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竹节参总皂苷通过调节TGF-β1/Smad3通路改善衰老大鼠心肌纤维化的作用研究
研究竹节参总皂苷(saponins extracted from Panax japonicas,SPJ)对衰老大鼠心肌纤维化的改善作用及作用机制.将18月龄SD雄性大鼠随机分为衰老模型组、SPJ低剂量组、SPJ高剂量组,每组10只;衰老模型组,SPJ低、高剂量组分别灌胃给予等量的生理盐水,SPJ 10,60 mg·kg-1 ·d-1,每周6次,持续灌胃6个月至24月龄;另取10只6月龄大鼠作为青年对照组.处死动物后,采用HE染色观察各组大鼠心肌形态;Masoon染色观察各组大鼠胶原沉积的变化;RT-PCR法检测各组大鼠心脏组织中胶原相关蛋白COL1α2,COL3α1,肌成纤维细胞标记物α-SMA和基质金属蛋白酶MMP9,MMP2的mRNA表达水平;Western blot法检测各组大鼠心脏组织中TGF-β1,p-Smad3,IL-1β,TNF-α的蛋白表达.SPJ能有效改善衰老大鼠心肌纤维紊乱程度,减少炎性细胞浸润,降低衰老大鼠胶原蛋白沉积;能明显下调衰老心脏组织中COL1α2,COL3α1,α-SMA和MMP9,MMP2的mRNA表达水平;同时,能有效抑制衰老心脏中TGF-β1,p-Smad3,TNF-α,IL-1β蛋白的表达量.SPJ能有效改善衰老大鼠心肌纤维化程度,其作用机制与抑制衰老心脏中TGF-β1,p-Smad3蛋白表达,降低心肌炎症反应有关.
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芪苈强心胶囊对心肌梗死后心力衰竭大鼠肺结构重塑作用及机制
目的 观察芪苈强心胶囊防治心肌梗死(心梗)后心力衰竭大鼠肺结构重塑的作用及机制.方法 结扎大鼠冠脉左前降支,建立急性心梗模型,随机分为模型组(灌胃蒸馏水1 mL/100 g,n=13),芪苈强心组[中药组,灌胃芪苈强心胶囊药液1 g/(kg·d),n=9],另设假手术组(灌胃蒸馏水1 mL/100 g,n=10).干预4周后,应用超声心动图检测大鼠的心功能;取肺组织采用HE染色、Masson染色方法观察肺的结构学变化;用Western blot方法、免疫组织化学法检测肺组织α-SMA、Collagen Ⅰ、TGF-β1、p-Smad3蛋白表达情况.结果 与假手术比较,模型组EF、FS降低(P＜0.05),LVIDd、LVIDs、EDV、ESV、α-SMA、Collagen Ⅰ、TGF-β1、p-Smad3蛋白表达升高(P＜0.05),模型组肌型血管比例及肺组织胶原面积升高(P＜0.05).与模型组比较,中药组EF、FS升高(P＜0.05),LVIDs、ESV、肺α-SMA、Collagen Ⅰ、TGF-β1、p-Smad3蛋白表达降低(P＜0.05),中药组肌型血管比例及肺组织胶原面积域降低(P＜0.05).结论 芪苈强心胶囊可改善心梗后心力衰竭大鼠肺结构重塑程度,其作用机制可能通过调控TGF-β1/Smad3信号通路实现.
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贝母提取物对异丙肾上腺素致小鼠心肌纤维化的作用
目的:观察贝母提取物(FE)对异丙肾上腺素(Iso)致小鼠心肌纤维化的作用.方法:昆明种小鼠40只,雌雄兼用,随机分为4组(n=10):对照组、模型组、FE 900 mg/kg、300 mg/kg剂量组,每只i.h Iso1.5 mg/kg(0.3 ml/d)造模,持续14 d;高、低给药组造模同时分别0.9 ml/d,0.4 ml/d灌胃FE,对照组s.c.等量生理盐水,连续30d.实验结束,测定小鼠心重指数,血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量,HE和Masson染色分析心肌组织病理改变,免疫组化法检测心肌转化生长因子β1(TGF-β1)表达.结果:与对照组相比,模型组SOD活性显著性下降,MDA含量显著升高(P＜0.05);显微镜下,心肌组织间隙变大,炎性细胞浸润,出血坏死细胞增加,TGF-β1表达明显增加(P＜0.05);与模型组比较,FE组小鼠心重指数明显下降,SOD活性显著提高,MDA含量明显下降(P＜0.05),心肌组织病理学改变缓解,TGF-β1表达明显下调(P＜0.05),且呈一定剂量依赖性.结论:FE治疗对抗Iso诱导心肌纤维化,其机制可能与清除氧自由基,减轻脂质过氧化损伤及抑制TGF-β1表达有关.
关键词： 贝母提取物 心肌纤维化 TGF-β1/Smad3信号通路 小鼠 -
厄贝沙坦对自发性高血压慢性肾功能衰竭大鼠肾功能的影响及机制研究
目的 观察厄贝沙坦对自发性高血压大鼠慢性肾功能衰竭(SHR-CRF)模型肾功能的影响并探讨其机制.方法 SHR随机分为模型组及厄贝沙坦高、中、低剂量组,另设Wistar大鼠作为对照组.采用SHR进行5/6肾切除复制SHR-CRF模型.造模后予大鼠灌胃给药,连续8周.观察一般状况、血压,测定血液中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)浓度及尿液中尿蛋白(UP)、BUN、Cr、尿微量白蛋白(mALB)的浓度;采用荧光定量PCR测定肾转化生长因子-β1(TGF-β1)、转化生长因子-β受体I(TGF-βRI)、转化生长因子-β受体II(TGF-βRII)、Smad3 mRNA的表达.结果 厄贝沙坦能显著改善SHR-CRF大鼠症状,降低血压(P＜0.05),降低血液中BUN、Cr及尿液中UP、BUN、Cr、mALB浓度(P＜0.05),降低肾组织TGF-β1、TGF-βRI、TGF-βRII、Smad3表达.结论 厄贝沙坦能降低SHR-CRF模型的血压、改善肾功能,与抑制肾脏TGF-β1/Smad3信号通路的激活有关.
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基于TGF-β1/Smad3信号通路探讨血竭含药血清对皮肤成纤维细胞的影响
目的:探讨血竭含药血清对皮肤成纤维细胞TGF-β1/Smad3信号通路的影响.方法:将大鼠随机分为血竭高、中、低剂量含药血清组和正常对照组,每组6只.用药组分别以0.2、0.1、0.05 g·kg-1·d-1的血竭灌胃,正常对照组给予生理盐水,7d后取血制备含药血清.组织块法培养大鼠成纤维细胞,检测血竭含药血清对成纤维细胞增殖活性、TGF-β1分泌水平以及TGF-βR Ⅰ、TGF-βRⅡ、Smad3和p-Smad3蛋白表达的影响.结果:与正常对照组比较,血竭各剂量含药血清能显著提高成纤维细胞的增殖活性和TGF-βR Ⅰ、TGF-βRⅡ及p-Smad3蛋白的表达(P＜0.05或P＜0.01);中、高剂量含药血清组TGF-β1水平、Smad3、和Smad3蛋白磷酸化水平明显上升(P＜0.05或P＜0.01).结论:血竭对创伤的修复作用可能与其调节TGF-β1/Smad3信号转导通路有关.
关键词： 血竭 含药血清 成纤维细胞 TGF-β1/Smad3信号通路 -
反义Smad3转染阻断TGF-β1信号转导对球囊损伤后大鼠血管内膜增生的影响
目的 通过建立大鼠颈动脉球囊损伤模型并体内转染反义Smad3腺病毒载体,研究阻断TGF-β1/Smad3信号途径对损伤后大鼠颈动脉内膜增生的影响.方法 90只SD大鼠随机分为单纯损伤组(单纯球囊损伤大鼠颈动脉内膜)、干预组(损伤后局部保留灌注反义Smad3腺病毒液)、空白对照组(损伤后局部灌注空载腺病毒液);另取6只同周龄大鼠作为正常对照组(不进行任何处理).各组分别在损伤后第1天、3天、1周、2周、1月、3月时处死大鼠并取材.ELISA法检测单纯损伤组和正常对照组不同时间点血清中TGF-β1的质量浓度;Real-time PCR和HE染色法分别检测三个损伤组在不同时间点Smad3 mRNA表达和血管壁内膜、中膜厚度.结果 单纯损伤组各时间点TGF-β1的质量浓度较正常对照组显著升高(P<0.05).干预组第1天、3天、1周、2周、1月时的Smad3 mRNA表达和第1天、2周、3月时的内膜/中膜比值均较单纯损伤组明显下降(P<0.05);单纯损伤组与空白对照组各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 体内转染反义Smad3可以阻断TGF-β1/Smad3信号转导,从而抑制内膜增生.
关键词： 球囊损伤 内膜增生 TGF-β1/Smad3信号通路 反义Smad3 腺病毒 -
小青龙汤对哮喘大鼠TGF-β1/Smad3信号通路的影响
目的:探讨小青龙汤对哮喘大鼠TGF-β1 /Smad3信号通路的影响.方法:将24只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常对照组(A组),支气管哮喘组(B组)和小青龙汤组(C组),每组各8只.以卵清白蛋白(OVA)致敏与激发建立哮喘大鼠气道重塑模型.小青龙汤干预支气管哮喘大鼠后,HE染色观察各组气道壁嗜酸性粒细胞浸润及气道平滑肌增生情况;应用图像分析技术测定各组肺内支气管Wat、Wam等重塑指标;免疫组织化学法检测各组肺组织TGF-β1、Smad3蛋白的表达;酶联免疫吸附(ELISA)法测定各组血清中TGF-β1的浓度.结果:B组、C组大鼠Wat、Warn较A组明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.01),C组Wat、Wam较B组低,差异具有统计学(P＜0.01);免疫组织化学显示B组和C组TGF-β1及Smad3蛋白的表达明显高于A组,差异具有统计学(P＜0.01),B组高于C组,差异具有统计学(P＜0.01);血清中TGF-β1的浓度比较,B组和C组明显高于A组,差异具有统计学(P＜0.01),B组高于C组,差异具有统计学(P＜0.01).结论:小青龙汤可能通过影响支气管哮喘大鼠TGF-31 /Smad3信号通路来拮抗气道重塑,从而起到治疗作用.
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类泛素缀和酶9在肝纤维化中的作用及机制
目的 研究类泛素缀和酶9(UBC9)在肝星状细胞的激活及肝纤维化中的作用机制.方法 通过蛋白印记法(Western blot)检测UBC9在不同浓度的转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激下的肝星状细胞LX-2中的表达情况;构建UBC9质粒干扰片段(UBC9-shRNA),采用脂质体介导转染LX-2,同时设置无义序列组和空白对照组,实时荧光定量PCR检测转染后UBC9 mRNA的表达;Western blot检测UBC9在蛋白水平的表达;Western blot检测下调UBC9对α-SMA、Collagen I及磷酸化的Smad3表达的影响.CCK8检测转染后细胞增殖能力.结果 UBC9在TGF-β1因子刺激下的肝星状细胞LX-2表达增加,一定剂量下呈浓度依赖性.转染干扰片段UBC9-shRNA后,激活的LX-2细胞增殖减弱,α-SMA和Collagen I蛋白的表达减少,而且下调UBC9也能抑制磷酸化的Smad3的表达.结论 下调UBC9可以通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路进而影响肝星状细胞LX-2的激活,这些都提示UBC9在肝纤维化过程具有重要作用,为肝纤维化治疗提供一些新的理论依据.
关键词： 肝纤维化 Ubc9 肝星状细胞 TGF-β1/Smad3信号通路 -
全反式维甲酸对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏TGF-β1/Smad3信号通路的影响
目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾脏组织TGF-β1/Smad3信号通路的影响.方法:雄性Wistar大鼠72只随机分成3组:假手术组、UUO组、ATRA干预组,每组均为24只.UUO组和ATRA组大鼠腹腔注射麻醉后,行左侧输尿管结扎术.在同样的条件下,假手术组只探及肾包膜.ATRA组自手术前一天起,每天给予ATRA( 15mg/kg)溶液灌胃一次直至处死当天,假手术组和UUO组大鼠在相同条件下给予等容量生理盐水灌胃,各组大鼠于术后第21天处死,取其左侧肾脏.肾脏组织HE及Masson染色观察病理改变,计算肾间质纤维化(RIF)指数.免疫印迹(Western blot)和实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测肾脏组织Smad3的蛋白及其mRNA表达.免疫组织化学法检测肾脏组织TGF-β1、Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)和纤维连接蛋白(FN)的蛋白表达.结果:与UUO组比较,ATRA组大鼠肾脏组织RIF指数、TGF-β1、Col-Ⅳ和FN蛋白表达均明显降低(P＜0.05),而肾脏组织Smad3的蛋白及其mRNA表达无明显差异(P＞0.05).结论:ATRA可能通过下调UUO大鼠肾脏组织TGF-β1的表达,从而减少ECM积聚而起到减轻RIF的作用；但ATRA对TGF-β1/Smad3信号通路的下游蛋白Smad3的表达无明显影响.
关键词： 全反式维甲酸 TGF-β1/Smad3信号通路 肾间质纤维化 大鼠
