可能通过调节肝细胞内质网应激,参与肝细胞脂肪变的形成.
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内质网分子伴侣GRP94在瘢痕疙瘩中的表达
目的:观察内质网分子伴侣GRP94在瘢痕疙瘩和正常皮肤组织中的表达,探讨GRP94在瘢痕疙瘩发生中的作用.方法:用免疫组织化学法和免疫印迹法分别检测12例瘢痕疙瘩与12例正常皮肤组织中GRP94的表达.结果:①GRP94在瘢痕疙瘩和正常皮肤组织的角质形成细胞、成纤维细胞、炎症细胞、血管内皮细胞以及毛囊、汗腺、皮脂腺等细胞质及少数细胞的核中表达.②表皮中GRP94的表达量在两种组织无显著性差异(P＞0.05);真皮中GRP94阳性成纤维细胞数在瘢痕疙瘩组明显高于(1283.33±565.10/mm2)正常皮肤组(238.33±255.62/mm2),(P＜0.05).免疫印迹法实验结果进一步证实了GRP94的含量在瘢痕疙瘩组(0.50±0.07)高于正常皮肤组(0.15±0.03),(P＜0.05).结论:GRP94在瘢痕疙瘩成纤维细胞中高表达,提示内质网应激与瘢痕疙瘩的过度增殖有关.
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沉默GRP94抑制宫颈癌细胞的侵袭和迁移
目的:探究GRP94在不同宫颈癌细胞株中的表达情况,及GRP94对细胞侵袭和迁移能力的影响.方法:采用Western blot和qRT-PCR检测不同类型的宫颈癌细胞株中GRP94的表达水平.选择高表达GRP94的细胞株,应用RNA干扰技术下调GRP94的表达,采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞侵袭和迁移能力的改变.结果:与正常的宫颈细胞相比,GRP94在不同的宫颈癌细胞株(C33A、CaSki、HeLa、HeLa 229、MS751、ME-180、SiHa和HCC 94)中表达均升高,且GRP94在CaSki和MS751中表达量高,在ME-180、SiHa和HCC 94中表达量中等,在C33A、HeLa和HeLa 229中表达量低.选用GRP94高表达的CaSki细胞,下调GRP94的表达后,划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示细胞的侵袭和迁移能力显著下降.结论:GRP94在宫颈癌细胞中高表达,沉默GRP94的表达能抑制宫颈癌细胞的侵袭和迁移能力.
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GRP94在HBV感染的人肝细胞肝癌中的表达及意义
目的：探讨葡萄糖调节蛋白（ glucose-regulated protein 94，GRP94）在乙型肝炎病毒（ hepatitis B virus， HBV）感染的人肝细胞肝癌（ human hepatocellular carcinomas，HCC）中的表达及其意义。方法：酶联免疫吸附试验（ enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）和实时荧光定量 PCR（ real -time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTQF-PCR）方法来检测HCC患者血清。采用免疫组织化学（ immunohistochemistry， IHC）方法、蛋白质印迹（ Western blot）方法及半定量逆转录聚合酶链反应（ reverse transcrition -polymerase chain reaction，RT-PCR），来探讨GRP94在HBV病毒感染的HCC和癌旁组织中的表达。结果：GRP94在癌旁组织中低表达，而在HCC中高表达，两者在Western blot、IHC及RT-PCR中的表达，其差异有统计学意义。同时HCC中GRP94的表达强度与肝癌患者肿瘤TNM分期（P=0.02）、肿瘤大小（P=0.01）、肿瘤结节的数目（P=0.02）、HBV-DNA的拷贝数值（P<0.01）和血清甲胎蛋白（alpha-fetal protein，AFP）水平（P=0.02）相关，但与患者的性别、年龄差异无关。结论：GRP94与HCC临床病理特征存在一定的相关性，对HCC治疗、预后判定具有一定指导意义。
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蛋白质组学方法筛选肺腺癌相关蛋白
目的 寻找肺腺癌的相关蛋白标志物,为肺腺癌的诊断、监测及治疗提供新的途径.方法 提取肺腺癌和癌旁正常组织中可溶性蛋白质,应用双向凝胶电泳技术筛选两者间的差异表达蛋白,基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱结合生物信息学技术鉴定在肺腺癌组织中高表达的蛋白质.应用免疫组织化学技术验证分析差异蛋白grp94的表达情况.结果 应用蛋白质组学技术从肺腺癌组织中成功筛选出grp94等6种蛋白,其在癌组织的表达明显高于癌旁正常组织.免疫组化技术也证实grp94在肺腺癌组织中的表达比例明显高于癌旁正常组织.所鉴定的蛋白功能分别涉及细胞内蛋白的合成、装配,体内超氧自由基的清除、细胞凋亡等与肿瘤生物学特性密切相关的方面.结论 蛋白质组学技术可有效从组织中筛选肺腺癌相关蛋白.筛选出的蛋白标志物包括铜锌超氧化物岐化酶、热休克蛋白27、磷酸丙糖异构酶B链、膜联蛋白Ⅰ、94ku糖调节蛋白和热休克蛋白90-β,为肺腺癌进一步的分子诊断和治疗提供了参考靶点.
关键词： 肺腺癌 蛋白质组学 蛋白标志物 基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱 GRP94 -
两种方法检测Grp94在子宫内膜癌中的表达及其意义研究
目的:比较两种方法检测葡萄糖调节蛋白(glucose-regdated protein94,Grp94)在子宫内膜癌中的表达及其意义.方法:应用免疫组化S-P法和原位杂交技术检测子宫内膜癌患者50例,观察肿瘤相关基因Grp94的表达,同时回顾性研究表达与子宫内膜癌发生、浸润及转移等临床病理特征的关系.结果:①50例子宫内膜癌组织中,应用免疫组化S-P法和原位杂交法检测Grp94的阳性表达率分别为68.0%、72.0%;②免疫组化S-P法Grp94在不同组织学分级和有、无淋巴结转移的子宫内膜癌患者中表达差异有统计学意义(P<0.05),原位杂交检测Grp94在有、无淋巴结转移的子宫内膜癌患者中表达差异有统计学意义(P<0.05),在不同组织学分级表达差异无统计学意义(P>0.05),但随着分化程度的降低,Grp94的检出有增高趋势.结论:Grp94的阳性表达与恶性程度密切相关,在肿瘤转移的预测方面可作为生物标志因子.
