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HPLC法测定银杏内酯滴丸中银杏内酯A及银杏内酯B总量
目的:建立银杏内酯滴丸中银杏内酯A、银杏内酯B含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法,以正丙醇-四氢呋喃-水(1:27∶72)为流动相,流速:1.0 mL· min-1,检测波长:220 nm.结果:建立了银杏内酯滴丸中银杏内酯A、银杏内酯B含量测定方法,且银杏内酯A、银杏内酯B的RSD分别为1.39％,2.16％.结论:本方法简便可靠,可用于银杏内酯滴丸的质量控制.
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LC-MS/MS分析银杏二萜内酯葡胺注射液在人尿液中的代谢产物
目的:研究银杏二萜内酯葡胺注射液在人尿液中的主要代谢产物及其代谢途径.方法:3名受试者静脉滴注银杏二萜内酯葡胺注射液后收集0～6h的尿样,分别按酸化和不酸化样品处理后,以液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)对样品进行分析.采用ACE C18-AR色谱柱(4.6 mm×150 mm,3μm),酸性HPLC条件流动相Ⅰ为乙腈-0.4％甲酸铵水溶液(pH3.2)梯度洗脱,中性HPLC条件流动相Ⅱ为乙腈-水梯度洗脱,流速0.7 mL·min-1.通过比较空白尿样和给药后尿样的总离子流和提取离子流色谱图以及各个色谱峰的保留时间、准分子离子和二级碎片离子,分析银杏内酯A(GA),银杏内酯B(GB)和银杏内酯K(GK)在人体内可能的代谢产物.结果:除原型药外,共鉴定了12个代谢产物,其中GA相关的代谢产物有6个,包括5个Ⅰ相和1个Ⅱ相代谢产物;GB相关的有4个,包括1个Ⅰ相和3个Ⅱ相代谢产物;GK相关的有2个,包括1个Ⅰ相和1个Ⅱ相代谢产物.结论:GA在人体内主要的代谢途径为羟基化和内酯环水解,并可进一步共价结合成硫酸酯;GB主要的代谢途径为羟基化和内酯环水解,并可进一步共价结合成硫酸酯、葡萄糖醛酸苷或谷胱甘肽结合物;GK在人体内主要的代谢途径为甲基化葡萄糖醛酸结合反应.
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银杏内酯A、B分离纯化研究
目的:研究大孔吸附树脂分离纯化银杏叶提取物的工艺条件.方法:以银杏内酯A (Ginkalide A,GA)和银杏内酯B(Ginkalide B,GB)的含量为指标,考察大孔吸附树脂对有效成分的富集纯化工艺.结果:采用DA201型大孔吸附树脂为纯化树脂,上样吸附6h后,用10柱体积、30％的乙醇洗脱,可得到GA和GB总含量达70％以上的提取物.结论:DA201型大孔吸附树脂在确定的工艺条件下,具有工艺简单、稳定、可靠的特点,能得到纯度较高的GA和GB的提取物.
关键词： 银杏内酯A 银杏内酯B:大孔吸附树脂 分离 纯化 -
混料设计运用于银杏内酯A、B水凝胶骨架缓释片的处方优化及释药机制研究
目的：优化银杏内酯 A、B 水凝胶骨架缓释片的处方组成，并对其体外释药机制进行研究。方法在单因素考察的基础上，采用混料设计对缓释片的处方进行优化。通过考察体外释放度，以累积释放度对时间进行线性拟合，对银杏内酯 A、B 水凝胶骨架缓释片的释药机制进行分析。结果确定银杏内酯 A、B 缓释片的优处方组成为：药粉∶HPMC∶乳糖=23∶24∶53。结论混料设计用于优化银杏内酯 A、B 缓释片的佳处方结果准确，以此比例制备的缓释片以非 Fick 模式释药，释药符合零级释放。
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3种银杏内酯成分的质谱裂解途径研究
该文利用高分辨的四极杆串联飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF-MS)的高分辨率及高质量准确度特点,在负离子模式下,对3种银杏内酯(银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C)的质谱裂解规律进行研究.结果表明,3种银杏内酯有相似的裂解途径,包括4条共同的裂解途径和1个共同的特征性离子.在高质量区,三种银杏内酯的主要裂解途径是内酯环开环并连续丢失CO,C02,以及母核不断失去H20.在低质量区,碎片离子m/z 72.993 6是3种银杏内酯共有的特征性碎片离子,推测可能是C环开裂形成的碎片离子.碎片离子m/z 141.018 8,125.023 8,113.024 0,97.029 1是银杏内酯B、银杏内酯C的共有的特征性碎片离子,推测可能是母核A环开环或连续碎裂形成的碎片离子.上述质谱裂解途径可为银杏内酯类化合物的结构鉴定提供依据.
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高效液相色谱蒸发光散射测定银杏叶软胶囊中4种萜类内酯的含量
目的:用HPLC-ELSD测定银杏叶软胶囊中银杏内酯A、B、C及白果内酯的含量.方法:色谱柱填料为十八烷基键合硅胶,流动相为四氢呋喃-甲醇-水(11 : 19:70);漂移管温度为109℃,戴气流速为2.9L·min-1.结果:银杏内酯A、B、C及白果内酯分别在2.994μg～14.970μg、2.967μg～14.835μg、2.955μg～14.775μg5.952μg～29.760μg线性关系良好;银杏内酯A、B、C及白果内酯的平均回收率分别为97.2%、97.5%、97.6%、98.3%.结论:该方法简便、准确、分离效果好;本方法可用于银杏叶软胶囊的质量评价.
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液质联用法测定灯银脑通胶囊中6种有效成分的含量
目的 建立同时测定灯银脑通胶囊中灯盏乙素、白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、人参皂苷Rg1和三七皂苷R1等6种有效成分含量的HPLC-MS/MS方法.方法 选用Phenomenex Luna C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,0.2％甲酸甲醇溶液(A)、0.2％甲酸水溶液(B)梯度洗脱方式洗脱,柱温为30℃,流速为0.3 mL· min-1,分析时间10.0 min;质谱条件选用ESI源-MRM模式,正离子模式检测.建立的方法对3批灯银脑通胶囊进行了测定.结果 灯盏乙素、白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、人参皂苷Rg1和三七皂苷R16种有效成分在测定浓度范围内均具有良好的线性关系,r均不小于0.999 0,提取回收率均在94.8％～108.5％之间.结论 本法准确可靠、结果稳定、专属性强、重现性良好,为灯银脑通胶囊的质量控制提供了很好的依据.
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银杏内酯A和银杏内酯B在健康人体内的药动学的实验研究
目的用本实验室建立的测定血液中内酯浓度的方法,对银杏内酯A(ginkgolide A,GA)和银杏内酯B(ginkgoide B,GB)在10例健康受试者体内的药动学进行了研究.方法 10例健康受试者,静脉滴注银杏叶提取物注射液(舒血宁注射液),于给药后不同的时间取血,用气相-质谱联用法测定血药浓度,并计算GA和GB的药动学参数.结果健康受试者静脉点滴GA和GB后的代谢均符合二房室模型,t1/t2分别为3.73,4.25 h.AUC值分别为68 305.10,19 714.69 ng@min@mL-1.结论GC-MS测定银杏内酯的血药浓度是测定银杏内酯的较好的方法.
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银杏内酯A、B对高胆固醇诱导的PC12细胞胆固醇代谢的影响
[目的]基于体外血脑屏障(BBB)环境,观察高胆固醇环境下PC12细胞胆固醇的代谢情况及银杏内酯A、B对其的影响.[方法]利用Transwell装置共培养星形胶质细胞和脑微血管内皮细胞建立体外BBB,并与PC12细胞共培养.在Transwell内皮细胞侧添加40μmol/L胆固醇,并分别给予30μmol/L银杏内酯A和25μmol/L银杏内酯B进行干预.干预结束后,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,检测胆固醇代谢关键酶低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(LRP-1)、胆固醇酰基转移酶(ACAT)、ATP结合盒转运子A1(ABCA1)及胆固醇24S-羟化酶基因(CYP46)在mRNA水平的表达.[结果]高胆固醇环境下,LRP-1表达下调(P＜0.01),ACAT及ABCA1表达上调(P＜0.05),CYP46的表达有上调趋势；药物干预后,除LRP-1有不同程度的升高(P＜0.05),其余各指标均无明显变化.[结论]GKA、B对高胆固醇环境下PC12细胞胆固醇代谢关键酶LRP-1的表达有一定影响.
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银杏内酯A和B混合物对大鼠永久性局灶性脑缺血的保护作用
目的 研究银杏内酯A和B混合物(ginkgolide A and ginkgolide B,GKAB)对大鼠永久性局灶性脑缺血的保护作用.方法 采用大鼠永久性大脑中动脉阻塞(permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)模型观察GKAB 12.5、25、50 mg/kg iv给药对脑梗死体积、脑含水量、行为学症状及组织形态学(光镜)的影响.结果 GKAB 12.5、25、50 mg/kg iv给药呈剂量依赖性减少pMCAO大鼠脑梗死体积、降低脑含水量、改善行为学症状及减轻脑组织形态改变.50、25 mg/kg组与模型组相比均有显著性差异(P＜0.01、0.05).结论 GKAB对大鼠永久性局灶性脑缺血损伤具有保护作用.
关键词： 银杏内酯A 银杏内酯B 脑缺血 永久性大脑中动脉阻塞 -
银杏叶滴丸中萜类内酯测定方法的改进研究
目的 以银杏叶对照提取物为对照建立银杏叶滴丸中萜类内酯的定量测定方法.方法 采用HPLC-ELSD法,色谱柱为Diamonsil C18柱(150 nun×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(30∶70),体积流量0.8 mL/min,ELSD检测器,漂移管温度105℃,氮气体积流量3.0 L/min.结果 银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯分别在1 672.2～10 033.2、1 026.4～6 158.4、527.8～3 166.8、2 200.8～13 204.8 ng呈良好的对数线性关系;银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯及总萜类内酯的平均回收率分别为100.3％ (RSD 2.5％)、108.1％ (RSD 3.5％)、116.0％ (RSD 4.9％)、90.4％ (RSD0.6％)及99.3％ (RSD 1.1％).结论 本方法简单易行、可控性强、重复性好,可用于银杏叶滴丸中萜类内酯的定量测定,并为中成药中多指标成分同时测定提供了有效的思路和解决方案.
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UPLC-MS/MS方法同时测定百咳宁颗粒中6种主要有效成分
目的 建立UPLC-MS/MS方法同时测定百咳宁颗粒中6种主要有效成分(靛玉红、贝母素甲、贝母素乙、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C).方法 百咳宁颗粒经氯仿-甲醇溶剂索氏提取后进样,采用正负离子切换的多反应监测(MRM)模式同时测定百咳宁颗粒中的靛玉红,2种贝母素和3种银杏内酯类成分.色谱柱为Inertsutain C18 (75 mm×3.0mm,2 μm)柱,流动相为甲醇-乙腈-2 mmol/L乙酸铵水溶液,梯度洗脱,分析时间为6 min.结果 所测6种主要有效成分在测定浓度范围内线性关系良好,r均大于0.995 8;精密度、重复性和稳定性良好;平均加样回收率为96.5％～105.1％,RSD≤4.2％.结论 本法简单快捷、灵敏度高、专属性好,可用于百咳宁颗粒中6中主要有效成分的定量控制,除靛玉红外,其他5种成分均为处方中首次测定,百咳宁颗粒中银杏内酯类成分的量较低.
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f2相似因子法评价银杏酮酯缓释微丸大类成分总黄酮和各类成分的体外释放相关性研究
目的 引入f2相似因子法对银杏酮酯(GBE)缓释微丸的大类成分总黄酮和各类成分(包括黄酮类和萜内酯类)的释放曲线进行分析,以能较全面地评价其体外释放.方法 运用紫外分光光度法、高效液相-质谱联用(HPLC-MS)测定GBE缓释微丸中大类成分(总黄酮)和各类成分(槲皮苷、异鼠李素、芦丁、槲皮素、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯)的体外释放率,并进行f2相似因子计算;采用扫描电镜法观察微丸释药前后的微观结构,结合方程拟合分别对微丸中总黄酮和各类成分的释药机制解析,以验证f2相似因子法的可靠性.结果 优化工艺的GBE微丸黄酮类和内酯类的各成分与大类成分总黄酮的f2均大于50,说明大类成分总黄酮与各类成分体外释放曲线具有较好的相关性.释药机制解析进一步验证了该结果的可靠性.结论 f2相似因子法可运用于多组分中药缓释制剂大类成分和各类成分的体外释放评价.
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HPLC测定银杏愈伤组织内酯A的研究
建立了一种可用于银杏离体细胞培养物中内酯A含量分析的RP-HPLC方法.样品经低浓度甲醇提取后,用中性或酸性氧化铝固相萃取柱纯化,用示差检测器检测,银杏内酯A的低检测限为0.012 μg,方法回收率为(96.0±2)%,RSD为3.1%.
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银杏叶中银杏萜内酯的GC-MS定性定量分析
目的建立银杏叶中银杏内酯A,B,C和白果内酯的定性定量分析方法.方法银杏叶以20%乙醇超声提取,乙酸乙酯萃取,再经酸性氧化铝-活性炭-硅藻土混合柱层析,在100℃以双-三甲基硅烷三氟乙酰胺硅烷化60min后,用HP-5 MS毛细管色谱柱,柱温从180℃程序升温至300℃.采用选择离子监测(SIM)方式,以峰值高的碎片离子作为监视离子进行定量分析.结果银杏内酯A,B,C和白果内酯的保留时间分别为13.7,14.3,15.3和6.8 min,特征(监视)离子(m/x)分别为537,625,713及455(299);平均回收率分别为102.0%,99.4%,96.0%和96.3%,RSD分别为0.54%,2.40%,1.98%和2.43%.结论本方法操作简便、重现性好、专属性强、准确可靠,可作为银杏萜内酯的定性定量分析方法.
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基于一测多评的舒血宁注射液定量测定方法研究
目的 采用一测多评法同时测定舒血宁注射液中山柰素、槲皮素、异鼠李素和白果内酯与银杏内酯A、B、C的量,并建立以上实验的方法学考察模式.方法 分别以山柰素和白果内酯为内参物,建立舒血宁注射液中这2种成分与槲皮素、异鼠李素和银杏内酯A、B、C间的相对校正因子(fk/s);采用外标法测定舒血宁注射液中山柰素和白果内酯的量,通过fk/s计算输血宁注射液中其他5种成分的量,并将用一测多评法测定的5批舒血宁注射液的结果与用外标法测定的结果进行t检验.结果 在一定的线性范围内,山柰素与槲皮素及异鼠李素的fk/s分别为1.873、0.324,白果内酯与银杏内酯A、B、C的fk/s分别为2.280、1.659、1.429,且在不同的实验条件下重现性良好;5批舒血宁注射液的一测多评法计算值与外标法测定值经t检验无显著性差异,实验所得的fk/s可信.结论 本实验所建立的fk/s重复性良好,可用于舒血宁注射液中多个成分的定量分析与质量评价.
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国产与进口银杏叶片萜类内酯Beagle犬生物利用度的比较
目的 比较国产与进口银杏叶片在Beagle犬体内的药动学参数和生物利用度.方法 Beagle犬分别ig国产与进口银杏叶片后,取血测定.采用LC-MS检测Beagle犬血浆中银杏叶片萜类内酯(银杏内酯A、银杏内酯B和白果内酯)的含量,绘制血药浓度-时间曲线,采用DAS软件计算药动学参数.结果 Beagle犬ig国产银杏叶片(80 mg/kg)后银杏内酯A、银杏内酯B和白果内酯的药-时曲线下面积(AUC0～t)分别为51.64、19.86和72.90 ng·h/mL,而ig进口银杏叶片(80 mg/kg)后三者的药-时曲线下面积(AUC0～t)分别为69.98、24.35和169.60 ng·h/mL.根据2种制剂中3种成分的含量,国产银杏叶片中银杏内酯A、银杏内酯B、白果内酯的相对生物利用度分别为37.77％、33.70％和95.98％.结论 Beagle犬ig国产银杏叶片后的萜类内酯生物利用度显著低于进口银杏叶片.
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高速逆流色谱法分离纯化银杏叶中白果内酯和银杏内酯A、B、C
目的 从银杏叶中分离纯化白果内酯和银杏内酯A、B、C.方法 银杏叶提取液经醋酸乙酯萃取、D-101大孔吸附树脂柱和Al2O3柱纯化后得到总内酯提取物,提取物再经两次高速逆流色谱分离制备4种内酯单体.结果 25%乙醇热提取、醋酸乙酯萃取、D-101柱、pH 4.0的Al2O3柱对总内酯的提纯终使总内酯质量分数达到44.98%.经高速逆流色谱制备得到的白果内酯和银杏内酯A、B、C高质量分数分别为98.3%、98.9%、98.8%、98.4%.结论 本法简便快速、回收率高,为银杏叶中内酯单体的制备提供了一种新方法
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银杏内酯A对胆碱能神经功能损伤引起的SD大鼠学习记忆的促进作用
目的研究银杏内酯A对Meynert基底核(NBM)损伤引起的SD大鼠学习记忆的改善作用.方法通过N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)单侧损伤SD大鼠NBM以破坏胆碱能神经功能,采用Y型迷宫法检测动物空间辨别学习记忆能力,利用放射化学法检测皮层胆碱乙酰转移酶(ChAT)活力,观察银杏内酯A对胆碱能损伤记忆功能的恢复,脑内ChAT的变化.结果银杏内酯A对胆碱能损伤记忆功能具有恢复作用,且能防止ChAT活力降低.结论银杏内酯A能改善NBM损伤引起的大鼠学习记忆能力.
关键词： 银杏内酯A Meynert基底核 胆碱乙酰转移酶 -
HPLC-MS法测定银杏叶片中银杏内酯A、B、C和白果内酯
目的 建立测定银杏叶片中银杏内酯A、B、C及白果内酯的HPLC-MS法.方法 采用HPLC-MS法,Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇–10 mmol乙酸铵水溶液,梯度洗脱;柱温:30℃;体积流量:1 mL/min;进样量:10μL.采用离子阱(ESI)负离子模式进行检测,检测模式为母离子全扫描方式(Scan),并进行二次离子化扫描.雾化器压力310.28 kPa,毛细管电压3.5 kV,碰撞诱导解离电压150 V,干燥气为N2,干燥器温度350℃,干燥气流量8.0 L/min.结果 银杏内酯A、B、C和白果内酯在0.1006~2.0120、0.1020~2.0400、0.0500~1.0000、0.1016~2.0320 mg/mL显示良好的线性关系;平均加样回收率分别为97.1%、97.0%、98.2%、97.8%,RSD值分别为1.73%、1.68%、1.76%、1.83%(n=6).结论 该法灵敏度高、选择性高、检测限低,为银杏叶片的质量控制提供依据.
