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参芪抑瘤方药物血清对胃癌MKN-45细胞周期阻滞及抗侵袭转移的影响
目的：探讨不同浓度参芪抑瘤方药物血清对胃癌 MKN-45细胞周期阻滞及抗侵袭转移作用的相关机制。方法60只SPF级Wistar大鼠，随机分为对照组和参芪抑瘤方低、中、高剂量组，每组15只。参芪抑瘤方低、中、高剂量组分别给予0.25、0.50、1.00 g原药材/mL药液灌胃，空白组给予等量饮用水灌胃，每日2次，连续7 d，末次灌胃2 h后取血，分离血清。MKN-45细胞经不同浓度药物血清处理后，流式细胞术检测细胞周期，免疫组化检测COX-2、PTEN蛋白表达。结果药物血清干预后细胞G0～G1期比例增加， S期比例减少；药物血清可降低MKN-45细胞COX-2蛋白阳性表达率，升高PTEN蛋白阳性表达率（P＜0.05）。结论参芪抑瘤方药物血清阻滞细胞周期及抗侵袭转移作用可能与影响COX-2、PTEN蛋白表达有关。
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miR-21在弥漫大B细胞淋巴瘤肿瘤组织中的表达及临床意义
本研究旨在检测弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者肿瘤石蜡组织中miR-21的差异性表达与PTEN相关性及其临床意义.采用Real-time-PCR方法检测26例DLBCL患者及10名正常对照的miR-21表达,应用聚合物免疫组化检测系统检测PTEN蛋白水平.结果表明,26例DLBCL石蜡组织中miR-21的表达量为6.586(1.10,38.22),显著高于正常对照[0.791 (0.35,2.87)](P＜0.05),在26例DLBCL中有6例PTEN蛋白(23％)阳性,而在20例(77％)中为阴性.DLBCL中miR-21表达水平与PTEN蛋白水平呈负相关,其高表达与DLBCL血清LDH水平呈正相关、Ⅲ/Ⅳ期患者miR-21表达水平明显高于Ⅱ/Ⅱ期患者(P＜0.05),与临床亚型无关(P＞0.05).结论:在DLBCL中miR-21表达升高可能提示肿瘤恶性程度高,预后不良,PTEN可能是miR-21的靶基因.
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PTEN、P16表达与原发性胆囊癌病理生物学行为及预后的关系
目的:探讨PTEN、P16在原发性胆囊癌中的表达与其病理生物学行为和预后的关系.方法:采用免疫组化CSA法对56例胆囊癌进行PTEN和P16蛋白的定位观察.结果:PTEN、P16在原发性胆囊癌中阳性表达率为46.4%,42.9%,显著低于胆囊良性病变(92.3%,76.9%;P＜0.05).PTEN、P16表达与胆囊癌的组织类型、病理学分级无相关(P＞0.05),与胆囊癌的浸润、转移和预后明显相关(P＜0.05),PTEN和P16基因蛋白表达存在着明显的正相关(r=0.8746,P＜0.05).结论:PTEN和P16基因蛋白低表达可能是胆囊癌发生、发展中的分子事件,PTEN、P16表达可作为评估胆囊癌病理生物学行为及预后的参考指标.
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胃癌组织中MTA1,PTEN,E-cadherin的表达及其相互关系
目的:观察MTA1,PTEN,E-cadherin蛋白在胃癌和正常胃黏膜组织中的表达,探讨其与胃癌浸润、转移和生物学行为的关系.方法:应用免疫组织化学方法检测54例胃癌手术切除标本和15例正常胃黏膜组织中MTA1,PTEN,E-cadherin的表达.各指标之间相关因素的差异性比较采用χ2检验,相关性研究采用Spearman相关分析:结果:与正常胃组织相比,MTA1蛋白在胃癌组织中高表达(46.3% vs 6.7%,P＜0.01),PTEN和E-cadherin蛋白在胃癌组织中表达下调或缺失(51.9% vs 100%,42.6% vs 100%,均P＜0.01).MTA1和PTEN的阳性表达率与肿瘤浸润深度(P=0.003,P=0.001)、病理分期(P=0.004,P=0.008)、淋巴转移(P=0.000,P=0.001)、远隔转移(P=0.004,P=0.006)、临床分期有关(P=0.001,P=0.000);E-cadherin的正常表达率与肿瘤浸润深度(P=0.027)、病理分化程度(P=0.006)、淋巴转移(P=0.044)、临床分期有关(P=0.000).Spearman相关分析显MTA1与PTEN蛋白、MTA1与E-cadherin蛋白的表达呈负相关(r=-0.518,r=-0.424,均p＜0.05).PTEN蛋白与E-cadherin蛋白的表达呈正相关(r=0.53,P＜0.05).结论:MTA1蛋白水平高表达和PTEN,E-cadherin蛋白水平低表达可能与胃癌浸润和转移有关,且联合检测可以用于判断胃癌的生物学行为.
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生长抑素联合顺铂对胆囊癌细胞生长的协同抑制作用
目的 评估生长抑素(SST)联合顺铂(DDP)对胆囊癌(GBC)细胞生长的协同抑制作用及分子机制.方法 免疫组化方法检测PTEN蛋白在GBC组织中的表达;CCK-8法检测SST联合DDP对GBC细胞GBC-SD和SGC996体外增殖的影响,并通过等效法分析两种药物的协同作用;裸鼠荷瘤模型评估药物处理后细胞体内增殖;Annexin V/PI双染法检测SST联合DDP对细胞凋亡的影响;组织活性氧荧光定量(DCFH-DA)法检测药物处理后细胞内氧化应激活性氧(ROS)的水平变化;JC-1法检测药物处理后细胞线粒体膜电位变化;蛋白印迹(Western blot)法检测药物处理后细胞内PTEN、p-AKT等蛋白表达水平变化.结果 PTEN蛋白在GBC组织中表达异常降低,且表达水平与肿瘤分化程度呈负相关,与患者生存期呈正相关.DDP可以降低细胞内PTEN蛋白表达水平,SST作用与之相反,两者联合可以发挥协同抑制作用,并且能够显著抑制裸鼠荷瘤组织的生长.SST和DDP均能诱导细胞凋亡,且两药联合的凋亡诱导作用更显著.SST可以抑制AKT信号通路激活,但并不诱导ROS生成.DDP作用与之相反.两者均能诱导线粒体细胞色素C(cytochrome C)释放,激活caspase-3.结论 SST通过诱导PTEN蛋白表达增强DDP对GBC细胞生长的抑制作用,二者联合用药有望成为今后临床GBC患者化疗的选择之一.
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PTEN多克隆抗体制备和原发性肝癌组织PTEN蛋白表达的研究
目的:制备并鉴定抗PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10)兔多克隆抗体,利用该抗体研究PTEN蛋白在原发性肝癌中表达的临床病理意义.方法:以PCR扩增合成人PTEN全长cDNA序列;与6组氨酸融合表达载体pPROEX HTb构建原核表达重组体,转染进大肠杆菌诱导融合蛋白表达后将其纯化;用融合蛋白免疫新西兰大白兔制备抗PTEN多克隆抗体,经Western杂交鉴定后用于免疫组织化学检测60例肝癌组织中PTEN蛋白的表达.结果:采用制备的兔多克隆抗体进行Western blot的结果显示,在瞬时转染了pcDNA3.0-PTEN的MCF-7细胞裂解液中检测1条相对分子质量约为48×103的特异性蛋白带,而转染了空载体pcDNA3.0的MCF-7细胞中未检测到该蛋白条带.免疫组化显示PTEN蛋白定位于肝细胞的胞质内,原发性肝癌组织内PTEN蛋白表达阳性率为48.33%,显著低于对应的癌旁肝组织内100%的检出阳性率.PTEN蛋白的表达水平与肝癌患者的病理分级和有无癌栓显著相关.结论:获得了作用特异的PTEN兔多克隆抗体,该抗体可应用于研究PTEN在肝癌组织中的表达分析.PTEN蛋白表达水平在预测原发性肝癌的进展和预后方面可能具有潜在的应用价值.
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PTEN与FHIT在骨肉瘤组织中的表达
目的:探讨骨肉瘤组织中抑癌基因PTEN、FHIT的表达情况.方法:应用免疫组织化学SP法测定PTEN、FHIT在45例骨肉瘤、20例骨软骨瘤和10例正常骨组织中的表达情况,观察骨肉瘤中PTEN、FHIT的表达与临床预后之间的关系.结果:45例骨肉瘤、20例骨软骨瘤、10例正常骨组织中PTEN阳性率分别为24.4%、95.0%和100%;FHIT阳性率分别为15.6%,95.0%和100%.骨肉瘤与骨软骨瘤及正常骨相比均有差异有统计学意义,P＜0.001,骨肉瘤中PTEN、FHIT表达下调者易复发转移、生存时间短,P＜0.001.结论:PTEN、FHIT在骨肉瘤组织中表达下调,可作为评估骨肉瘤的发生和预后的指标.
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PTEN在结直肠癌中的表达及其临床病理学意义
目的:研究抑癌基因PTEN(phosphatase and tensin homolog detected on chromosome ten)编码蛋白在正常结肠黏膜、结肠腺瘤、癌旁结肠黏膜及结直肠癌组织中的表达特征.探讨结直肠癌中PTEN表达的临床病理学意义.方法:采用免疫组织化学(S-P法)检测110例结直肠癌、13例癌旁黏膜、17例结肠腺瘤、8例正常结肠黏膜中PTEN的表达,分析其与结直肠癌临床病理学关系.结果:PTEN蛋白在结直肠癌、癌旁黏膜、结肠腺瘤和正常结肠黏膜中的阳性表达率分别为59.1%、76.9%、76.4%和100%,结直肠癌PTEN蛋白的阳性表达率及水平明显低于非癌组,P＜0.01.细胞分化较差、有淋巴结转移、Duke分期较晚的结直肠癌PTEN蛋白阳性率表达低,P＜0.05.结论:PTEN蛋白的表达在大肠癌中呈减少或缺失,并与大肠癌临床病理学特性有关,其表达水平可作为判定结直肠癌临床病理学特性的标志.
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惠州客家人群食管癌组织PTEN蛋白表达及其与STAT1/3信号通路相关性的初步研究
目的:研究抑癌基因PTEN在惠州客家人群食管癌组织的表达,探讨PTEN与STAT1/3信号传导激活状态的相关性.方法:采用SP免疫组织化学及免疫蛋白印迹法,检测惠州客家人群53例食管组织标本中PTEN、STAT1/3、p-STAT1/3蛋白的表达.结果:PTEN 在食管癌组织中的表达显著低于癌旁正常食管黏膜(P<0.01),且与分化程度及癌组织浸润深度明显相关,P<0.01.食管癌组织STAT1 及p-STAT1蛋白阳性率显著低于癌旁正常组织,P<0.01.STAT3及p-STAT3的在食管癌的表达远远高于癌旁食管正常黏膜组织,P<0.05,且与食管鳞癌的分化程度及癌组织浸润深度相关(P<0.01).结论:PTEN/STAT1/3信号传导与惠州客家人群食管癌密切相关.伴随PTEN的表达缺失,STAT1信号通路活化水平降低及STAT3信号通路活化水平升高,PTEN及STAT1/3蛋白可为食管癌的基因治疗提供新的靶点.
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敲低miR-221、miR-222表达对乳腺癌细胞放射敏感性影响的研究
R-222共转染组细胞PTEN蛋白表达明显上调,pAkt蛋白表达下调.结论 反义miR-221、AS-miR-222可能通过上调PTEN蛋白表达增强MCF-7人乳腺癌细胞放射敏感性.
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环氧化酶-2在子宫内膜样腺癌中的表达及其与PTEN的相关性
目的 研究环氧化酶-2(COX-2)在子宫内膜样腺癌(EAC)中的表达及意义,探讨COX-2与PTEN的相关性.方法 用免疫组化SP法检测COX-2、PTEN在正常子宫内膜、子宫内膜非典型增生及EAC中的表达.结果 COX-2的阳性表达率自正常内膜至非典型增生及EAC呈阶梯性升高(13.33%、50.00%、64.58%)(P＜0.05).EAC中,COX-2蛋白表达与组织分级(G1、G2、G3分别为4/9、64.29%、81.82%)、肌层浸润(深肌层浸润、浅肌层浸润分别为75.00%、57.14%)、手术-病理分期(早期、晚期分别为56.41%、9/9)、淋巴转移(有、无分别为9/9、56.41%)相关(P=0.007,P=0.009,P=0.001,P=0.001).预后好的EAC中,COX-2与PTEN之间存在负相关(rs=-0.400,P＜0.05).结论 COX-2与EAC的浸润转移相关;预后好的EAC中,PTEN可能参与COX-2的表达调控.
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抑癌基因PTEN在鼻咽癌中的突变及表达
目的 探讨抑癌基因PTEN在鼻咽癌细胞株及组织中的基因突变和蛋白表达缺失情况.方法 收集鼻咽癌细胞株4种(CNE-1、CNE-2、HONE1、sUNE1)、经病理组织学确诊为未分化型非角化性鼻咽癌组织标本96例(其中71例同时取癌旁组织)和慢性鼻咽炎的组织标本5例.4种鼻咽癌细胞株、25例未分化型非角化性鼻咽癌组织和5例慢性鼻咽炎组织标本用于检测基因突变,其余71例未分化型非角化性鼻Ⅱ凼癌组织及癌旁组织进行免疫组化,检测PTEN的蛋白表达.采用RT-PCR和直接测序法分析PTEN编码序列基因突变;免疫组织化学SP法观察蜡块包埋的鼻咽癌组织和癌旁组织中PTEN蛋白的表达情况.免疫印迹法检测PTEN及相关蛋白在细胞株中的表达.结果 仅1例鼻咽癌组织检测到PTEN基因第8外显子中存在点突变,但属于沉默突变.71例鼻咽癌组织中PTEN蛋白的表达率(30.9%)显著低于癌旁组织(52.1%,P=0.017).Ⅲ-Ⅳ期肿瘤组织PTEN阳性表达率(25.5%)显著低于Ⅰ-Ⅱ期肿瘤组织(55%,P=0.026).EB病毒阳性组PTEN蛋白表达率与EB病毒阴性组比较明显降低(P=0.03).EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)可以下调PTEN蛋白的表达.结论 PTEN蛋白的表达缺失在鼻咽癌的发生、发展过程中起着重要作用,其缺失可能与EB病毒有关.
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桂皮酸对胰腺癌BxPC-3细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨桂皮提取物桂皮酸对胰腺癌细胞系BxPC-3细胞增殖和凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制.方法 以胰腺癌BxPC-3细胞为研究对象,用不同浓度(0～8 mmol·L-1)桂皮酸分别处理24、48、72h后,CCK-8比色法检测细胞活力;桂皮酸(0、1、2、4 mmol ·L-1)处理BxPC-3细胞48 h后,PI/Annexin Ⅴ检测细胞凋亡率,Western blot法检测药物对细胞Bax、Bcl-2、PTEN、Akt、p-Akt蛋白表达的影响.结果 桂皮酸能有效抑制BxPC-39细胞增殖,且呈浓度、时间依赖性;桂皮酸处理BxPC-3细胞48h后,细胞凋亡率增加;促凋亡蛋白Bax表达量上调,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量下调;此外,桂皮酸可上调PTEN蛋白表达,并下调Akt蛋白磷酸化.结论 桂皮酸可抑制BxPC-3细胞增殖并诱导凋亡,其作用机制可能与上调PTEN蛋白表达并抑制Akt蛋白磷酸化,继而上调Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白相关.
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E-钙粘蛋白及PTEN基因编码蛋白与胃癌浸润转移
目的:观察抑癌基因PTEN蛋白和ECD在胃癌组织中的表达,探讨其与胃癌生物学行为及预后的关系.方法:以兔抗人PTEN多克隆抗体、鼠抗人ECD单克隆抗体,采用SABC免疫组化法,检测100例胃癌手术切除标本中拟测指标的表达.以X2和Log rank检验对结果做统计学分析.结果:ECD、PTEN蛋白在非癌胃粘膜中均见表达;在胃癌组织中表达下调或缺失.ECD异常表达率为42.0%;弥漫型胃癌异常表达率(48.57%),明显高于肠型胃癌(26.67%),(P＜0.05);ECD异常表达与浸润深度有关(P＜0.05).胃癌组织中PTEN蛋白缺失率为59%;弥漫型胃癌缺失率(65.71%)明显高于肠型胃癌(43.33%),(P＜0.05);伴淋巴结转移的胃癌缺失率(64.47%)明显高于无淋巴结转移者(41.67%),(P＜0.05);PTEN蛋白缺失的患者比阳性表达者预后差(P=0.0066).65.85%PTEN阳性表达者同时伴ECD正常表达.结论:两种标志物与胃癌浸润转移有关,PTEN表达与胃癌患者预后密切相关.将两种指标联合检测,可作为正确判断胃癌患者预后,指导临床治疗的分子生物学指标.
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Id-1 PTEN表达与食管鳞癌血管新生及预后关系的研究
目的:研究Id-1、PTEN蛋白在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达及二者在食管鳞癌血管新生及预后中的作用.方法:ESCC手术切除标本131例,癌旁正常组织40例为正常对照,免疫组化检测Id-1、PTEN表达,通过CD-34计算食管鳞癌微血管密度(MVD),分析Id-1、PTEN与MVD的关系,并通过Kaplan-Meier寿命表法及COX回归分析与预后的关系.结果:Id-1在ESCC组织中的阳性表达率83.2%(109/131),切缘正常组织中阳性率5%(2/40),二者差异有显著性(P＜0.01),其表达与患者年龄、性别、浸润深度及淋巴结转移均无关(P＞0.05),而与细胞分化、MVD呈正相关(P＜0.01),与ESCC患者预后呈负相关.PTEN在切缘正常组织中达到97.5%(39/40),而在ESCC组织中阳性表达率为62.6%(82/131),二者差异有显著性(P＜0.01),其表达与患者年龄、性别、分化程度无关,而与浸润深度、淋巴结转移及MVD呈负相关(P＜0.05),而与ESCC预后呈正相关.在对血管新生的影响方面,可能Id-1起更重要作用,二者差别有统计学意义(P＜0.05).COX回归提示Id-1、PTEN表达及侵袭深度均为影响患者预后的重要因素(P＜0.05).结论:Id-1高表达或PTEN表达下调可能促进了ESCC发生、血管新生,并降低了ESCC患者的预后生存期.ESCC中Id-1、PTEN表达在血管生成方面呈拮抗关系,以Id-1作用为主,Id-1、PTEN可能是ESCC患者预后的独立影响因素.
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PTEN蛋白产物在鼻咽癌中的表达及意义
PTEN是20世纪90年代末期新发现并命名的一种肿瘤抑癌基因,定位于染色体10q23上[1,2].许多肿瘤在这个基因组区域中都具有杂合性缺失现象.PTEN亦与细胞增殖周期、凋亡有关.但是该基因与鼻咽癌的关系文献报道尚少.为此我们通过免疫组化的方法在蛋白质水平检测56例放疗前鼻咽癌组织中PTEN蛋白的表达情况,以探讨PTEN蛋白的表达与鼻咽癌的关系.
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胰腺癌组织中PTEN蛋白表达及细胞周期分析
目的 研究胰腺癌组织中PTEN蛋白表达以及细胞周期的变化,探讨其与肿瘤发生发展的关系.方法 采用流式细胞术检测32例正常胰腺黏膜、76例胰腺癌组织中PTEN蛋白表达和细胞周期变化.结果 从正常胰腺黏膜到胰腺癌组织中PTEN蛋白表达逐渐降低,统计学分析表明PTEN蛋白在胰腺癌组织中的表达与正常组比较差异有统计学意义(x2=41.58,P＜0.01).胰腺癌组织的S期组分高于对照组,与对照组比较差异有统计学意义(t=9.63,P＜0.01).结论 PTEN蛋白表达异常与细胞周期调控障碍可能在胰腺癌发病过程中发挥重要的作用.
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子宫内膜癌中PTEN蛋白、HER-2蛋白的表达及意义
目的 检测子宫内膜癌组织中PTEN蛋白及HER-2蛋白表达并探讨其意义.方法 采用免疫组织化学法检测60例子宫内膜癌、32例正常子宫内膜组织中PTEN蛋白及HER-2的表达.结果 子宫内膜癌组织中PTEN蛋白为缺失表达,高于正常子宫内膜组织(P<0.05),而且PTEN表达在G1级肿瘤高于G2、G3级(P均<0.05),PTEN蛋白缺失率与肿瘤组织类型有关(P<0.05),与肌层浸润、淋巴结转移及病理分期无明显关系(P均>0.05).子宫内膜癌组织中HER-2蛋白表达为高表达,HER-2的表达与肿瘤组织学分级、病理学分期以及肿瘤浸润子宫肌层深度均显著相关(P均<0.05),其表达与组织学类型、有无淋巴结转移均无关(P均>0.05).HER-2与PTEN的表达呈明显负相关.结论 PTEN表达缺失与临床病理参数无关,蛋白表达缺失常发生于细胞分化较差的子宫内膜癌.PTEN蛋白表达缺失与HER-2表达水平有关.
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大肠癌组织中PTEN蛋白的表达及其与患者临床病理特征和预后的关系
PTEN基因是迄今发现的第1个具有磷酸酶活性的抑癌基因,在维持细胞的增殖、分化和凋亡平衡中起重要作用,在许多肿瘤常表现为突变或缺失[1].本研究通过免疫组织化学法检测PTEN蛋白在大肠癌组织中的表达,并探讨其与患者的临床病理特征和预后的关系,现报告如下.
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抑癌基因PTEN在大肠癌组织芯片中的表达及其与患者临床病理特征的关系
第10号染色体丢失的张力蛋白同源的磷酸酶基因(PTEN)是迄今发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,它在细胞内信号传导通路的调控中起关键作用,不但参与正常细胞生长、发育的调控.而且在肿瘤发生、发展及转移中起抑制作用[1].研究表明,PTEN是继p53基因之后发现的人类肿瘤中易发生突变的抑癌基因[2].人类许多肿瘤中存在着PTEN功能的失活.本研究通过免疫组织化学SP法检测PTEN蛋白在大肠癌组织芯片中的表达,并探讨其与患者的临床病理特征的关系,现报告如下.
