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3种银杏内酯成分的质谱裂解途径研究
该文利用高分辨的四极杆串联飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF-MS)的高分辨率及高质量准确度特点,在负离子模式下,对3种银杏内酯(银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C)的质谱裂解规律进行研究.结果表明,3种银杏内酯有相似的裂解途径,包括4条共同的裂解途径和1个共同的特征性离子.在高质量区,三种银杏内酯的主要裂解途径是内酯环开环并连续丢失CO,C02,以及母核不断失去H20.在低质量区,碎片离子m/z 72.993 6是3种银杏内酯共有的特征性碎片离子,推测可能是C环开裂形成的碎片离子.碎片离子m/z 141.018 8,125.023 8,113.024 0,97.029 1是银杏内酯B、银杏内酯C的共有的特征性碎片离子,推测可能是母核A环开环或连续碎裂形成的碎片离子.上述质谱裂解途径可为银杏内酯类化合物的结构鉴定提供依据.
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高效液相色谱蒸发光散射测定银杏叶软胶囊中4种萜类内酯的含量
目的:用HPLC-ELSD测定银杏叶软胶囊中银杏内酯A、B、C及白果内酯的含量.方法:色谱柱填料为十八烷基键合硅胶,流动相为四氢呋喃-甲醇-水(11 : 19:70);漂移管温度为109℃,戴气流速为2.9L·min-1.结果:银杏内酯A、B、C及白果内酯分别在2.994μg～14.970μg、2.967μg～14.835μg、2.955μg～14.775μg5.952μg～29.760μg线性关系良好;银杏内酯A、B、C及白果内酯的平均回收率分别为97.2%、97.5%、97.6%、98.3%.结论:该方法简便、准确、分离效果好;本方法可用于银杏叶软胶囊的质量评价.
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银杏叶滴丸中萜类内酯测定方法的改进研究
目的 以银杏叶对照提取物为对照建立银杏叶滴丸中萜类内酯的定量测定方法.方法 采用HPLC-ELSD法,色谱柱为Diamonsil C18柱(150 nun×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(30∶70),体积流量0.8 mL/min,ELSD检测器,漂移管温度105℃,氮气体积流量3.0 L/min.结果 银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯分别在1 672.2～10 033.2、1 026.4～6 158.4、527.8～3 166.8、2 200.8～13 204.8 ng呈良好的对数线性关系;银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯及总萜类内酯的平均回收率分别为100.3％ (RSD 2.5％)、108.1％ (RSD 3.5％)、116.0％ (RSD 4.9％)、90.4％ (RSD0.6％)及99.3％ (RSD 1.1％).结论 本方法简单易行、可控性强、重复性好,可用于银杏叶滴丸中萜类内酯的定量测定,并为中成药中多指标成分同时测定提供了有效的思路和解决方案.
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UPLC-MS/MS方法同时测定百咳宁颗粒中6种主要有效成分
目的 建立UPLC-MS/MS方法同时测定百咳宁颗粒中6种主要有效成分(靛玉红、贝母素甲、贝母素乙、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C).方法 百咳宁颗粒经氯仿-甲醇溶剂索氏提取后进样,采用正负离子切换的多反应监测(MRM)模式同时测定百咳宁颗粒中的靛玉红,2种贝母素和3种银杏内酯类成分.色谱柱为Inertsutain C18 (75 mm×3.0mm,2 μm)柱,流动相为甲醇-乙腈-2 mmol/L乙酸铵水溶液,梯度洗脱,分析时间为6 min.结果 所测6种主要有效成分在测定浓度范围内线性关系良好,r均大于0.995 8;精密度、重复性和稳定性良好;平均加样回收率为96.5％～105.1％,RSD≤4.2％.结论 本法简单快捷、灵敏度高、专属性好,可用于百咳宁颗粒中6中主要有效成分的定量控制,除靛玉红外,其他5种成分均为处方中首次测定,百咳宁颗粒中银杏内酯类成分的量较低.
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f2相似因子法评价银杏酮酯缓释微丸大类成分总黄酮和各类成分的体外释放相关性研究
目的 引入f2相似因子法对银杏酮酯(GBE)缓释微丸的大类成分总黄酮和各类成分(包括黄酮类和萜内酯类)的释放曲线进行分析,以能较全面地评价其体外释放.方法 运用紫外分光光度法、高效液相-质谱联用(HPLC-MS)测定GBE缓释微丸中大类成分(总黄酮)和各类成分(槲皮苷、异鼠李素、芦丁、槲皮素、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯)的体外释放率,并进行f2相似因子计算;采用扫描电镜法观察微丸释药前后的微观结构,结合方程拟合分别对微丸中总黄酮和各类成分的释药机制解析,以验证f2相似因子法的可靠性.结果 优化工艺的GBE微丸黄酮类和内酯类的各成分与大类成分总黄酮的f2均大于50,说明大类成分总黄酮与各类成分体外释放曲线具有较好的相关性.释药机制解析进一步验证了该结果的可靠性.结论 f2相似因子法可运用于多组分中药缓释制剂大类成分和各类成分的体外释放评价.
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基于一测多评的舒血宁注射液定量测定方法研究
目的 采用一测多评法同时测定舒血宁注射液中山柰素、槲皮素、异鼠李素和白果内酯与银杏内酯A、B、C的量,并建立以上实验的方法学考察模式.方法 分别以山柰素和白果内酯为内参物,建立舒血宁注射液中这2种成分与槲皮素、异鼠李素和银杏内酯A、B、C间的相对校正因子(fk/s);采用外标法测定舒血宁注射液中山柰素和白果内酯的量,通过fk/s计算输血宁注射液中其他5种成分的量,并将用一测多评法测定的5批舒血宁注射液的结果与用外标法测定的结果进行t检验.结果 在一定的线性范围内,山柰素与槲皮素及异鼠李素的fk/s分别为1.873、0.324,白果内酯与银杏内酯A、B、C的fk/s分别为2.280、1.659、1.429,且在不同的实验条件下重现性良好;5批舒血宁注射液的一测多评法计算值与外标法测定值经t检验无显著性差异,实验所得的fk/s可信.结论 本实验所建立的fk/s重复性良好,可用于舒血宁注射液中多个成分的定量分析与质量评价.
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高速逆流色谱法分离纯化银杏叶中白果内酯和银杏内酯A、B、C
目的 从银杏叶中分离纯化白果内酯和银杏内酯A、B、C.方法 银杏叶提取液经醋酸乙酯萃取、D-101大孔吸附树脂柱和Al2O3柱纯化后得到总内酯提取物,提取物再经两次高速逆流色谱分离制备4种内酯单体.结果 25%乙醇热提取、醋酸乙酯萃取、D-101柱、pH 4.0的Al2O3柱对总内酯的提纯终使总内酯质量分数达到44.98%.经高速逆流色谱制备得到的白果内酯和银杏内酯A、B、C高质量分数分别为98.3%、98.9%、98.8%、98.4%.结论 本法简便快速、回收率高,为银杏叶中内酯单体的制备提供了一种新方法
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HPLC-MS法测定银杏叶片中银杏内酯A、B、C和白果内酯
目的 建立测定银杏叶片中银杏内酯A、B、C及白果内酯的HPLC-MS法.方法 采用HPLC-MS法,Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇–10 mmol乙酸铵水溶液,梯度洗脱;柱温:30℃;体积流量:1 mL/min;进样量:10μL.采用离子阱(ESI)负离子模式进行检测,检测模式为母离子全扫描方式(Scan),并进行二次离子化扫描.雾化器压力310.28 kPa,毛细管电压3.5 kV,碰撞诱导解离电压150 V,干燥气为N2,干燥器温度350℃,干燥气流量8.0 L/min.结果 银杏内酯A、B、C和白果内酯在0.1006~2.0120、0.1020~2.0400、0.0500~1.0000、0.1016~2.0320 mg/mL显示良好的线性关系;平均加样回收率分别为97.1%、97.0%、98.2%、97.8%,RSD值分别为1.73%、1.68%、1.76%、1.83%(n=6).结论 该法灵敏度高、选择性高、检测限低,为银杏叶片的质量控制提供依据.
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HPLC-ELSD法测定注射用银杏二萜内酯中银杏内酯A、B、C、K
目的 建立测定注射用银杏二萜内酯中银杏内酯A、B、C、K的HPLC-ELSD法.方法 采用HPLC-ELSD法,Phenomenex Luna C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为四氢呋喃-甲醇-水,梯度洗脱；体积流量为1.0 mL/min;柱温为30℃；漂移管温度为105℃,氮气体积流量为3.0 L/min.结果 注射用银杏二萜内酯中银杏内酯A、B、C、K分别在1.70～8.50 μg (r=0.999 7)、2.45～12.5 μg (r=0.999 8)、0.30～1.50 μg (r=0.999 7)、0.25～1.25 μg (r=0.999 7)呈良好的线性关系；平均回收率分别为101.03％、100.86％、100.78％、101.02％,RSD值分别为0.87％、0.29％、1.30％、1.34％.结论 该方法简便准确,重复性好,可用于注射用银杏二萜内酯中银杏内酯A、B、C、K的测定.
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银杏内酯C对正常大鼠在体心功能的影响
目的:探讨银杏内酯C (Ginkgolide C,GC)对正常大鼠在体心功能的影响.方法:正常大鼠麻醉后,用连接压力换能器的插管经右侧颈总动脉逆行插入左心室,并用PowerLab生物信号采集系统检测心功能.经颈静脉分别给予生理盐水、1‰的二甲基亚砜(DMSO)、100 μmol/L的GC、1 000 μmol/L的GC各1 mL,通过连续记录左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、心脏收缩期左心室内压上升的大变化速率(+dp/dtmax)、舒张期左心室内压下降的大变化速率(—dp/dtmax)和心率(HR)等心功能指标来测定给药前后心功能的变化.结果:与正常条件下相比,给予浓度为100 μmol/L的GC 1 mL后,对心功能各指标均无明显影响；给予浓度为1 000 μmol/L的GC 1 mL后对正常大鼠心脏产生正性肌力的作用,能明显增强左心室内压差(△LVP)、+dp/dtmax、-dp/dtmax等心功能指标,但对HR无明显影响.结论:银杏内酯C能增加左心室内压力差,增强心肌的收缩和舒张功能,而对心率没有影响,对心脏具有一定程度的正性肌力作用.
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高效液相色谱法测定银杏总内酯注射液中银杏总内酯的含量
目的:采用HPLC法测定银杏总内酯注射液中总内酯的含量.方法:采用Dikma Diamosn型色谱柱(5μm,4.6×200 mm),流动相为甲醇一水(35:65),流速为1.0 mL/mim,示差折光检测器,柱温为30C.结果:白果内酯在0.206～2.060mg/mL(r=0.9998,n=5),银杏内酯C在0.056～0.560mg/mL(r=0.9996,n=5),银杏内酯A在0.150～1.500 mg/mL,(r=0.9994,n=5),银杏内酯B在0.102～1.020 mg/mL范围内与峰面积积分值线性关系良好.结论:本方法测定结果准确,操作简便,灵敏度高,重复性好,可用于本品的质量控制.
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高效液相色谱法测定银杏叶胶囊中银杏内酯的含量
目的:应用HPLC-ELSD法测定银杏叶胶囊中银杏内酯A、B、C及白果内酯的含量.方法:采用C18色谱柱(Kromasil,4.6×250mm,5 μm),以甲醇-水为流动相梯度洗脱,ELSD雾化温度为50℃,载气N2流速为1.2L/Min.结果:测得银杏内酯A、B、C及白果内酯分别在2.18 μg-16.35 μg、2.10 μg-15.60v-g、0.59 μg-8.85 μg、0.73 μg-9.90 μg线性关系良好;银杏内酯A、B、C及白果内酯的平均回收率分别为97.28%、97.68%、98.34%、99.52%.结论:该方法简单、准确可靠.分离效果好;本方法可用于银杏叶胶囊的质量评价.
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HPLC-ELSD法同时测定不同产地白果药材中4种萜内酯类成分
目的 建立HPLC-ELSD法同时测定白果药材中白果内酯和银杏内酯A、B、C.方法 白果乙酸乙酯萃取物的分析采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为甲醇-0.1％甲酸水(38∶62);柱温30℃,体积流量0.8 mL/min.结果 白果内酯和银杏内酯A、B、C分别在1.01 ～ 40.40 μg、1.03～41.20 μg、2.37～94.80 μg、1.51～60.40 μg范围内线性关系良好(r＞0.999 5),平均回收率在97.3％～99.2％之间.5个不同产地(山东济南、临沂、泰安,广西桂林和江苏泰兴)白果药材中四者的含有量分别为75.55～219.73、54.79～135.88、200.37 ～ 853.39、119.31 ～498.06 μg/g.结论 白果中4种萜内酯类成分的总含有量以江苏省泰兴市产者为高.
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银杏内酯B、C及联合用药预处理对大鼠心肌缺血/再灌注心功能的影响
目的 探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)、银杏内酯C(ginkgolide C,GC)及两者1∶1联合用药预处理对心肌缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,I/R)大鼠血流动力学的影响及其与氧自由基的关系.方法 50 只SD大鼠,随机分为5 组(n=10):正常对照组(Control组)、缺血/再灌注组(I/R组)、银杏内酯B预处理组(GB组)、银杏内酯C预处理组(GC组)及银杏内酯B和C联合用药预处理组(GB+GC组).采用Langendorff装置逆行插管灌流,建立大鼠离体心脏I /R 模型;除Control组外,其余各组均缺血20 min,再灌注40 min.记录左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室内压上升和下降的大变化速率(+dp/dtmax),并测定冠状动脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性.结果 GB组、GC组及GB+GC组用药预处理后,复灌时左心室内压差(△LVP)、+ dp/dtmax等心功能指标明显优于I/R组(P<0.05),联合用药较单一用药效果差异不明显,各用药组的LDH活性均较I/R组明显降低.结论 银杏内酯B、C及联合用药均能一定程度改善大鼠心肌缺血/再灌注损伤,但联合用药较单一用药效果优势不明显.
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银杏内酯B与C联合应用对缺血/再灌注损伤大鼠心功能的影响
目的 研究银杏内酯B与C联合应用对离体心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,IR)损伤大鼠心功能的影响.方法 将离体心脏挂于Langendorff装置,用停灌复灌的方式制备离体大鼠心脏缺血/再灌注损伤模型,并用PowerLab生物信号采集系统记录离体心脏心功能各指标:左心室收缩峰压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、心脏收缩期左心室内压上升大变化速率(+ dp/dtmax)、舒张期左心室内压下降大变化速率(-dp/dtmax)和心率(HR),并计算出压力差,分别观察在复灌20 min、40 min时银杏内酯B、银杏内酯C及两者联合应用对离体心功能的影响.并测定复灌后冠状动脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性.结果 与Control组相比,GBC组在20min、40min时对左心室压力差(△LVP)的影响已没有差异,GB组、GC组在20 min和40 min时对+dp/dtmax、-dp/dtmax的影响显著,而GBC组在40 min时已使-dp/dtmax恢复正常;与IR组相比,GBC组在40min时对HR影响显著(P<0.01).GBC能够降低LDH的释放,并增加SOD的活性.结论 银杏内酯B与银杏内酯C均能增加左心室压力差,增强心肌顺应性.银杏内酯B改善心功能的效果优于银杏内酯B,两者合用对心功能的恢复作用效果更好.
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HPLC-ELSD法测定银杏达莫注射液中萜类内酯的含量
目的 建立银杏达莫注射液中白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B及银杏内酯C 4种成分的反相高效液相色谱分析方法.方法 采用大连江申Hypersil ODS2 柱 (200 mm×4.6 mm,5 μm),四氢呋喃甲醇水(1∶22∶77)为流动相, 流速为1.0 mL·min-1;柱温:(35±0.1) ℃;ELSD参数:漂移管温度为94 ℃,气体压力为50 psi.结果 白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B及银杏内酯C分别在4.25～16.5 μg;3.74～14.52 μg;3.58～13.86 μg;3.40～13.20 μg内呈良好的线性关系,且4种成分的平均回收率分别为100.3%(RSD=0.76%),100.0% (RSD=0.39%),99.8%(RSD=0.48%),99.9%(RSD=0.70%).结论 所建立的HPLC-ELSD法具有较好的精密度和重现性,可用于银杏达莫注射液的质量控制.
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GC-MS法测定大鼠血浆中银杏内酯A、B、C、N浓度
目的:建立GC-MS法同时测定大鼠血浆中银杏内酯A、B、C、N的浓度.方法:以白果内酯为内标,血样经乙酸乙酯-正己烷(9∶1)提取后,以双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)衍生化,采用GC-MS法测定大鼠血浆中银杏内酯A、B、C、N的浓度.结果:银杏内酯A、B、C、N线性范围分别为12.08 ～ 289.80 ng/mL、10.63～255.00 ng/mL、11.18 ～ 268.20 ng/mL和11.40～273.60 ng/mL;低检测限分别为1.21、1.06、2.24和4.56 ng/mL;r均大于0.99.高、中、低3个浓度的日内、日间精密度RSD均小于10％,绝对回收率均大于85％.结论:该方法灵敏度高、专属性强,血浆中内源性杂质无干扰,适用于4种银杏内酯血药浓度的测定和药动学研究.
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UPLC-MS/MS法测定银杏叶分散片中4种萜内酯的含量
目的 建立一种适合同时测定银杏叶分散片提取物中4种萜内酯(白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C)含量的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法.方法 以芍药苷作为内标物,采用UPLC-MS/MS法,色谱柱为EclipsePlus C1s(50 mm×2.1 mm,1.8 μm),流动相为甲醇-0.1％甲酸水溶液,梯度洗脱,流速为0.4 mL·min-1,柱温为40 C.质谱采用负离子模式,多反应监测扫描.结果 白果内酯在8.34～66.72 μg·mL-1浓度范围内线性良好,r=0.999 8,平均回收率为92.9％(RSD=2.42％);银杏内酯A在4.64～ 37.12 μg·mL-1浓度范围内线性良好,r=0.999 4,平均回收率为93.2％(RSD=2.10％);银杏内酯B在3.375～27.00μg·mL-1浓度范围内线性良好,r=0.999 4,平均回收率为92.0％(RSD=1.31％);银杏内酯C在4.74～37.92 μg·mL-1浓度范围内线性良好,r=0.999 8,平均回收率为94.0％(RSD=2.59％).结论 建立的UPLC-MS/MS方法可用于同时测定银杏叶提取物中4种萜内酯成分,简单快捷、灵敏度高且专属性好.
关键词： 白果内酯 银杏内酯A 银杏内酯B 银杏内酯C 超高效液相色谱-串联质谱法 -
乌参醒脑滴丸中银杏萜类内酯成分的质量控制研究
目的 控制银杏叶提取物原料质量并建立乌参醒脑滴丸中萜类内酯成分的含量测定方法.方法 采用AB-8大孔吸附树脂进行银杏叶萜类内酯提取优化,HPLC-ELSD法检测4种萜类内酯白果内酯及银杏内酯C、A、B的含量,优选提取部位入药.优化色谱条件,采用Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm,5.0 μm)色谱柱,柱温34℃;以甲醇-0.2％甲酸水为流动相进行梯度洗脱,流速为0.7 mL· min-1;蒸发光散射检测器检测,载气压力为30 psi,漂移管温度为80℃,同时测定乌参醒脑滴丸中白果内酯、银杏内酯C、银杏内酯A、银杏内酯B的含量.结果 乌参醒脑滴丸优选60％乙醇提取部位干浸膏进行成药制剂,滴丸制剂中4种成分(白果内酯及银杏内酯C、A、B)分别在4.77～47.70 mg· mL-1,2.31～23.10 mg·mL-1,4.79～47.94 mg· mL-1,2.32 ～ 23.25 mg· mL-1浓度的常用对数(X)与峰面积的常用对数(Y)呈良好的线性关系.其4种萜类内酯成分的平均回收率分别为92.1％,91.5％,93.7％,93.7％;RSD分别为2.31％,2.77％,2.12％,1.36％.结论 HPLC-ELSD法测定乌参醒脑滴丸4种萜类内酯分离度好,专属性强.该研究可保证乌参醒脑滴丸萜类内酯成分原料可控,成分可控.
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HPLC-ELSD法测定银杏洋参颗粒中萜类内酯的含量
[目的]建立HPLC-ELSD法测定银杏洋参颗粒中白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量.[方法]采用SunfireTM C18柱(4.6 mm×150 mm,5μM)色谱柱,以甲醇-水(30∶70)为流动相进行洗脱,流速1.0 ml/min,柱温35℃,漂移管温度110℃,气体流速2.9 L/min.[结果]白果内酯在0.9333～7.778μg范围内线性关系良好(r=0.9994),平均加样回收率为98.89％(RSD-1.20％);银杏内酯A在0.9846～8.205μg范围内线性关系良好(r=0.9991),平均加样回收率为104.63％(RSD=1.10％);银杏内酯B在0.9144～7.620μg范围内线性关系良好(r=0.9992),平均加样回收率为100.21％(RSD=2.78％);银杏内酯C在0.3027～2.5225μg范国内线性关系良好(r=0.9991),平均加样回收率为103.80％(RSD=2.11％).[结论]该方法操作简便,方法可靠,结果准确,灵敏度高,重现性好,可作为该产品质量控制的方法.
