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肺癌组织中p63蛋白及CK5/6的表达及临床病理特点
目的 探讨肺癌组织中p63蛋白及CK5/6的表达及临床病理特点.方法 应用免疫组化法检测100例肺癌患者肺癌组织中p63及CK5/6蛋白质的表达,并观察其临床病理特点.结果 p63、CK5/6蛋白表达阳性率分别为56%、45%,阴性表达率分别为44%、55%;男性p63、CK5/6蛋白表达阳性率分别为60%、51.25%,显著高于女性的30%、15.00%;腺癌、鳞状细胞癌、腺鳞癌及小细胞肺癌其p63、CK5/6蛋白表达阳性率存在显著差异,且p63与CK5/6表达间存在正相关关系.结论 肺癌患者的性别、病理类型均与p63及CK5/6的蛋白表达有关,这两种蛋白表达间存在正相关关系.
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EB病毒介导的鼻咽上皮细胞永生化早期阶段的生物学观察
目的:鼻咽癌是我国南方地区高发的恶性肿瘤之一,长期以来,对鼻咽癌发病分子机制未能彻底阐明,关键问题之一是缺乏一个良好的体外多阶段细胞模型.虽然利用EB病毒已建立了数个灵长类上皮细胞系,但是,EB病毒转化的人鼻咽上皮永生化细胞系尚为空白.目前认为,上皮细胞永生化呈多阶段,即上皮细胞增殖--逃避老化期(Senescence)--逃避危机期(Crisis)--进入永生化(Immortalization),其中,逃避Senescence可能是上皮细胞永生化的初阶段.方法:借助EB病毒和TPA的体外协同作用,采用相差显微摄影、间接免疫荧光、Senescence相关半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色、细胞生长曲线及群体倍增时间等检测方法,我们对12例EB病毒感染的原代人胚鼻咽上皮细胞生长过程进行了观察.结果:EB病毒感染的原代鼻咽上皮细胞表达EB病毒瘤基因产物LMP1,并随着培养时间的延长,对SA-β-Gal表达呈现从弱到强再到弱的趋势.在原代培养后期,SA-β-Gal表达阳性率降低,提示EB病毒促使部分鼻咽上皮细胞逃离了Senescence、进入永生化早期阶段.作进一步的生物学观察表明,处于该阶段的鼻咽上皮细胞具有部分转化特征,表现为细胞形态学发生改变,从原来扁平而紧密的镶嵌状排列,逐渐变成立体感增强,细胞体积变小,分裂相增多.原代培养后期可观察到明显的转化灶,细胞生长活跃,与正常培养的鼻咽上皮细胞呈现的老化形成明显的对照.经传代后,细胞呈岛状重叠生长,提示永生化早期阶段的鼻咽上皮细胞具有去接触抑制生长的特性.细胞生长曲线检测进一步表明,其群体倍增时间降低,提示EB病毒促使永生化早期阶段的鼻咽上皮细胞进一步生长.结论:EB病毒促使体外培养的鼻咽上皮细胞通过Senescence时期、进入永生化早期阶段,并初步具有体外转化特征,为进一步阐明上皮细胞永生化分子机制及建立人鼻咽上皮细胞永生化模型提供实验依据.
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CCX－CKR、VEGF－A及VEGF－C在人大肠癌中的表达及其与转移的关系
目的：研究ChemoCentryx趋化因子受体（ ChemoCentryx chemokine receptor，CCX－CKR）、血管内皮生长因子（ vascular endo－thelial growth factor， VEGF） A和C在大肠癌组织、癌旁组织、正常大肠组织中的表达，探讨其与淋巴结转移的关系。方法：收集大连医科大学附属第一医院手术切除的大肠癌组织、癌旁组织80例和正常大肠组织11例。应用免疫组织化学SP法检测CCXCKR、VEGF－A和VEGF－C在不同组织中的表达情况；应用RT－PCR和Western blot方法检测不同组织中CCX－CKR的表达情况。结果：免疫组织化学结果显示CCX－CKR在正常大肠组织和癌旁组织中表达明显高于大肠癌组织（ P＜0．01），在淋巴结转移组的表达明显低于淋巴结未转移组（ P＜0．01）；而VEGF－A和VEGF－C在大肠癌组织和癌旁组织表达阳性率明显高于正常大肠组织（P＜0．01），其中淋巴结转移组两者的表达明显高于淋巴结未转移组（P＜0．05）。 RT－PCR和Western blot方法检测CCX－CKR在相关组织中的表达与免疫组织化学结果一致。结论：大肠癌中CCX－CKR低表达、VEGF－A和VEGF－C高表达与大肠癌淋巴结转移密切相关。因此，三者可作为预测直肠癌淋巴转移的重要指标，并有望成为直肠癌转移分子治疗的新靶点。
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两种中药多糖诱导人内皮细胞表达造血生长因子的实验研究
血管内皮细胞(EC)是造血诱导微环境的重要组成成分.文献报道EC能分泌多种造血生长因子来调控造血.人参与当归是祖国传统医学的"补气"和"补血"要药,人参多糖(G PS)和当归多糖(APS)为其主要药物成分之一.近10年来我们课题组对APS以及G PS促进血细胞生成的调控机理进行了系统的研究,我们既往研究证明:APS对造血干/ 祖细胞增殖分化有显著刺激作用,GPS也可促进人粒单系造血祖细胞的增殖和分化,但其现代生物学机理尚不甚清楚.本研究采用造血生长因子生物活性检测与免疫细胞化学等技术 ,探讨APS和GPS诱导人内皮细胞表达GM-CSF、IL-3、IL-6与促进人造血祖细胞增殖分化的相互关系.材料与方法:(1)GPS:重庆中药研究所分离、提取、纯化,纯度＞90%;APS:兰州医学院血液病研究所惠赠,纯度＞85%.(2)人脐静脉内皮细胞株(Ecv304).(3)EC培养上清液的制备:分别制备对照组(不加任何刺激物,常规培养)、IL-1、GPS与APS体外诱导组(IL-1:100u/ml ,GPS:50μg/ml,APS:200μg/ml)的Ecv304细胞培养上清液 .(4)造血生长因子活性检测:以每种植5×104个骨髓有核细胞所生成的CFU-M ix、CFU-GM集落数评价各种Ecv304细胞培养上清液中造血生长因子的活性. (5)SP免疫细胞化学检测经IL-1、GPS和APS诱导和对照组Ecv304细胞的G M-CSF、IL-3、IL-6蛋白表达.实验结果表明:(1)经IL-1或GPS、A PS诱导制备的Ecv304细胞培养上清液能显著促进CFU-Mix、CFU-GM的增殖,其集落产率与对照组相比有显著的统计学意义(CFU-Mix:GPS组:52. 89±9.67,APS组:54.33±10.39,IL-1组:61.13±9.2 6,对照组:36.24±10.74;CFU-GM:GPS组:40.36±8.92 ,APS组:44.17±9.53,IL-1组:43.37±8.56,对照组:30 .78±11.45).(2)免疫细胞化学检测显示正常静止状态下EC胞浆内有棕黄色的 GM-CSF、IL-3、IL-6蛋白表达的阳性颗粒,但表达阳性率及强度均很低,经过IL-1或GPS、APS诱导后Ecv304细胞的GM-CSF、IL-3、IL- 6蛋白表达阳性细胞率和表达强度均明显提高.结果表明:经GPS、APS或IL-1诱导制备的内皮细胞培养上清液对CFU-GM和CFU-Mix的增殖分化有明显促进作用 ,提示其中造血生长因子(HGF)含量或活性有所增加.我们推测GPS和APS对内皮细胞表达HGF具有明显的刺激作用.现代研究认为:HGF与造血细胞膜上相应的HGF 受体结合,启动调控信号向核内转导,引起核内某些基因转录增强或其他基因转录抑制,终表现出蛋白合成改变,而导致细胞行为等变化.可见研究HGF的蛋白表达及调控能深入阐明造血调控的分子生物学机理.HGF生物学活性检测仅反映了内皮细胞条件培养液所含 HGF的生物学活性,HGF有其多效性和丰富性的特点,为进一步阐明GPS和APS能诱导和影响哪些HGF表达,本研究采用免疫细胞化学SP法对内皮细胞的GM-CSF、 IL-3和IL-6蛋白表达进行检测,结果表明:IL-1或GPS、APS诱导后内皮细胞的GM-CSF、IL-3和IL-6蛋白表达阳性率和强度积分值均显著高于对照组 ,这与生物学活性检测的结果相吻合.我们研究结果提示:GPS和APS调控造血的机理之一是上调造血微环境中的内皮细胞分泌造血调控因子来调节血细胞的生成.这或许是人参和当归"补气""补血"的现代生物学机理之一.
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重组人血管内皮抑素对非小细胞肺癌淋巴管生成的抑制及对循环肿瘤细胞的影响
背景与目的血管内皮抑素可以抑制肿瘤新生血管的生成，但对肿瘤微淋巴管的形成与发展是否存在抑制效应引起我们关注。本研究旨在探讨重组人血管内皮抑素（recombinant human endostatin injection）对非小细胞肺癌组织中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）-C、VEGF-D和VEGF受体（VEGFR）-3表达及对外周血循环肿瘤细胞数目的影响。方法荷瘤裸鼠随机分为空白对照组、顺铂组、不同浓度重组人血管内皮抑素组及重组人血管内皮抑素+顺铂组，连续给药2周。1周后检测肿瘤组织中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表达水平和微淋巴管密度。免疫荧光染色诊断和计数循环肿瘤细胞。结果重组人血管内皮抑素组与重组人血管内皮抑素联合顺铂组的表达阳性率、微淋巴管密度均明显低于空白对照组与顺铂组（P<0.05）；较高浓度的重组人血管内皮抑素联合顺铂组与重组人血管内皮抑素组表达阳性率和微淋巴管密度低于相应较低重组人血管内皮抑素浓度的组别（P<0.05）。各组微淋巴管密度与VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3表达阳性率存在正相关。重组人血管内皮抑素联合顺铂各组的循环肿瘤细胞数目明显低于单独使用顺铂或重组人血管内皮抑素（P<0.05）。结论重组人血管内皮抑素可以抑制肿瘤新生淋巴管生成，减少循环肿瘤细胞，作用大小与浓度有关。与顺铂联合使用能够更有效的减少循环肿瘤细胞。
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p16基因表达与Wilms瘤病理分型和临床分期关系的研究
目的与方法:为探Wilms瘤中p16基因表达与肿瘤病理分型和临床分期之间的关系,应用免疫组织化学SP方法,对52例Wilms瘤及7例肿瘤周围正常肾组织(对照)手术标本中p16基因的表达情况进行检测.结果:52例wilms瘤中有16例p16基因表达阳性,阳性率为30.8%,其中预后良好型p16基因表达阳性率为37.2%(16/43),预后差者为0%(0/9),均明显低于正常对照100%(7/7),差异具有显著的统计学意义(P＜0.05).在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ临床期中,p16表达阳性率以Ⅰ期高,逐步递减,分别为47.6%(10/21)、37.5%(3/8)、28.6% (2/7)、6.3%(1/16).结论:Wilms瘤中p16基因表达与肿瘤病理分型和临床分期存在联系,p16基因失活似是Wilms瘤发生发展中的晚期事件.
