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牛磺酸通过p38通路对缺氧内皮细胞ICAM-1,VCAM-1表达的影响
探讨牛磺酸(taurine,Tau)通过p-p38通路对牛肺主动脉内皮细胞(PAECs)中ICAM-1,VCAM-1的影响及其作用机制.原代培养PAECs取4~12代细胞用于实验.分为5组:对照(control)组、缺氧(hyp)组、抑制剂(SB203580)组、给药(Tau)组、抑制剂+给药(SB+Tau)组,Tau的给药浓度为100 mmol·L-1,p38抑制剂SB203580浓度为20 μmol·L-1,给药时间为12 h.MTT检测不同浓度Tau对PAECs的抑制.使用Western blot及Real-time PCR方法检测p38通路蛋白及炎症因子ICAM-1,VCAM-1的表达情况.使用免疫荧光检测p38核位移情况.MTT结果显示随着Tau浓度增加,对PAECs增殖抑制增强.Western blot和Real-time PCR结果显示在蛋白水平及基因水平Tau都抑制ICAM-1,VCAM-1的表达.Western blot的结果和免疫荧光的结果均显示Tau可以抑制p38蛋白的活化.Tau可能通过p38 MAPK通路抑制由缺氧引起的牛肺主动脉内皮细胞中ICAM-1,VCAM-1的表达.
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雌激素诱导的合成型血管平滑肌细胞凋亡与p38通路激活及肌细胞增强因子-2的表达
目的 探讨雌激素诱导合成型血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的分子机制.方法 体外培养第3代的雌性大鼠VSMCs分为3组:17β-雌二醇(E2)组、p38通路阻断(SB+E2)组和对照组.药物处理72h后,ELISA法检测细胞内核小体以检测VSMCs凋亡率, Western blotting检测p38总蛋白、磷酸化p38(p-p38)的变化及肌细胞增强因子-2(MEF2)的表达,免疫组织化学染色确认MEF2的定位和表达.结果 ELISA检测显示,E2组VSMCs凋亡率明显高于对照组,而SB+E2组无明显变化.Western blotting显示,E2组p38、p-p38和MEF2均明显增高,而SB+E2组p38表达无明显变化,p-p38和MEF2明显降低.免疫组织化学染色显示,MEF2主要定位于细胞核,各组表达水平与Western blotting结果一致.结论 雌激素可能通过激活p38通路上调MEF2的表达,诱导VSMCs凋亡.
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青藤碱对阿奇霉素诱导的急性肝损伤大鼠的保护作用及机制研究
目的:探索青藤碱对阿奇霉素诱导的大鼠急性肝损伤的影响及其分子机制.方法:SD大鼠随机分为3组:对照组、阿奇霉素(AZM)组和阿奇霉素+青藤碱(AZM+SM)组.苏木素伊红(HE)染色观察肝脏组织病变.脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡.免疫组化检测细胞增殖核抗原-67(Ki-67)表达.ELISA检测IL-6、IL-18和IL-1β水平.蛋白印迹检测p38、p-p38、HSP27和p-HSP27表达.结果:青藤碱可减轻阿奇霉素诱导的急性肝损伤大鼠肝脏组织病变.与对照组相比,阿奇霉素组细胞凋亡增加,Ki67表达下降(P＜0.05).与阿奇霉素组相比,阿奇霉素+青藤碱组细胞凋亡降低,Ki67表达升高(P＜0.05).阿奇霉素组IL-6、IL-18和IL-1β水平高于对照组(P＜0.05).阿奇霉素+青藤碱组IL-6、IL-18和IL-1β水平低于阿奇霉素组(P＜0.05).与对照组相比,阿奇霉素组p-p38/p38和p-HSP27/HSP27比值上升(P＜0.05).与阿奇霉素组相比,阿奇霉素+青藤碱组p-p38/p38和p-HSP27/HSP27比值下降(P＜0.05).结论:青藤碱可通过抑制p38通路的活化减轻阿奇霉素诱导的大鼠急性肝损伤.
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木鳖子醇提物诱导小鼠黑素瘤B16细胞分化的作用机制
目的:探讨木鳖子醇提物(ethanol extract of cochinchina momordica seed,CMSEE)诱导黑素瘤B16细胞分化的作用机制.方法:CMSEE处理B16细胞后,瑞氏染色法观察B16细胞的形态变化；比色法检测B16细胞的黑素含量.Western blotting检测经CMSEE和p38、ERK通路抑制剂SB203580、SD98059分别处理后B16细胞中p-p38、p-ERK表达的变化.结果:CMSEE可诱导B16细胞分化,使细胞的黑素量含量明显升高(P＜0.01),10、20、40 μg/ml CMSEE处理组B16细胞的黑素量D值分别为(0.057±0.007)、(0.173 ±0.005)和(0.249±0.002),而对照组为(0.037±0.002).20 μg/ml CMSEE处理B16细胞后,p-p38蛋白表达水平明显升高,处理60 min时的相对表达量高,为对照组的5.6倍；而p-ERK表达水平明显降低(P＜0.01),处理60 min时的相对表达量为对照组的25％倍.p38通路抑制剂SB203580可阻断CMSEE对B16细胞的分化诱导作用,而ERK通路抑制剂SD98059可增强CMSEE对B16细胞的分化诱导作用.结论:p38通路和ERK通路的活化参与了CMSEE对B16细胞的分化诱导作用.
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p38通路在二烯丙基二硫诱导人胃癌MGC803细胞G2/M期阻滞中的作用
背景与目的:研究表明p38通路参与了细胞G2/M期阻滞过程的调控,但对其调控机制研究很少.本研究旨在探讨p38通路在二烯丙基二硫(diallyldisulfide,DADS)诱导人胃癌MGC803细胞G2/M期阻滞中的作用及其机制.方法:采用MTT法检测MGC803细胞的生长活性;流式细胞仪检测药物对细胞周期分布的影响;Western blot法检测药物对P38蛋白、磷酸化P38蛋白、Cdc25C蛋白的表达.结果:MTT法检测结果显示,P38特异性抑制剂SB203580可拮抗DADS对MGC803细胞的抑制增殖作用.流式细胞仪分析表明,30 mg/L的DADS处理MGC803细胞24 h后,G2/M期的比率为39.4%,高于对照组的9.3%(P＜0.05);但用SB203580抑制P38的活性后,DADS诱导的G2/M期比率从39.4%降到21.2%(P＜0.05).Western blot结果表明,DADS处理MGC803细胞后,p38通路快速激活,磷酸化P38的表达与对照组相比,在20 min内升高3.52倍,而P38总蛋白量没有发生明显改变;DADS作用24 h后,Cdc25C磷酸酶表达降低了62%,而用SB203580抑制剂后,DADS对Cdc25C的抑制作用可以部分逆转(P＜0.05).结论:DADS可能通过激活p38通路使部分MGC803细胞停滞在G2/M期,p38通路调节Cdc25C磷酸酶的表达在DADS诱导MGC803细胞G2/M期阻滞中起着重要作用.
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丙泊酚合并低氧通过p38通路损伤未成熟大鼠的认知功能
目的 探讨丙泊酚合并低氧对未成熟大鼠认知功能的影响及与p38通路、tau蛋白的关系.方法 将90只7日龄(P7)SD大鼠随机分为丙泊酚低氧组、丙泊酚空气组、丙泊酚氧气组、脂肪乳低氧组、脂肪乳空气组、脂肪乳氧气组.丙泊酚低氧组、丙泊酚空气组、丙泊酚氧气组幼鼠腹腔注释丙泊酚50 mg/kg,脂肪乳低氧组、脂肪乳空气组、脂肪乳氧气组幼鼠腹腔注射脂肪乳5.0 mL/kg,1次/d,连续7 d.每次注射完毕后分别放入氧浓度为18％、21％、50％的暖箱(38℃),待幼鼠翻正反射完全恢复后放回鼠笼.另取90只P7大鼠分为阻滞剂加丙泊酚低氧组、阻滞剂加丙泊酚空气组、阻滞剂加丙泊酚氧气组、阻滞剂加脂肪乳低氧组、阻滞剂加脂肪乳空气组、阻滞剂加脂肪乳氧气组,腹腔注射p-p38阻滞剂15 mg/kg,30 min后分别与丙泊酚低氧组、丙泊酚空气组、丙泊酚氧气组、脂肪乳低氧组、脂肪乳空气组、脂肪乳氧气组进行同样处理.采用Western blot法检测海马组织磷酸化tau蛋白、总tau蛋白、p-p38含量,水迷宫实验评估大鼠空间学习和记忆能力.结果 丙泊酚低氧组、丙泊酚空气组与相应脂肪乳组相比p-p38、磷酸化tau蛋白、总tau蛋白含量升高(P<0.05),丙泊酚氧气组、阻滞剂加丙泊酚空气组、阻滞剂加丙泊酚低氧组、阻滞剂加丙泊酚氧气组与相应脂肪乳组相比各蛋白表达无差异(P>0.05).丙泊酚低氧组、丙泊酚空气组、阻滞剂加丙泊酚空气组、阻滞剂加丙泊酚低氧组与相应脂肪乳组相比潜伏期延长(P<0.05)、穿越平台次数减少、第三象限停留时间缩短(P<0.05);丙泊酚氧气组、阻滞剂加丙泊酚氧气组与相应脂肪乳组相比水迷宫实验结果无差异.阻滞剂加丙泊酚氧气组与丙泊酚氧气组,阻滞剂加丙泊酚低氧组与丙泊酚低氧组、阻滞剂加丙泊酚空气组与丙泊酚空气组之间水迷宫实验结果有差异(P<0.05);脂肪乳低氧组与阻滞剂加脂肪乳低氧组、脂肪乳空气组与阻滞剂加脂肪乳空气组、脂肪乳氧气组与阻滞剂加脂肪乳氧气组之间水迷宫实验结果无差异.结论 丙泊酚合并低氧可通过p38通路影响tau蛋白表达从而损伤未成熟大鼠的认知功能,氧气在该过程中可发挥一定的保护作用.
