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Cx32调控肝癌细胞上皮间质转化的机制
目的 探讨缝隙连接蛋白32(Cx32)在肝癌细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用及其机制.方法 在HepG2细胞(对阿霉素敏感)中干扰Cx32的表达,在HepG2/doxorubicin(DOX)细胞(对阿霉素耐药)中过表达Cx32,Western blot测定Cx32、p-Akt的表达水平.20μmol/L的LY294002(PI3K/Akt信号通路的抑制剂)作用于HepG2/DOX细胞24 h,Western blot检测p-Akt、E-cadherin、vimentin的表达水平,Transwell实验检测细胞的侵袭、迁移能力.在干扰Cx32的HepG2细胞中,用20μmol/L的LY294002作用于细胞24 h,Western blot检测E-cadherin、vimentin的表达水平,Tran-swell实验检测细胞的侵袭、迁移能力.结果 Western blot结果显示,在HepG2细胞中干扰Cx32的表达后,p-Akt的表达升高(P<0.05);在HepG2/DOX细胞中过表达Cx32后,p-Akt的表达降低(P<0.05).20μmol/L的LY294002作用于HepG2/DOX细胞24 h后,p-Akt、vimentin的表达降低,E-cadherin的表达升高(P<0.05),且细胞的侵袭、迁移能力降低(P<0.05).在HepG2细胞中干扰Cx32的表达后,细胞中E-cadherin的表达降低,vimentin的表达升高(P<0.05),且细胞的侵袭、迁移能力显著增加(P<0.05);而在干扰Cx32的HepG2细胞中,用20μmol/L的LY294002作用于细胞24 h后,细胞中E-cadherin、vimentin的表达均没有显著变化(P>0.05),细胞的侵袭、迁移能力也无显著改变(P>0.05).结论 Cx32可调控肝癌细胞中PI3K/Akt信号通路的活性,LY294002可逆转HepG2/DOX细胞的EMT,Cx32可能是通过PI3K/Akt信号通路调控肝癌细胞EMT.
关键词： 缝隙连接蛋白32 肝癌细胞株 PI3K/Akt信号通路 阿霉素 -
叶酸在体外对人肝癌细胞株生长的影响
目的研究叶酸的抑癌防癌作用,用叶酸在体外对人肝癌细胞SMMC-7721进行处理.方法采用生长曲线法、MTT法研究叶酸对细胞的增殖和功能的影响;采用FCM进行细胞周期分析研究叶酸对细胞凋亡的影响.结果提示在叶酸浓度达13.5×10-5mol/L和40.5×10-5mol/L时对人肝癌细胞株的增殖和功能有抑制作用,40.5×10-5mol/L时引起的凋亡率可达27.3%.结论叶酸对脐静脉内皮细胞无抑制作用,表明叶酸对正常人体细胞无不良影响而对癌细胞有抑制作用.
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刺五加皂苷对血管内皮生长因子表达的抑制作用
目的:检测刺五加皂苷(ASS)对血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响.方法:以人肝癌细胞株(Hep G2)为研究对象,采用RT-PCR法测定刺五加皂苷(ASS)对VEGF mRNA表达的影响.结果:刺五加皂苷(ASS)250、500μg/mL作用于Hep G2细胞株,VEGF mRNA表达量下降(P＜0.01).结论:一定剂量刺五加皂苷(ASs)抑制Hep G2细胞株的VEGF mRNA表达量,提示刺五加皂苷(ASS)可以抑制VEGF介导的肿瘤血管新生途径,进而抑制肿瘤的生长与转移.
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姜黄素对肝癌细胞株SMMC7721凋亡的研究
[目的] 探讨姜黄素对人肝癌SMMC7721细胞株的生长凋亡作用及机制.[方法] 用MTT法检测姜黄素对肝癌细胞系SMMC7721增殖的影响;应用流式细胞术检测不同浓度姜黄素对SMMC7721细胞凋亡及线粒体膜电位的影响.[结果]姜黄素对SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用,在6.25～50 μmol/L范围内成剂量依赖性,与对照组相比差异具有显著性意义,P<0.01.姜黄素6.25、12.5、25、50 μmol/L诱导SMMC7721细胞24 h的凋亡率为6.3%、7.2%、37.3%、72.3%,线粒体膜电位下降为6.3%、13.8%、47.8%和87.9%.[结论] 姜黄素可通过诱导细胞凋亡而有效抑制肝癌细胞SMMC7721增殖,并与线粒体膜电位降低相关.
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白毛夏枯草提取液抗肝癌体内外实验研究
目的:观察白毛夏枯草提取物对肝癌细胞株HepG2的体外增殖抑制作用及对小鼠移植性肝癌H22实体瘤的体内抑制作用的影响.方法:(1)肝癌细胞增殖抑制观察:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药物,观察不同浓度的白毛夏枯草水提液对肝癌细胞株HepG2的增殖抑制作用;(2)小鼠腹水瘤抑制作用观察:小鼠接种H22腹水瘤后,造成移植性小鼠肝癌模型.随机分为阴性对照组(NS组)、阳性对照组(5-FU组)、白毛夏枯草水提物大剂量组、白毛夏枯草水提物小剂量组,分别观察荷瘤小鼠的抑瘤率.结果:(1)白毛夏枯草水提物对HepG2细胞有较强的抑制增殖作用,并呈一定的浓度依赖性.(2)白毛夏枯草水提物大剂量组、小剂量组对小鼠腹水瘤抑制率分别为37.84％、34.82％.结论:白毛夏枯草对肝癌细胞和小鼠腹水瘤有较好的抑制作用.
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三氯化镧对CBRH-7919细胞P21基因表达的影响
研究表明细胞周期调控异常是肿瘤发生的重要原因[1,2],如果能阻抑肿瘤细胞周期的异常调控,则能阻滞肿瘤的进一步发展.稀土化合物具有明显的抑瘤性能[3-6],我们研究探讨了三氯化镧对大鼠肝癌细胞株CBRH-7919 P21基因表达的影响.
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尾叶香茶菜二萜类化合物F对肝癌细胞株SMMC-7721的影响
观察尾叶香茶菜中提取物二萜类化合物F对人肝癌细胞株SMMC-7721的作用并探讨其机制.分别应用MTT法、AO/EB荧光染色法分析细胞存活率和凋亡情况,利用DCFH-DA荧光分光光度法检测细胞内过氧化物(ROS)的水平.二萜类化合物F抑制SMMC-7721细胞增殖,且呈时间剂量依赖性,二萜类化合物F作用的SMMC-7721细胞内ROS水平明显升高.二萜类化合物F可以启动细胞内氧化应激诱导SMMC-7721细胞坏死或凋亡而抑制肝癌细胞株增殖.
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p21基因转染人肝癌SMMC-7721 细胞对化疗药物敏感性的研究
目的 探讨p21基因转染人肝癌SMMC-7721 细胞(7721细胞)对化疗药物的敏感性,深入研究p21基因对肝癌细胞的治疗作用.方法 应用磷酸钙介导p21基因转染人肝癌7721细胞;通过 G418筛选稳定表达细胞株并扩大培养;采用MTT法检测肿瘤细胞增殖速度;流式细胞术检测细胞周期变化.结果 经过3～4 w G418筛选得到稳定表达的细胞株,p21基因稳定转染并联合化疗药物应用可明显抑制7721细胞的体外增殖,细胞周期明显改变,细胞从G1期到G2期发生阻滞.结论 提示转染外源p21基因联合化疗药物可使7721细胞周期阻滞于G1期,并可抑制肿瘤细胞增殖.
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桦菌芝多糖注射液对小鼠HepA瘤细胞N-Ras基因表达的影响
1 材料和方法1.1 实验动物雄性昆明种小白鼠50只,体重(20±2)g,由黑龙江中医药大学实验动物中心提供.1.2 肿瘤细胞株小鼠腹水型肝癌细胞株(HepA),由黑龙江肿瘤研究所引进,以腹水传代.无菌取腹水,以0.2ml/只接种于小鼠右侧腋窝下.
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鹅血对肝癌细胞株抑瘤作用的实验研究
1 实验资料供血鹅:武汉市商品白鹅(品种为太湖鹅)10只,26周龄,体重3～5kg,用5～10ml一次性消毒注射器抽取鹅翅翼内静脉新鲜血.实验时用细胞培养液制备成5种浓度梯度的鹅血稀释液,浓度分别为20%、10%、5%、2.5%、1.25%.瘤株:肝癌细胞株MHCC97由我院中心实验室提供.主要试剂及仪器:甲基噻基四唑MTT(美国Sisma)、二甲基亚砜DMSO(美国Sigma)、RPMI1640细胞培养液(Gibco)、胎牛血清(美国sism)、0.25%胰酶、分析纯.Napco5410型CO2培养箱(美国BIO-RAD公司)、MicrolateReader 450酶标仪、96孔细胞培养板等.
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血管内皮细胞生长因子对肝癌细胞钙粘附蛋白表达的影响
目的 研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)对肝癌HepG2细胞同质性粘附作用和钙粘附蛋白(E-cadherin)的影响.方法 采用3H-TdR掺入试验测定VEGF对肝癌HepG2细胞同质性粘附作用,激光扫描共聚焦显微镜检测VEGF对肝癌细胞E-cadherin表达作用.结果 1 ng/ml、5 ng/ml VEGF诱导HepG2细胞60 min、90 min 3H-TdR掺入实验(dpm/min)分别为1 758.67±289.46、1 380.03±328.55和3 124.3±2 262.14、2 245.6±273.24,10 ng/ml VEGF诱导HepG2细胞60min、90 min、120 min3 H-TdR掺入实验分别为1 232.32±201.04、2 337.5±333.04、2 236.99±237.07,显著低于对照组60、90、120分钟的2 184.49±336.03、3 560.±255.17和4 337.4±377.35.5 ng/ml VEGF降低肝癌细胞E-cadherin的表达,荧光强度为757±103,显著低于对照组的352±56.结论 VEGF降低肝癌细胞同质性粘附作用可能与其降低肝癌细胞E-cadherin有关.
关键词： 血管内皮细胞生长因子 肝癌细胞株 钙粘附蛋白 -
KPNA2基因沉默对人肝癌细胞株 SMMC7721和 Bel7404增殖和侵袭能力的影响
目的：观察核转运蛋白基因α2（Karyopherin α-2，KPNA2）基因沉默对人肝癌细胞株 SMMC7721和 Bel7404增殖以及侵袭能力的影响。方法将 KPNA2 siRNA 干扰质粒用 LipofectaminTM 2000方法瞬时转染人肝癌细胞株SMMC7721和 Bel7404，转染后48 h 应用蛋白质印迹法检测转染细胞中 KPNA2蛋白表达。采用 MTT 法检测基因沉默细胞增殖能力，采用 Transwell 法检测基因沉默细胞侵袭能力。结果 SMMC7721细胞株对照组 mRNA 为1．02±0．13，高于 siRNA 转染组的0．37±0．07（t＝10．78，P ＜0．01）；肝癌 Bel7404细胞株对照组 mRNA 为1．05±0．17，高于 siRNA 转染组的0．36±0．06（t＝9．38，P ＜0．01）。肝癌 SMMC7721细胞株对照组蛋白定量值为0．96±0．10，高于转染组的0．42±0．05（t＝11．83，P ＜0．01）；肝癌 Bel7404细胞株对照组蛋白定量值为0．93±0．09，高于转染组的0．48±0．06（t ＝10．19， P ＜0．01）。SMMC7721和 Bel7404细胞株在24、48和72 h 时对照组增殖能力高于转染组，且差异有统计学意义（P ＜0．05）。SMMC7721细胞株对照组侵袭能力值为126．20±21．61，高于 siRNA 转染组的51．13±10．2（t ＝7．68，P ＜0．01）；肝癌 Bel7404细胞株对照组侵袭能力值为125．124±8．04，高于 siRNA 转染组的55．20±18．54（t ＝8．48，P ＜0．01）。结论 KPNA2基因沉默可以调节人肝癌细胞株 SMMC7721和 Bel7404的增殖能力和侵袭能力。
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生存素反义核酸诱导肝癌细胞株SMMC-7721凋亡和增加其对抗肿瘤药物敏感性的研究
背景:生存素是凋亡抑制蛋白家族的重要成员,生存素基因有可能成为肿瘤反义基因治疗的理想靶基因.目的:研究生存素反义核酸诱导肝癌细胞株SMMC-7721凋亡和增加其对常用抗肿瘤药物敏感性的作用,探讨生存素反义核酸用于肿瘤基因治疗的可能性.方法:应用基因重组技术构建pEGFP-C1-生存素反义核酸重组质粒,以脂质体转染法转染SMMC-7721细胞,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测生存素mRNA的表达,用流式细胞仪检测细胞凋亡.将生存素反义核酸分别与7种常用抗肿瘤药物共同作用于SMMC-7721细胞,用四唑蓝(MTT)比色法测定细胞杀伤率.结果:生存素反义核酸可抑制SMMC-7721细胞中生存素mRNA的表达,从而导致细胞凋亡增加,其作用呈剂量依赖性.生存素反义核酸可增加SMMC-7721细胞对7种常用抗肿瘤药物的敏感性,明显增强药物的杀伤作用.结论:生存素反义核酸能靶向抑制野生型生存素基因的表达,提高肝癌细胞对常用抗肿瘤药物的敏感性,有可能成为肿瘤基因治疗的新方法.
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毫米波诱导人肝癌细胞株凋亡的研究
目的研究35.8 GHz毫米波照射诱导人肝癌细胞株BEL7404凋亡.方法选取BEL7404人肝癌细胞体外培养,随机分为4组,分别为对照组、毫米波照射30 min组、氟尿嘧啶(5-FU)组、毫米波联合5-FU组.用荧光显微镜观察细胞核的变化;DNA片段化分析检测染色体断裂情况;用流式细胞仪检测凋亡率.结果 BEL7404细胞经毫米波照射后诱发的细胞死亡具有细胞凋亡的形态学特征;照射30 min组和5-FU组诱导细胞凋亡的比例高于对照组,分别为(14.33±2.66)%,(18.58±2.57)%和(3.21±1.06)%,毫米波与5-FU联合明显增加细胞凋亡率,达(27.91±3.66)%.结论 35.8 GHz毫米波照射可诱导BEL7404肝癌细胞凋亡,与5-FU联合使用可明显增加凋亡比例.
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缺氧环境下三氧化二砷对肝癌细胞株BEL-7402生长及凋亡影响的研究
在人类实体肿瘤中,缺氧情况普遍存在.三氧化二砷(As2O3)在抗肿瘤治疗方面的主要机制为诱导肿瘤细胞凋亡.有研究证明,其对多种消化系肿瘤细胞的生长有抑制作用,但在模拟体内缺氧微环境条件下其对肝癌细胞的生长抑制作用及机制尚少有相关报道,本研究旨在探讨As2O3在缺氧环境下对肝癌细胞的生长抑制、诱导凋亡作用及其机制.
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肝细胞瘤衍化生长因子在结直肠腺癌中的表达及与血管形成关系的研究
肝细胞瘤衍化生长因子(hepatoma-derived growth factor,HDGF)是一种初从肝癌细胞株HuH-7的条件培养液中分离纯化出来的酸性肝素结合蛋白[1].研究发现,HDGF在许多恶性肿瘤中的表达水平显著高于正常组织,外源性HDGF可促进几种肿瘤细胞株增殖[2],提示其过度表达可能与肿瘤发生有关.
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NS-398影响基质金属蛋白酶-2及其抑制剂的表达
近年研究发现,选择性环氧合酶(COX)-2抑制剂具有抑制肿瘤细胞生长,促进其凋亡的作用[1,2].但是选择性COX-2抑制剂影响肿瘤细胞侵袭转移能力的报道较少,其影响基质金属蛋白酶(MMP)和基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)表达方面的报道尤其少见.因此,我们以选择性COX-2抑制剂NS-398作用于HepG2肝癌细胞株,观察MMP-2、TIMP-2表达的变化,探讨其在肿瘤侵袭和转移中的作用.
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ICE基因转染联合化疗药物杀伤肝癌细胞的研究
目的:研究人ICE基因转染联合化疗药物诱导体外杀伤肝癌细胞的作用.方法:应用电穿孔法将构建成功含有目的基因的逆转录病毒载体pLXSN-hICE导入包装细胞系PA317,筛选G418抗性克隆,并将其病毒上清转入肝癌细胞株HepG2,DNA提取、电泳观察;采用3H-TDR掺入法观察、分析化疗药物卡铂对肝癌细胞株SMMC7721及转入相应目的基因后的SMMC7721-ICE,SMMC7721-反义hICE,SMMC7721-neo细胞株体外增殖的影响.结果:ICE基因转染可诱导HepG2形成具有凋亡特征的梯状DNA;在卡铂低浓度诱导下,与对照细胞相比SMMC7721-hICE细胞株体外增殖明显受抑.结论:人ICE基因转染可直接诱导肝癌细胞株HepG2凋亡,明显提高肝癌细胞SMMC7721对化疗药物卡铂杀伤的敏感性,ICE基因转染联合化疗药物诱导极大增强了对肝癌细胞的杀伤作用,可能是治疗肝癌一个有前途的方案.
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血管内皮生长因子对肝癌细胞侵袭能力和同质性粘附作用影响
目的观察血管内皮细胞生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor VEGF)诱导肝癌HepG2细胞转移及其对细胞同质性粘附作用的影响.方法采用3H-TdR掺入及鼠尾胶粘附试验测定VEGF对肝癌HepG2细胞同质性粘附作用以及Bodyen-Chamber观察VEGF诱导肝癌细胞转移作用.结果 1ng/ml、5 ng/ml VEGF诱导HepG2细胞60min、90min、120min 3H-TdR掺入实验(dpm/min)分别为1758.67±289.46、1380.03±328.55、2657.43±310.31和3124.3±2262.14、2245.6±273.24、2091.52±213.84,10ng/ml VEGF诱导HepG2细胞60min、90min、120min,3H-TdR掺入实验(dpm/min)分别为1232.32±201.04、2337.5±333.04、2236.99±237.07,显著低于对照组60、90、120min的2184.49±336.03、3560±255.17、4337.4±377.35,(P＜0.05或0.01);用VEGF 1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml培养肝癌细胞2h,下室浸润的肝癌细胞数分别为5.75±1.00、17.17±2.38、10.33±0.88×104/ml,分别高于对照组1.58±0.38×104/ml,(P＜0.05或0.01).结论 VEGF可以促进肝癌HepG2细胞转移,与VEGF降低肝癌细胞的同质性粘附作用有关.
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Chol-PEG-GA修饰的马钱子碱脂质体体外肝癌细胞摄取特性
目的 研究新型高分子材料Chol-PEG-GA修饰马钱子碱脂质体(CPGL)体外肝癌细胞摄取特性.方法 采用硫酸铵梯度法制备马钱子碱普通脂质体(LP)和CPGL,测定其包封率,以人肝癌SMMC-7721细胞株为模型,研究孵化温度、给药剂量、Chol-PEG-GA及甘草次酸浓度等因素对LP和CPGL摄取的影响.结果 LP和CPGL的平均包封率分别为(81.5±1.2)％和(86.8±1.6)％,平均粒径分别为(131.3±15.8) nm和(147.2士16.6)nm.经过60 min孵育,肝癌细胞摄取CPGL的单位蛋白摄取量高于LP;在25～100 mg.L-1药物浓度范围内,肝癌细胞摄取CPGL的单位细胞摄取马钱子碱量随给药剂量的增加而增加,且明显高于LP (P＜0.05).4℃温度条件下,单位蛋白摄取量明显低于37℃,有显著差异(P＜0.05).结论 CPGL可作为肝细胞靶向的载体,显著提高药物进入肝癌细胞的摄取量,为临床治疗肝脏疾病提供理论依据.
