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葛根素减轻PM2.5对血管内皮细胞损伤的机制研究
探讨PM2.5对EA.hy926型人脐静脉内皮细胞损伤的影响及葛根素的保护作用及机制.采集大气PM2.5分别以0,20,200,400 mg·L-染毒EA.hy926细胞24 h,MTT法测细胞存活率,流式细胞术测细胞凋亡,Western blot法测p-ERK1/2,Bax,Bcl-2蛋白水平,ELISA法测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)含量,并测细胞丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)活性;分别加入葛根素(10,50,100μmol·L-1)和ERK1/2通路特异性阻滞剂PD98059 20μmol·L-1检测葛根素的干预作用及机制.检测发现与对照组比较,PM2.5染毒后呈剂量依赖性降低EA.hy926细胞存活率,上调p-ERK1/2蛋白水平及Bax/Bcl-2蛋白比率以促进细胞凋亡,诱导分泌TNF-α及IL-6含量增高,降低SOD活性,增加MDA含量及LDH活性(P＜0.05);葛根素呈剂量依赖性增加EA.hy926细胞的存活率,下调p-ERK1/2蛋白水平及Bax/Bcl-2蛋白比率以抑制细胞凋亡,降低TNF-α及IL-6含量,增加SOD活性,降低MDA含量及LDH活性(P＜0.05).研究显示葛根素可能通过抑制ERK1/2通路减轻PM2.5对EA.hy926细胞的损伤.
关键词： 大气细颗粒物 葛根素 细胞外信号调节蛋白激酶1/2 血管内皮细胞 -
人参皂苷Rg1对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠海马p-ERK1/2与p-JNK表达的影响
目的 探讨人参皂苷Rg1抗脑缺血再灌注(ischemia reperfusion,I/R)损伤大鼠海马神经元凋亡的可能机制.方法 成年健康雌性SD大鼠120只随机分为脑缺血再灌注模型组(模型组)、人参皂苷Rg1低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高剂量(40 mg/kg)组及假手术组,每组1 8只.各组均腹腔注射给药,假手术组及模型组腹腔注射等量生理盐水,每天1次,连续7天,末次给药后30 min,大鼠右侧大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)2 h再灌注24 h制备I/R模型.以Longa EZ法评定神经功能,尼氏染色、TUNEL染色观察海马锥体神经细胞的损伤情况,并计算神经细胞凋亡率.采用Western blot法检测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)及磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2 (phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2,p-ERK 1/2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinases,JNK)及磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinases,p-JNK)表达.结果 与假手术组比较,模型组神经功能评分、细胞凋亡率、p-JNK、p-ERK 1/2蛋白表达升高(P ＜0.05,P＜0.01),锥体细胞存活数减少(P＜0.01)；与模型组比较,人参皂苷Rg1各剂量组神经功能评分、细胞凋亡率降低(P＜0.05,P＜0.01),人参皂苷Rg1中、高剂量组大鼠锥体细胞存活数增加,海马CA1区p-JNK蛋白表达降低,p-ERK1/2表达升高(P ＜0.05,P＜0.01).假手术组海马CA1区有3-4层锥体细胞,排列整齐、紧密,高倍镜下细胞核大而圆,有1～2个核仁.脑组织缺血损伤后,海马区神经细胞受损严重,CA1区失去正常结构,细胞排列散乱,细胞数量减少.部分神经元皱缩,核固缩、深染,呈三角形、长条形、梭形或不规则形,核染色聚集,核仁不清晰.与人参皂苷Rg1低剂量组比较,人参皂苷Rg1中、高剂量组神经功能评分、细胞凋亡率及p-JNK蛋白表达降低(P＜0.05,P ＜0.01),锥体细胞存活数增加,p-ERK1/2表达升高(P ＜0.05,P＜0.01).人参皂苷Rg1中、高剂量能够改善缺血神经细胞形态,减少神经细胞的丢失,其中,高剂量组作用强于低剂量组.JNK蛋白条带分为两个亚带,JNK1是分子量为46 kD的蛋白,JNK2分子量为54 kD.ERK蛋白条带也分为两个亚带,ERK1是分子量为44 kD的蛋白,ERK2分子量为42 kD的蛋白.结论 人参皂苷Rg1对I/R大鼠的保护作用与抑制海马神经元凋亡,调节p-JNK及p-ERK1/2表达水平有关.
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加味脑泰方对卵巢摘除脑缺血大鼠海马细胞外信号调节蛋白激酶1/2和c-Jun氨基末端蛋白激酶蛋白活化的影响
目的 探讨加味脑泰方对卵巢摘除脑缺血大鼠神经细胞凋亡的影响及其机制.方法 雌性Sprague-Dawley大鼠40只随机分为假手术组(n=10)、模型组(n=10)、雌激素组(n=10)和加味脑泰方组(n=10).模型组、雌激素组、加味脑泰方组大鼠摘除卵巢.去卵巢术后11 d,雌激素组、加味脑泰方组分别予雌激素和加味脑泰方灌胃3 d;术后14 d,模型组、雌激素组、加味脑泰方组线栓法制备局灶性脑缺血模型.缺血24 h后取脑组织,TUNEL法观察神经细胞凋亡率,Western blotting检测海马细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)蛋白活化程度.结果 与模型组比较,加味脑泰方组和雌激素组神经细胞凋亡率显著降低(P<0.001),ERK1/2蛋白活化程度明显升高(P<0.01),p-JNK蛋白活化程度明显降低(P<0.01).结论 加味脑泰方可能通过提高p-ERK1/2蛋白活化,降低p-JNK蛋白活化,降低脑缺血后神经细胞凋亡率.
关键词： 脑缺血 加味脑泰方 中药 凋亡 细胞外信号调节蛋白激酶1/2 磷酸化c-Jun氨基末端蛋白激酶 大鼠 -
HO-1通过Adipophilin途径对脂肪干细胞在低氧无血清条件下的保护机制探讨
目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对脂肪干细胞(ADSCs)在低氧无血清的条件下的保护机制.方法 分离培养SD大鼠ADSCs,取第三代ADSCs分为四组:对照组(Control,Con);低氧无血清(serum-free and oxygen deprivation,SOD)组;慢病毒介导的HO-1组;HO-1+Znpp组.蛋白印迹(Western-blot)法检测四组细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERKl/2)、脂肪分化相关蛋白(Adipophilin,Adi)的表达量;用ERK1/2抑制剂PD98059孵育四组细胞,检测各组细胞中ERKl/2、Adipophilin的变化情况.ELISA法测定四组细胞培养上清液中TNF-a,hs-CRP含量.结果 (1)对照组ERK 1/2、Adipophilin的表达量极低;与对照组相比,SOD组ERK 1/2、Adipophilin的表达量显著升高(P＜0.01),HO-1组与SOD组相比ERK 1/2、Adipophilin的表达量显著降低(P＜0.05);HO-1+Znpp组与HO-1组相比ERK 1/2、Adipophilin的表达量显著升高(P＜0.05)(2)用ERK 1/2抑制剂PD98059孵育四组细胞,较孵育前:SOD组ERK l/2、Adipophilin的表达量显著降低(P＜0.01);HO-1组、HO-1+Znpp组ERK1/2、Adipophilin的表达量降低,但差异无统计学意义(P＞0.05);(3) SOD组TNF-a,hs-CRP浓度较对照组显著升高(P＜0.01);HO-1可显著降低TNF-a,hs-CRP分泌,而这种保护效应可被HO-1抑制剂锌原卟啉(Znpp)所逆转;(4)随着Adipophilin的表达减少,TNF-a,hs-CRP浓度相应降低.结论 HO-1降低ADSCs在低氧无血清条件下的凋亡,其机制与抑制ERK 1/2激活,降低Adipophilin表达,从而减少炎症因子TNF-a,hs-CRP分泌有关.
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APLP2在恶性肿瘤中的研究进展
淀粉样肽前体样蛋白2(APLP2)作为淀粉样前体蛋白(APP)家族中的一员,广泛存在于哺乳动物的全身组织细胞中,是一种高度保守的单次跨膜糖蛋白.在生理状态下,APLP2具有调节其所在细胞部分功能的作用,例如在哺乳动物神经细胞中,APLP2具有促进哺乳动物神经细胞迁移的作用.另外,APLP2在人体中具有维持铜的稳态、维持位于细胞膜表面的主要组织相容性复合体Ⅰ(MHCⅠ)类分子的表达平衡以及维持葡萄糖和胰岛素平衡的作用.近年来,越来越多的研究发现,APLP2在恶性肿瘤中发挥着一定的作用,例如通过启动细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路促进肿瘤细胞的增殖,通过调节肌动蛋白结构增加肿瘤的转移速度以及通过更多地结合MHCⅠ类分子从而发挥抗肿瘤细胞凋亡的作用.本文对APLP2在恶性肿瘤组织中的表达情况及相关机制的研究进展作一综述.
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细胞外信号调节蛋白激酶1/2磷酸化及白细胞介素-32在哮喘小鼠气道黏液高分泌中的作用
目的 探讨细胞外信号调节蛋白激酶1/2 (ERK1/2)特异性抑制药U0126和地塞米松干预对支气管哮喘小鼠肺组织中ERK1/2磷酸化(p-ERK1/2)、白细胞介素-32(IL-32)及黏蛋白5ac(Muc5ac)蛋白表达的影响.方法 将40只支气管哮喘模型小鼠随机分为模型组、实验A组、实验B组、实验C组,每组10只;另取10只正常小鼠作为对照组.模型组于第1和13天腹腔注射卵清白蛋白(OVA)混悬液0.2 mL致敏,第19天开始雾化吸入5％ OVA,每次30 min,连续5d;实验A组、实验B组及实验C组在雾化激发前30 min分别腹腔注射2mg·kg-1地塞米松、30 mg·kg-1 U0126及二甲亚砜0.2 mL,其余操作同模型组;对照组予以0.9％ NaCl,其余操作同模型组.用酶联免疫吸附试验检测肺泡灌洗液中IL-32的表达,用免疫组织化学法检测肺组织中Muc5ac、p-ERK1/2及IL-32蛋白的表达.结果 模型组、实验A组、实验B组的IL-32光密度(OD)值分别为(0.81±0.25),(0.34 ±0.06)和(0.37 ±0.12),Muc5 ac的积分光密度(IOD)值分别为(54462.97±6907.17),(7904.62±1639.96)和(7447.74±1233.68),p-ERK的IOD值分别为(95621.04±11112.78),(10225.53±1456.72)和(10718.69±2554.13),IL-32的IOD值分别为(44870.78±7330.11),(15075.80±3490.51)和(16847.16±3485.83).模型组的上述指标与实验A,B组比较,差异均有统计学意义(均P ＜0.01).结论 p-ERK1/2及IL-32均参与支气管哮喘小鼠气道Muc5ac的表达及分泌,且二者呈协同刺激作用.
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羟基红花黄色素A对氧化低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用
目的 探讨羟基红花黄色素A( HSYA)抑制氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖与细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和丝裂原活化蛋白激酶磷酯酶-1(MKP-1)基因转录及蛋白表达之间的关系.方法 HSYA 10 μmol·L-1和ox-LDL 35 mg·L-1与VSMC共培育48 h,MTT检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期,逆转录PCR(RT-PCR)观察ERK1/2和MKP-1基因表达,Western印迹法观察ERK1/2和MKP-1蛋白表达.结果 与ox-LDL 35 mg·L-1模型组比较,加入HSYA 10 μmol·L-1组细胞存活率明显下降,G0/G1期细胞明显增多,ERK1 mRNA表达下降了42.2％ (P ＜0.01),MKP-1 mRNA显著增加了86.9％ (P ＜0.01),p-ERK1/2蛋白表达降低了39.9％ (P ＜0.01),MKP-1蛋白表达增加了80.6％(P＜0.01)；加入PD98059 10 μmol·L-1组,细胞存活率明显降低了58.3％ (P ＜0.01),G0/G1期细胞明显增多(P＜0.01),ERK1 mRNA表达下降了45.9％ (P ＜0.01)；p-ERK1/2蛋白表达下降了45.9％(P＜0.01)；PD98059 10 μmol·L-1 +HSYA 10 μmol·L-1同时加入,细胞生存率下降了61.9％ (P＜0.01),G0/G1期细胞明显增多(P＜0.01),ERK1 mRNA表达进一步减少(P＜0.01),MKP-1 mRNA增加了110％ (P ＜0.01),p-ERK1/2蛋白表达下降了51.2％ (P＜0.01),MKP-1蛋白表达增加了62.4％(P＜0.01).结论 HSYA通过增强MKP-1蛋白表达、降低p-ERK1/2蛋白活性和抑制细胞周期运转的机制抑制VSMC增殖.
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降钙素基因相关肽对低氧性肺动脉高压肺动脉胶原沉积的影响
目的:观察降钙素基因相关肽(CGRP)对低氧性肺动脉高压(PAH)大鼠肺动脉胶原沉积的影响,以探讨CGRP对低氧性PAH血管重构的作用及机制.方法:大鼠适应性喂养一周,随机分为3组:常氧组、低氧组及低氧+辣椒素组.低氧诱导PAH大鼠模型.低氧+辣椒素组低氧前4d大鼠皮下注射辣椒素(50mg/(kg·d)),耗竭内源性CGRP.低氧(3％O2)刺激大鼠原代肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖,BrdU法检测细胞增殖.Real-time PCR和(或)Western blot检测CGRP、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、collagn Ⅰ、collagenⅢmRNA和(或)蛋白表达.结果:与常氧组相比,低氧组右心室收缩压(RVSP)、平均肺动脉压(mPAP)及肺动脉conagen Ⅰ、collagenⅢ和p-ERK1/2的表达明显升高,而血浆CGRP含量及肺组织CGRP的表达明显降低.HE和MMasson染色结果显示低氧组大鼠肺血管中膜增厚,肺动脉胶原沉积明显增多.而用辣椒素预先耗竭内源性CGRP后能够加重低氧诱导的上述改变.同时低氧能够促进PASMCs的增殖,显著上调p-ERK1/2、collagen Ⅰ及collagenⅢ的表达.外源性CGRP可剂量依赖性的抑制低氧诱导的细胞增殖,明显抑制p-ERK1/2、Collagen Ⅰ及CollagenⅢ的表达,而CGRP的这些作用可以被CGRP阻断剂CGRP8-37所取消.结论:CGRP能够抑制低氧诱导的PAH血管重构,其机制可能与抑制ERK1/2的磷酸化,降低肺动脉胶原异常沉积有关.
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复元胶囊对软骨细胞凋亡细胞外信号调节蛋白激酶1/2信号通路的作用研究
目的 观察复元胶囊对体外原代培养软骨细胞凋亡的影响及对软骨细胞凋亡细胞外信号调节蛋白激酶(extraeellular signal regulated kinase,包括:ERK1和ERK2)信号通路的作用,探讨其治疗骨关节炎的作用机制.方法 建立体外原代培养软骨细胞体系,制备复元胶囊血清,采用硝普钠(SNP)诱导软骨细胞凋亡,并用复元胶囊血清以及ERK1/2的特异阻断剂U0126干预.透射电镜观察软骨细胞凋亡的超微结构,流式细胞仪检测其对软骨细胞凋亡的影响,免疫印迹技术(Western印迹法)检测磷酸化ERK1/2、p53蛋白表达水平,比色法观察caspase-3活性变化.结果 复元胶囊血清能降低SNP诱导的软骨细胞凋亡率,促进磷酸化ERK1/2蛋白表达,降低凋亡基因p53蛋白表达,抑制凋亡执行因子caspase-3的活性;使用U0126阻断ERK1/2信号通路后,复元胶囊血清也能降低SNP诱导的软骨细胞凋亡率,减少凋亡基因p53蛋白表达,抑制凋亡执行因子caspase-3的活性,但足对促进磷酸化ERK1/2蛋白表达作用不明显.结论 复元胶囊血清通过促进磷酸化ERK1/2表达、调节ERK1/2信号通路下游p53和caspase-3因子而抑制SNP诱导的软骨细胞凋亡.
关键词： 软骨细胞 细胞凋亡 细胞外信号调节蛋白激酶1/2 中药治疗 -
经皮穴位电刺激对急性内脏痛大鼠脊髓细胞外信号调节蛋白激酶1/2活化的影响
目的 通过观察经皮穴位电刺激(TENS)对宫颈扩张大鼠脊髓细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)1/2磷酸化水平的影响,探讨TENS抑制急性内脏痛的机制.方法 将36只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为单纯刺激组、TENS组和假手术组,每组12只.单纯刺激组大鼠在手术暴露扩张宫颈前于“合谷”和“三阴交”穴位穿刺留针,但不予TENS;TENS组大鼠在手术暴露扩张宫颈前后,于“合谷”和“三阴交”穴位穿刺留针行TENS;假手术组大鼠仅手术暴露宫颈,不行宫颈扩张和穴位穿刺留针.采用免疫组织化学法测定脊髓磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)水平,记录大鼠腹直肌肌电位(EMG)振幅.结果 3组间宫颈扩张前腹直肌EMG振幅的差异均无统计学意义(P值均＞0.05),假手术组宫颈扩张前后腹直肌EMG振幅的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).单纯刺激组和TENS组宫颈扩张后30、60、120 min的腹直肌EMG振幅均显著高于同组宫颈扩张前(P值均＜0.05),单纯刺激组宫颈扩张后30、120 min的腹直肌EMG振幅均显著低于同组宫颈扩张后60 min(P值均＜0.05),TENS组宫颈扩张后30、60、120 min的腹直肌EMG振幅均显著低于单纯刺激组同时间点(P值均＜0.05).单纯刺激组、TENS组、假手术组的脊髓p-ERK1/2阳性细胞数分别为(33.57士6.79)、(26.86±6.23)、(9.45±1.16)个,单纯刺激组和TENS组均显著多于假手术组(P值均＜0.05),单纯刺激组又显著多于TENS组(P＜0.05).结论 脊髓ERK1/2信号通路参与宫颈扩张所致的急性内脏痛的信号转导过程,抑制ERK1/2的活化可能是TENS缓解内脏痛的机制之一.
关键词： 穴位电刺激 急性内脏痛 细胞外信号调节蛋白激酶1/2 脊髓 -
安子合剂对抗心磷脂抗体阳性流产小鼠母胎界面ERK1／2信号通路的影响
目的：研究细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular signal regulated kinase，ERK）1/2信号通路参与抗心磷脂抗体（anticardiolipin antibodies，ACA）阳性流产的发病过程，从细胞增殖的角度阐明安子合剂对ERK1/2信号通路的影响。方法采用免疫组化方法检测ACA阳性流产模型组、空白对照组、安子合剂低/中/高剂量组和阿司匹林组小鼠母胎界面ERK1、ERK2磷酸化水平。结果 JD801形态学统计分析结果显示安子合剂低剂量组ERK1平均光密度值（0.678±0.097）接近空白对照组的平均光密度值（0.727±0.047），差异无统计学意义；模型组、安子合剂中剂量组、高剂量组、阿司匹林组ERK1平均光密度值（0.434±0.066、0.613±0.041、0.487±0.061、0.551±0.056）均较空白对照组明显降低，差异均有统计学意义（P＜0.01）。模型组、安子合剂低剂量组、中剂量组、高剂量组、阿司匹林组ERK2平均光密度值（0.430±0.058、0.621±0.041、0.562±0.047、0.449±0.062、0.515±0.045）均较空白对照组（0.708±0.038）明显降低，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论安子合剂可以通过ERK信号转导通路提高细胞增殖的活性，改善胎盘功能，改变妊娠结局。
关键词： 抗心磷脂抗体 细胞外信号调节蛋白激酶1/2 流产 母胎界面 安子合剂 -
ERK1/2信号通路在青蒿琥酯抑制PDGF-BB诱导HSC细胞增殖中的作用
目的:观察青蒿琥酯(Artesunate,Art)对血小板衍生生长因子-BB(platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)刺激大鼠肝星状细胞(he-patic stellate cell,HSC)增殖,磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(phosphorylated extracellular signal regulated kinase 1/2,p-ERK1/2)表达的影响,探讨Art抗肝纤维化的分子机制.方法:实验分为对照组、PDGF-BB组、PDGF-BB+Art组和PDGF-BB+PD98059组.以PDGF-BB诱导HSC增殖,再分别加入不同浓度的Art和ERK1/2抑制剂PD98059.CCK-8法检测各组HSC细胞的增殖情况,ELISA法测定细胞上清液中I型胶原的含量,免疫印迹(Western blotting)法检测各组细胞ERK1/2的表达及活化情况.结果:PDGF-BB可诱导HSC细胞增殖,p-ERK1/2表达增高,而PDGF-BB+Art组、PDGF-BB+PD98059组HSC I型胶原的含量及P-ERK1/2活性均降低.结论:ERK1/2参与了PDGF-BB诱导HSC细胞增殖的作用,Art抗PDGF-BB所诱导的HSC细胞增殖作用与其抑制ERK1/2的活化有关.
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双歧杆菌的完整肽聚糖对大鼠腹腔巨噬细胞ERK的影响
目的 探索分叉双歧杆菌的完整肽聚糖(WPG)对大鼠腹腔巨噬细胞ERK1/2的调控作用.方法 以WPG刺激大鼠腹腔巨噬细胞或以PKC抑制剂Chelerythrine预先孵育巨噬细胞,再用WPG刺激巨噬细胞,后用Western blot检测巨噬细胞ERK1/2的表达水平.结果 未受WPG刺激的正常大鼠腹腔巨噬细胞ERK1/2处于低活性状态,给予WPG刺激巨噬细胞,其磷酸化ERK1/2的蛋白表达水平明显高于对照组(P＜0.01).但经Chelerythrine预先孵育巨噬细胞后,其磷酸化ERK1/2的蛋白表达水平明显低于WPG刺激组(P＜0.01).结论 分叉双歧杆菌的WPG可通过PKC激活巨噬细胞的ERK1/2.
关键词： 双歧杆菌 完整肽聚糖 巨噬细胞 细胞外信号调节蛋白激酶1/2 -
清肝祛湿活血方对非酒精性脂肪肝大鼠ERK1/2 磷酸化的影响
目的:通过观察治疗前后ERK1/2磷酸化的变化,探讨清肝祛湿活血方治疗非酒精性脂肪肝的部分机制.方法:将90只SD大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,多烯磷脂酰胆碱组,清肝祛湿活血方低、中、高剂量组6组,每组15只.通过高脂饲料喂养+腹腔注射四环素复制非酒精性脂肪肝模型,低、中、高剂量组分别给予清肝祛湿活血方生药5.63,11.25,22.5 g/(kg·d)灌胃,多烯磷脂酰胆碱组给予多烯磷脂酰胆碱550μg/(g·d),模型对照组和正常对照组予生理盐水10μL/(g·d)灌胃.30 d后尾静脉采血,采用血糖仪查空腹血糖(FPG);眶后静脉丛采血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测空腹胰岛素(FINS)、游离脂肪酸(FFA)和三酰甘油(TG),并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);留取肝脏组织,采用ELISA法测定肝脏细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2),采用蛋白印记法检测肝脏固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)表达.结果:模型对照组FPG、FINS、FFA、TG、HOMA-IR、ERK1/2和SREBP-1c均显著高于正常对照组,差别有统计学意义(P<0.05).清肝祛湿活血方3个剂量组的FPG、FINS、FFA、TG、HOMA-IR、P-ERK1/2和SREBP-1c与模型对照组对比均下降,差别有统计学意义(P<0.05).结论:清肝祛湿活血方能够改善ERK1/2过度磷酸化,降低SREBP-1C表达,从而调节糖脂代谢,改善IR.这可能是其治疗非酒精性脂肪肝的部分机制.
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脑缺血损伤后细胞外信号调节蛋白激酶1/2信号通路及胡黄连苷Ⅱ的干预作用
目的 探讨胡黄连苷Ⅱ对脑缺血损伤后细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路的影响.方法 成年健康雄性Wistar大鼠90只,随机选择15只为对照组,其余75只应用线栓法建立大鼠脑缺血模型,经腹腔注射胡黄连苷Ⅱ 20 mg/kg干预治疗为胡黄连苷组.将成功的60只动物模型随机分为模型组、治疗组、脂多糖(LPS)组及U0126组,每组15只.用改良神经功能缺损评分(mNSS)评价动物神经行为功能,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,Western blot检测ERK1/2表达水平.结果 大鼠脑缺血损伤后出现神经行为功能障碍,皮质区神经细胞凋亡数量和pERK1/2蛋白表达较对照组明显增多(P＜0.05).胡黄连苷组和U0126组大鼠皮质区凋亡细胞与pERK1/2表达较模型组明显降低(P＜0.05),LPS组大鼠凋亡细胞与pERK1/2表达水平较高,但后期pERK1/2表达水平有所下降,动物神经行为功能恢复.结论 胡黄连苷Ⅱ可能通过降低ERK1/2磷酸化水平,抑制神经细胞凋亡.
关键词： 胡黄连苷Ⅱ 脑缺血 凋亡 细胞外信号调节蛋白激酶1/2 大鼠 -
黄连素抑制ERK1/2途径减轻大气细颗粒物对EA.hy926内皮细胞损伤的研究
目的:探讨大气细颗粒物(PM2.5)对EA.hy926型人脐静脉内皮细胞的损伤及黄连素的保护作用及其机制.方法:采集大气PM2.5并分别以0、20、200、400 mg/L染毒EA.hy926细胞24 h,MTT法检测细胞存活率、流式细胞术检测细胞凋亡、Western blot法检测p-ERK1/2、BAX、BCL-2蛋白表达,ELISA法测IL-6、TNF-α、MDA含量及SOD、LDH活性;分别加入黄连素(10、50、100μmol/L)和ERK1/2通路特异性阻滞剂PD98059 20 μmol/L检测黄连素的干预作用.结果:与对照组比较,PM2.5染毒后呈剂量依赖性降低细胞存活率,并上调p-ERK1/2蛋白水平及BAX/BCL-2蛋白比率以促进细胞凋亡、诱导分泌IL-6、TNF-α及升高MDA含量、降低SOD活性、升高LDH活性(P＜0.05);黄连素呈剂量依赖性升高PM2.5作用下细胞存活率、下调p-ERK1/2蛋白水平及BAX/BCL-2蛋白比率以抑制细胞凋亡、降低IL-6、TNF-α及MDA含量、升高SOD活性、降低LDH活性(P＜0.05).结论:黄连素能通过抑制ERK1/2通路,减轻PM2.5对EA.hy926细胞的损伤.
关键词： 黄连素 PM2.5 细胞外信号调节蛋白激酶1/2 血管内皮细胞 -
前列腺素E2受体1亚型拮抗剂通过抑制ERK通路减轻转化生长因子β1诱导的小鼠系膜细胞损伤
目的 探讨前列腺素E2(PGE2)受体1亚型(EP1)拮抗剂(SC-19220)对转化生长因子(TGF)β1诱导的小鼠肾小球系膜细胞增殖、前列腺素合酶表达、细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的影响及可能机制.方法 小鼠肾小球系膜细胞分组:对照组;TGF-β1(10μg/L)组;药物干预组:不同浓度(0.1、0.5、1.0 μmol/L)SC-19220+ TGF-β1(10卜Lg/L)组.CCK-8法检测细胞增殖;ELISA法检测细胞上清中PGE2的表达;实时荧光定量PCR法检测细胞结缔组织生长因子(CTGF)、层粘连蛋白(LN)、环氧化酶2(COX2)、膜结合型前列腺素E2合酶1(mPGES1) mRNA的表达.Western印迹法检测CTGF、LN、COX2、mPGES1及ERK1/2活性变化.结果 与对照组比,TGF-β1组系膜细胞增殖增加(P ＜ 0.05),PGE2表达增加(P ＜ 0.05),CTGF、LN、COX2、mPGES1 mRNA及蛋白表达增加(P＜0.05),ERK1/2活性增加(P＜0.05).SC-19220干预后呈剂量依赖性抑制系膜细胞增殖(P＜0.05),下调PGE2的表达(P ＜ 0.05),抑制CTGF、LN、COX2、mPGES1 mRNA及蛋白表达(P ＜ 0.05),抑制ERK1/2活性(P＜0.05).结论 SC-19220可能通过抑制ERK1/2活性,反馈抑制COX2、mPGES1及PGE2的表达,从而下调CTGF、LN的表达,减轻TGF-β1诱导的系膜细胞损伤.
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艾塞那肽对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响
目的:研究艾塞那肽对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及涉及的信号通路.方法:艾塞那肽以不同浓度、时间作用于人乳腺癌MCF-7细胞,MTT法测细胞数目,流式细胞仪测定细胞周期,Western blot测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,Erk1/2)和蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)磷酸化程度.结果:艾塞那肽1、10 nmol/L作用24、48 h或100、1 000 nmol/L作用24、48、72、96 h,MCF-7细胞数目减少,但差异无统计学意义,艾塞那肽1、10 nmol/L作用72、96 h,MCF-7细胞数目较对照组明显减少(P ＜ 0.05).艾塞那肽10 nmol/L作用96 h,S+ G2/M期细胞数目减少(P ＜ 0.05),同时出现Erk1/2磷酸化程度下降、Akt磷酸化程度升高,但差异无统计学意义.结论:艾塞那肽1、10 nmol/L作用MCF-7细胞72、96 h,抑制细胞增殖,该作用未涉及Erk和PI3K/Akt信号通路.
关键词： 乳腺肿瘤 艾塞那肽 MCF-7细胞 细胞外信号调节蛋白激酶1/2 蛋白激酶B -
氢溴酸樟柳碱对急性脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织细胞凋亡及ERK1/2磷酸化水平的影响
目的:研究氢溴酸樟柳碱对急性脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织细胞凋亡及细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)磷酸化(p-ERK1/2)水平的影响.方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组(尼莫地平1.0 mg/kg)和氢溴酸樟柳碱高、中、低、极低剂量组(1.2、0.6、0.3、0.15 mg/kg),每组8只,采用线栓法建立大鼠急性脑缺血再灌注损伤模型.分别于脑缺血2 h和再灌注6 h时对各组大鼠尾iv给药1次,再灌注22 h后检测各组大鼠脑组织三磷酸腺苷(ATP)酶活性、Ca2+含量、细胞凋亡情况、脑组织中p-ERK1/2蛋白表达和p-ERK1/2/总ERK1/2(t-ERK1/2)比例.结果:与假手术组比较,模型组大鼠脑组织ATP酶活性明显降低、Ca2+含量明显增加、凋亡细胞密度明显增加,以上差异均有统计学意义(P<0.01).与模型组比较,各给药组大鼠脑组织凋亡细胞密度均明显减小,阳性对照组和氢溴酸樟柳碱高、低剂量组大鼠脑组织Ca2+含量均明显降低,氢溴酸樟柳碱高、低、极低剂量组大鼠脑组织中p-ERK1/2/t-ERK1/2比例均明显增加,以上差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);其余差异均无统计学意义(P>0.05).结论:氢溴酸樟柳碱能抑制急性脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织细胞凋亡,其作用机制可能与激活ERK1/2信号通路和调节ATP酶活性,进而降低脑组织Ca2+含量有关.
关键词： 氢溴酸樟柳碱 急性脑缺血再灌注 大鼠 细胞凋亡 细胞外信号调节蛋白激酶1/2 -
细胞外信号调节蛋白激酶1/2在介导周期性牵张力对牙周膜细胞成骨分化中的作用
目的 研究周期性牵张力刺激下细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)1/2对牙周膜细胞成骨分化的分子调控机制.方法 组织块法培养人牙周膜细胞.采用多通道应力加载系统对细胞施加频率0.5 Hz、振幅10%的周期性牵张力(加力时间1、3、6、12、24 h),以不加力的细胞作为对照,并分别在加力前应用ERK1/2通路特异性抑制剂U0126以及对细胞转染ERK1/2显性负相变异体(DN-ERK1/2).采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)及蛋白质印迹法研究人牙周膜细胞的基因蛋白水平变化.结果 加力后人牙周膜细胞的p-ERK1/2蛋白水平及骨钙蛋白(OCN)mRNA、骨涎蛋白(BSP)mRNA水平均显著升高,Runt相关基因(Runx)2 mRNA及蛋白水平在加力3、6 h均显著升高.加入抑制剂U0126或细胞转染DN-ERK1/2后,Runx2、OCN、BSP mRNA水平以及Runx2、p-ERK1/2蛋白水平均降低.结论 ERK1/2是周期性牵张力刺激下牙周膜细胞成骨分化的重要分子途径,力学刺激下激活的ERK1/2可能通过提高Runx2蛋白的表达水平而参与成骨基因OCN和BSP的转录表达.
关键词： 牙周膜细胞 成骨分化 周期性牵张力 细胞外信号调节蛋白激酶1/2
